中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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益气养阴、祛痰化瘀中药复方对糖尿病肾病大鼠干预作用及其机制
目的:观察并证实益气养阴、祛痰化瘀中药复方对早期糖尿病肾病大鼠于预作用,分析其可能的作用机制,为临床防治糖尿病肾病提供可靠的实验依据.方法:实验于2005-01/12在解放军沈阳军区总院动物实验中心完成.SPF级雄性Wistar大鼠72只,随机选出正常组12只,其余大鼠高糖高脂饲料喂养1个月后,腹腔注射链脲佐菌素建立早期糖尿病肾病大鼠模型.造模成功大鼠56只以随机排列表分为4组:模型组、中药10,20 g/kg组及中药预防组各14只.中药预防组在成模后立即开始给药,中药10,20 g/kg组在成模后2周开始给药.预防组与10 g/kg组给予10.15 g/(kg·d),20 g/kg组给予20.30 g/(kg·d)灌胃;正常对照组及模型组灌服相应容量(10 mL/kg)的生理盐水,1次/d,连续6周.采用生化法、放射免疫法和蛋白质印迹杂交法等分析血糖、尿微量白蛋白、α1微球蛋白、血清肌肝、尿素氮水平,观察肾皮质转化生长因子B1、赢小板衍化生长因子B蛋白表达.结果:纳入实验观察的大鼠共72只,造模不成功4只,模型组死亡3只,中药预防组死亡2只,中药10 g/kg组死亡3只,中药20 g/kg组死亡2只,终纳入结果分析58只.①治疗后6周,模型组、中药10,20 g/kg组、中药预防组血糖均明显高于正常组(P＜0.01);各中药组血糖均低于模型组(P＜0.05～0.01);中药预防组血糖低于10,20 g,kg组(P＜0.01,0.05).②治疗后6周,模型组、中药10,20 g/kg组、中药预防组尿微量白蛋白、尿α1微球蛋白均高于正常组(P均＜0.01);各中药组两指标均低于模型组(P均＜0.01),中药10 g/kg组高于预防组(P＜0.01,0.05).③治疗后6周,模型组、中药10,20 g/kg组、中药预防组血尿素氮、血清肌肝均高于正常组(P均＜0.01);中药10,20 g/kg组、预防组两指标均低于模型组(P＜0.05～0.01),10 g/kg组高于预防组(P＜0.01).④早期糖尿病肾病大鼠肾皮质转化生长因子β1和血小板衍化生长因子B蛋白表达增加,中药预防组、20 g/kg组对两者的表达均有明显抑制作用,各治疗组与模型组间均有显著差别.结论:益气养阴、祛痰化瘀中药复方能有效防治糖尿病肾病,其药效学机制可能通过降低血糖,减少尿微量白蛋白、α1-微球蛋白的水平,改善肾功能,下调肾皮质转化生长因子β1、血小板衍化生长因子B蛋白的过度表达实现.
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异硫氰酸荧光素标记动态观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞的损伤
目的:应用异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白,在激光共聚焦显微镜下直接观察天花粉蛋白进入黑色素瘤B16细胞的动态过程并分析其对黑色瘤B16细胞的损伤作用. 方法:实验于2003-08/2004-08在南通大学神经再生重点实验室完成.将常规传代培养的黑色素瘤B16细胞用胰酶消化,以5×109个/L的浓度种植于24孔培养板.将天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白分别加入培养细胞中,终浓度为50 mg/L,同时加入等量生理盐水作为正常对照组,每组再分别设3,6,12 h不同孵育时间组.异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白后,利用激光共聚焦显微镜观察异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白进入细胞的过程及其荧光强度,CCK-8细胞毒性实验评估各组细胞存活率、并用单细胞凝胶电泳及hoechst33258染核观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞致DNA损伤作用.结果:①终浓度50 mg/L的异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白孵育3 h时已经进入黑色素瘤细胞,6 h时进入细胞量达到高,12 h时已轻度下降,各时间点比较差异有统计学意义(P＜0.01).异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白组与异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白组荧光强度差异有显著性(P＜0.01).②终浓度50 mg/L异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、天花粉蛋白孵育黑色素瘤细胞3,6 h后利用单细胞电泳和Hoechst33258染色未观察到核形态的变化;但孵育6 h后CCK-8细胞毒性实验显示活细胞数量明显下降;孵育12 h后出现DNA损伤的特征性彗星尾现象,并观察到明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体.结论:孵育6 h时天花粉蛋白进入细胞量多,但并没有明显的细胞DNA损伤的作用,而孵育12 h时产生明显的细胞毒作用和凋亡的发生.
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参附注射液对糖尿病大鼠心肌超微结构的保护
目的:观察参附注射液对糖尿病大鼠心肌超微结构的影响并探索其可能机制.方法:实验于2003-12/2005-01在重庆医科大学生理教研室完成.①实验分组:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组10只、糖尿病组20只.②实验方法:所有大鼠禁食12 h后,糖尿病组大鼠以链脲佐菌素(以0.1 mol/L,pH=4.2的枸橼酸缓冲液溶解)按60 mg,kg经腹腔注射,正常对照组以等量的枸橼酸缓冲液腹腔注射.72 h后,大鼠剪尾取静脉血测定空腹血糖,当空腹血糖＞16.67 mmol/L并有多饮、多食、多尿者,即为1型糖尿病造模成功.糖尿病组大鼠又按分层随机法分为单纯糖尿病组和参附注射液处理组,每组10只,参附注射液组以参附注射液10 mL/kg腹腔注射,1次/d.正常对照组和单纯糖尿病组大鼠均以生理盐水10 mL/kg腹腔注射.所有大鼠均以普通食物喂养,自由饮水和单笼饲养20周.⑧实验评估:20周后测定各组血糖、血脂、血清胰岛素、血清与心肌超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量;免疫组化法检测心肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4 mRNA蛋白表达;观察各组大鼠胰岛细胞的病理结构以及心肌超微结构的变化.结果:30只大鼠均进入结果分析.①空腹血糖、血清胰岛素水平:造模后20周,参附注射液组的空腹血糖明显低于造模3 d时水平(P＜0.05),明显低于单纯糖尿病组,但高于正常对照组(P＜0.01);单纯糖尿病组空腹血糖明显高于造模3 d时水平(P＜0.01).造模后20周,参附注射液组血清胰岛素水平明显低于正常对照组,但显著高于单纯糖尿病组(P＜0.05).②血脂水平:参附注射液组和单纯糖尿病组的总三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组(P＜0.05),参附注射液组各值明显低于单纯糖尿病组(P＜0.05);单纯糖尿病组和参附注射液组高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于正常对照组(P＜0.05),参附注射液组高密度脂蛋白胆固醇水平明显高于单纯糖尿病组(P＜0.05).③血清和心肌超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量:超氧化物歧化酶活性:参附注射液组和单纯糖尿病组明显低于正常对照组(P＜0.01),参附注射液组明显高于单纯糖尿病组(P＜0.05);血清丙二醛的含量:参附注射液组和单纯糖尿病组明显高于正常对照组(P＜0.05),参附注射液组明显低于单纯糖尿病组(P＜0.05).④葡萄糖转运蛋白4 mRNA阳性表达:参附注射液组吸光度显著低于正常对照组(P＜0.01),明显高于单纯糖尿病组(P＜0.01),而参附注射液组的面密度值显著低于正常对照组(P＜0.01),明显高于单纯糖尿病组(P＜0.01).⑤光镜观察:参附注射液组大鼠胰岛细胞水肿或空泡样变比单纯糖尿病组数量少而且更轻;透视电镜观察参附注射液组其心肌细胞线粒体和心肌毛细血管内皮细胞的水肿较单纯糖尿病组程度更轻.结论:参附注射液对糖尿病大鼠心肌超微结构具有保护作用,这与其清除氧自由基和抗脂质过氧化物有关;参附注射液对糖尿病大鼠健存胰岛细胞的保护,提高了糖尿病大鼠的血清胰岛素水平,降低了血糖、血脂,对糖尿病大鼠心肌内微血管内皮细胞和心肌细胞线粒体的保护具有促进作用.
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异丙酚激活蛋白激酶C对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察异丙酚对大鼠离体心肌缺血再灌注的影响及蛋白激酶C激活的作用.方法:实验于2004-04/2005-03在河北省医学科学院药研室完成.48只大鼠离体心脏随机分为6组,每组8只.分别为:正常对照组,持续灌注Lock液65 min;缺血再灌注模型组,用含脂肪乳对照的灌流液灌注15 min后,以钳夹主动脉灌注管造成全心常温缺血25 min后,恢复再灌注30 min,灌流液与预灌时相同;异丙酚15,30,60 μmol/L组,缺血前和再灌期的灌流液中分别含相应浓度的异丙酚,余同缺血再灌注模型组;异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶抑制剂5斗mol/L组,灌流液中含5 μmol/L的chelerythrine的灌流液,其余同异丙酚60 μmol/L组.实验评估:①Powedab/8 s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30 min时心率、左室发展压、左室舒张末压、左室压力变化速率、冠状动脉流量等心功能指标.②测定冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶活性.③透射电镜观察心肌细胞超微结构变化.④差速离心提取心肌线粒体,测定线粒体超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、ATP酶活性和丙二醛含量.结果:48只大鼠均进入结果分析.①平衡灌注末、缺血前各组间心功能指标差异无显著性(P＞0.05),再灌注30 min末,异丙酚30,60 μmol/L组左室发展压、左室压力变化速率、冠状动脉流量明显高于缺血再灌注模型组(P＜0.05),左室舒张末压明显低于缺血再灌注模型组(P＜0.05).异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L组左室发展压、左室压力变化速率、冠状动脉流量明显低于单纯异丙酚60 μmol/L组(P＜0.05),但仍高于与缺血再灌注模型组(P＜0.05).②心肌缺血再灌后,冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性明显高于正常对照组(P＜0.05).异丙酚30,60 μmol/L组、异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L组乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性明显低于缺血再灌注模型组(P＜0.05),异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L组乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性与异丙酚60 μmol/L组无明显差异.③与缺血再灌注模型组相比,异丙酚组心肌损伤明显减轻,尤其是60 μmol/L组,心肌纤维排列均匀,线粒体膜结构完整,仅轻度水肿,嵴清晰,糖原可见.异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L.组心肌超微结构显示损伤程度重于异丙酚60 μmol/L组.④异丙酚30,60 μmoL/L、异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L组丙二醛含量低于缺血再灌注模型组(P＜0.05),ATP酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于缺血再灌注模型组(P＜0.05).异丙酚60 μmol/L组与异丙酚60 μmol/L+蛋白激酶C抑制剂5 μmol/L组相比,上述指标无明显差异.结论:异丙酚对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,可能与其抗脂质过氧化和激活蛋白激酶C有关.
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新疆地区维吾尔族乳腺癌中BRCA1基因突变及P53蛋白的表达
目的:了解新疆地区维吾尔族乳腺癌患者BRCA1基因突变及P53蛋白的表达情况.方法:选择2000-01/2004-06石河子大学医学院第一附属医院、喀什地区第一人民医院病理科收集的70例维吾尔族乳腺癌根治标本.其中维吾尔族早发性乳腺癌(≤35岁,即定为早发性乳腺癌)22例.51例患者淋巴结转移.2例为双侧乳腺癌.另选32例维吾尔族乳腺癌旁非癌组织及乳腺良性病变(纤维腺病及纤维腺瘤)作对照;上述标本为甲醛溶液固定石蜡包埋组织及少量新鲜冰冻组织.运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析和DNA序列测定的方法检测BRCA1基因突变及用Evision二步法检测P53蛋白的表达.结果:①70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1突变的12个新位点.②70例维吾尔族乳腺癌中BRAC1的突变率为12.86%(9/70);其中22例维吾尔族早发性乳腺癌(≤35岁)BRCA1突变率为31.82%(7/22),高于维吾尔族晚发性乳腺癌(2/48),差异有显著性(χ2=10.295,P＜0.01).③2例双侧乳腺癌中均检测出BRCA1基因的突变.④70例维吾尔族乳腺癌中发现9例BRCA1基因核苷酸多态性位点.⑤BRCA1基因突变相关性乳腺癌中P53蛋白阳性表达率高于对照组,其淋巴结转移率高于对照组,其发病年龄小于对照组.结论:BRCA1基因突变与新疆维吾尔族早发性乳腺癌及双侧乳腺癌的发生密切相关,且BRCA1突变相关性乳腺癌具有P53阳性率高、发病年龄趋于年轻化、淋巴结转移率高的趋势,这些特点有可能为基因检测前的筛选提供参考依据.
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阴茎及会阴浅层肌的解剖学特点及与勃起功能关系
目的:观察男性坐骨海绵体肌、球海绵体肌及阴茎血管的构筑特点,探讨其与勃起生理相关的解剖学因素.方法:实验于2004-07/2005-03在郑州铁路职业技术学院医学分院解剖学实验室完成.18例阴茎均取自死后3～5 h内的尸体(年龄18～63岁),流浪死亡者(无名无亲属)及自愿捐献者(捐献者或捐献者家属知情并同意).应用血管铸型法对18例成人阴茎制作血管铸型标本,再分别取下每具尸体两侧坐骨海绵体肌和球海绵体肌进行观察.用天平测量肌质量、用游标卡尺测量肌长(肌纤维起点近端至止点远端的距离)及用量角器测量羽状角(肌矢状切面上测量肌纤维与肌腱之间所形成的夹角)等指数.结果:阴茎海绵体内纵行的动脉发出无数树状分支,其中部分分支为毛细血管,此毛细血管汇合后注入白膜下静脉丛:部分形成螺旋动脉,与海绵窦相交通.引流海绵窦血液的窦后小静脉相互融合形成白膜下静脉丛,再汇合形成导静脉.坐骨海绵体肌肌质量(2.13±0.26)g,肌长(7.36±0.16)cm,羽状角(5.20±0.27)°;球海绵体肌肌质量(2.14±0.58)g,肌长(7.25±0.76)cm,羽状角(28.63±0.18)°.结论:副交感神经作用使阴茎动脉血管扩张,阴茎静脉和静脉分流支的管腔部分闭合,由于静脉回流受阻,引起阴茎海绵体和尿道海绵体充血膨胀,导致阴茎勃起.勃起的阴茎由于海绵体外坚韧的白膜的限制和会阴浅层肌尤其是坐骨海绵体肌的收缩,进一步压迫阴茎静脉,阻碍血液回流,勃起得以维持.球海面体肌收缩在协助勃起、缩窄和缩短尿道,帮助排尿和射精时,需要会阴浅横肌收缩加强会阴中心腱的稳定;坐骨海绵体肌收缩使硬勃起期的阴茎硬度增强,两肌协同作用,使勃起期的阴茎保持中立状态.
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偏头痛大鼠脑内5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶基因的表达变化及针刺的干预效应
目的:前期实验已证实针刺治疗偏头痛疗效优越.观察针刺对偏头痛大鼠脑内5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的调控作用.方法:实验于2005-11/2006-05在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成.①选用SD大鼠40只,按随机数字表法分为4组(n=10),除正常对照组外,其余3组均复制大鼠偏头痛模型.模型对照组只造模,不作其他处理;针刺治疗组造模后进行针刺;针刺预防组针刺后造模电刺激20 min.针刺方法:针刺大鼠双侧太冲、阳陵泉穴20 min.采用疏密波,电流强度0.3-0.6mA,留针20min,1次/d,共5次.②实验完毕后取脑干及三叉神经节匀浆,采用反转录-聚合酶链反应法测定5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达.结果:进入结果分析正常对照组10只,模型对照组、针刺治疗组、针刺预防组各9只,共脱失3只.①与正常对照组比较,模型对照组大鼠诱导型一氧化氮合酶mRNA表达显著增强(P＜0.01),5-羟色胺1F mRNA表达显著减弱(P＜0.01).②与模型对照组比较,针刺预防组和针刺治疗组诱导型一氧化氮合酶mRNA表达明显减弱(P＜0.01),5-羟色胺1F mRNA表达显著增强(P＜0.01).结论:针刺调控5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达可能是针刺防治偏头痛的分子机制.
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两种麻醉方法对单双肺通气期间能量代谢和呼吸氧价及应激反应的影响
目的:观察胸段硬膜外复合全静脉麻醉和全静脉麻醉对单、双肺通气能量代谢、呼吸氧价和应激反应的影响,比较两者的差异.方法:选择2004-07/2005-01徐州医学院附属医院心胸外科择期行食管癌根治术且需要单肺通气的患者40例,按随机数字表法分为硬膜外复合全静脉麻醉组(n=20)和全静脉麻醉组(n=20),经患者同意并签字后进入试验.分别在单肺通气和双肺通气时进行氧耗量、二氧化碳排出量、能量代谢和呼吸商测定,同时测量肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇和血糖水平.结果:40例患者全部进入结果分析,无脱落.①在单、双肺通气时硬膜外复合全静脉麻醉组的氧耗量、二氧化碳排出量、能量代谢均高于全静脉麻醉组(P＜0.05);两组患者单肺通气时段氧耗量、二氧化碳排出量、能量代谢低于双肺通气时段,但差异无显著性意义(P＞0.05).②在单、双肺通气时硬膜外复合全静脉麻醉组的肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇和血糖水平均低于全静脉麻醉组(P＜0.05);单、双肺通气相比,两组患者肾上腺素、去甲肾上腺素变化差异无显著性意义(P＞0.05).结论:与全静脉麻醉相比,胸段硬膜外阻滞复合全静脉麻醉能够增加胸科手术的氧耗量、能量代谢,减轻应激反应.单、双肺通气期间没有明显差异.
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结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达
背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性.目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达.设计:单一样本实验.单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室.材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠.方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成.以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒.再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6.通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达.主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小.②pEGFP-C1DNA序列分析.③转染后Hela细胞的荧光表达情况.④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果.结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7 kb,而pEGHsp65为6.4 kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7 kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异.②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同.③转染融合质粒24 h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分细胞表达荧光蛋白,说明融合质粒转染成功,转染率约为30%.未转染的Hela细胞则无荧光表达.④通过免疫组织化学法证实融合质粒在Hela细胞内能正确表达出具有生物学活性的Hsp65与ESAT-6蛋白.结论:采用Hsp65和Esat6搭配作为免疫原,成功克隆并构建了结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光真核表达质粒.
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益肾汤对糖尿病及糖尿病肾病患者血液流变学指标的影响
背景:多数糖尿病患者经过数年病理积累,特别是血液流变学异常所致的微循环障碍,终导致严重的并发症.目的:观察益肾汤对糖尿病和糖尿病肾病患者血液流变学的影响,并与健康体检对照进行比较.设计:对比观察实验.单位:哈尔滨医科大学第一临床医学院.对象:选择1998-01/2000-12哈尔滨医科大学第一临床医学院中西医结合科住院糖尿病患者76例为糖尿病组.选择本院1994-01/2001-02住院糖尿病肾病患者65例为糖尿病肾病组.选择本院1993年进行体检的健康者130名为对照组,男98名,女性32名,平均年龄(42±12)岁,均无糖尿病者.3组对象均对检测项目知情同意.方法:患者经常规治疗,加服益肾汤(仙灵脾、坤草、黄芪各20 g,枸杞子、黄精、首乌、山药、大黄各15 g,王不留行25 g,水蛭0.8 g(冲服)),将上方剂中药用文火煎200 mL,每日早晚分服疗程为4周.病例组均空腹采静脉血2 mL,于治疗前后进行血液流变学测定,对照组在体检时做血液流变学测定.主要观察指标:血液流变学指标.结果:糖尿病患者76例、糖尿病肾病患者65例、健康体检的130名均进入结果分析.①治疗前,糖尿病组患者的全血黏度、血浆黏度及血浆纤维蛋白原含量与正常对照组相比,均明显升高(P＜0.05～0.01).这种变化在糖尿病肾病组更为明显(P＜0.01),糖尿病肾病组红细胞压积及血沉方程K值亦明显高于正常对照组(P＜0.01).糖尿病肾病组患者治疗前全血黏度、红细胞压积、血沉方程,(值明显高于糖尿病组(P＜0.05-0.01).②治疗后糖尿病组和糖尿病肾病组全血和血浆黏度、红细胞压积、血沉方程K值明显降低并基本恢复正常,与正常对照组相近(P＞0.05).结论:益肾汤可改善糖尿病及其肾脏并发症患者的血液流变学指标.
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去势雌干眼症模型鼠睑板腺上皮细胞凋亡及其组织损伤
目的:建立去势雌干眼症动物模型并探讨干眼症模型鼠睑板腺上皮细胞凋亡、相关基因表达与组织损伤的关系.方法:实验于2003-07/2004-07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心及眼科病理室完成.①实验动物:清洁级健康成年Wistar雌性大白鼠20只,体质量180～200 g,无眼疾患.②实验分组:采用随机数字表法分为去势雌组及对照组,每组10只.③实验干预:去势雌组摘两侧卵巢.对照组按相同方法找到卵巢后不摘除.去势雌组分别于手术前和手术后2,3,4,5,6个月行Schirmer试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色检测.④去势雌组分别于术前、术后第1天、第9天心脏穿刺取血,采用化学发光法测量血清雌二醇水平(取血后有数只大鼠死亡,分别按上述步骤补齐);6个月后麻醉下处死两组动物,取睑板腺进行病理组织学观察,并采用免疫组织化学方法检测睑板腺上皮细胞中的Bax、bcl-2等相关基因蛋白的表达.结果:20只大鼠进入结果分析.①血清雌激素水平测定结果:去势雌组术后血清雌二醇水平明显低于手术前[(16.34±3.15),(43.57±2.81)ng/L,P＜0.01].②两组大鼠眼表损害的检查结果:去势雌组5个月起泪膜破裂时间明显低于正常对照组,且随观察时间的延长差异有显著性(P＜0.01);4个月起角膜荧光素染色阳性,且随观察时间延长加重.③两组大鼠睑板腺光镜观察:病理学观察去势雌鼠睑板腺腺细胞萎缩,腺管扩展.④两组大鼠睑板腺上皮凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达:睑板腺上皮细胞中Bax阳性表达的细胞数明显高于对照组(P＜0.01).bcl-2阳性表达的细胞数明显低于对照组(P＜0.01).结论:去势后雌鼠雌二醇水平明显低下,睑板腺上皮细胞中Bax增加及bcl-2减少均与促进细胞凋亡有关,可能是导致组织学改变进而功能丧失引起干眼症的原因之一.
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脑损伤大鼠皮质神经细胞凋亡过程中细胞外调节激酶通路的作用
目的:细胞外调节激酶通路在凋亡信号转导中具有重要作用,观察细胞外调节激酶信号转导通路在颅脑损伤中的作用.方法:实验于2004-09/2006-01在华北煤炭医学院中心实验室完成.选用SD大鼠70只,按随机数字表法分为2组,即对照组(n=28)和模型组(n=42),每组又分为伤后10 min,30 min,3 h,6 h,24 h,48 h和72 h 7个时相点,对照组每个时相点4只大鼠,模型组每个时相点6只大鼠.按照Mamarou方法建立大鼠重型弥漫性颅脑损伤模型,在不同时相点采用免疫组化、Western-blot法分别检测两组大鼠颅脑损伤后皮质细胞外调节激酶的表达情况,另外分别应用原位杂交方法、原位末端标记法检测半胱氨酸天冬氨酸酶3及凋亡细胞,并进行比较.结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①模型组大鼠皮质p-细胞外调节激酶1/2蛋白在伤后10 min时已较对照组明显升高(P＜0.05),逐渐增强,伤后6 h达高峰,24 h仍有大量表达,明显高于对照组(P＜0.01),至伤后48 h降至对照组水平(P＞0.05).②模型组大鼠皮质半胱氨酸天冬氨酸酶3 mRNA杂交阳性信号表达在伤后3 h开始升高,48 h达高峰,72 h仍明显高于对照组(P＜0.01).③模型组大鼠皮质伤后3 h偶见原位末端标记阳性细胞,6 h开始增加,明显高于对照组(P＜0.01),48 h达高峰.④p-细胞外调节激酶1/2蛋白与半胱氨酸天冬氨酸酶3 mRNA及原位末端标记阳性细胞均主要分布于损伤中心区及其周围,在分布区域上呈现很大的相似性.结论:脑损伤时p-细胞外调节激酶1/2蛋白表达呈一种过度激活状态,而且与半胱氨酸天冬氨酸酶3 mRNA及原位末端标记阳性细胞在分布区域上呈现很大的相似性,推测大鼠脑损伤后细胞外调节激酶通路的过度激活是导致神经细胞凋亡的作用途径之一.
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运动强度与端粒酶表达及心肌细胞受损的关系
目的:分析运动强度与端粒酶表达及心肌细胞受损的关系.方法:实验于2005-04/11在华中师范大学体育学院人体科学实验室完成.①雄性SD大鼠30只,随机分为3组,对照组,有氧训练组,过度训练组,每组10只.②对照组不加任何训练;有氧训练组大鼠不负重,每天游泳训练75 min,每周训练5 d,休息2 d.过度训练组大鼠每天游泳训练180 min,每周训练5 d,休息2 d.从第4周开始,大鼠尾部负重,重物为体质量的5%,第一天负重5 min,以后每次增加10 min,直至180 min全程负重.总训练时间16周.16周后处死,于左心室处取材,常规脱水石蜡包埋,切片,行苏木精一伊红染色.端粒酶TERT mRNA的检测采用原位杂交法,TERT mRNA表达阳性被染为棕黄色.用Image-pro plus 5.2图像分析系统测定阳性单位的积分吸光度值.结果:进入结果分析22只,对照组9只,有氧训练组8只,过度训练组5只.①有氧训练组心肌肌纤维平行排列,体积增大,细胞核呈椭圆形,体积较对照组增大.过度训练组肌纤维肿胀,细胞核增大,核间隙增宽,局部出现细胞核溶解,呈空泡状,肌浆凝聚和炎性细胞的浸润.②有氧训练组和过度训练组积分吸光度值高于对照组(54.876±25.883,142.08±56.621,0,P＜0.01):过度训练组积分吸光度高于有氧训练组(P＜0.05).结论:运动可以促进端粒酶的表达,并且随运动强度的增大而增多,适宜的运动有助于端粒酶修复损伤的心肌细胞;过度运动时,端粒酶不能完全修复损伤的心肌细胞,心脏发生病理性改变.
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轮叶党参提取物对酒精性肝损伤的保护作用
目的:探讨轮叶党参提取物保护酒精性肝损伤的作用及其机制.方法:实验于2006-03门2在延边大学基础医学部卫生学教研室完成.选用雄性昆明种小鼠40只,普通级,由延边大学医学部实验动物科提供.按体质量随机分为4组,分别为正常对照组、乙醇组、轮叶党参提取物低剂量组及高剂量组,每组10只.各组小鼠均以每次0.1 mL/10 g体质量灌胃,正常对照组和乙醇组上午灌胃蒸馏水,轮叶党参提取物低剂量组和高剂量组分别灌胃轮叶党参提取物1g/kg和2 g/kg,下午除正常对照组蒸馏水灌胃外,其他各组以食用乙醇灌胃,浓度为450 mL/L,连续8周.末次灌胃后禁食12 h,颈椎脱臼处死小鼠后迅速取出肝脏,用冷匀浆介质制成10%肝匀浆.检测肝组织中三酰甘油、丙二醛、硒含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性.结果:实验共纳入昆明中小鼠40只,全部进入结果分析.①轮叶党参提取物对肝脏三酰甘油、丙二醛含量的影响:乙醇组三酰甘油、丙二醛含量明显高于正常对照组(P＜0.05),轮叶党参提取物低剂量组和高剂量组三酰甘油、丙二醛含量也明显低于乙醇组(P＜0.05),与正常对照组比较,差异不明显(P＞0.05).②轮叶党参提取物对肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及硒含量的影响:低剂量组和高剂量组的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及硒含量均明显高于乙醇组(P＜0.05).结论:轮叶党参提取物可能通过抗氧化、增强自由基及其代谢产物的清除能力,抑制脂质过氧化反应,从而起到对酒精性肝损伤的保护作用.
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大豆磷脂脂质体对FeS04/Cysteine引起培养心肌细胞损伤的保护效应
目的:观察大豆磷脂脂质体的累积对FeSO4/Cysteine体系产生羟自由基引起心肌细胞损伤的保护作用.方法:①实验于2003-10/2004-07在锦州医学院生物化学实验室完成.选用新生两三天清洁级SD大鼠的乳鼠10～15只,取心肌细胞进行原代培养48 h后,随机分成3组:正常对照组、损伤组和大豆磷脂脂质体保护组.损伤组加入FeSO4/Cysteine(终浓度FeSO4 1×10-3mol/L + Cysteine 5×10-4 mol/L)作用于培养的乳鼠心肌细胞12 h.大豆磷脂脂质体保护组在加入损伤因素的同时加入不同质量浓度的大豆磷脂脂质体(0.2,0.4,0.8,1.6 g/L).②测定心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶的活力,心肌细胞中丙二醛的含量和超氧化物歧化酶的活力,均参照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书进行.培养心肌细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶的活力采用甲基四唑蓝比色测定.结果:①培养液中乳酸脱氢酶的活力:损伤组显著高于正常对照组(P＜0.01).大豆磷脂脂质体保护各组均低于损伤组(P＜0.01).②培养心肌细胞中丙二醛的含量:损伤组显著高于正常对照组(P＜0.01).大豆磷脂脂质体保护各组均低于损伤组(P＜0.01).③培养心肌细胞中超氧化物歧化酶的活力:损伤组显著低于正常对照组(P＜0.01).大豆磷脂脂质体保护各组均高于损伤组(P＜0.01).④心肌细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶的活力:损伤组显著低于正常对照组(P＜0.01).大豆磷脂脂质体保护各组均高于损伤组(P＜0.01).⑤大豆磷脂脂质体保护作用在一定浓度范围(0.2～0.8 g/l.)随着浓度的升高而增强,但剂量达到一定浓度,大豆磷脂脂质体保护作用不再随着浓度的升高而增强.结论:大豆磷脂脂质体对FeSO4/Cysteine体系产生的羟自由基引起的心肌细胞损伤具有明显的保护作用,且存在大豆磷脂脂质体浓度依赖性.
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阿霉素致兔心脏毒性心肌细胞凋亡及相关基因bcl-2,bax蛋白表达变化
目的:观察不同剂量阿霉素心脏毒性心肌细胞凋亡情况及相关基因bcl-2,bax蛋白表达变化.方法:实验于2005-06/2006-08在大连医科大学附属第二医院实验中心完成.选用健康新西兰纯种白兔42只,按随机数字表法分成4组:①对照组(n=10),给予2 mL/kg的生理盐水静脉注射,1次,周,共8周.②阿霉素4 mg/kg组(n=10),给予阿霉素2mg/kg,以生理盐水稀释耳缘静脉注射,1次,周,共2周.③阿霉素8mg/kg组(n=10),同样方法给予阿霉素,共4周.④阿霉素16 mg,kg组(n=12),同样方法给予阿霉素,共8周.12周后麻醉处死兔,取心肌组织,应用原位末端标记法标记凋亡的心肌细胞;应用免疫组织化学法检测bcl-2,bax蛋白的表达,以平均吸光度表达.结果:阿霉素16 mg/kg组兔死亡3只,后39只兔进入结果分析.①透射电镜观察结果:对照组、阿霉素4 mg/kg组未见心肌细胞凋亡;阿霉素8 mg/kg组和阿霉素16 mg/kg组均观察到细胞核变小、核染色质浓缩、边聚的凋亡心肌细胞.②心肌细胞凋亡指数:对照组、阿霉素4 mg/kg组未见心肌细胞凋亡;阿霉素8 mg/kg组和阿霉素16 mg/kg组心肌细胞凋亡指数显著高于对照组(P＜0.01).③心肌bcl-2与bax蛋白表达:阿霉素8/16 mg/kg组bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),bax蛋白表达显著高于对照组(P＜0.01),bcl-2/bax显著低于对照组(P＜0.01).阿霉素16 mg/kg组bcl-2蛋白表达显著低于阿霉素8 mg/kg组(P＜0.01),bax蛋白表达显著高于阿霉素8 mg/kg组(P＜0.01).与对照组相比,阿霉素4 mg/kg组bcl-2,bax蛋白表达及bcl-2,bax无明显变化(P＞0.05).结论:阿霉素4 mg/kg组可能因阿霉素剂量小未出现心肌细胞凋亡,阿霉素8,16 mg/kg组可见典型凋亡心肌细胞,并且呈一定的量效关系,进一步说明细胞凋亡机制参与了阿霉素心脏毒性的病理过程,其作用与下调bcl-2基因的蛋白表达、上调bax基因的蛋白表达有关.
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雄黄对哮喘豚鼠嗜酸细胞作用的量效和时效性
目的:观察抑喘中药雄黄对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸细胞的作用,并分析量效及时效性.方法:实验于2005-03/2006-07在广州医学院中心实验室进行.①采用卵白蛋白制备哮喘豚鼠模型并激发哮喘,提取肺泡灌洗液并分离其中的嗜酸细胞.②将嗜酸细胞悬浮生长于含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,嗜酸细胞初始浓度均为2×109L-1.一组雄黄以1.562 5 mg/L终浓度分别加入细胞培养液中,培养3,6,12,24,48 h.以不加雄黄为对照.另一组将雄黄终浓度调整为0.05,0.1,0.19,0.39,0.78,1.56,3.19mg/L.,培养6 h.以不加雄黄为对照.③Wright's 染色、透射电子显微镜观察嗜酸细胞的形态学变化.流式细胞仪检测观察嗜酸细胞凋亡率.免疫组织化学染色观察嗜酸细胞bcl-2基因表达.结果:①嗜酸细胞与雄黄作用6 h后,Wright's 染色、透射电子显微镜观察到嗜酸细胞核固缩,染色体边集现象,核膜表面凹凸不平,部分嗜酸细胞出现了细胞核碎裂,有少量的凋亡小体形成.②1.562 5 mg/L.雄黄在培养基中分别培养3,6,12,24,48 h后,流式细胞检测可见嗜酸细胞凋亡率随着雄黄作用时间的延长而先升高,于24 h达高,凋亡率为26.21%,而后下降,各不同时间组嗜酸细胞凋亡率与对照组相比,差异均有显著性.将嗜酸细胞与不同终浓度雄黄在培养基中分别培养6 h后,流式细胞检测可见嗜酸细胞凋亡率随着雄黄浓度的增加而升高,各不同浓度组嗜酸细胞凋亡率与不加雄黄的对照组相比,差异亦均有显著性.③经雄黄处理的嗜酸细胞bcl-2蛋白表达较对照组低.结论:雄黄促进哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸细胞凋亡,随着雄黄作用时间的延长和浓度增加这种作用更明显.bcl-2基因参与了嗜酸细胞凋亡的过程.
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肺纤维化鼠Ⅰ型前胶原和Ⅲ型前胶原mRNA表达及芪丹颗粒剂的干预效应
目的:观察芪丹颗粒对博莱霉素致肺纤维化鼠的Ⅰ型前胶原和Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响,探讨其作用机制.方法:实验于2004-10/2006-10在山东省医学科学院基础所病理实验室完成.实验材料:清洁级雄性SD大鼠.160只,体质量180～210 g.氢化可的松琥珀酸钠50 mg/支;芪丹(颗粒剂)是由黄芪、丹参、川芎等中草药加工提纯后的粗提取物制成的颗粒剂,10 g/包(1 g干粉相当于原生药8 g).实验分组:160只SD大鼠按随机区组设计分为正常组20只、模型组40只、芪丹颗粒剂50只、氢化可的松50 N.实验干预:正常组20只气管内灌注和灌胃均用生理盐水.其余大鼠经气管内一次性灌注博莱霉素A5按0.25 mL.左右(5 mg/kg体质量)诱导大鼠肺间质纤维化.随机取40只为模型组.取芪丹颗粒剂组和氢化可地松组大鼠各30只,分别从造模后第2天灌注芪丹颗粒剂(3125mg/kg)和腹腔注射氢化可的松(25mg/kg),药物干预后第7,14,28天麻醉下处死动物.两组各余20只分别从造模14 d后灌注芪丹颗粒剂和腹腔注射氢化可的松(用量同前),于第28、42天分别处死动物.实验评估:用苏木精-伊红评价肺组织病理学变化和原位杂交方法检测各组大鼠肺I型和Ⅲ型前胶原mRNA表达.结果:160只大鼠全部进入结果分析.①大鼠肺脏大体标本观察:对照组肺组织各观察时间点无明显改变,模型组肺组织表面凸凹不平,部分肺叶体积缩小,表面见灰白色结节.氢化可的松组与模型组相似.芪丹颗粒剂组见部分肺叶表面不光滑及大小不等结节.②肺组织病理学观察:模型组7 d肺泡腔内大量巨噬细胞淋巴细胞中性粒细胞浸润,肺间质成纤维细胞增殖,28 d肺泡结构破坏肺泡内见大量胶原纤维和成纤维细胞.芪丹颗粒剂组肺泡炎及肺纤维化程度均明显轻于模型组和氢化可的松组(P＜0.05).③肺间质纤维化形成中Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA表达:原位杂交显示两种前胶原mRNA表达呈动态变化,早期肺泡炎以Ⅲ型前胶原mRNA大量增生为主,晚期纤维化期以Ⅰ型前胶原mRNA增生为主.芪丹颗粒剂组m型前胶原mRNA的表达在第14天处于高,至28 d仍维持较高的水平,芪丹颗粒剂组Ⅲ型前胶原mRNA的表达高于模型组和氢化可的松组(P＜0.05).28 d,Ⅰ型前胶原mRNA的表达在第二天给药芪丹颗粒剂组和氢化可地松组及第14天给药芪丹颗粒剂组和氢化可的松组组间差异均有显著性(P＜0.05).结论:大鼠肺纤维化的早期以Ⅲ型前胶原mRNA的表达为主,晚期纤维化期以Ⅰ型前胶原mRNA的大量表达为主.芪丹颗粒可减轻博莱霉素诱导的大鼠肺泡炎及肺纤维化的程度,其机制可能通过影响了Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的代谢和表达,从而减慢肺间质纤维化的进程.芪丹颗粒对肺间质纤维化有治疗作用,且优于氢化可的松.
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构建消除糖皮质激素抵抗新靶点的BAG-1质粒表达载体
目的:利用RNA干扰技术,建立脂多糖和地塞米松作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG一1基因阻断模型,并阐明BAG-1表达对糖皮质激素受体抗炎活性的影响.方法:本实验于2006-02/09在南京军区南京总医院呼吸病实验室进行.选用健康SPF级Wistar大鼠10只,鼠龄四五周,雌雄不拘.采用支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞,将分离培养得到的大鼠肺泡巨噬细胞随机分为4组:正常对照组、阴性对照组、SiBAG-1α转染组及SiBAG-1β转染组.通过在线寻找针对BAG-1基因的RNA干扰靶序列并设计对应的寡核苷酸序列,将退火的合成寡核苷酸序列插入pSilencer3.1H1-hygro质粒载体,构建RNA干扰质粒SiBAG-1 α和SiBAG-1β,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞,阴性对照组是试剂盒提供的阴性对照质粒pSilencer3.1H1-negetive.运用细胞免疫组织化学法检测各组细胞核中BAG-1表达变化,以胞核中积分吸光度平均值表示BAG-1表达的相对强度;运用电泳迁移率改变分析法检测各组糖皮质激素受体活性变化,以扫描条带的灰度值与滞后带面积之积表示糖皮质激素受体的活性.结果:①合成的寡核苷酸片段正确连入pSilencer3.1H1-hygro质粒载体,成功构建针对BAG-1基因的RNA干扰重组质粒SiBAG-1α和SiBAG-1β(上海博亚公司测序号分别为1524-036和1524-037).②质粒SiBAG-1α转染组胞核内BAG-1蛋白表达较正常对照组明显降低(3.46±0.75,13.58±0.47,P＜0.05),而质粒SiBAG-1β转染组胞核内BAG-1蛋白表达与正常对照组比较差异无显著性意义(15.27±+0.89,13.58±0.47,P＞0.05).③质粒SiBAG-1α转染组细胞糖皮质激素受体活性与正常对照组明显增强(9.62±0.47,2.65±0.22,P＜0.05),质粒SiBAG-1β转染组细胞糖皮质激素受体活性与正常对照组比较差异无显著性意义(2.79±0,57,2.65±0.22,P＞0.05).结论:成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断BAG-1表达的质粒表达载体SiBAG-1α,抑制BAG-1表达可恢复糖皮质激素受体抗炎活性,逆转糖皮质激素受体活性下降所致的糖皮质激素抵抗.BAG-1是消除糖皮质激素抵抗的新靶点.
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构建糖尿病性肢端坏疽大鼠模型及中药复方的干预效应
背景:糖尿病性肢端坏疽已成为糖尿病致残、致死的重要原因之一.目的:建立糖尿病性肢端坏疽的大鼠模型,观察中药复方对糖尿病性肢端坏疽的干预作用.设计:对比观察实验.单位:河南科技大学临床医学院第一附属医院.材料:选用雄性Wistar大鼠50只,6周龄,体质量(200.0±16.3)g.以普通饲料单笼喂养,室温18～22℃,自由摄食、饮水.随机抽取10只作为空白对照组,其余40只用于造模.方法:实验于2001-10/2002-04在河南科技大学动物房完成.①实验分组:将40只大鼠禁食6 h后左下腹腹腔注射链脲佐菌素55.0 mg/kg;空白对照组注入同体积的柠檬酸钠缓冲溶液.选用造模成功的20只大鼠,随机分为2组:模型组和治疗组,每组10只.治疗组大鼠于造模成功后每天9:00灌胃中药(60 g/kg),共3周;模型组灌胃等体积的生理盐水.第3周末,各组大鼠禁食12 h,麻醉后处死取血测血糖、血脂和胰岛素水平;实验过程中记录各组大鼠的每日饮水量.②实验评估:肢端坏疽积分标准:以皮肤颜色发黑、皮肤有轻度开放性病灶、病灶已侵入深部肌肉组织3个等级对糖尿病性肢端坏疽大鼠的四肢进行评分,计算每只大鼠的总积分.对胰岛β细胞分泌的功能进行评价主要观察指标:实验前后大鼠饮水量、体质量、三酰甘油、胆固醇、空腹血糖、血脂和胰岛素水平的变化.结果:纳入Wistar大鼠50只,造模不成功脱落20只,30只进入结果分析.①实验期间,模型组和治疗组饮水量明显高于空白对照组(P＜0.01);治疗组随着治疗时间增加饮水量明显下降,模型组随着时间的推移逐渐升高.②治疗后模型组大鼠体质量明显低于治疗前(P＜0.01),治疗组有下降趋势,与治疗前比较,差异不明显(P＞0.05).③两组大鼠均有明显肢端坏疽出现(P＜0.01).治疗组大鼠的体质量明显高于模型组(P＜0.01),肢端坏疽情况明显好于模型组(P＜0.01).④治疗前治疗组和模型组的空腹血糖水平明显高于空白对照组(P＜0.01),而胰岛素水平和胰岛β细胞功能指数明显低于空白对照组(P＜0.01).治疗后两组的空腹血糖水平高于空白对照组(P＜0.01),治疗组的明显低于模型组(P＜0.01),已接近正常值;两组血脂和胰岛β细胞功能指数均明显低于空白对照组(P＜0.01),治疗组明显高于模型组(P＜0.01),接近正常值.⑤治疗前其它两组三酰甘油、胆固醇水平明显高于空白对照组(P＜0.01).经过治疗,治疗组三酰甘油、胆固醇明显下降(P＜0.01),与空白对照组比较,差异不明显(P＞0.05);模型组继续升高,明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:血清胰岛素水平升高,血糖、血脂水平下降,可在一定程度上防治糖尿病足的发生、发展.该糖尿病性肢端坏疽模型对药物反应敏感,可用于研究糖尿病足发病机制及药物治疗效果的评价.
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重组腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗慢性充血性心力衰竭:短期及中期作用
背景:慢性充血性心力衰竭(CHF)时,心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase,SERCA2a)的蛋白表达和活性均明显降低,这导致钙离子的调控异常和心脏收缩和舒张功能不全.目的:观察腺相关病毒为载体的SERCA2a基因转导对CHF大鼠的短期和中长期治疗作用,探讨其治疗心力衰竭的多种可能的机制.设计:随机对照设计.单位:解放军总医院老年心内科和病理生理研究室.方法:将雄性SD大鼠随机分为,假手术组,CHF组,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组4组,每组又分为基因转导10,30 d 2个时间点,后3组采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,手术后18～20周,造模成功的大鼠进行经腹心包腔内注射,CHF组注射500μL无菌生理盐水,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组分别注射等量携带GFP基因和SERCA2a基因的重组腺相关病毒.主要观察指标:①于基因转导后10,30 d,检测大鼠的血流动力学参数,应用Western Blot方法检测SERCA2a蛋白表达;改良的Jones法测定SERCA2a活性.②应用蛋白质组学研究技术分析比较基因转导30 d组中CHF和CHF+SERCA2a亚组大鼠的心肌蛋白质组表达的差异.③应用电泳分离和定量的方法检测基因转导30 d组的各亚组大鼠心肌肌球蛋白重链亚型的表达情况.结果:①SERCA2a蛋白表达和活性:CHF组和CHF+GFP组低于假手术组.基因转导10 d后,CHF+SERCA2a组与CHF组比较,SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%,但低于假手术组水平;基因转导30 d后,CHF+SERCA2a组SERCA2a蛋白表达和活性已经达到假手术组大鼠水平.②心脏功能:基因转导10 d后,CHF+SERCA2a组血流动力学指标中左室舒张末压力明显下降,其他指标明显升高,但未完全达到对照大鼠的心功能水平;基因转导30 d后心脏收缩和舒张功能进一步改善,各项指标与假手术组比较差异不显著.③心肌蛋白质组的研究发现,基因转导30 d后,CHF+SERCA2a组多种能量代谢的酶表达明显增加.④凝胶电泳发现:CHF时α-MHC的表达明显降低而β-MHC则显著增加,α-MHC/β-MHC明显低于假手术组大鼠;基因转导30 d后,α-MHC、β-MHC的表达以及α-MHC/β-MHC恢复至假手术组大鼠水平.结论:以重组腺相关病毒2作为载体,SERCA2a基因转导可以增强衰竭心脏的SERCA2a功能,纠正Ca2+稳态异常,增加心脏能量代谢,纠正MHC亚型的异常表达,增强心脏收缩和舒张功能;因而SERCA2a基因转导对CHF具有良好的短期和中长期治疗作用.
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高脂血症阶段自发代谢综合征及2型糖尿病模型大鼠肾小管上皮细胞电压敏感性尿酸盐转运体的表达
目的:观察自发代谢综合征及2型糖尿病动物模型(OLETF大鼠)在高脂血症阶段肾小管上皮细胞电压敏感性尿酸盐转运体的表达.方法:实验于2006-05/10在青岛大学医学院附属医院医学动物实验中心和分子中心实验室完成.选择雄性4周龄OLETF大鼠10只为OLETF组,同系4周龄LETO大鼠(非糖尿病)10只为对照,基础饮食至11周龄.采用定量RT-PCR方法检测电压敏感性尿酸盐转运体在肾皮质中的表达,记录并比较两组大鼠7周龄和11周龄时体质量、体长,及11周龄三酰甘油、总胆固醇、尿酸、肌酐、尿素氮和高密度脂蛋白.结果:20只大鼠均进入结果分析.①7及11周龄时OLETF大鼠体质量大于同龄LETO大鼠[7周龄:(282.42±18.75),(224.58±17.33)g;11周龄:(380.33±30.98),(301.58±25.15)g;P均＜0.05],体长也大于同龄LETO大鼠[7周龄:(18.80±0.79),(17.00±0.82)cm,P＜0.05;11周龄:(20.08±0.67),(18.17±1.19)cm,P＜0.01];但Lee's 指数无明显差别.②11周龄时,OLETF大鼠三酰甘油和总胆固醇高于LETO大鼠[(1.24±0.43),(0.41±0.14)mmol/L;(1.92±0.19),(1.46±0.15);P均＜0.05];尿酸较LETO组增高,但差异不显著,其他指标两组无明显差别.③OLETF大鼠大鼠电压敏感性尿酸盐转运体mRNA的表达水平低于LETO大鼠(0.32±0.12,1.12±0.63,P＜0.05).结论:OLETF大鼠在高脂血症阶段,随着尿酸的升高,电压敏感性尿酸盐转运体mRNA的表达明显降低,可能通过下调电压敏感性尿酸盐转运体的表达,来调节体内尿酸的排泄,脂代谢紊乱和高尿酸血症可能通过该纽带相联系.
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肠聚集性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的结构和功能
目的:通过了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌中的结构和摄铁功能,从而进一步研究肠聚集性大肠杆菌的毒力进化及其致病机制.方法:实验于2005-08/2006-09在南方医科大学公共卫生与热带医学学院完成.6株肠聚集性大肠杆菌采自某部队腹泻患者粪便,并经血清学鉴定.采用聚合酶链反应方法观察肠聚集性大肠杆菌中强毒力岛irp2和fyua阳性检出率和强毒力岛在阳性菌株中的定位鉴定.原位杂交方法进行肠聚集性大肠杆菌中强毒力岛irp2和fyua基因序列分析.SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳方法观察小肠结肠炎耶尔森菌WA和毒力岛阳性的肠聚集性大肠杆菌HMWP1和HMWP2的表达.结果:6株肠聚集性大肠杆菌有5株检出了强毒力岛,检出率达到83.33%,而且这些阳性菌株中的毒力岛都位于天冬氨酸tRNA位点;在缺铁条件下,肠聚集性大肠杆菌能够表达和小肠结肠炎耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2.结论:小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在肠聚集性大肠杆菌中具有阳性率较高的分布,并具有相同的摄铁功能,很可能肠聚集性大肠杆菌和小肠结肠炎耶尔森菌中的强毒力岛有相同的转移机制.
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缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性的变化
目的:制备大鼠在体缺血再灌注模型,观察缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性的变化.方法:实验于2005-03/2006-10在解放军沈阳军区总医院医学实验动物中心和全军心血管研究所实验室完成.实验分组:选用健康雌性SD大鼠36只,根据预适应程序分为第1,2,3次缺血,第1,2,3次再灌注,每一时间点6只大鼠.实验过程:用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注.所有实验动物在实验程序结束后,取出心脏迅速置液氮保存备用.实验评估:用放射免疫法测环磷酸腺苷水平,生化法测环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性变化.结果:36只大鼠均进入结果分析.①环磷酸腺苷含量:第1次再灌注组低于第1次缺血组[(0.325±0.015),(0.395±0.024)pmol/g,t=6.06,P＜0.001],第2次再灌注组低于第2次缺血组[(0.523±0.017),(0.708±0.067)pmol/g,t=6.56,P＜0.001],第3次再灌注组低于第3次缺血组[(0.567±0.031),(0.712±0.038)pmol/g,t=7.24,P＜0.001].②环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性:第1次再灌注组低于第1次缺血组[(10.115±1.000),(16.351±0.849)pkat/g,t=11.12,P＜0.001],第2次再灌注组低于第2次缺血组[(11.877±2.213),(14.869±0.619)pkat/g,t=3.31,P＜0.01],第3次再灌注组低于第3次缺血组[(11.745±0.987),(14.766±0.329)pkat/g,t=7.09,P＜0.001].③缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性随缺血及再灌注呈周期性波动.在5 min缺血预处理时表现为明显增高,而在间隔的再灌注程序中恰呈相反改变,有明显下降的趋势.结论:环磷酸腺苷及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶的周期性波动变化可能是激发心肌缺血预处理的机制之一,环磷酸腺苷可能在预处理保护作用中起一些作用.
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缺血预处理减轻胰腺移植受体大鼠小肠肠黏膜屏障的损害
背景:胰腺移植过程中的缺血再灌注损伤可以引起术后众多的并发症,其中继发性胰腺炎可以导致受体小肠黏膜的损伤,造成严重的后果.目的:观察缺血预处理对大鼠胰腺移植受体肠黏膜屏障的保护作用.设计:随机对照动物实验.单位:解放军第四军医大学西京医院胃肠外科.材料:实验于2001-09/2004-04在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.动物为SD雄性大鼠83只.方法:①取47只大鼠,自阴茎静脉注射脲链霉素65 mg/kg制备糖尿病大鼠模型.将造模成功的36只大鼠随机分为缺血再灌注组,供体缺血预处理组(DIPC组),受体双后肢缺血预处理组(RIPC组)3组,每组12只.剩余36只正常大鼠中随机取12只为对照组,另外24只为供体.②对照组仅行开腹术,其他3组行胰腺移植.DIPC组于获取供胰前阻断供体脾血管5 min再灌注5 min 2次;RIPC组于供胰再灌注前阻断受体双后肢血流5 min再灌注5 min,重复3次;缺血再灌注组不作处理.主要观察指标:①手术后5 d各组随机取6只大鼠检测小肠通透性(以血浆中FITC-dextran浓度表示)和吸收功能(以血浆中木糖浓度表示).②各组其余6只大鼠于术后5 d取血检测血清肿瘤坏死因子α、NO、超氧化物歧化酶和淀粉酶活性,取回肠黏膜组织检测小肠黏膜黏膜湿重、微绒毛高度及宽度、丙二醛含量及髓过氧化物酶活性,同时取肠系膜淋巴结、肝及脾组织进行细菌培养,观察细菌易位情况.结果:经补充后72只大鼠进入结果分析.①血浆中FITC-dextran浓度:缺血再灌注组高于对照组、DIPC组和RIPC组(P＜0.01).②血浆中木糖浓度:缺血再灌注组低于对照组、DIPC组和RIPC组(P＜0.01).③细菌易位率:缺血再灌注组高于对照组、DIPC组和RIPC组(P＜0.01).④小肠黏膜损伤程度:缺血再灌注组低于其他3组(P＜0.01).⑤缺血再灌注组小肠髓过氧化物酶活性和丙二醛含量显著高于其他3组(P＜0.01),血清超氧化物歧化酶活性和NO水平低于其他3组,淀粉酶活性和肿瘤坏死因子α水平高于其他3组(P＜0.01).结论:供体和受体双后肢缺血预处理均可保护大鼠胰腺移植受体小肠肠黏膜屏障,降低细菌易位率
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肝细胞移植治疗慢性乙型重型肝炎:2年随访
背景:近年来发展的肝细胞移植作为肝衰竭及遗传性代谢性肝脏疾病的一种治疗措施日益受到重视.目的:随访2年评估1例人肝细胞移植治疗慢性乙型重型肝炎患者的疗效.设计:病例报告,随访2年.单位:解放军第三○二医院感染九科及生物工程研究室.对象:纳入解放军第三○二医院感染住院的慢性重型肝炎患者1例.经实验室检查等确诊.用于移植的肝脏细胞由1名24岁供体提供,该供体生前签署过肝脏捐赠协议,且肝脏健康.方法:于2004-12在解放军第三○二医院放射科完成肝细胞体内移植.分离肝脏,获得人原代肝细胞并冷冻保存,复苏后经股动脉插管移植到受体脾脏,观察治疗前后患者临床症状及血液生化指标改变及脾脏核磁共振信号的改变.患者术后每半年复诊检测1次肝功能、凝血功能、B超及胃镜检查、MRI,随访2年.主要观察指标:患者肝功能、凝血功能、影像学指标、免疫学指标、并发症和排斥反应发生情况.结果:①人肝脏可获取(1～2)×1010肝细胞,复苏后肝细胞存活率在60%以上,移植的肝细胞数为2×109个.②移植后2个月,患者临床症状明显改善,血胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶明显降低,凝血酶原活动度明显升高.移植20个月后MRI提示脾脏内可见肝细胞信号.术后2年患者血总胆红素20 μmot/L,直接胆红素7μmol/L,丙氨酸氨基转移酶416.75 nka/L,天门冬氨酸氨基转移酶533.44 nkat/L,白蛋白37g/L,凝血酶原活动度90%,较术前明显改善(474.5,340.3 μmol/L,400.08,1 200.24 nkat/L,38 g/L,25%).患者可从事正常一般家务活动及轻体力工作.未出现腹水及肝功能衰竭等并发症,未出现移植排斥反应.患者多次复查B超及胃镜均提示肝硬化及食道静脉曲张有进一步加重的趋势,曾2次因食道静脉曲张破裂出血而住院治疗.结论:肝细胞体内移植可改善肝功能,且未见移植排斥反应,但不能解决门静脉高压.
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交联型猪脱细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植的临床应用
目的:观察交联型异种(猪)脱细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植修复大面积深度烧伤早期切痂创面的疗效.方法:选择2001-09/2006-10在珠海市人民医院暨南大学医学院第三附属医院整形烧伤科就诊的中面积和大面积深度烧伤患者16例共48个观测创面,患者均知情同意.患者于伤后3-5 d休克期平稳渡过后行肢体创面切痂术,自体微粒皮移植组观测24个创面,均位于复合皮移植组创面的邻近或对侧肢体相同部位.①复合皮移植组:切痂创面用交联型异种(猪)脱细胞真皮基质(由江苏启东医疗用品研究所提供)+自体微粒皮复合移植+异体皮覆盖.②自体微粒皮移植组:切痂创面用自体微粒皮移植+异体皮覆盖.术后6周异体皮脱落,两组散在肉芽创面行小邮票状皮片补充移植修复创面.术后定期观察创面愈合情况,计算创面愈合率及收缩率,并行创面组织学检测.结果:两组48个创面均进入结果分析,无脱落.①两组异体皮成活情况相近.②术后6周,复合皮移植组患者的创面愈合率均显著低于自体微粒皮移植组(P＜0.05);经补充植皮后即术后8周两组创面愈合率差异无显著性意义(P＞0.05).③移植术后6,8,12周,复合皮移植组患者的移植创面收缩率均显著低于自体微粒皮移植组[(10.28+2.36)%,(16.25+3.78)%;(15.68+1.79)%.(30.42±3.65)%;(22.07+1.39)%,(42.83±2.74)%(P＜0.05)].④术后8周组织学观察结果显示,复合皮移植组创面愈合处上皮化良好,胶原纤维排列有序,基底膜结构完整;自体微粒皮移植组上皮层仍较薄,细胞分化不良,真皮内胶原排列较紊乱.结论:交联型异种(猪)脱细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植修复大面积深度烧伤早期切痂创面,能够抑制瘢痕增生,改善创面愈合质量,疗效满意.
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热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌生化指标的影响
目的:观察应激情况下产生的热休克蛋白70对心脏移植大鼠供心心肌相关生化指标的影响.方法:实验于2006-04/09在青岛市市立医院中心实验室完成.①实验动物及分组:取成年SPF级雄性Wistar大鼠18只,按随机数字表法分为2组,每组9只.对照组腹腔注射生理盐水0.5 mL,注射后24 h取离体心脏,灌注HTK心脏保护液,并置于HTK液4℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注K-H液2 h.实验组腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1μmol/kg(0.53 mg/kg),24 h后取离体心脏,余处理步骤同对照组.②实验评估:应用全自动生化分析仪测定心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量;计算心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)10 min漏出率、心肌含水量;采用羟胺法测定超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量,采用双缩脲法测定组织蛋白含量;采用免疫组织化学法,以染色阳性面积占视野面积的百分比作为心肌组织热休克蛋白70的表达量.结果:18只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①心肌组织热休克蛋白70含量:实验组高于对照组(t=17.96,P＜0.01).②相关生化指标:实验组大鼠心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶10 min漏出率、心肌含水量及丙二醛含量显著均低于对照组(t=4.13～15.81,P＜0.01),实验组大鼠心肌超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(t=10.89,P＜0.01).结论:热休克蛋白70的高表达能减少氧自由基对供心心肌的损害,是热休克蛋白70发挥其供心心肌保护作用的可能途径之一.
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自体骨粉移植修复下颌骨部分缺损的组织学检测
目的:通过动物实验进行组织学光镜及扫描电镜检测,观察自体骨粉移植修复下颌骨缺损的愈合过程.方法:实验于2005-05/11在南方医科大学动物实验中心完成,选用12只健康雄性大耳白兔.实验分为两组:一侧为自体骨粉移植组,另一侧为空白对照组,均采用自体左右对照.①缺损模型建立:于双侧下颌骨体部下缘用磨削机器各造成1.0×1.0 cm的全层骨缺损.②自体骨粉移植:将所有自体骨粉回填一侧缺损处作为自体骨粉移植组,另一侧缺损旷置作为空白对照组.③分别于术后2,4及8周各处死4只动物,获取整块下颌骨标本作组织学光镜及扫描电镜检测,光镜切片应用苏木精-伊红染色,扫描电镜只观察自体骨粉移植组标本.结果:12只大耳白兔均进入结果分析,无脱失.①两组标本组织学观察结果:自体骨粉移植组术后2周时形成薄层骨痂;4周时为新生的骨小梁,但排列紊乱;8周时骨小梁形成的编织骨已逐渐向板层骨过渡.空白对照组术后8周时骨小梁分布仍稀疏.②自体骨粉移植组标本超微结构观察结果:术后4周骨基质钙化程度提高,大量成骨细胞位于骨陷窝内.缺损间隙逐渐变窄形成多孔较疏松的新骨组织,新生骨小梁形成,新骨超微结构呈"蜂窝状".8周时骨小梁钙化程度继续升高,形成的板状骨排列出现一定方向性,新生骨组织由多孔疏松的结构向致密性结构转化,新原骨组织基本上融为一体产生骨性结合,髓腔相通.结论:自体骨粉移植修复下颌骨成骨可靠,愈合加快,愈合方式以骨传导爬行替代为主,且应用方法简便.
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碱性成纤维细胞生长因子在人体脂肪移植中的应用
目的:碱性成纤维细胞生长因子可促进再血管化过程,有利于脂肪细胞的成活.观察碱性成纤维细胞生长因子在自体脂肪移植治疗面部凹陷畸形中的作用效果.方法:选择2001-11/2006-03于南昌大学第二附属医院整形美容科采用自体脂肪移植治疗面部凹陷畸形的患者60例,共73个部位,所有患者均排除器质性病变且知情同意.按随机数字表法分为2组,每组30例.取出的脂肪经过清洗、过滤备用.①碱性成纤维细胞生长因子组在要移植的脂肪中加入10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子和庆大霉素液,每100 mL脂肪颗粒中加入庆大霉素8万单位及碱性成纤维细胞生长因子2万单位.②对照组只加入庆大霉素液不加碱性成纤维细胞生长因子.术后半年随访,观察一次注射后的治疗效果.评估标准:凹陷充填后丰满平坦,双侧对称满意者为优;凹陷充填后较丰满平坦,双侧基本对称较满意者为良.结果:①术后半年随访,本组60例患者均使凹陷部位得到不同改善,无一例发生感染、液化及干酪样坏死等并发症.②术后半年碱性成纤维细胞生长因子组优良率为87%,对照组优良率为57%,两组相比差异具有显著性意义(P＜0.05).结论:碱性成纤维细胞生长因子可以促进人体移植脂肪的存活,改善面部凹陷畸形脂肪移植的术后效果.
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多轴向螺钉-棒椎弓根固定系统植入治疗寰枢椎损伤的特征
目的:总结应用多轴向钛螺钉-棒系统椎弓根钉植入技术治疗寰枢椎损伤的特点.方法:选择山东省东营市人民医院、加拿大脊柱外科中心、山东省立医院脊柱外科1999-01/2004-01治疗的寰枢椎损伤患者.应用后路多轴向钛螺钉-棒系统固定融合手术治疗38例,固定位置为寰椎(C1)的双侧块和枢椎(C2)的椎弓根,并与46例采用关节突螺钉复合后方椎板下钢丝固定植骨融合进行对比分析.结果:84例患者全部进入结果分析.①治疗组脊髓损伤的治愈率和总有效率(治愈+有效)高于对照组,但差异无显著性(92%,85%,χ2=0.29,P＞0.05).②治疗组对椎动脉孔的入侵率明显低于对照组(5%,30%,χ2=6.99,P＜0.05).③治疗组对椎管的入侵率明显低于对照组(5%,28%,χ2=6.02,P＜0.05).④术后治疗组d角(寰枢椎角)为(26.8±5.42).,对照组α角为(25.6±5.82)°,两组对比差异无显著性(t=1.27,P＞0.05).⑤治疗组1例轻度错位(≤7 mm),1例神经轻度放射痛,术后5个月取出内固定后消失,余无固定松动、椎动脉损伤、神经压迫征发生,3个月融合28例,6个月全部融合.对照组4例出现骨折所致不稳,3例半脱位,5例不融合,6例神经痛.结论:对急性寰、枢椎损伤患者进行C1双侧块和C2椎弓根后路多轴向钉-棒系统固定融合手术治疗方法简单、易于避开椎动脉,定位准确,直视下进行操作,安全性高,固定可靠.芒键词.
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急性心肌梗死患者直接、延迟接受支架置入术治疗的近远期效果:与溶栓和一般药物治疗的比较
目的:观察急性心肌梗死患者直接、延迟接受支架置入术治疗的效果,并与溶栓和一般药物治疗的临床疗效及远期预后比较.方法:选择2004-09/2005-12在北华大学附属医院住院的153例ST段抬高性急性心肌梗死患者.①实验分组:发病6 h以内行直接经皮冠状动脉成形术+冠状动脉支架术30例(简称直接组),发病6 h-7 d行延迟经皮冠状动脉成形术+冠状动脉支架术45例(简称延迟组),行尿激酶静脉溶栓术36例(静脉溶栓组),未再灌注治疗组42例.②支架及用药方法:直接组和延迟组冠状动脉支架均选用美国强生cordis金属裸支架,术前口服氯吡格雷300 mg,阿斯匹林300 mg,术后静脉滴注肝素24 h后,皮下注射肝素3 d,每次7 500 u,2次,d;术后口服氯吡格雷75 mg,2次,d,3个月后改为1次/d;El服阿斯匹林300 mg,1次/d,6个月后150 mg,1次/d长期口服.静脉溶栓组患者尿激酶100～150万u加入生理盐水100 mL中30 min内静脉滴注后,肝素24 h静脉滴注,长期1:3服阿司匹林.未再灌注治疗组患者仅内科药物保守治疗,如静脉滴注硝酸甘油,极化液等;口服阿司匹林.所有患者根据情况,给予血管紧张转换酶抑制剂,β-受体阻滞剂和其他降血压药物等治疗.③随访指标:153例患者均在术后12,18,24个月接受随访.观察住院期间和随访期间的不良事件发生情况和超声心动图变化(包括左室射血分数、左室短轴缩短率;左室舒张末径、左房内径).结果:153例患者均进入结果分析.①平均住院2周左右超声心动图结果:各再灌注组左室射血分数、左室短轴缩短率明显高于未再灌注治疗组,直接组明显高于静脉溶栓组(P＜0.05).②随访期间超声心动图结果:各再灌注组左室射血分数、左室短轴缩短率高于未再灌注治疗组(P＜0.05).左室舒张末内径、左房内径低于未再灌注治疗组(户＜0.05);而且各再灌注组间的左室射血分数、左室短轴缩短率、左室舒张末内径均有统计学意义(P＜0.05).③住院期间不良事件发生情况:4组患者发生各项心脏事件差异均无显著性;但在复合终点事件发生率方面,各再灌注组明显低于未再灌注治疗组(P＜0.05),而且直接组低于静脉溶栓组(P＜0.05).④随访期间不良事件发生情况:延迟组、直接组发生心力衰竭少于未再灌注治疗组(P＜0.05);各再灌注组复合终点事件发生率明显低于未再灌注治疗组(P＜0.05),而且直接组低于溶栓组(P＜0.05).⑤平均住院时间:延迟组与直接组比较差异无显著性,但明显短于静脉溶栓组、未再灌注治疗组(P＜0.05).结论:①直接经皮冠状动脉成形术+冠状动脉支架术优于延迟经皮冠状动脉成形术+冠状动脉支架术及溶栓治疗,而延迟经皮冠状动脉成形术+冠脉支架术优于溶栓治疗.②急性心肌梗死再灌注治疗可降低复合终点事件的发生并改善心脏功能,优于未再灌注治疗.
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异基因供体骨髓细胞胸腺内注射对肠移植大鼠的影响
目的:观察异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用.方法:实验于2006-09/2007-03在平凉市第二人民医院及兰州大学第二医院完成.①将大鼠分为空白对照组(Wistar)、同基因移植组(FK344/N)、异基因移植组(Wistar)、骨髓胸腺内注射组(Wistar,),空白对照组18只,其余每组18只受体大鼠,供体为18只FK344/N大鼠.除空白对照组外,各组选用供受体大鼠进行全小肠异位移植,骨髓胸腺内注射组在行异基因小肠移植前7 d取供体骨髓细胞行受体胸腺内注入,同基因移植组、异基因移植组大鼠不注射异基因骨髓细胞,只进行全小肠移植.②每组大鼠分别于术后3,5,7 d观察排斥反应,于各时间点每次处死6只,检测血清可溶性白细胞介素2受体表达,并取出移植肠进行苏木精一伊红染色后观察组织学变化.结果:纳入受体大鼠54只及空白对照组大鼠18只均进入结果分析.①排斥反应:异基因移植组大鼠异位全小肠移植术后3,5,7 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和骨髓胸腺内注射组中未出现排斥反应.②可溶性白细胞介素2受体水平:术后3 d,同基因移植组、骨髓胸腺内注射组可溶性白细胞介素2受体表达水平高于空白对照组(P＜0.01),而第5,7天与空白对照组差异不显著(P＞0.05),异基因移植组受体大鼠各时间点血清可溶性白细胞介素2受体表达均高于同基因移植组(P＜0.01).结论:移植术前7 d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生.血清可溶性白细胞介素2受体的检测可能作为小肠移植急性排斥反应的早期诊断敏感的免疫指标.
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自体骨屑移植颏部充填动物模型的建立
目的:设计及建立自体骨屑移植颏部充填的动物模型,评价此动物模型的可行性,为I临床自体骨屑移植提供实验资料和理论依据.方法:实验于2006-06/12在南方医科大学南方医院实验动物中心完成.选用同窝健康40周杂种犬4只,全麻后取下颌角区切口,分离咬肌暴露下颌角,切取部分下颌角区下颌骨,用电动打磨机磨碎成骨屑.在下颏部切口,分离至下颏骨膜处,将骨屑移植至下颏部下颌骨区,清洗沉淀后,将富含松质骨的骨屑移植至下颏部下颌骨区,并用牙科钻在下颏骨移植区处打孔3个,深达松质骨,建立动物模型.术后当时、术后4,8,12周观察犬进食活动情况,进行下颌骨X射线检测,全麻下活体取材行骨组织苏木精一伊红染色常规组织学检查,并观察移植骨屑的稳定性.结果:4只犬全部进入结果分析,无脱失.①手术后动物进食活动正常.②植骨区x射线观察结果:术后4周骨密度低于正常下颌骨;8周时骨形状基本和正常一致,皮质连续骨密度略低于正常;12周时缺损两端与植骨区无明显界限.③植骨区组织学观察结果:术后4周时可见新生的骨小梁,但排列紊乱;8周时骨小梁形成的编织骨已逐渐向板层骨过渡;12周时植骨区基本形成板状骨,骨质较厚.④移植骨屑的稳定性及活动度:术后4周,所移植骨屑的稳定性较好,不能活动.结论:实验成功建立了自体骨屑移植颏部充填的动物模型,以骨屑为支架,可以很快形成新生骨,与颏部下颌骨融合良好,结构稳定,提示模型有效、可靠.
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三种移植物关节镜下重建膝关节前交叉韧带效果比较:2年随访
目的:采用自体骨-髌韧带、自体双股半腱肌腱半膜肌及同种异体跟腱移植重建膝关节前交叉韧带,比较不同移植物的临床疗效.方法:选择1998-06/2003-02中山大学附属第三医院骨科单纯前交叉韧带损伤后行关节镜下重建手术病例96例,患者均签署知情同意书.根据不同移植物分为3组:①自体骨-髌韧带组38例,应用自体中1/3骨-髌韧带-骨移植物.②自体双股半腱肌腱股薄肌腱组22例,应用自体双股半腱肌腱股薄肌腱.③同种异体跟腱组36例,应用同种异体跟腱.术后定期随访,对膝关节活动度、肌力恢复程度、Wemer髌股痛评分(差为0分,高为55分)、Lysholm评分(0～100分,分数越高膝关节功能恢复越好)、国际膝关节文献委员会评分(按病情严重程度分类分为正常、接近正常、异常、严重异常4个等级)等进行对比观察.结果:①96例患者随访2年,无脱落.②全部患者无感染,未发生髌骨骨折.也未发现关节内粘连、下肢深静脉血栓形成和血管神经损伤等并发症.③膝关节活动度、肌力恢复情况、髌股痛评分:随访结束时3组差异均无显著性意义(P＞0.05).④Lysholm膝关节评分:随访结束时自体骨-髌韧带组由术前(68.2±6.3)分提高至(88.6±6.8)分,自体双股半腱肌腱股薄肌腱组由术前(66.5±6.5)分提高至(86.4+6.6)分,同种异体跟腱组由术前(68.2±6.3)分提高至(86.3±6.2)分,随访结束时各组评分均显著高于术前(P＜0.05),3组比较差异无显著性意义(P＞0.05).⑤国际膝关节文献委员会评分(术后活动水平正常或接近正常):随访结束时自体骨-髌韧带组为87%,自体双股半腱肌腱股薄肌腱组为86%,同种异体跟腱组为89%,各组移植术后膝关节功能均有所改善,3组间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:关节镜下采用自体骨-髌韧带、自体双股半腱肌腱股薄肌腱和同种异体跟腱移植重建前交叉韧带,均能明显改善膝关节运动功能,3种移植方法的临床疗效无明显差异,提示重建前交叉韧带的术后疗效与移植物种类的相关性不明显.
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示指桡侧指背动脉逆行岛状皮瓣移植修复示指缺损
目的:观察示指桡侧指背动脉逆行岛状皮瓣移植对示指指端缺损的修复效果.方法:选择2002-08/2005-09南华大学附属第一医院急诊收治的外伤性示指末节部分缺损患者13例,手术方法的选择在术前均得到患者同意,且得到医院伦理道德委员会批准.组织缺损大小在1.5 cm×1.0 cm～2.0 cm×1.5 cm之间,所有缺损均有指骨和(或)大部分的指腹组织缺损,采用示指桡侧指背动脉逆行岛状皮瓣移植修复,皮瓣设计:旋转点位于近侧指间关节的近端,皮瓣轴为示指的桡背侧,皮瓣部分设计在第2掌指关节的近侧,蒂宽约0.8 mm.术后定期随访,主要观察皮瓣质地和感觉的恢复情况,将感觉恢复的评估标准分为5级:S1:无感觉;S5:在神经单一分布区恢复两点鉴别能力.结果:13例患者全部进入结果分析,无脱落.①术后随访三四个月者10例,随访五六个月者3例.②术后9例皮瓣完全成活;4例皮瓣远端部分坏死,经换药表皮爬行创面愈合.③外形基本满意,皮瓣色泽、质地良好.④术后1个月随访时,3例患者两点辨别觉大于6.0 mm,感觉恢复S4;术后五六个月随访时,3例患者两点辨别觉4.0～6.0 mm,感觉恢复S5.结论:示指桡侧指背动脉逆行岛状皮瓣设计的旋转点位于近侧指间关节的近端,可以简化手术而不影响皮瓣存活,是示指部分缺损修复的可选方法.
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中西医结合治疗带状疱疹的临床研究进展
目的:概述综合疗法治疗带状疱疹的临床效果,为临床采用各种疗法治疗带状疱疹提供参考.资料来源:应用计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库1992-01/2006-12期间的相关文章,检索词"带状疱疹的综合治疗",限定文章语言种类为中文.资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文.纳入标准:①有关带状疱疹的中医、西医治疗方法.②有关带状疱疹的综合治疗方法.排除标准:重复或类似的同一研究、综述文献(或个案报道等).资料提炼:共收集到180篇有关带状疱疹综合治疗的文章,排除重复或类似的同一研究,34篇符合研究要求(其中23篇为中医治疗方面的文献,9篇涉及西医治疗方面,其余的为中西结合疗法).资料综合:①中医治疗带状疱疹主要是针对带状疱疹的后遗神经痛进行治疗,临床一般采用针刺法,灸法,刺血法,拔罐法,内服外敷中药法,以及这几种方法的综合治疗为主治疗,且一般疗效较好,l临床均可以收到较好的疗效,其中针刺病变相应神经节段的夹脊穴获效显著.②西医治疗带状疱疹以抗病毒治疗为主,辅以营养神经、镇痛、抗癫痫、抗抑郁等疗法,且多在疾病早期进行此疗法,临床多选用阿昔洛韦进行静脉点滴亦或口服,或者两种方法同时应用,加用维生素B1,维生素B12,维生素C片,于此同时根据具体病况采取相应的治疗,获效亦显著.③带状疱疹疗法展望:目前治疗方法甚多,但是如何减短治疗时间,以及如何减轻后遗神经痛仍是主要问题,可望有更好的方法达到此目的.结论:采用综合疗法治疗带状疱疹是一种行之有效的治疗方法.
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卵巢移植在宫颈癌治疗中的临床应用价值
目的:探讨卵巢移植在宫颈癌患者中应用的可行性、临床价值、并发症及其预防.方法:应用计算机检索中国全文期刊数据库1985/2006卵巢移植相关的文献,检索词为"卵巢移植、宫颈癌",限定语言种类为中文,同时检索Publmed数据库1995/2006有关宫颈癌卵巢移植的文献,检索词为"cervical cancer,ovarian transplantation",限定语言种类为"English",共收集51篇文献,进行归纳总结.结果:①对于年轻的宫颈鳞癌患者,保留卵巢并行自体异位移植手术是安全的,也是必要的.②宫颈癌患者卵巢自体移植的方法有卵巢组织移植术、带蒂卵巢器官移植术(卵巢移位术)、游离卵巢器官移植术等术式.③移位术后卵巢的功能较原位卵巢下降,卵巢器官移植术后较移位术后下降显著,辅以放疗后进一步加重卵巢功能的损伤.④卵巢移植术后常见的并发症有移植部位结节和包块、症状性卵巢囊肿、移植部位疼痛和卵巢功能衰退,但是可以预防的.结论:卵巢移植术使年轻宫颈癌患者的卵巢得以保留,但由于移植后卵巢功能减退及术后辅助放疗对卵巢的影响、移植后宫颈癌卵巢转移等问题限制了临床应用,如能对上述问题加以预防和治疗,卵巢移植术在宫颈癌患者中会有广阔的应用前景.
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同种异体肾移植232例资料回顾
选择2003-03/2007-02在西安市高新医院肾移植中心行同种异体肾移植的患者232例,患者均知情同意.部分患者在术前使用多克隆抗体、单克隆抗体,术中及术后3～5 d内使用甲强龙冲击.术后均采用麦考酚酸酯(或咪唑立宾)+环孢素(或他克莫司)+强的松三联免疫抑制治疗.肾移植手术均采用左、右髂窝为植肾处,供血动脉多采用植.肾动脉与髂外动脉端侧吻合,回流静脉均采用供肾静脉与髂外静脉端侧吻合.供肾输尿管膀胱再植根据情况留或不留置支架管.术后进行随访.术后1年内人,肾存活率分别为95.7%,95.3%;3年内人肾存活率分别为94.4%/93.1%.同种异体肾移植术前自身条件的准备及选择性使用生物制剂可有效提高肾移植术后人/肾存活率.
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医学植入体治疗老年股骨转子间骨质疏松性骨折:33例回顾性分析
目的:观察不同类型股骨转子间骨质疏松性骨折患者应用小切口动力髋螺钉及Gamma钉内固定植入技术对髋关节功能的改善作用.方法:选择2004-07/2006-07上海市杨浦区中心医院骨科收治的高龄(65岁以上)股骨转子间骨折患者33例.根据改良Evens分型为Ⅰ-Ⅴ型,其中稳定型Ⅰ～Ⅱ型18例,不稳定型Ⅲ～Ⅴ型15例.所有稳定型18例采用动力髋螺钉固定,其余15例不稳定型采用Garoma钉内固定术.术后早期行髋关节间隙主动及被动锻炼.观察手术切口大小,操作时间,术中出血量,并发症情况.髋关节功能评价采用Harris髋关节功能评分方法(满分为100分,90分以上为优,80分以上为较好,70分以上为良,低于70分为差).结果:33例均得到随访,平均随访8个月.①小切口动力髋螺钉组:切口长度为4 cm(3～5 cm),平均手术时间70 min(60～100 min),术中平均出血量100 mL(50～200 mL);微创Gamma钉组:切口长度3 cm(2.5～4.5 cm),平均手术时间50 min(40～70 min),术中平均出血量65 mL(30～100 mL).②术后髋关节功能评定:优30例(90.9%),良3例(9.1%).③术后1,3,6,8个月随访复查髋关节X线片,三四个月全部骨折愈合,双下肢基本等长,无髋内翻畸形.④2例行动力髋螺钉内固定术的切口出现小块皮肤坏死,1例Gamma钉内固定患者,术后4个月发现拉力螺钉自股骨头上方切出,复片示骨折愈合,行内固定取出.结论:小切口动力髋螺钉及Gamma钉内固定植入技术治疗股骨转子间骨折创伤小,术后髋关节功能恢复好,适用于老年患者.
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三面皮质骨块移植一期重建肱骨远端粉碎性骨折
女性患者,2005年6月行走时被汽车撞伤入院,诊断为肱骨远端粉碎性骨折.患者知晓治疗方案.取髂骨大小约为2.5 cm×2 cm的三面皮质骨块修整后植入到肱骨远端关节面的缺损处,关节面朝向尺骨鹰嘴,并用一枚全螺纹松质骨钉固定.术后对肘关节运动功能进行MEPS评分(0-80分),疗效良好(满意)≥75分;较差(不满意)＜50分.术后随访6个月,患者生活自理,能够参与日常活动.MEPS评分78分,术后疗效满意.肘关节正侧位X射线片未见骨性关节炎的征象.采用三面皮质髂骨重建肱骨远端粉碎性骨折,具有一定的临床应用价值.
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植皮成活率及愈合时间与不同切痂术式的关系
目的:观察不同的切痂术式对肢体深度烧伤患者术中出血量、植皮成活率及创面愈合时间的影响,探寻更合适的肢体切痂的手术方式.方法:选择2001-06/2004-05济南市中心医院烧伤科收治的肢体Ⅲ度烧伤患者22例患者38个肢体,按入院先后顺序随机分为2组,逆行切痂组11例20个肢体,常规顺行切痂组11例18个肢体,患者均签署知情同意书且得到医院伦理道德委员会许可.两组患者于休克期平稳度过后分别做逆行切痂术和常规顺行切痂术,除关节功能部位移植大张中厚皮外,其他创面移植邮票皮片.术中收集止血纱布计算出血量,术后观察植皮成活率和创面愈合时间.结果:22例患者全部进入结果分析,无脱落.①逆行切痂组患者的1%体表面积切痂出血量显著低于常规顺行切痂组[(21.30±2.11,30.30±2.67)mL(P＜0.01)].②逆行切痂组患者的植皮成活率显著高于常规顺行切痂组[(83.45±5.57,73.27±5.06)%(P＜0.01)].③逆行切痂组患者的创面愈合时间显著短于常规顺行切痂组[(33.73±4.15,44.64±3.72)d(P＜0.01)].结论:逆行切痂能明显减少肢体深度烧伤患者的术中出血量,增加植皮成活率,缩短创面愈合时间,减少患者痛苦,值得推广应用.
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选择不同类型全髋关节置换假体治疗髋关节发育不良继发性关节炎:116例128髋资料回顾性分析
目的:观察不同类型全髋关节置换假体治疗先天性髋关节发育不良继发骨关节炎的临床效果. 方法:实验于1998-06/2005-12在解放军总医院骨科完成.①实验对象:对116例(128髋)成人髋关节发育不良继发骨关节炎患者进行了全髋关节置换术.男13例(15髋),女113例(106髋),年龄16～66岁,平均年龄42.6岁.按Crowe分级:Ⅰ级57例(60髋),Ⅱ级20例(23髋),Ⅲ级16例(20髋),Ⅳ级23例(25髋).②技术方法:髋臼侧均在真臼位置重建,除1例外均行生物型固定,常规置换83髋,小号髋臼假体27髋;颗粒植骨后使用常规髋臼11髋,髋臼外上缘自体股骨头植骨后,安置小号髋臼假体7髋.股骨侧选用生物型假体119个,普通骨水泥假体4个(其中CDH柄2个),长柄骨水泥假体柄6个,S-ROM假体4个.③效果评估:髋关节功能评价采用Harris髋关节功能评分方法.X线摄片观察假体位置情况.结果:①Harris评分:由术前平均38.5分恢复到平均88.5分.②假体松动、髋关节脱位和翻修:未发生此类病例,患肢长度平均延长2.3 cm.术后伤口均一期愈合.③随访X线摄片:显示关节假体位置正常,宿主骨对臼杯的覆盖良好,平均覆盖率为95%(90%～100%),2例金属臼杯与宿主髋臼之间出现透光线,1例股骨假体出现透光线,但均无临床不稳.④不良反应:术后1例出现坐骨神经牵拉伤,4个月恢复,1例出现股神经牵拉伤,3个月恢复.4例遗留髋关节持续性疼痛.结论:髋关节发育不良继发骨关节炎采用全髋关节置换术治疗时,尽可能在真臼位置重建髋臼,尤应注意个性化的正确选择股骨侧假体是取得良好临床疗效的关键.
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T型肽钢板植入治疗桡骨远端骨折37例
为观察切开复位T型钢板植入治疗桡骨远端骨折的效果,选择桡骨远端骨折37例,切开复位,T型肽钢板植入内固定.分别于术后3 d、4,8,12周复查X射线片,测量桡骨远端关节面的台阶征、掌倾角、尺偏角、桡骨长度,并进行腕关节功能评估.结果显示术后12周时桡骨远端关节面的台阶征、掌倾角、尺偏角和桡骨相对尺骨长度基本正常;所有骨折均愈合,腕关节功能优良率为92%.
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肾移植术后乙型肝炎病毒拉米夫定耐药的治疗
目的:观察肾移植术后乙型肝炎病毒患者发生拉米夫定耐药后,应用新一代核苷类抗乙型肝炎病毒药物阿德福韦和恩替卡韦的治疗效果.方法:选择2001-05/2006-09于南方医科大学南方医院器官移植科就诊的乙型肝炎病毒感染并发生病毒多聚酶催化域YMDD基序变异,对拉米夫定耐药的肾移植患者4例,患者均知情同意.定期复查血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、乙型肝炎病毒DNA定量及乙型肝炎病毒YMDD变异情况,先后采用拉米夫定、阿德福韦及恩替卡韦进行治疗,并观察其治疗效果.结果:①4例患者分别随访16,26,63,67个月,移植肾功能良好.②4例患者分别在服用拉米夫定14,24,51和62个月(术后12个月)时出现乙型肝炎病毒YMDD变异,乙型肝炎病毒DNA升高至105～109拷贝/mL,,肝功能异常.2例加用阿德福韦3个月后撤除拉米夫定,单用阿德福韦治疗,乙型肝炎病毒DNA均降为104拷贝/mL,肝功能正常,其中1例单用阿德福韦9个月后乙型肝炎病毒YMDD变异转阴,另1例单用阿德福韦2个月,乙型肝炎病毒YMDD变异仍为阳性;2例停用拉米夫定,直接换为恩替卡韦,其中1例2个月后肝功能正常,乙型肝炎病毒DNA阴性,乙型肝炎病毒YMDD变异阴性,另1例服药2个月后肝功能正常,乙型肝炎病毒DNA降为104拷贝/mL,乙型肝炎病毒YMDD变异仍为阳性.结论:新型抗乙型肝炎病毒药物阿德福韦和恩替卡韦可有效抑制拉米夫定耐药的乙型肝炎病毒复制,有利于乙型肝炎病毒阳性肾移植患者长期存活.
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国人全膝关节假体置换胫骨近端截骨面至腘血管距离的测量及意义
目的:测量国人全膝关节假体置换术胫骨近端截骨面后缘至腘窝血管之间的距离,以期为临床全膝关节置换术中避免损伤腘窝血管提供参考数据.方法:选择2006-06/12于解放军第二军医大学长征医院体检的50名正常成人(53膝),男29名(31膝),女21名(22膝).所有观察对象均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.对所有膝关节进行MRl扫描,在胫骨外侧平台以下10 mm水平横断面上辨认腘动静脉,并测量胫骨近端截骨面后缘至腘窝动静脉的距离.结果:53膝全部进入结果分析,无脱落.①男性胫骨近端截骨面后缘至腘动脉、腘静脉平均距离为(617±2.5,7.3±2.3)mm,95%可信区间分别为5.8-7.6 mm,6 5～8.1 mm.②女性胫骨近端截骨面后缘至腘动脉、腘静脉平均距离为(6.6±1.9,7.1±2.7)mm,95%可信区间分别为:5.8～7.4 mm,5.9～8.3 mm.③不同性别观察对象胫骨近端截骨面后缘至腘血管的距离差异无显著性意义(P＞0.05).结论:腘窝血管紧邻全膝关节假体置换术胫骨近端截骨面后缘,不同性别间无明显差异.全膝关节假体置换术中进行胫骨近端截骨,特别是后方操作时需特别谨慎,以避免损伤腘窝血管.
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肾移植术后患者的营养状况评价
目的:调查肾移植术后患者的营养状况,探寻合理的临床营养治疗方案.方法:抽取2002-10/2006-09于江苏省中医院住院的肾移植术后1个月患者40例,患者均知情同意,配合各种测量、检查.调查内容:①膳食调查:采用饮食称重法.蛋白质应为总热量的30%～35%,碳水化合物应为50%～60%,脂肪应为10%～15%.②人体测量:包括身高、体质量、三头肌皮褶厚度、上臂围、上臂肌围.③生化实验室检查:包括血浆白蛋白、血胆固醇、血糖、血尿酸、血钾、血钠、总淋巴细胞计数.结果:40例患者全部进入结果分析,无脱落.①肾移植术后患者膳食结构不合理,其中脂肪(38%)和蛋白质(17%)摄入量超标,碳水化合物(45%)摄入不足.②40例患者中高血糖者9例(占22.5%),胆固醇、三酰甘油升高者28例(占70%),血尿酸升高者18例(占45%).结论:通过营养评价可为改善肾移植术后患者营养状况提供依据,指导患者平衡膳食,维持理想的营养状况.
