中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小肠部分切除大鼠术后一氧化氮代谢途径干预对葡萄糖代谢的影响
目的:观察小肠部分切除大鼠术后一氧化氮代谢途径干预对大鼠术后葡萄糖代谢的影响,寻找解决术后胰岛素抵抗的方法.方法:实验于2005-01/2006-08在解放军第四军医大学第二附属医院中心实验室完成.实验分组:96只大鼠随机数字表法分为4组,正常对照组,L-硝基-精氨酸甲酯处理组,L-精氨酸处理组,L-精氨酸+L-硝基-精氨酸甲酯处理组,每组24只.实验干预:建立大鼠小肠部分切除模型,各干预组分别尾静脉注射1 mg/kg L-硝基-精氨酸甲酯、100 mg/kg L-精氨酸处理、0.5 mg/kg L-硝基-精氨酸甲酯+50 mg/kg L-精氨酸处理进行一氧化氮代谢途径干预.正常对照组只注射1 mL生理盐水.实验评估:①给药后2,8,12,24,48 h取血,测定血清中一氧化氮含量及血糖检测.②给药后24 h,48 h,1周后采用胰岛素敏感性实验计算每公斤代谢体质量每分钟代谢葡萄糖的量.结果:96只大鼠均进入结果分析.①血清一氧化氮含量:L-硝基-精氨酸甲酯处理组各时间点血清一氧化氮含量低于正常对照组(P＜0.05),而L-精氨酸处理组各时间点血清一氧化氮含量高于正常对照组(P＜0.05);L-精氨酸+L-硝基-精氨酸甲酯处理组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.1).②空腹血糖:给药后8,12,24,48 h L-硝基-精氨酸甲酯处理组高于正常对照组(P＜0.05).给药后8,12,24,48 h L-精氨酸处理组低于正常对照组(P＜0.05);L-精氨酸+L-硝基-精氨酸甲酯处理组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.1).③稳态情况下每千克代谢体质量每分钟代谢葡萄糖的量:L-硝基-精氨酸甲酯处理组显著低于正常对照组(P＜0.05),而L-精氨酸处理组则显著高于正常对照组(P＜0.05);L-精氨酸+L-硝基-精氨酸甲酯处理组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0.1).结论:小肠部分切除大鼠术后一氧化氮代谢途径在葡萄糖转运和胰岛素活性方面可能起着重要作用,提示其可能是解决术后胰岛素抵抗的一种方法.
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耐力训练大鼠心肌组织抗氧化指标和超微结构变化与葛根总黄酮的干预
目的:目前国内外有关葛根总黄酮与运动的关系少见报道,且大多涉及临床领域.建立运动动物模型,观察补充葛根总黄酮对运动大鼠运动能力及抗疲劳能力的影响,为葛根总黄酮用于运动营养食品的开发与利用提供理论依据.方法:实验于2003-07/2004-12完成.①实验方法及分组:选用SD雄性大鼠36只,按随机数字表法分为3组(n=12),即安静对照组、耐力训练组和训练+葛根总黄酮组.安静对照组安静饲养;耐力圳练组和训练+葛根总黄酮组于动物跑台上先进行5周的适应性训练,然后进行2周大强度耐力训练.②实验评估:第8周第1 d测定各组大鼠心肌组织的超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氧酶活性与丙二醛含量,应用透射电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构变化.结果:36只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①训练+葛根总黄酮组谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、铜锌超氧化物歧化酶活性均显著高于耐力训练组(P＜0.05～0.01),丙二醛含量显著低于耐力训练组(P＜0.01).②训练+葛根总黄酮组大鼠心肌组织细胞中线粒体、粗面内质网等结构均比耐力训练组完整,损伤程度比耐力训练组轻.③训练+葛根总黄酮组大鼠的运动力竭时间显著长于耐力训练组(P＜0.05).结论:葛根总黄酮能改善运动对心肌组织细胞造成的损伤,对心肌组织细胞具有明显保护作用,并能延长大鼠跑台运动至力竭的时间.
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参芪健胃颗粒抗炎效应
目的:观察参芪健胃颗粒对急性炎症模型的抗炎作用.方法:实验于2006-02/05在河南中医学院动物实验中心完成.①将50只昆明小鼠随机均分为5组:大、中、小剂量的参芪健胃颗粒组(2.4,1.2,0.6g/kg),三九胃泰颗粒组(10 g/kg)及生理盐水组.给药体积0.02 mL/g.灌服给药1次/d,连续给药5 d,于后1次给药后1 h,每鼠右耳涂二甲苯,4 h后处死小鼠,沿耳廓基线解剖位置仔细剪下全耳,对齐双耳,修剪,使每耳大小一致,迅速用分析天平称重,并计算肿胀度(肿胀度=右耳重-左耳重).②将40只SD大鼠随机均分为5组:大、中、小剂量的参芪健胃颗粒组(16,8,4 g/kg),三九胃泰颗粒组(6.7 g/kg)及同体积生理盐水组.给药体积2 mL/kg.灌服给药1次/d,连续给药5 d,于后1次给药后立即在大鼠足趾肿胀仪上测大鼠正常左后足跖体积,给药后30 min立即给每鼠左后足跖皮下注射0.1 mL新配制的10%新鲜鸡蛋清液,分别于给蛋清后30,60,120,240,360 min再次在大鼠足趾肿胀仪上测大鼠左后足跖体积,并计算肿胀率[足跖肿胀率=(给药后不同时间足跖体积-同侧正常足跖体积)/同侧正常足跖体积].结果:50只小鼠和40只大鼠均进入结果分析.①大、中剂量的参芪健胃颗粒组和三九胃泰颗粒组耳壳肿胀度显著小于生理盐水组(P＜0.01),小剂量参芪健胃颗粒组小于生理盐水组(P＜0.05).②与生理盐水组比,大剂量参芪健胃颗粒组和三九胃泰颗粒组在给药后30～60 min均可明显抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率明显减小(P＜0.05),在给药后120～360 min均可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀度明显减小(P＜0.01);中剂量参芪健胃颗粒组在给药后30～120 min可明显抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率明显减少(P＜0.05),在给药后240～360 min可显著抑制大鼠蛋清性足跖肿胀,使足跖肿胀率显著减少(P＜0.01);小剂量参芪健胃颗粒在给药后30～360 min仅有抑制大鼠蛋清性足跖肿胀的趋势.结论:参芪健胃颗粒可显著抑制小鼠耳壳肿胀和大鼠足趾肿胀程度,有较好的抗炎作用.
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富碘中药海藻对甲状腺细胞凋亡及凋亡调控基因的影响
目的:通过观察富碘中药海藻对碘缺乏机体甲状腺滤泡上皮细胞凋亡,Fas,FasL,Bcl-2蛋白表达的影响,分析富碘中药过量对甲状腺损伤的机制.方法:实验于2006-03/09在辽宁中医药大学实验中心完成.①实验干预:选用健康鼠龄4周的Wistar大鼠150只.取120只喂低碘饲料建立缺碘大鼠模型,随机分为4组,每组30只:单纯高碘组喂含碘2 000μg/L的双蒸水;模型组喂等体积双蒸水;常规剂量海藻组和3倍剂量海藻组分别灌胃海藻生药量13.5 g/(kg·d)和40.5 g/(kg·d).以其余30只大鼠为正常对照组:正常饮食,每日灌服等体积双蒸水.②实验评估:分别在给药0,7,28 d后取材.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导原位缺口末端标记确定甲状腺滤泡上皮细胞凋亡细胞数.采用免疫组化方法观察甲状腺滤泡上皮细胞Fas,FasL,bcl-2表达.结果:大鼠150只均进入结果分析.①凋亡细胞数:给药后7 d,常规剂量海藻组和3倍剂量海藻组低于模型组,差异有非常显著性意义(P＜0.01).常规剂量海藻组和3倍剂量海藻组低于单纯高碘组,差异有显著性意义(P＜0.05).给药后28 d,正常对照组甲状腺滤泡上皮细胞凋亡细胞数低于其他4组,差异有显著性或非常显著性意义(P＜0.05～0.01).常规剂量海藻组高于单纯高碘组,差异有显著性意义(P＜0.05).②Fas,FasL,Bcl-2蛋白表达:给药7 d后,常规剂量海藻组和3倍剂量海藻组Fas蛋白的表达低于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).单纯高碘组和3倍剂量海藻组FasL表达低于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).常规剂量海藻组Bcl-2蛋白表达高于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).给药28 d后,单纯高碘组和3倍剂量海藻组Fas蛋白的表达低于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).单纯高碘组、常规剂量海藻组和3倍剂量海藻组Bcl-2蛋白表达高于模型组,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:富碘中药海藻给药28 d可造成碘缺乏大鼠甲状腺细胞损伤,Fas,FasL,bcl-2可能参与诱导细胞凋亡.
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三七总皂甙对人肝癌细胞缝隙连接细胞间通讯的调节机制
目的:观察三七总皂甙对人肝癌细胞SMMC-7721缝隙连接细胞间通讯、以及缝隙连接蛋白32 mRNA和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响.方法:实验于2005-08/2006-03在江西省分子医学重点实验室完成.①实验操作:SMMC-7721细胞用含100 mg/L,200 mg/L,400 mg/L三七总皂甙的培养液预处理,对照组SMMC-7721细胞不加三七总皂甙.②实验评估:采用划痕标记/染料示踪技术检测缝隙连接细胞间通讯的变化;采用反转录-聚合酶链反应检测缝隙连接蛋白32 mRNA水平;采用流式细胞仪检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达.结果:①对照组染料局限于划痕两侧的细胞内,无明显的荧光染料传输,GJIC阴性;三七总皂甙可上调染料传输范围,且随三七总皂甙剂量增高,染料传输范围逐渐增大,远可达三四层细胞.②反转录-聚合酶链反应结果显示,各组细胞缝隙连接蛋白32 mRNA水平差异无显著性意义(P＞0.05).③流式细胞仪结果显示,对照组SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率较高,伴随三七总皂甙剂量增加磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率逐渐下降,呈一定的剂量依赖效应.结论:三七总皂甙可能通过抑制SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的活化减少缝隙连接蛋白32的磷酸化,进而上调SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞间通讯功能.
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腺苷受体激活对体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护效应
目的:观察腺苷A1受体激动剂和A2受体激动剂对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/再给氧损伤的影响.方法:实验于2005-09/2006-06在辽宁医学院药理实验室完成.生后2～4 d的SD大白鼠乳鼠260只,以培养的大鼠乳鼠心肌细胞为模型,在造成心肌细胞缺氧/再给氧损伤模型后,观察分别给正常含糖含氧的Hanks液组,缺氧+腺苷A1受体激动剂再给氧组,缺氧+腺苷A1受体激动剂+腺苷A1受体拮抗剂再给氧组,缺氧+腺苷A2受体激动剂再给氧组,缺氧+腺苷A2受体激动剂+腺苷A2受体拮抗剂再给氧组对心肌细胞活力及心肌细胞搏动频率的影响,以及对心肌细胞培养液上清中乳酸脱氢酶含量的影响.结果:腺苷A1受体激动剂可以明显增加心肌细胞的活力,显著提高心肌细胞的搏动频率,使心肌细胞的搏动频率在缺氧/再给氧后明显恢复,还可以使心肌细胞培养液上清中乳酸脱氢酶的含量明显降低.并且这种保护作用可以被腺苷A1受体拮抗剂所拮抗.腺苷A2受体激动剂和A2受体拮抗剂对培养的心肌细胞缺氧/再给氧损伤无明显影响.结论:腺苷受体激活对培养的心肌细胞缺氧/再给氧损伤有保护作用,其保护作用可能是通过激动腺苷A1受体途径来实现的.
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冷水游泳对胃黏膜的保护作用
目的:长期冬泳运动是对外界应激刺激的一种适应,观察不同运动时间的冷水游泳对小鼠急性胃溃疡发生情况的影响.方法:实验于2004-04/08在河北师范大学体育学院运动人体科学专业实验室及河北师范大学生命科学学院细胞生物实验室完成,选用雄性小鼠53只,按随机数字表法分为5组,正常对照组、胃溃疡模型组、冷泳1 min组及冷泳2 min组各10只,冷泳力竭组13只.①游泳训练:正常对照组及胃溃疡模型组只抓取不游泳.其余各组均在4℃水中进行相应时间的游泳训练,每周训练6 d,1次/d,共进行12周.冷泳1,2 min组的训练时间分别为1 min/次,2 min/次;冷泳力竭组每次游泳的力竭标准为沉入水下10 s不能上浮.②模型制作:训练结束后各冷泳组及胃溃疡模型组制作无水乙醇型胃溃疡模型,正常对照组灌服等量生理盐水.1 h后麻醉处死各组小鼠,取胃,观察胃黏膜损伤情况,计算以下指标:a溃疡指数:点状出血为1分;线状出血长度＜1 mm为2分,3～4 mm为5分;宽度＞1 mm,分值×2.全胃分数的总和为溃疡指数.b溃疡抑制率=(模型组溃疡指数-运动组溃疡指数)/模型组溃疡指数×100%.取胃组织匀浆上清液,测一氧化氮及丙二醛含量.结果:实验过程中,胃溃疡模型组因病死亡1只;冷泳力竭组死亡5只,均为训练中溺水窒息死亡.①胃黏膜面大体形态:胃溃疡模型组小鼠的胃溃疡程度重;冷泳力竭组胃溃疡程度与胃溃疡模型组小鼠相近,黏膜损伤较重;冷泳1 min组、冷泳2 min组胃溃疡程度较轻.②胃组织溃疡指数、溃疡抑制率:冷泳1min组、冷泳2 min组小鼠的胃溃疡指数显著低于胃溃疡模型组(25.5±20.4,32.4±24.5,109.1±27.5,P＜0.01),冷泳1min组、冷泳2 min组的溃疡抑制率分别为76.63%,70.30%.冷泳力竭组胃黏膜损伤严重,无法计算其溃疡指数.③胃组织一氧化氮、丙二醛含量:其他4组小鼠胃组织的一氧化氮含量均显著低于正常对照组(P＜0.01).冷泳1 min组、冷泳2min组基本相近,差异无显著性意义(P＞0.05),均高于冷泳力竭组(P＜0.05)及胃溃疡模型组(P＜0.01).冷泳力竭组与胃溃疡模型组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).冷泳力竭组、胃溃疡模型组小鼠胃组织的丙二醛含量差异无显著性意义(P＞0.05),均显著高于正常对照组(P＜0.01).冷泳1 min组、冷泳2 min组含量相近,差异无显著性意义(P＞0.05),均显著低于冷泳力竭组(P＜0.05)及胃溃疡模型组(P＜ 0.01).结论:①适量运动时间的冷水游泳能明显抑制小鼠无水乙醇型胃溃疡的形成.②力竭性冷水游泳运动对胃溃疡的形成无明显抑制作用.③在4℃水温中进行1次/d,2 min/次的强迫游泳,持续12周,能达到与1 min/次的冬泳小鼠模型相似的效果,也可以作为冬泳小鼠模型.
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聚合酶链反应技术检测后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA表达
目的:聚合酶链反应方法检测后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA的表达.方法:实验于2006-06/2007-01在解放军总医院老年医学研究所完成.1日龄北京雏鸭6只经腿静脉注射上海麻鸭DHBV阳性血清(中国医学科学院提供)0.2 mL/只,感染7 d后处死动物取血分离血清并取肝组织,同时取同日龄正常鸭6只肝组织作为对照.聚合酶链反应技术检测肝脏、血清中鸭乙型肝炎病毒DNA及共价闭环状DNA的表达.结果:①血清斑点杂交显示模型制备成功,平均病毒吸光度值为0.62±0.12.②琼脂糖凝胶电泳显示,模型肝脏、血清中DHBVDNA均高表达,而共价闭环状DNA仅在模型肝脏表达,正常鸭DNA与共价闭环状DNA均不表达.结论:后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA高表达,可作为临床乙肝药物筛选模型.
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新生大鼠原代肝细胞四氯化碳损伤模型与叶下珠保肝活性成分的提取与初步分离
目的:采用大鼠原代肝细胞四氯化碳化学性损伤模型,结合四甲基偶氮噻唑蓝比色法的体外药理模型,对传统中草药叶下珠的活性成分进行提取和初步分离,追踪叶下珠保肝护肝的活性单体成分.方法:实验于2006-05/12在浙江大学药学院中药开发及评价重点研究实验室完成.①制备新生大鼠原代肝细胞四氯化碳损伤的药理模型.②叶下珠提取物的制备:采用水、体积分数为0.95的乙醇对叶下珠活性成分进行回流提取.③活性成分的初步分离:依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取;应用AB-8大孔吸附树脂分步洗脱法,即体积分数为0.1～0.9的乙醇洗脱.④采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法,通过保护率及增生指数,观察回流提取物、各萃取物及AB-8大孔树脂各洗脱部位对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护作用.结果:①正丁醇萃取物对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护率及其增生指数高于阳性对照槲皮素及其他各萃取物(P＜0.05～0.01).②正丁醇萃取物中,体积分数为0.1,0.3,0.5的乙醇洗脱部分对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞具有保护作用,但体积分数为0.1的乙醇洗脱部分保护作用强,显著高于阳性对照槲皮素及其他各处理组(P＜0.01),体积分数为0.1乙醇洗脱部分在剂量为200 g/L时,保护率为64.43%,增生指数达到2.952.结论:叶下珠保肝护肝的有效部位为正丁醇萃取物中AB-8大孔吸附树脂体积分数为0.1的乙醇洗脱部分.但叶下珠中保肝的有效单体成分还没有确定,有待进一步实验证明.
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人α防御素3前体蛋白对克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌作用
目的:分析α防御素3前体蛋白对于克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌效果,为进一步研究人类α防御素3的杀菌机制提供依据.方法:实验于2005-11/2006-09在上海交通大学生命科学技术学院刘建华实验室完成.将α防御素3前体的编码基因克隆到载体pDEST17中,载体转化入大肠杆菌DE3细胞,通过体外诱导及亲和纯化的方法获得α防御素3前体蛋白.根据在不同蛋白浓度下生存下来大肠杆菌和克雷伯菌所占的比例以及导致50%,90%和99%细菌死亡(LD50,LD90和LD99)时人α防御素3前体蛋白浓度来判断前体蛋白的杀菌作用.结果:①在1 L培养基培养条件下,可获得纯化后α防御素3前体蛋白12 mg,复性效率为15%～20%.②蛋白浓度为5,10,15和30 mg/L时,克雷伯菌仔活率分别为50%,33%,10%和4%.蛋白浓度为10,20,30和45 mg/L时,大肠杆菌存活率分别为50%,10%,5%和1%.③克雷伯菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为5和35 mg/L.大肠杆菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为10 mg/L和45 mg/L.结论:重组纯化的人α防御素3前体蛋白具有有效杀灭大肠杆菌和克雷伯菌的作用.
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脑海马CA3区星形胶质细胞激活及环氧化酶2、核因子κB表达变化与雷公藤甲素的干预
目的:观察雷公藤甲素对脂多糖诱导的海马内慢性炎症CA3区星形胶质细胞活化及相关因子的影响,为雷公藤甲素应用于临床治疗提供实验依据.方法:实验于2006-07/11在中南大学湘雅医学院人体解剖学教研室实验室完成.选用30只SD大鼠,按随机数字表法分为3组(n=10):①雷公藤甲素组:海马内注射脂多糖10μL制备海马慢性炎症模型后,腹腔注射雷公藤甲素20μg/kg,1次/d.②单纯脂多糖组:制备海马慢性炎症模型.③生理盐水组:海马注射10μL生理盐水.每组分别取术后7 d,14 d两个时间点(n=5),应用免疫组织化学染色结合图像分析方法观察海马CA3区注射部位胶质纤维酸性蛋白、环氧化酶2和核因子κB的表达变化.结果:①与生理盐水组比较,单纯脂多糖组可以引起海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达增加,胞体变大,突起粗大;神经元环氧化酶2表达增加,阳性产物位于细胞浆;神经元核因子κB免疫阳性产物表达增加,阳性产物位于细胞浆和细胞核内.②雷公藤甲素可下调脂多糖诱导的胶质纤维酸性蛋白、环氧化酶2及核因子κB的表达,同时逆转星形胶质细胞的形态变化.结论:雷公藤甲素可能通过抑制海马炎症反应过程中星形胶质细胞的激活以及环氧化酶2、核因子κB的表达发挥其抗炎和神经保护作用.
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鹰嘴豆异黄酮提取物对糖尿病小鼠血糖和氧化-抗氧化态的效应
目的:通过观察鹰嘴豆异黄酮对糖尿病小鼠血糖及氧化-抗氧化效应的影响,探讨其降糖机制.方法:实验于2006-08/10在中国药科大学药理教研室动物实验中心完成.①选用清洁级昆明种小白鼠50只进行造模:小鼠以高糖高脂饲料喂养4周后,按25 mg/kg剂量一次尾静脉注射链脲佐菌素,注射7 d后血糖升高稳定、且随机血糖达16.7mmol/L以上者为造模成功.②随机将造模成功的小鼠50只均分为5组:高血糖模型对照组、二甲双胍治疗组、鹰嘴豆异黄酮提取物低、中、高剂量组,每组10只.在各组给予高糖高脂饲料的基础上,鹰嘴豆异黄酮提取物3个剂量组分别给予25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg的受试物,高血糖模型对照组和二甲双胍治疗组分别给予150 mg/kg的蒸馏水和二甲双胍,1次/d,连续4周.③给药2周末和4周末监测空腹血糖,实验结束时于空腹12 h后将小鼠处死,取血和肝脏组织,测定血清及肝组织中丙二醛含量及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性.结果:纳入50只小鼠均进入结果分析.①空腹血糖:给予鹰嘴豆异黄酮提取物2周后,高剂量组与二甲双胍治疗组小鼠血糖值显著低于高血糖模型对照组(P＜0.05),且二者间差异无显著性;4周后,高、中剂量组均显著低于高血糖模型对照组(P＜0.05),二甲双胍治疗组极显著低于高血糖模型对照组(P＜0.01);高、中剂量组与二甲双胍治疗组间差异无显著性.②丙二醛含量:与高血糖模型对照组相比,中剂量组和二甲双胍治疗组血清和肝脏中丙二醛含量均显著降低(P＜0.05),高剂量组呈极显著降低(P＜0.01),且高剂量组血清中丙二醛含量显著低于二甲双胍治疗组(P＜0.05).③超氧化物歧化酶活性:中、高剂量组和二甲双胍治疗组血清和肝脏中超氧化物歧化酶活性均高于高血糖模型对照组(P＜0.05).④过氧化氢酶活性:中、高剂量组血清和高剂量组肝脏中过氧化氢酶活性高于高血糖模型对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05),高剂量组血清和肝脏中过氧化氢酶活性均显著高于二甲双胍治疗组(P＜0.05),而二甲双胍治疗组无论血清还是肝脏中过氧化氢酶活性与高血糖模型对照组相比差异无显著性(P＞0.05).⑤谷胱甘肽过氧化物酶活性:中、高剂量组血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性均高于高血糖模型对照组(P＜0.01);各剂量组肝脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶活性均高于高血糖模型对照组(P＜0.01);二甲双胍治疗组血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著高于高血糖模型对照组(P＜0.05),但肝脏中活性仍极显著低于3个剂量组(P＜0.01).⑥给药后,模型鼠的血糖与血清超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性的相关系数分别为-0.940 3、-0.946 6和-0.950 3;与肝脏超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性的相关系数分别为-0.943 6、-0.935 6和-0.963 1.结论:①鹰嘴豆异黄酮提取物有显著的降血糖作用.②鹰嘴豆异黄酮提取物降血糖作用的机制可能与其提高抗氧自由基酶类的活性,保护机体组织免遭过氧化损伤有关.③鹰嘴豆异黄酮提取物在降低过氧化产物丙二醛含量、增强机体抗氧化能力方面的功能优于治疗糖尿病的常用药物二甲双胍.
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单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及对骨肉瘤细胞增殖的抑制
背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象.而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者.同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,能否更易促进肿瘤细胞凋亡?目的:利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用.设计:随机对照观察.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科.材料:实验于2005-01/2006-10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成.人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供.含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司.方法:利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5kb)亚克隆至pIRES载体中,通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53.通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,将细胞分为3组:空白对照组(MG-63细胞),空载体对照组(稳定转染pIRES-neo细胞),p14ARF-p53组(稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞).①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期.②逆转录PCR(RT-PCR)和Western bolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测.③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况.主要观察指标:①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期.②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达.③细胞增殖情况.结果:成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53.①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期:流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期.②蛋白表达检测结果:RT-PCR与Western blot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达.③细胞生长情况:转染MG-63后24,48,72,96 h瘤细胞生长抑制率分别为33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,与空载体对照组差异显著(P＜0.01).结论:野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡.
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力竭性运动对大鼠血浆心钠素及心肌血供的影响
目的:观察不同训练程度大鼠力竭性运动后血浆心钠素含量及心肌缺血情况,探讨力竭性运动对大鼠心脏内分泌以及心肌血供的影响.方法:实验于2006-10/12在武汉体育学院细胞与分子生物学实验室完成.选择SD大鼠16只,按随机数字表法分为3组,安静对照组(n=4)笼内生活,自由饮食;游泳力竭组(n=6)适应性喂养1周后进行一定的适应性游泳训练;长期耐力训练游泳力竭组(n=6)训练8周,6次/周.8周后,后两组大鼠进行力竭性运动,运动后取大鼠血浆,采用放射免疫法测定心钠素含量;取心肌组织,制作光镜切片,采用Nagar-Olsen特殊染色法检测心肌缺血情况.结果:16只大鼠全部进入结果分析.①在经过8周的运动训练后,游泳力竭组、长期耐力训练游泳力竭组大鼠血浆心钠素含量显著高于安静对照组(P＜0.05,＜0.01);长期耐力训练游泳力竭组大鼠血浆心钠素含量显著高于游泳力竭组(P＜0.05).②游泳力竭组大鼠心肌组织缺血较为严重;而长期耐力训练游泳力竭组大鼠心肌组织与安静对照组相比,也有缺血现象发生,但没有游泳力竭组严重.结论:力竭性运动会造成大鼠心血管内分泌活性物质心钠素的失调,并造成心肌组织缺血;长期耐力游泳训练可以使大鼠心脏结构及功能产生一定的适应性改变.
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活血降糖饮对实验性糖尿病大鼠作用及机制
目的:观察活血降糖饮对糖尿病大鼠血糖、血脂、血浆胰岛素、胰高糖素、胰岛素敏感性指数及氧自由基等指标的干预作用.方法:实验于2001-03/08在广州中医药大学第一临床医学院糖尿病研究所实验室进行.①造模:取80只SD大鼠随机分为2组,一组65只腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病,另一组15只腹腔注射柠檬酸缓冲液为正常对照组.②给药:将造模成功的56只大鼠随机分为模型空白组、玉泉丸组、优降糖组及活血降糖饮组4组,每组14只.模型空白组每日灌服3 mL生理盐水,玉泉丸组每日灌服玉泉丸混悬液3.75 g/kg,优降糖组每日灌服优降糖混悬液1.25 mg/kg,活血降糖饮组每日灌服活血降糖饮水煎液(黄芪30 g、生地20 g,丹参30 g,太子参30 g,五味子15 g,麦冬15 g,淮山12 g,黄精15 g,丹皮12 g,大黄16 g,川红花12 g,桃仁10 g组成)0.01 mL/g,治疗5周.③评估指标:5周后采血检测空腹血糖、血脂、过氧化脂质、超氧化物歧化酶、血浆胰岛素、胰高糖素,并计算胰岛素敏感性指数.结果:60只大鼠进入结果分析.①空腹血糖:造模后各组均较造模前升高(P＜0.001),治疗后活血降糖饮组低于玉泉丸组,高于优降糖组[(13.22±6.88),(15.35±7.23),(10.28±6.75)mmol/L,P＜0.05],3组均高于正常对照组.②血脂:活血降糖饮组和玉泉丸组三酰甘油及胆固醇低于优降糖组,高密度脂蛋白胆固醇高于优降糖组(P＜0.05).③血浆胰岛素:治疗后优降糖组高于造模后[(9.15±2.66),(4.61±1.55)mU/L,P＜0.05],玉泉丸组与活血降糖饮组与造模后无差异.④胰高糖素:治疗后各组均明显下降(P＜0.01),其中活血降糖饮组下降程度强于玉泉丸组,弱于优降糖组(P＜0.05).⑤胰岛素敏感性指数:治疗后玉泉丸组与活血降糖饮组均较造模后显著改善(P＜0.01),优降糖组无明显变化.⑥治疗后,治疗各组血浆过氧化脂质水平降低,超氧化物歧化酶活性升高,与空白组比较差异显著(P＜0.01),但仍未达到正常对照组水平(P＜0.05).结论:活血降糖饮对实验性糖尿病大鼠有降低空腹血糖、改善血脂、降低胰高糖素及增强胰岛素敏感性的作用.
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咪达唑仑对大鼠杏仁核点燃的抑制作用及对小鼠大电休克惊厥模型的影响
背景:经典的抗癫痫治疗药物苯巴比妥、苯妥英钠、地西泮等均具有抑制大鼠杏仁核的点燃效应,咪达唑仑是否有此效果尚不十分明确.目的:观察咪达唑仑对大鼠杏仁核点燃发作的抑制及其抗癫痫作用及对小鼠大电休克惊厥模型的影响.设计:分为3个小实验,分别检测咪达唑仑对杏仁核点燃、对自主活动、对惊厥发生率的作用,各小实验采用完全随机,组间对照或动物前后对照.单位:青岛大学医学院.材料:实验于2004-08/2005-03在青岛大学医学院附属医院综合实验室完成.选择雌性Wistar大鼠9只,体质量(250±10)g;昆明种小鼠120只,雌雄不拘,体质量(20±5)g,实验动物由青岛市药品检验所动物中心提供.咪达唑仑由徐州恩华药业生产(批号:20030706,5 g/L).方法:①电极埋置建立大鼠杏仁核点燃模型.随机取点燃大鼠9只,分别以0.25,0.5,1 mg/kg咪达唑仑腹腔注射,采用四道生物信号微机处理系统测定后放电时程和Racine's分级.②将60只小鼠随机分为生理盐水组,苯巴比妥(40 mg/kg)组,咪达唑仑0.5,1.0,1.5 mg/kg组,每组12只.腹腔注射给药,用XZC-4A小动物自主活动仪测定单位时间内的活动数(次数/5 min).③建立小鼠大电休克惊厥模型的影响,以及计数惊厥发生率.主要观察指标:咪达唑仑对大鼠后放电时程和Racine's分级、对小鼠自主活动次数和惊厥发生率的影响.结果:纳入大鼠9只和小鼠120只,全部进入结果分析.①咪达唑仑对大鼠杏仁核点燃发作的影响:咪达唑仑0.5,1.0 mg/kg腹腔注射后,后放电时程和Racine's分级均明显低于用药前(P＜0.05～0.01);咪达唑仑0.25 mg/kg腹腔注射后,后放电时程低于用药前(P＜0.05),Racine's分级差异不明显(P＞0.05).②咪达唑仑对小鼠自主活动的影响:苯巴比妥组和咪达唑仑0.5,1.0,1.5 mg/kg组小鼠自主活动数均明显低于生理盐水组(P＜0.01),咪达唑仑0.5 mg/kg组小鼠自主活动数高于苯巴比妥组(P＜0.05).③咪达唑仑抗小鼠大电休克实验的结果:苯巴比妥组和咪达唑仑0.5,1.0,1.5 mg/kg组小鼠惊厥发生率均明显低于生理盐水组(P＜0.05～0.01),咪达唑仑0.5 mg/kg组小鼠惊厥发生率高于苯巴比妥组(P＜0.05).结论:咪达唑仑具有抑制杏仁核点燃的作用,抗癫痫作用显著,具有明确的抗惊厥和镇静作用.
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早期限饲对肉鸡脂质过氧化和抗氧化酶活性长期影响
目的:观察早期限饲(出雏后两周隔天饲喂)对肉鸡脂质过氧化作用和抗氧化酶活性产生的长期影响,并通过与后期限饲(屠宰前两周隔天饲喂)比较,观察不同阶段限饲对肉鸡血清、肝脏、胸肌、腓肠肌丙二醛浓度、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响.方法:实验主要于2005-04/12在南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室完成.实验分组:选取1日龄健康快三黄商品肉鸡100羽随机分为2组,对照组60羽,早期限饲组40羽.饲养至50日龄,从对照组随机选取20羽作为后期限饲组.实验处理:①早期限饲组,1～14日龄进行隔日限饲,以后自由采食.②后期限饲组,1～49日龄自由采食,50～63日龄进行隔日限饲.③对照组,全程自由采食.实验评估:记录每周体质量,检测14日龄对照组、早期限饲组,63日龄对照组、早期限饲组和后期限饲组血清、肝脏、胸肌、腓肠肌丙二醛浓度、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性.结果:100羽实验动物均进入结果分析.①14日龄早期限饲组肉鸡血清、肝脏、胸肌和腓肠肌丙二醛浓度、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性与对照组相比差异无显著性.②63日龄时早期限饲组血清丙二醛浓度和谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著高于对照组(P＜0.05),肝脏超氧化物歧化酶活性显著低于对照组(P＜0.05);后期限饲组血清丙二醛浓度以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著高于对照组(P＜0.05),而肝脏丙二醛浓度、胸肌超氧化物歧化酶活性显著低于对照组(P＜0.05),腓肠肌各项指标与对照组相比差异无显著性.后期限饲组血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于早期限饲组(P＜0.05).后期限饲组肝脏丙二醛浓度显著低于早期限饲组,超氧化物歧化酶活性显著高于早期限饲组(P＜0.05).结论:早期及后期限饲均能增强63日龄肉鸡体内整体水平脂质过氧化作用和抗氧化酶活性,早期限饲对肉鸡脂质过氧化作用和血清抗氧化酶活性的即时影响表现不明显,但其影响可以持续到后期.
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糖尿病大鼠卵巢组织中细胞色素C、线粒体Ca2+变化与灵芝孢子粉的干预
目的:以卵巢组织中细胞色素C、线粒体Ca2+和性激素水平为观察指标,观察灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠卵巢组织的保护作用.方法:实验于2006-06/08在佳木斯大学黑龙江省小儿神经康复重点实验室完成.①实验对象:Wistar雌性大鼠50只,随机分为对照组10只,2型糖尿病模型组20只,灵芝孢子粉组20只.②实验方法:大鼠禁食16～18 h,自由饮水,模型组及灵芝孢子粉组大鼠经尾静脉一次性按25 mg/kg注射2%链脲佐菌素,正常对照组尾静脉注射等量柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液.正常饮食喂养2周后,进行糖耐量试验,模型组和灵芝组以糖耐量异常者保留,余去除,并改喂高脂高糖饮食,灵芝孢子粉组另加灵芝孢子粉[250 mg/(kg·d)]持续10周,实验结束前一天再次做糖耐量试验.③实验评估:实验结束后,各组动物均禁食12 h,乙醚吸入浅麻醉,内眦静脉取血待测血清胰岛素.解剖出卵巢,待测线粒体细胞色素C、线粒体Ca2+含量.结果:选用Wistar雌性大鼠50只,结果分析数量每组8只.①葡萄糖耐量试验:实验开始及实验12周时,模型组大鼠均表现出糖耐量异常的变化(P＜0.05),1 h血糖增高显著(P＜0.05)达到高峰,2 h血糖仍较高;对照组大鼠30 min血糖达到峰值,2 h血糖基本恢复正常.②血清胰岛素和卵巢性激素水平:模型组血清胰岛素明显升高(P＜0.05).而灵芝孢子粉组与对照组比较差异无显著性.模型组雌二醇含量明显降低(P＜0.05),卵胞刺激素含量、睾酮含量明显升高(P＜0.05),而灵芝孢子粉组与对照组比较差异无显著性.③胞浆细胞色素C、线粒体细胞色素C、线粒体钙变化:模型组卵巢组织胞浆细胞色素C含量明显升高(P＜0.05),模型组卵巢组织线粒体细胞色素C含量明显降低(P＜0.05),模型组卵巢组织线粒体钙含量明显降低(P＜0.05);而灵芝孢子粉组与对照组比较差异均无显著性.结论:灵芝孢子粉可降低糖尿病大鼠血清胰岛素、卵巢组织卵胞刺激素、睾酮、胞浆细胞色素C含量,调节卵巢组织雌二醇、线粒体细胞色素C、钙含量,对糖尿病大鼠卵巢组织具有一定保护作用.
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原发性高血压患者左室构型与儿茶酚胺的关系
目的:了解原发性高血压心脏超声构型的分型与血浆儿茶酚胺水平的关系.方法:实验于2003-02/2005-07在泰安市中心医院完成.选择102例原发性高血压患者,采用超声心动图(Ganau标准)将患者分为:①正常构型组:左室质量指数及相对室壁厚度均在正常范围.②向心性重构组:左室质量指数正常,但相对室壁厚度增加.③向心性肥厚组:左室质量指数与相对室壁厚度均增加.④离心性肥厚组:左室质量指数增加但相对室壁厚度正常.另选择50名年龄相当的健康查体者做为正常对照组.高血压患者停用降压药2周,所有受检者实验前1 d禁用烟、酒、茶及咖啡,禁食12 h,于清晨采静脉血10 mL,以高效液相色谱法检测其血浆中的肾上腺素及去甲肾上腺素含量.结果:152名研究对象全部进入结果分析.向心性重构组、向心性肥厚组和离心性肥厚组的肾上腺素水平、去甲肾上腺素水平均高于正常对照组及正常构型组(P分别＜0.01),而且向心性重构组＞正常构型组,向心性肥厚组＞向心性重构组,离心性肥厚组＞向心性肥厚组(P＜0.05或0.01).结论:原发性高血压患者血浆肾上腺素、去甲肾上腺素水平的升高促进了左室构型的发展.
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筛选心肌缺血再灌注大鼠差异表达基因
目的:利用抑制性消减杂交技术,筛选出大鼠心肌缺血再灌注的差异表达基因,以期通过基因线索探讨其损伤机制.方法:实验于2006-03/10在中山大学中山医学院完成.①实验分组:Sprague-Dawley雄性大鼠40只,随机分为手术组,对照组,每组20只.②实验干预:手术组结扎左冠状动脉,心电图出现急性心肌梗死改变90 min后,去除结扎线,再灌注60 min,建立心肌缺血再灌注大鼠模型.对照组仅穿线不结扎,余同手术组.③取缺血区心肌,提取Total RNA,构建cDNA文库,利用抑制性消减杂交技术筛选差异表达基因,测序,登录Genbank寻找同源性基因.结果:共获得124个阳性结果,56个为高表达基因,68个为低表达基因,其中发现5个新的cDNA片段.其中能量代谢、物质运输、信号转导相关差异表达基因分别占所有差异表达基因的39.25%,15.89%,15.89%,并且主要变化为下调.结论:抑制性消减杂交技术是一种高效的筛选差异基因的方法.心肌缺血再灌注后基因变化涉及多种功能的基因,以能量代谢、物质运输、信号转导相关基因下调明显.
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睡眠剥夺后急性力竭运动大鼠血清的氧化应激状态
背景:有研究表明,大负荷的运动训练可造成自由基的生成急剧增加这些内源性自由基生成增多以及由此导致的组织细胞及亚细胞的脂质过氧化加强,使组织细胞的结构和功能受损,从而导致运动能力下降.睡眠剥夺也可造成机体氧自由基增加.目的:观察不同睡眠剥夺时间后急性力竭运动大鼠血清丙二醛、谷胱甘肽含量和超氧化物歧化酶活力的变化.设计:随机对照动物实验.单位:湖南师范大学体育学院运动人体科学实验室.材料:选用30只健康雄性10周龄SD大鼠,体质量(220±13)g,清洁级,由湖南农业大学实验动物服务部提供.方法:实验于2006-04/05在湖南师范大学体育学院运动生物化学实验室完成,随机摸球法将大鼠分为5组,空白对照组,单纯运动组,剥夺睡眠24 h组,剥夺睡眠24 h组,剥夺睡眠72 h组,每组6只;空白对照组大鼠正常睡眠、不运动;单纯运动组大鼠正常睡眠、急性力竭运动后处死;剥夺睡眠24,48,72 h组大鼠分别在剥夺睡眠24,48,72 h,进行急性力竭运动后处死.大鼠睡眠剥夺模型采用的是轻柔刺激法;单纯运动组和睡眠剥夺后力竭运动组大鼠依据Bedford建立的大鼠运动模型方案进行运动:跑台坡度为10°,速度为19.3 m/min,所有运动大鼠至力竭(力竭标准:运动末期,大鼠先后滞留跑道后1/3处达3次以上,各种刺激驱赶均无效,停跑后体征表现为呼吸急促,神情倦怠,腹卧位,对刺激反应迟钝,捕捉时,逃避反应较运动前减弱).各组大鼠于实验后麻醉处死,将血液取出,自然凝固后离心,取上清检测丙二醛、谷胱甘肽的含量及超氧化物歧化酶活性.主要观察指标:大鼠血清的丙二醛、谷胱甘肽含量和超氧化物歧化酶活力的变化.结果:纳入大鼠30只均进入结果分析.①单纯运动组丙二醛含量高于空白对照组[(4.37±0.26),(3.35±0.14)μmol/L,P＜0.01].剥夺睡眠24,48,72 h组丙二醛含量分别为(4.89±0.20),(5.15±0.12),(7.29±0.42)μmol/L,均高于单纯运动组,其中睡眠剥夺72h组高于其他睡眠剥夺组,差异有统计学意义(P＜0.01).②单纯运动组的谷胱甘肽含量低于空白对照组[(83.33±1.73),(93.16±2.44)mg/g,P＜0.01],剥夺睡眠24 h组谷胱甘肽含量为(94.98±1.69),高于单纯运动组(P＜0.01),剥夺睡眠48,72 h组谷胱甘肽含量分别为(79.89±2.16),(72.38±3.19)mg/g,低于单纯运动组(P＜0.05,0.01),睡眠剥夺各时间组差异均有统计学意义(P＜0.01).③单纯运动组超氧化物歧化酶活力低于空白对照组[(4.59±0.21),(5.21±0.11)mkat/g,P＜0.01],剥夺睡眠24,48,72 h组超氧化物歧化酶活力分别为(5.03±0.15),(3.95±0.19),(3.27±0.31)mkat/g,均低于单纯运动组(P＜0.01),但睡眠剥夺48 h和72 h的超氧化物歧化酶明显低于空白对照组(P＜0.01);睡眠剥夺各时间组差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:睡眠剥夺能够引起大鼠血清氧化应激损伤;随着睡眠剥夺时间的加长并做力竭运动使大鼠血清的氧自由基产物堆积越多,清除氧自由基能力越差,对机体的损伤明显.
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冷缺血时间及血液相容性与移植胰岛细胞活性的关系
背景:在胰岛移植过程中,胰岛细胞的数量和胰岛细胞的活性是非常重要的.胰岛细胞移植中玲缺血时间和组织相容性是关系胰岛细胞移植能否成功的关键问题.目的:观察冷缺血时间及血液相容性不同对于胰岛细胞数量和活性的影响.设计:观察性实验.单位:广西中医学院附属瑞康医院.材料:采用脑死亡自愿捐赠者的器官(已知血型和HLA配型),在其他器官切取后或同时进行胰腺的获取;血型相同、HLA配型相符的血液;HLA配型高致敏(错配3个以上位点)或群体反应性抗体＞50%或淋巴毒阳性受者的血液;分离纯化后的胰岛细胞悬浊液,经过70μm的筛网滤过后,保留直径大于70μm的胰岛细胞,配置成浓度1.20×105L-1左右活性胰岛细胞悬浊液.方法:高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉原位灌注后,参照文献进行肝、肾、胰腺联合及分别切取.用于切取的时间:胰腺肾脏的联合切取、肝脏胰腺肾脏的联合切取方法平均需时15 min,肝脏、胰腺、肾脏的单独切取平均需时20 min,用于胰岛分离的胰腺12份,冷缺血时间2.5～8 h.冷却血时间在5 h以内的9份,温缺血时间0～3 min,消化的时间15±2.4 min.采用胶原霉P进行消化分离胰岛细胞,双硫腙、丫腚橙染色测定不同的冷缺血时间条件下活性胰岛细胞活性,分析体外胰岛细胞和血液与供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系.主要观察指标:胰岛细胞活性率和血小板、中性粒细胞和单核细胞计数.结果:肝、肾、胰腺联合切取及各器官的单独切取顺利,在玲却血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性;人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中,胰岛将诱发一个迅速的血细胞消耗;进行血小板、中性粒细胞和单核细胞计数,HLA错配组和HLA匹配组与对照组比较血细胞都发生明显的消耗;加入肝素后血细胞计数与对照组比较差异明显(P＜0.05),反应明显减轻.HLA匹配组和HLA错配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量较,差异明显(P＜0.05).结论:在冷缺血时间＜5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞的移植;血液相容性好能够明显提高胰岛细胞移植的成功率.
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肾小管泌氢功能检测在肾移植对抗排斥反应治疗效果中的应用
背景:移植后的急性排斥是肾移植术后的主要并发症,也是导致慢性排斥反应和移植物失功重要的危险因素,因此,了解肾小管泌氢功能能否早期反映移植物的功能情况有重要意义.目的:观察肾移植患者术后肾小管泌氢功能,并进行监测,探讨其在移植物急慢性排斥中的作用.设计:病例-对照观察.单位:解放军济南军区总医院泌尿外科.对象:选择2000-05/2005-06解放军济南军区总医院泌尿外科连续实施肾脏移植26例患者,男16例,女10例;年龄21～58岁,平均35岁.原发病均为慢性肾小球肾炎,慢性肾功能衰竭,全部为尸肾移植.供受者均血型相同、淋巴细胞毒试验阴性.其中1例为第2次移植.所有患者对检测项目知情同意.方法:依据典型的临床表现,彩色多普勒超声及血流变化诊断患者排斥反应,16例患者未发生排斥反应为稳定组,10例发生排斥反应的患者为排斥组,排斥组根据排斥情况分为排斥前期、排斥期及恢复期.对所有患者术前及术后1周起每周1次,连续10周分别以化学清洁玻璃瓶留取晨起中段尿测定尿可滴定酸、NH4+和净酸水平评估肾小管泌氢功能.主要观察指标:两组患者尿可滴定酸、NH4+和净酸水平.结果:纳入患者26例均进入结果分析.排斥反应组排斥前期患者肾小管泌氢功能各检测值显示泌氢功能开始建立,并趋向正常,排斥期患者肾小管泌氢功能检测值均显示明显下降,与排斥前期及稳定组比较均有统计学显著性差异(P＜0.01).恢复期患者排斥反应治疗后监测的结果显示泌氢功能恢复较快.肾小管泌氢功能总体连续观察结果显示总体恢复的不均衡性,大部分病例恢复时间从1～10周不等,平均恢复期限约6周,2例10周内未恢复,4例严重排斥者中3例治疗后泌氢功能恢复缓慢.结论:肾小管泌氢功能可弥补血清肌酐不能良好反映肾小管功能的不足,能在连续观察中对移植肾急性排斥反应的诊断,特别是对抗排斥治疗的效果判断和预后评估中作为有价值的指标.
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大鼠小肠移植早期应用趋化因子受体拮抗剂抑制移植物急性排斥反应
背景:排斥反应的发生是导致小肠移植失败的主要原因,趋化因子RANTES及其受体介导的细胞免疫在急性排斥反应中具有重要作用.目的:观察小肠移植术后早期应用趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对排斥反应的免疫抑制作用及其与他克莫司的协同效应.设计:随机化完全区组设计,观察对照动物实验.单位:解放军第四五一医院普通外科、解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室及解放军第四军医大学基础部电子显微镜中心.材料:实验于2003-09/2005-03在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.以96只SD大鼠为供者,96只Wistar大鼠为受者,施行异基因节段性异位小肠移植.方法:移植后的大鼠以随机化完全区组设计分为4组(n=24):对照组、Met-RANTES组(200 μg/d)、他克莫司组(0.5 mg/(kg·d))及Met-RANTES+他克莫司组(Met-RANTES 200μg/d+他克莫司0.5 mg/(kg·d)).后3组均于移植术后腹腔注射给药,共7 d;对照组移植前后不作任何处理.术后观察移植大鼠的一般状况、存活时间以及免疫细胞浸润情况,并于移植术后3,5,7d分别取各组大鼠移植肠标本(n=6)进行组织病理学检查,采用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜技术对移植肠RANTES和CD4+,CD8+,CD25+ T淋巴细胞的表达进行连续定量测定.每组剩余6只大鼠作存活时间观察,观察期限为5周.主要观察指标:①各组大鼠移植术后存活时间.②各组大鼠移植肠的病理改变.③各组大鼠移植肠RANTES及T淋巴细胞亚群的表达.结果:移植术后96只Wistar受体大鼠全部进入结果分析.①Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠平均存活时间显著长于对照组(P＜0.01);Met-RANTES+他克莫司组大鼠存活时间长,与Met-RANTES组、他克莫司组差异均有显著性意义(P＜0.01).②对照组全部死于急性排斥反应及感染,组织病理学检查显示移植后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应.Met-RANTES组、他克莫司组和Met-RANTES+他克莫司组病理学检查无明显排斥反应征象.③对照组大鼠的移植肠RANTES表达在术后各时段均显著高于其他3组(P＜0.01),其动态变化与急性排斥反应的进程成正相关;Met-RANTES组和Met-RANTES+他克莫司组大鼠移植肠RANTES、CD4+、CD8+和CD25+T细胞的表达均低于对照组(P＜0.01).结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量(0.5 mg/(kg·d))他克莫司的免疫抑制作用.
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预致敏受者尸体肾移植术后的急性排斥反应
目的:预致敏肾移植受者的增加已是目前肾移植成功的重大影响因素.观察人类白细胞抗原氨基酸残基配型及新型免疫抑制剂治疗方案对预致敏患者肾移植术后急性排斥反应的治疗效应,寻找提高移植物存活率的佳方案.方法:选择2003-01/2005-08在首都医科大学附属北京友谊医院行肾移植手术的患者396例,患者均知情同意.分组:①预致敏组(n=32):即术前致敏患者.采用诱导治疗(抗淋巴细胞球蛋白100 mg/d,3～7 d)+三联免疫抑制剂维持治疗方案(他克莫司+霉酚酸酯+激素).②对照组(n=364):未致敏患者.采用三联免疫抑制剂维持用药方案.比较两组患者肾移植术后6个月内急性排斥反应发生率、移植肾功能延迟恢复发生率及移植肾/患者1年存活率,同时分析人类白细胞抗原氨基酸残基配型对移植肾急性排斥反应的影响.结果:396例患者全部进入结果分析.①两组患者肾移植术后急性排斥反应发生率差异无显著性意义(P＞0.05).预致敏组患者移植肾功能延迟恢复发生率显著高于对照组(P＜0.01).②两组患者1年存活率差异无显著性意义(P＞0.05).预致敏组患者1年移植肾存活率低于对照组(P＜0.05),如果去除患者死亡因素的影响,两组患者1年移植肾存活率差异无显著性意义(P＞0.05).③预致敏组患者人类白细胞抗原氨基酸残基相配率高于对照组(P＜0.05).预致敏组中氨基酸残基配型3-4错配患者的急性排斥反应发生率显著高于0-2错配患者(P＜0.01),高度致敏患者(移植术前群体反应抗体＞50%)急性排斥反应发生率显著高于低度致敏患者(群体反应抗体10%～20%)(P＜0.01).结论:供受者之间良好的人类白细胞抗原氨基酸残基分型及采用新型免疫抑制药物治疗方案,对预防及减轻致敏患者移植术后急性排斥反应疗效确切,并可以缩短致敏患者等待移植手术的时间.
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移植脾组织血管神经生成规律的动态观察
目的:观察自体脾组织大网膜内移植后,移植脾组织血管神经再生过程中血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体及神经肽Y表达的动态变化,分析自体移植脾组织血管神经生成规律.方法:实验于2004-09/2006-10在解放军第三军医大学基础部外科应用解剖与手术学教研室实验室完成.①选用Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为7个时相组,每组10只.②行脾切除自体脾组织大网膜内移植,分别于术后7,14,30,60,90,120,180 d,采用免疫组化血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体、神经肽Y阳性神经纤维抗体染色方法,应用光镜、电镜、图像分析观测自体移植脾组织.结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①自体脾组织移植术后7 d即有血管长入移植脾组织,180 d再生血管接近正常;术后30 d神经开始再生,180 d趋于正常.②术后7,14 d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度迅速升高,60 d达高峰,随后逐渐降低;术后30 d出现神经肽Y阳性神经纤维.术后180 d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度趋于正常;术后120,180 d神经肽Y阳性神经纤维广泛分布.结论:自体移植脾组织再生过程中移植脾组织再生血管神经来源于大网膜内的神经.自体移植再生脾组织内血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体表达量早期开始升高,移植脾组织先出现血管再生,后出现神经再生.
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游离足趾移植术中Ⅱ趾血供系统的特点
目的:游离足趾移植是拇指Ⅱ类以上缺损再造术的首选.分析与Ⅱ趾移植相关的足部供血系统的血管走行、分支情况及变异程度,并提出临床应用中为保证手术成功而采取的相应对策.方法:对1978-03/2007-06天津医院手、显微外科收治的91例Ⅱ趾移植再造拇(手)指患者进行回顾性分析,所有病例均为Ⅱs～ⅢB类型拇指缺损,均为择期手术,对治疗方案知情同意.术中遇第一跖背动脉纤细型,采取足背动脉-足底深支-第一跖底动脉的第2套供血系统.当第一跖背动脉走行不定而误伤时,手术继续进行,完整切取Ⅱ趾后,进行第一跖背动脉吻合修复.注意第一跖背动脉至足趾的分支解剖特点,辨清与Ⅱ趾的关系,采取不同的手术对策.结果:91例拇指缺损患者获得了97.8%的成活率及优良的外形与功能恢复,移植术中Ⅱ趾的使用率是100%.Ⅱ趾的血供系统特点:①由足背动脉发出的第二跖背动脉很少见,足背动脉的弓状动脉分支也很少见.②第一跖背动脉起始、走行、口径虽不恒定,但是有章可循.③第一跖背动脉终末交通支及至Ⅱ趾的分支情况分为3型,各型对Ⅱ趾的血供也有其不同特点.结论:全面掌握与Ⅱ趾移植相关的足部供血系统的解剖特点,术中仔细游离并采取相应的处理方法,是保证手术成功的关键.
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L-精氨酸对任意型移植皮瓣组织中基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶2抑制因子表达的影响
目的:观察L-精氨酸对任意型移植皮瓣组织中基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶2抑制因子表达的影响,分析L-精氨酸对移植皮瓣保护作用的途径.方法:于2005-06/09在武汉大学人民医院动物实验室完成取材、组织学和组织化学实验;2005-10/2006-02在武汉大学医学院人体解剖与组织胚胎实验室完成图像分析、照相和统计学处理.①实验材料和分组:取Wistar大白鼠79只,按随机数字表法分为3组:正常对照组(n=5),仅接受生理盐水处理,不形成皮瓣,只切开皮肤;皮瓣模型组(n=37),形成皮瓣,接受生理盐水处理;L-精氨酸干预组(n=37),形成皮瓣,接受L-精氨酸处理.②实验评估:肉眼观察皮瓣成活情况,利用HPIAS-2000多媒体彩色病理图像分析系统求出皮瓣平均成活面积率.应用光镜观察皮瓣组织学变化;用免疫组织化学SP法检测基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶2抑制因子抗原.比较各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均吸光度、阳性面积率并作统计学分析.结果:纳入85只大鼠,79只大鼠进入结果分析,皮瓣模型组和L-精氨酸干预组各有3只大鼠死亡.①术后7 d,L-精氨酸干预组皮瓣成活面积率显著高于皮瓣模型组(P＜0.01).②术后24 h,72 h皮瓣模型组皮瓣组织中基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶2抑制因子呈强阳性表达,L-精氨酸干预组呈弱阳性或阴性,正常对照组呈阴性.③皮瓣模型组皮瓣组织中基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶2抑制因子的平均吸光度及阳性面积率均显著高于L-精氨酸干预组和正常对照组(P＜0.01).结论:外源性L-精氨酸可能通过抑制任意型移植皮瓣组织中基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶2抑制因子的过度表达,提高任意型皮瓣的成活率.
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肾移植术后糖尿病的发病率及丙型肝炎在其发病过程中的作用
目的:肾移植术后糖尿病已成为影响患者术后短期及长期存活率的一项严重并发症.总结肾移植术后糖尿病的发病率及独立危险因素,并分析丙型肝炎病毒感染在其发病过程中的可能作用.方法:选择2000-01/2004-01在首都医科大学附属北京友谊医院行肾移植,术后服用他克莫司的患者58例,均知情同意.实验分组:①预防组(n=15):移植术前处于术前免疫功能高危状态.他克莫司起始剂量为10～12μg/L.②治疗组(n=25):移植术后出现耐激素性排斥反应,需要抗体治疗.他克莫司起始剂量为10～15μg/L.③转换组(n=18):移植术后出现高血脂、顽固性高血压、慢性移植肾功能减退等情况,传统药物疗效欠佳,需将环孢霉素A转为他克莫司.他克莫司起始剂量为8～10 μg/L.进行随访观察,分析3组患者服用他克莫司1年内出现的肾移植术后糖尿病的发病率及丙型肝炎病毒感染的发病率.结果:58例患者全部进入结果分析.①58例患者中肾移植术后糖尿病的发病率为12.08%,服用他克莫司后出现肾移植术后糖尿病的平均时间为52 d;丙型肝炎病毒感染的发病率为15.52%,丙型肝炎病毒感染患者中肾移植术后糖尿病的发病率高于非丙型肝炎病毒感染患者(44.44%,6.12%,P=0.001).②丙型肝炎的发病率3组间差异无显著性意义(P＞0.05);预防组及治疗组移植术后糖尿病发病率显著高于转换组(20%,16%,0%,P＜0.05).③多变量统计分析结果显示,在肾移植术后2个月内服用他克莫司的患者,丙型肝炎病毒与他克莫司的剂量是导致肾移植术后糖尿病的独立危险因素;丙型肝炎病毒感染患者出现肾移植术后糖尿病的危险性比非丙型肝炎病毒感染患者高出8.3倍,他克莫司浓度每增加1μg/L,患者出现肾移植术后糖尿病的危险性将增加12%.结论:肾移植术后服用他克莫司的患者肾移植术后糖尿病的发病率与丙型肝炎病毒感染密切相关.
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介入性超声在肝移植术后并发症诊治中的价值
目的:通过对病例资料的回顾性分析,验证微创介入性超声技术在肝移植术后并发症诊断和治疗中的价值.方法:选择2003-04/2006-11在解放军八一医院应用介入性超声技术诊治原位肝移植术后并发症的患者64例,患者均知情同意.根据病变部位选择合适体位,局部麻醉后,彩超引导佳穿刺径路,用18G穿刺针或自动活检针对病灶进行细胞组织学穿刺活检.通过介入性超声下的影像学变化,对各种原位肝移植术后并发症作出评估诊断及治疗.结果:64例患者全部进入结果分析,无脱落.①超声引导下肝活检28例,穿刺成功率100%,其中排异反应16例.②彩色超声引导下诊断及介入治疗47例,其中腹腔出血3例,经皮经肝胆管引流4例,肝门部及膈下脓肿抽吸引流5例,胆漏置管引流4例,胸腹水置管引流5例,抽吸胸腹水26例.③误诊肝动脉血栓1例.④所有患者介入治疗后并发症症状均有不同改善,无复发.结论:介入性超声对正确诊断及治疗肝移植术后胸腹腔并发症具有重要的临床价值.
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肝移植术后神经精神系统并发症:3例回顾性分析及文献复习
报告2001-03/2004-08在潍坊市人民医院肝胆血管外科收治的3例肝移植术后神经精神病发症患者,其中2例为谵妄样精神障碍,1例出现癫痫及肢体运动障碍,主要给与调整免疫抑制剂药物治疗、及时纠正水电解质紊乱及对症处理.观察术后患者预后情况,并对各病例诊治过程给予回顾性观察.病例1,男,54岁,乙型肝炎肝硬变并大肝癌.有高血压史15年,糖尿病史10年.2001-09-25行背驮式肝移植.术中、术后曾应用甲强龙1 000 mg冲击治疗.术后28 d因高胆红素血症,高钾血症,肝肾功能衰竭临床死亡.病例2,男,47岁,乙型肝炎,肝硬变并巨大肝癌,慢性结石性胆囊炎.有高血压史5年,糖尿病史2年.2001-12-26行背驮式肝移植.术后44 d时有明显的咳嗽、咳黄绿色痰,痰培养有曲霉菌属(50%),给与大扶康治疗效果可.至53 d时,出现嗜睡、精神委靡,54 d时出现神志不清,55 d时出现右侧偏瘫,逐渐昏迷,经脑CT检查证实为脑内出血,后死亡.病例3,男,59岁,乙型肝炎,肝硬化肝萎缩合并右肝小肝癌.2004-08-20日行原位改良经典式肝脏移植手术,无体外静脉转流.术后4 d突发性失语、逐步出现运动功能障碍,吞咽功能障碍,烦躁等情况,并有癫痫发作,经给予苯妥英钠、水合氯醛灌肠、鲁米那钠等治疗后,局灶型癫痫发作、烦躁等症状得到有效控制,但仍有失语、左侧偏瘫.术后5个月脑出血死亡.肝移植术后神经精神病发症发生率较高.而脑出血则是严重的并发症,死亡率很高.术中减少出血,维持血流动力学和内环境的稳定,避免大量的输血及输液对于预防该严重并发症的发生有重要的积极意义.
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前臂外侧皮神经与头静脉营养血管远端蒂复合移植皮瓣的应用解剖
背景:前臂外侧皮神经营养血管皮瓣适合手部修复,但远端蒂血管缺少具体可操作性的描述,临床应用还比较困难.目的:探讨前臂外侧皮神经-头静脉营养血管远端蒂复合瓣和旋转点下移的解剖学基础.设计:单一样本观察.单位:解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心.材料:实验于2004-01/05在解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心实验室完成.选用30侧动脉灌注红色乳胶成人上肢标本(由解放军南京军区福州总医院军区临床解剖学研究中心提供).方法:以桡骨茎突为观测标志点,重点显微解剖:①前臂外侧皮神经-头静脉下1/3段的营养血管来源、分支分布及吻合.②前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与桡骨膜血管的关系.③头静脉浅深交通支.主要观察指标:①前臂外侧皮神经-头静脉营养血管的来源、分支及吻合.②前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与邻近骨、皮的血供关系.结果:①在前臂的下1/3段,前臂外侧皮神经-头静脉的营养血管来源:该营养血管来自:桡动脉穿皮支6～11支,外径(0.7±0.3)mm;掌浅支穿皮支2～6支,外径(0.5±0.3)mm;桡骨茎突返支穿皮支一二支,外径(0.8±0.1)mm;鼻烟壶穿皮支一二支,外径(0 6±0.2)mm.在距桡骨茎突上80～15.0 cm,桡动脉肌间隙骨皮穿支1～3支,起始外径(1.1±0.2)mm.骨膜支分布桡骨体部中下段的裸露区,皮支外径(0.8±0.2)mm.②在前臂的下1/3段,前臂外侧皮神经-头静脉的营养血管分布:前述穿皮支发皮支、筋膜支、皮神经-浅静脉营养血管,形成皮神经-头静脉血管链以及深、浅筋膜血管网.结论:前臂外侧皮神经-头静脉营养血管与肌、骨、皮营养血管同源,以桡动脉皮支为蒂前臂外侧皮神经-头静脉营养血管远端蒂复合瓣,旋转轴点在腕关节平面,可用于手部远处组织缺损修复.
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多普勒超声诊断移植肾排斥反应与病理检查及肾功能指标的对比分析
目的:以病理活检结果为金标准,评估多普勒超声检查对移植肾排斥反应的诊断价值.方法:选择2003-01/2006-12在中国医科大学附属第一医院器官移植科行肾移植并在术后行超声检查的患者176例,均知情同意.①实验分组:根据术后移植肾功能分为2组,移植肾功能不良组78例,其中30例次行病理活检;移植肾功能正常组98例.②实验方法及评估:对患者移植肾行多普勒超声检查,参数选择峰收缩期流速、平均舒张期流速、阻力指数及血管显示率.血管显示率的评估标准(0～5级):0级为肾动脉及其远侧血管未显示;5级为肾各级血管均显示良好.以病理活检结果为金标准,分别选取阻力指数=0.7,0.75,0.8,0.85为诊断界值进行诊断试验.结果:169例患者进入结果分析,脱落7例.①峰收缩期流速、平均舒张期流速不呈正态分布,无法作为肾功能评价指标.30例次病理活检中共有28例次被确诊为排斥反应,急性排斥反应15例次,慢性排斥反应13例次.②肾功能正常组患者中血管显示率5级者占63.30%,4级者占36.73%.肾功能不良组患者中血管显示率4级者占41.03%,3级者占46.15%,2级者占10.30%,1级者占2.60%.③移植肾功能不良组患者阻力指数显著高于移植肾功能正常组(P＜0.01).移植肾功能不良组患者移植肾功能恢复后阻力指数显著低于移植肾尚未恢复时(P＜0.01),其中99%以上的患者△(阻力指数)≥0.20.④界值阻力指数=0.75的诊断试验的敏感性、特异性和准确性高,均达到100%.结论:当移植肾血管阻力指数升高至0.75以上,特别是同一患者自身对照升高超过0.2以上和或血管显示率低于4级,结合临床表现和生化结果,提示可能出现移植肾排斥反应.
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肾移植术后肾功能延迟恢复原因及术后血液净化的干预作用
目的:分析肾移植术后常见并发症肾功能延迟恢复的诱因,并观察术后血液净化干预所发挥的临床效应.方法:选择1996-12/2006-12在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科明确诊断为肾移植术后肾功能延迟恢复的患者193例,其中接受尸肾移植192例,活体肾移植1例,均知情同意.根据患者的临床资料,分析术后肾功能延迟恢复的主要原因.除5例因术前安置腹膜透析管继续采用腹膜透析外,其余均选择血液透析治疗,其中35例穿插接受过连续性肾脏替代治疗或血液透析滤过,8例血浆置换2～5次.终止透析的标准为每日尿量＞1 500 mL,血肌酐＜300μmol/L.分析术后肾功能延迟恢复的原因,观察接受透析治疗后肾功能延迟恢复患者的临床疗效.结果:193例患者全部进入结果分析.①术后肾功能延迟恢复的病因:急性肾小管坏死89例(46.1%),术后早期低血压42例(21.8%),排斥反应37例(19.2%),动静脉吻合口狭窄9例(4.7%),尿路梗阻8例(4.1%),动脉过长扭曲5例(2.6%),环孢素A肾毒性2例(1.0%),髂内动脉粥样硬化斑块阻塞1例(0.5%).②术后肾功能转归:移植肾功能恢复正常者145例(75.1%);术后3个月血肌酐135～300μmol/L 29例(15.3%);＞300μmol/L 15例(7.8%);因超急性排斥反应切除移植肾2例(1%),肺部重症感染死亡2例(1%).③术后接受血液透析次数:术后接受血液透析189例,透析1～5次移植肾功能恢复正常20例(13.8%);6～10次41例(28.3%);11～20次82例(56.6%);21～25次2例(1.4%);＞25次44例,仅1例恢复正常(0.7%),其余43例患者带肾存活.结论:急性肾小管坏死、术后早期低血压和排斥反应是引起肾移植术后肾功能延迟恢复的主要原因.在肾功能延迟恢复患者确定以血液净化为主的方案后,绝大多数移植肾功能可以恢复.
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颈椎植入物的生物力学分析及临床应用
目的:概述颈椎植入物在颈髓损伤、颈椎损伤、颈椎骨折脱位治疗中的应用及其生物力学特征.资料来源:检索PubMed 1993-04/2005-10关于颈椎植入物的临床应用及相关生物力学分析的文章.检索词为"spinal fixation;cervical fracture;spinal injury;biomechanics"并限定语言种类为英文.同时检索中国期刊全文数据库2004-01/2006-12的相关文章,检索词"颈椎植入物;颈椎损伤;生物力学".资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①颈椎植入物在颈椎、颈髓损伤及颈椎骨折脱位治疗的临床应用.②颈椎植入物的生物力学分析.排除标准:重复性研究.资料提炼:共收集到142篇文章,排除112篇重复性研究或关系不密切的文章,纳入30篇与纳入标准为贴近的文章.资料综合:随着对颈椎的生物力学和损伤机制研究的深入,以及手术设计、材料、技术的改进,手术治疗显示了它的优越性.颈椎损伤、脊髓损伤和颈椎骨折脱位中螺钉、钢板通过精确复位和切实固定,减少了颈椎畸形;对不稳的节段早期固定,以防止后期的颈椎不稳及对颈脊髓的继发性损害;利于早期活动,大限度地降低并发症.不同骨科固定器械的具有不同生物力学特征,用于治疗颈椎疾病时应考虑到这一点.结论:颈椎植入物的应用已在临床广泛开展,并已取得了较满意的效果;目前所应用的固定器械在具有突出优点的同时,也存在不足之处.这就需要临床医生在临床实践中,根据生物力学原理和结构分析的方法选择适宜的颈椎植入物.
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先天性马蹄内翻足的肌腱移植及软组织松解治疗
目的:总结和分析先天性马蹄内翻足的诊治现状及研究进展.方法:应用计算机检索Medline1949-01/2005-10有关先天性马蹄内翻足治疗方面的文献,检索词"congenital clubfoot,tendon transfer",限定文献语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库1949-01/2005-12有关先天性马蹄内翻足治疗方面的文献,检索词为"先天性马蹄内翻足,肌腱转移术",并限定语言种类为中文.对资料进行初审,查找全文,排除重复文章.共纳入30篇符合标准的文献.结果:先天性马蹄内翻足治疗包括保守及手术治疗,对于中重度者宜早期治疗行肌腱移植及软组织松解,建立早期动态肌力平衡.随着时代的发展,微创技术的应用,外固定架将起重要作用.结论:早期行肌腱移植及软组织松解建立动态肌力平衡,结合外固定架的应用是一项新的突破,使中重度先天性马蹄内翻足治疗进入一个新的时代.
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人体器官移植的伦理困境及其对策
目的:从伦理学角度探讨器官移植面临的困境,探索相应对策.方法:为实现研究目标,首先进行了文献检索,全面系统地回顾、分析、总结上世纪80年代以来国内外有关器官移植的相关技术、政策资料、法律法规及其效果评价等方面的研究成果.登陆国际互联网站和专业期刊网站全文数据库,搜索国家媒体的有关报道及社会学、卫生法学、医学、医学伦理学等领域的相关研究成果.与从事多年器官移植技术工作的专家以及从事多年卫生法学、医学伦理学教学工作的教授进行深入交流和探讨,结合国内器官移植技术的实际情况进行分析.结果:器官移植技术的开展与人们的传统观念、道德、伦理发生冲突,使得该技术的广泛应用陷入诸多困境.活体供者、尸体供者、胎儿供体、死刑犯供体、受体的伦理困境、异种器官移植的伦理困境以及卫生资源分配的困境制约着器官移植医学的发展.结论:应尽快建立器官捐献的激励机制;坚持器官分配的效用和公正原则;确定符合国情的器官移植发展速度和适宜的规模;建立长效的宣传教育机制;建立全国性的或者区域性的器官移植调配中心或网络;建立健全的法律保障机制.
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封堵器置入位置与封堵器介入治疗心室间隔肌部大缺损术后心电图演变的关系:1例报告
目的 观察经国产肌部封堵器介入封堵治疗室间隔肌部大缺损患者术后的心电图演变,并探讨演变与置入封阻器的关系.方法 患者男,20岁,体质量50 kg,心脏超声心动图示左心室增大,室间隔肌部缺损,缺损口直径8 mm,术前心电图示左前分支阻滞.选择φ12 mm长7 mm国产(先健科技)肌部封堵器,经操纵杆在X线透视下推送至左心室.术后行心电监护7 d,并每天记录心电图;青霉素360万U/d,共3 d;地塞米松10 mg/d,共5 d;口服阿斯匹林100 mg/d,维持6个月;术后1个月复查超声心动图及动态心电图.结果 术后1周内心电图出现了一系列动态演变,包括结性心动过速,左束支传导阻滞,右束支传导阻滞,室性心动过速等,经密切观察和地塞米松治疗恢复正常.术后1个月彩色多普勒超声心动图提示:心脏各腔室大小正常,封堵器位置固定良好无移位,无残余分流,主动脉瓣、三尖瓣无返流.结论 国产肌部封堵器介入治疗室间隔肌部大缺损术后1周内心电图出现了一系列动态演变,其中选择封堵器大小为关键.
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广西百色地区壮、汉两民族冠状动脉粥样硬化性心脏病患者载脂蛋白E的基因多态性
目的:分析广西百色地区壮、汉两民族冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者载脂蛋白E基因多态性与冠心病的关系.方法:①分组:冠心病组94例,其中壮族42例,汉族52例,均为右江民族医学院附属医院心内科2005-08/2006-08的住院冠心病患者.全部符合1979年世界卫生组织修订的冠心病诊断标准.对照组100例中壮族50例,汉族50例,均为同期住院的非冠心病患者,并排除心脑血管疾病及肝、肾、内分泌等影响脂质代谢的疾病.②方法:用酚氯仿抽提核酸法从凝血块中分离,用多聚酶链式反应,Hhal内切酶消化法进行载脂蛋白E基因多态性检测.结果:所有受试者完成测试并进入结果分析,无脱落者,DNA抽提均成功.①载脂蛋白E的基因型频率:对照组中壮族人群的E2/2和E2/3基因型频率明显高于汉族人群(P＜0.05),而E3/4基因型频率却明显低于汉族人群(P＜0.05);壮族对照组E2/2和E2/3基因型频率明显高于壮族冠心病组(P＜0.05);而E3/4基因型频率明显低于壮族冠心病组(P＜0.05);汉族对照组E2/3基因型频率明显高于汉族冠心病组(P＜0.05);壮族冠心病组的E2/2基因型频率明显高于汉族冠心病组.②载脂蛋白E等位基因频率:壮族对照组载脂蛋白Eε2等位基因频率明显高于汉族对照组(0.239±0.216,0.101±0.169,P＜0.05),ε3和ε4等位基因频率与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).壮族和汉族冠心病组ε2等位基因频率明显低于相应对照组(P＜0.05),ε4等位基因频率明显高于相应对照组(P＜0.05).冠心病组中壮、汉两个民族载脂蛋白E之ε2,ε3和ε4等位基因频率差异无显著性(P＞0.05).结论:广西壮族自治区百色地区壮、汉两民族冠心病人群中载脂蛋白E基因多态性(ε2等位基因缺失)为冠心病的危险因子之一.
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中国回族首次检出苯丙酮尿症R176X突变型纯合子:1例报告
背景:苯丙酮尿症是由于苯丙氨酸羟化酶基因突变引起,苯丙氨酸羟化酶基因突变主要是因为碱基的置换,短片段、插入等.目的:鉴定回族苯丙酮尿症家系中苯丙氨酸羟化酶基因突变.设计:开放性实验.单位:解放军兰州军区乌鲁木齐总医院和北京首都儿科研究所.对象:患儿,男,回族,就诊时3岁1个月.1岁左右时发现智力滞后,近3岁时到医院就医,诊断为脑性瘫痪,反复治疗无效后于2004-12-13转入解放军兰州军区乌鲁木齐总医院就诊.尿液三氯化铁试验呈强阳性,血苯丙氨酸浓度测定1 680 μmol/L,遂确诊患儿为经典型苯丙酮尿症.方法:抽取患儿及父母静脉血各5 mL,EDTA-Na2抗凝.基因组DNA提取采用经典的酚/氯仿法进行.PAH基因外显子7,6,11,3,12,5的PCR引物序列参照文献设计.PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测.取5μL PCR产物与等体积的变性缓冲液混匀,97℃变性5 min,冰浴并迅速上样于80 g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳.电泳结束后常规方法银染,分析并记录单链DNA带型.采用PCR产物直接测序的方法,由上海博亚生物技术公司应用ABI377全自动序列分析仪(PE公司)完成样品纯化及序列分析.主要观察指标:尿液三氯化铁试验,血液血苯丙氨酸浓度和苯丙氨酸羟化酶突变基因类型.结果:分析患者及其父母PAH第7,6,11,3,12,5外显子基因,发现在外显子6中患者及父母的SSCP电泳行为与正常对照均不相同,其中父亲和母亲的电泳条带位置一致,而患儿的电泳条带位置相异.测序结果显示,父亲和母亲的苯丙氨酸羟化酶基因cDNA第526位发生了胞嘧啶被胸腺嘧啶替代的点突变,是R176X突变型杂合子,而患儿的两条染色体都在同一位点发生了突变,为R176X突变型纯合子.结论:在中国回族首次检出苯丙酮尿症R176X突变型纯合子.
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延边地区汉族和朝鲜族居民脂肪分布与代谢异常的关系
目的:了解延边地区朝鲜族和汉族居民的脂肪分布特征及其与血压、血脂及血糖的关系.方法:于2006-08-8/17在延边地区九龙和翁声社区随机选择40～60岁朝鲜族和汉族常住居民2 378名进行内脏脂肪率和体脂肪率以及血压、血脂、血糖等生化指标的检测.调查以健康体检形式进行,①内脏脂肪和体脂肪率测定采用日本TANITA株式会社生产的BC-600型体成分计测定,并且按其判定标准确定超过标准者[内脏脂肪率≥15%(男)、≥10%(女),体脂肪率(40～59岁)≥23%(男)、≥36%(女),体脂肪率(≥60岁)≥25%(男)、≥37%(女)].②取清晨空腹(禁食12 h)静脉血,采用日立-7600-010全自动生化分析仪测量血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖等指标.③高血压的诊断标准:收缩压≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)及或舒张压≥90 mm Hg.④血脂异常的诊断标准:总胆固醇≥5.72 mmol/L,三酰甘油≥1.7mmol/L,高密度脂蛋白胆固醇＜0.90mmol/L(男)、＜1.0mmol/L(女).⑤高血糖的诊断标准:空腹血糖≥6.1 mmol/L.结果:①汉族男性的内脏脂肪率和体脂肪率均值分别为(10.51±3.66)%和(22.70±4.85)%,朝鲜族男性分别为(9.16±3.81)%和(20.28±5.02)%,汉族均高于朝鲜族(P＜0.01);汉族女性的内脏脂肪率和体脂肪率分别为(6.22±2.27)%和(35.31±5.65)%,朝鲜族女性分别为(5.88±2.19)%和(34.00±5.72)%,汉族均高于朝鲜族(P＜0.01).②汉族男性的内脏脂肪率和体脂肪率超标率分别为12.1%和45.8%,朝鲜族男性分别为7.8%和28.6%,汉族均高于朝鲜族(P＜0.05);汉族女性的内脏脂肪率和体脂肪率超标率分别为6.7%和47.9%,朝鲜族女性分别为3.8%和37.3%,汉族均高于朝鲜族(P＜0.05).③Logistic逐步回归分析结果表明,内脏脂肪率与民族、性别、年龄、高血压、高三酰甘油血症和高血糖有密切关系;体脂肪率与民族、性别、高血压、高三酰甘油血症、低高密度脂蛋白血症和高血糖有密切的关系.结论:①延边地区汉族居民内脏脂肪率和体脂肪率平均水平及其超标率明显高于朝鲜族.②内脏脂肪率和体脂肪率均与民族、性别、年龄(体脂肪率除外)、高血压、高三酰甘油血症和高血糖相关.
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中国Crohn病患者85例与美国Crohn病患者68例临床特征及治疗手段:1985～2004年回顾性分析
背景:Crohn病症状复杂多变,缺乏特异性,与肠内病变的部位,范围,严重程度,有无并发症等有关,诊断多困难.因该病病因不甚清楚,尚缺乏根治性治疗.国内外报道Crohn病患者在临床表现和治疗措施方面亦有所不同.目的:探讨中国与美国Crohn病患者的临床特征及治疗的不同.设计:回顾性病例分析.单位:解放军总医院消化内科.对象:收集解放军总医院1985/2004期间住院的Crohn病患者85例和美国佛罗里达克利夫兰医院(Cleveland Clinic Florida,CCF)1985/2004Crohn病患者68例的病例资料.Crohn病的诊断依据WHO标准,根据患者内镜或X射线平片表现及病理特征做出诊断.方法:比较两医院患者的临床资料包括:年龄,性别,家族史,肠外表现,病变部位,病变特征,药物治疗及手术治疗.组间计数资料差异比较采用χ2检验.主要观察指标:Crohn病发病年龄、家族史、肠外表现、病变部位、病变特征、药物治疗及手术治疗.结果:①一般情况及肠外表现:解放军总医院男性患者与女性患者比例1.74:1,CCF为男:女=1:1.43.CCF患者家族史阳性率和肠外表现发生率分别为7%,34%,均高于解放军总医院(1%,14%,χ2=4.631 2,8.315 0,P＜0.05).②病变部位与病理特征:解放军总陕院患者病变部位累及回肠末端(69%)较多,无一例累及肛周,病变以溃疡(66%)多见,溃疡、肠腔梗阻发生率分别为66%和14%,高于CCF患者(25%和4%,χ2=25.309 2,4.024 6,P＜0.05).CCF患者累及结肠及直肠较多,肛周瘘管或直肠阴道瘘(51%)较多,肛周病变、腹腔内瘘发生率分别为51%和9%,显著高于解放军总医院(0和6%,χ2=38.429 0,0.148 2,P＜0.05).③治疗:解放军总医院治疗药物以SASP(54%),5-ASA(19%)及甲硝唑(21%)为主,CCF患者以激素(60%),硫唑嘌呤(34%),infliximab(46%)为主.CCF患者接受手术治疗率明显高于301医院(96%,49%,χ2=36,1459,P＜0.01).结论:301医院与CCF的Crohn病患者临床特征和治疗手段有明显差异,临床特征的不同是两者在治疗方法上采取不同措施的原因之一.
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亲属活体肾移植18例报告
目的:总结亲属活体肾移植的临床经验,以期提高该技术的安全性及疗效.方法:选择2005-11/2006-12解放军第一七五医院收治的亲属活体肾移植患者18例,均知情同意.受体均为慢性肾小球肾炎;供体年龄24～74岁,17例有血缘关系,另一例为妻子供肾.均行经腰开放手术取肾,左侧供肾15例,右侧供肾3例.术后受体采用环孢素A+霉酚酸酯+激素三联低剂量免疫抑制剂方案.结果:①所有供体在术后10 d左右出院,均无严重并发症且肾功能正常.②16例受体均在术后1～3 d内移植肾功能恢复正常,另2例因供肾迷走血管损伤在术后5 d左右血肌酐下降到200μmol/L,1个月左右稳定在160μmol/L.1例他克莫司仅服0.5～0.75 mg/d,于术后5个月出现急性排斥反应.1例术后2个月出现环孢素A急性肾毒性(血药浓度谷值为343μg/L).2例出现药物性肝炎.结论:亲属活体肾移植术较为安全,排斥反应少,结果满意.免疫抑制剂宜采用低剂量方案.
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中国人胚胎肝组织来源纤溶酶原kringle5基因的克隆与序列分析
目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础.方法:实验于2002-06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成.①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准).pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存.引物均由上海生工合成.②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序.③实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定.结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A280nm＞1.8,A260nm/A270nm＞1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28 S、18 S两条带,说明RNA基本完整.②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5 cDNA片段长为240 bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258 bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果.③pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamH I、Nde I双酶切,结果有250 bp左右条带出现.④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变.结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象.
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股方肌肌骨瓣植入治疗成人股骨头缺血性坏死
目的:目前成人股骨头缺血性坏死的手术方法较多,但远期疗效大多不肯定.股方肌肌骨瓣植入术可以治疗成人股骨头缺血性坏死,但需验证其近远期疗效.方法:选择2001-01/2007-01铜川市矿务局中心医院骨科收治的股方肌肌骨瓣植入治疗股骨头坏死患者15例(18髋),均知情同意.术中暴露股方肌及其在股骨近端的附着点,于附着点处凿取骨瓣,骨瓣为4 cm×1.5 cm×1.0 cm的长方形,将骨瓣插入股骨头内,远端用可吸收骨钉固定.术后3,6,12,24个月门诊复查拍患髋正位和蛙式位X射线片,根据临床查体和X射线片表现将手术效果分为优、良、差3级.结果:全部患者均获随访,随访时间4～36个月.近期疗效满意,出院时疼痛症状均缓解,未见手术相关并发症.中远期随访结果优10髋,良6髋,差2髋,优良率88.9%.结论:股方肌肌骨瓣植入术治疗成人股骨头缺血性坏死近远期疗效确切,手术操作相对简单.
