起搏通道HCN2基因和增强型绿色荧光蛋白双基因载体在人胚胎肾细胞的共转染表达

背景:获得高效、安全的基因转移载体是目前研究的目标.目的:构建携带起搏通道(HCN2)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)表达情况.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2006-0712007-08在全军重点实验室解放军总医院老年心血管病研究所完成.材料:质粒pIRES-EGFP为Clontech公司产品,PCI-HCN2质粒,含有人全长HCN2基因为解放军总医院老年心血管病研究所惠赠.方法:利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(IRES),构建HCN2与增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pIRES-EGFP-HCN2.将脂质体和plRES-EGFP-HCN2基因混合后转染人胚胎肾细胞,用反转录-聚合酶链反应检测HCN2 mRNA表达.主要观察指标:①重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2的构建.②起捧通道基因HCN2cDNA的克隆.③增强型绿色荧光蛋白表达的荧光检测.结果:构建的pIRES-EGFP-HCN2在转染8 h后开始表达,48 h达到高.经酶切鉴定含有增强型绿色荧光蛋白和HCN2基因.结论:实验成功地构建了pIRES-EGFP-HCN2真核共表达载体,具有HCN2、增强型绿色荧光蛋白的双重活性,IRES能够介导外源基因HCN2在人胚胎肾细胞表达.

肩袖损伤模型大鼠肌腱组织中4种生长因子表达及皮质激素和透明质酸的干预

背景:组织工程学在治疗肩袖损伤中扮演了重要的角色,调控生长因子的表达来促进损伤肩袖的愈合及预防粘连是其中的主要部分.目的:比较皮质激素和透明质酸对肩袖损伤模型肌腱组织中表皮生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子13、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/09在上海交通大学医学院动物实验中心完成.材料:36只SD大鼠随机分成4组:正常组6只,肩袖损伤组6只.透明质酸治疗组12只,皮质激素治疗组12只.方法:切除大鼠双侧岗下肌腱全厚层50%,宽约5 mm,于滑膜面建肩袖损伤模型.透明质酸治疗组肩峰下滑囊注射0.05 mL透明质酸钠;皮质激素治疗组肩峰下滑囊注射倍他米松0.05 mL.主要观察指标:术后3周,6周取岗下肌腱标本RT-PCR检测表皮生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子B、碱性成纤维细胞生长因子表达水平.结果:①皮质激素治疗肩袖损伤后6周表皮生长因子表达强度是3周时的近2倍,透明质酸治疗6周表皮生长因子表达明显减弱(P<0.01).②血小板源性生长因子在两种药物治疗3周后表达均增强,其中皮质激素治疗肩袖损伤3周后表达强(P<0.01),但6周后回复至正常水平,而透明质酸治疗6周后表达仍高(P<0.05).③转化生长因子B在两种药物治疗后3周表达均增强(P<0.05),6周后回复至正常水平.④碱性成纤维细胞生长因子在皮质激素治疗后3周表达减弱(P<0.05),6周后回复至正常水平;透明质酸治疗后3周,6周的表达均维持较高水平(P<0.05).结论:皮质激素在肩袖损伤修复过程中对4种因子的调控主要在早期:透明质酸在修复早期、后期均有不同程度的作用:皮质激素的调控作用主要是促进生长因子的表达,而透明质酸存在双向调控作用.

BIODEX-Ⅱ型等速测力仪检测男性短跑运动员各关节肌力的灰色关联分析

背景:短跑运动中重视上肢及肩带肌群及下肢屈伸肌群力量的平衡,对提高短跑速度起到一定作用.目的:检测男子短跑运动员肩、膝、髋和踝关节肌力,分析其与短跑速度的关联度.设计、时间及地点:于2007-06/07选择业余体校和专业队二级以上男子短跑运动员15名.对象:测试时15名运动员各关节均无任何伤病情况.方法:通过BIODEX-Ⅱ型等速测力及康复系统对专业短跑运动员和业余体校短跑运动员肩、髋、膝、踝关节肌肉力量进行测、试,其中肩关节、膝关节、髋关节和踝关节力矩分别选用360,120,120,120(°)/s,在快速运动状态下测定屈伸时相对峰力矩.主要观察指标:上、下肢关节的峰力矩与短跑速度的灰色关联分析.结果:灰色关联分析表明,专业队和业余体校短跑运动员肩关节的屈伸肌群力矩的关联度都在0.921以上,是影响短跑速度的首要因素;膝关节屈伸肌群和髋关节屈肌群的关联度也都在0.793之上,对短跑速度也起很重要的作用;踝关节背屈肌群力量的关联度也较大,对短跑速度也起一定的作用.结论:肩关节屈伸肌群力量、膝关节屈肌群力量、髋关节屈肌群力量是影响短跑速度的主要力量因素.

人KiSS-1基因克隆及其慢病毒载体的构建

背景:慢性病毒载体技术是目前转基因中有效和成功的方法,技术操作简便.目的:克隆转移抑制基因KiSS-1基因不含信号肽的表达序列,构建人KiSS-1基因的慢病毒表达载体.设计、时间及地点:开放性实验于2006-09/2007-12在福建师范大学发育学院实验室完成.材料:载体pNL-IRES2-EGFP由福建师范大学发育学院实验室保存.方法:从人正常胎盘组织中提取总RNA,经反转录一聚合酶链反应得到KiSS-1基因开放阅读框cDNA序列,并将其克隆到慢病毒载体pNL-IRES2-EGFP中,构建其表达质粒pNL-IRES2-EGFP-KiSS-1.主要观察指标:KISS-1目的基因片段的克隆,重组表达质粒pNL-IRES2-EGFP-KiSS-1的酶切鉴定及测序.结果:经酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入载体pNL-IRES2-EGFP的片段为目的基因开放阅读框的核苷酸序列.结论:成功构建了重组质粒pNL-IRES2-EGFP-KiSS-1.

益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

背景:益气解毒中药复方在体外能通过下调端粒酶的活性抑制细胞生长和诱导细胞凋亡,还可能通过抑制细胞内重要的核转录因子、细胞分裂增殖、细胞周期、DNA修复和诱导细胞凋亡、促进坏死等信号通路,从而抑制细胞增殖和诱导细胞死亡.目的:实验拟观察益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-01/2007-12在湖南中医药大学中西医结合学院基础研究室和中医五官重点学科实验室完成.材料:G4代8月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,体质量(25.44±2.3)kg,用于制备鼻咽和鼻腔癌前病变模型;益气解毒颗粒方药液为自制.方法:48只小鼠随机分为4组,转基因阳性中药组和转摹因阴性中药组小鼠灌胃益气解毒颗粒方药液,给药剂量为12.91 g/kd·d);转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组小鼠灌等体积生理盐水.主要观察指标:苏木精-伊红染色观察鼻腔和鼻咽黏膜病理组织学变化,免疫组织化学染色法检测其bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt摹因表达水平.结果:纳入转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组于实验结束前各死亡1只,转基因阴性中药组死亡1只，转基因阳性中药组死亡2只小鼠，共43只小鼠进入绳索果分析.①转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组小鼠的鼻腔/鼻咽黏膜组织均无明显病变；转基因阳性中药组有1只小鼠表现中度非典型性增生，转基因阳性生理盐水组有10只小鼠鼻腔和，或鼻咽黏膜上皮细胞呈现中度或中度以上非典型增生或灶性鳞状化生.转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组、转基因阳性中药组和转基因阳性生理盐水组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为0、0、10％和90.9％，差异具有显著性意义(P<0.01).②与转基因阳性生理盐水组相比.其他各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞中p53mt、bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平均下降(P<0.01)，bax表达水平显著增高，bcl-21bax比值降低(P<0.01).结论：益气解毒方中药可有效抑制或逆转TgN(p53mt-LMP1)HT阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮的癌前病变表型，其作用机制之一可能通过下调p53mt摹因和增殖细胞核抗原的表达，降低bcl-2／bax比值，使细胞增殖和凋亡速度达到平衡，进而促使鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞正常增长.

转化生长因子β 1基因克隆及重组真核表达质粒的构建

背景:通过基因转移方法研究某一外源性基因存细胞中的作用是目前分子生物学常用的技术手段,与病毒载体相比,应用pcDNA4.0-TGF.B 1真核表达质粒的转染方法无遗传毒性和细胞毒性,有更高的安全性.目的:通过克隆转化生长因子γβ1基因,观察构建重组转化生长因子β1l基因真核表达质粒的可行性.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的体外实验,于2007-03/2008-02在河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室完成.材料:2月龄清洁级健康SD大鼠,雌雄不拘,用于分离细胞中RNA.方法:从大鼠骨髓细胞中分离提取转化生长因子β 1的mRNA,反转录-聚合酶链反应扩增后,克隆入pGEM-T载体,PCR鉴定重组子;酶切下目的基因转化生长因子β1,再亚克隆入载体pcDNA4.0质粒,酶切鉴定亚克隆重组子并进行DNA序列分析.主要观察指标:TGF-β1cDNA、pGEM-T-TGF-β1和重组子pcDNA4.0-TGF-β1的表达.结果:经过反转录-聚合酶链反应扩增得到TGF-β1 cDNA条带;PCR扩增鉴定得到pGEM-T-TGF-β1.酶切鉴定得到亚克隆重组子pcDNA4.0-TGF-β1,经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致.结论:成功克隆大鼠转化生长因子β1基因,并构建出重组转化生长因子β1真核表达载体.

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备

背景:合并肝硬化肝病变患者接受大体积肝脏切除或其后进行肝移植手术可能造成较高的并发症发生率和死亡率.目前公认的肝功能评估方法是Child分级方法,包括了3个临床指标和2个生化指标,但它不能直接评估肝细胞的功能状态.目的:应用生物荧光法定量分析三磷酸腺苷作为肝功能监测手段的可行性.设计、时间及地点:病例对比观察,于2005-10/2006-03在中山大学附属第二医院完成.对象:选择肝部分切除患者32例,术中根据肝脏形态学改变分为3组:正常组7例,组织病理学没有明显硬化发现:大结节肝硬化组9例:微小结节型肝硬化组16例.方法:所有患者均于术前进行常规及肝生化检查,包括谷草转氨酶、总胆红素等.无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数,提取三磷酸腺苷并检测其含量.主要观察指标:换算出每个肝细胞的三磷酸腺苷含量,进一步将三磷酸腺苷含量与术前肝功能指标进行相关性分析.结果:①大结节肝硬化组单位肝细胞三磷酸腺苷含量明显高于正常组及小结节肝硬化组(P=0.000 1,0.004).小结节肝硬化组三磷酸腺苷含量也明显高于正常组(P=0.04).②单位肝细胞三磷酸腺苷含量与术前血浆谷草转氨酶活性、总胆红素含量呈显著正相关(r=0.609 3,P=0.000 2;r=0.614 5,P=0.0002).结论;肝细胞三磷酸腺苷水平检测可以评估肝实质储备功能,也可用于预测肝切除手术风险及选择肝移植手术时机.

人血管生成素1真核表达载体的构建及测序

背景:血管生成素1 具有抑制内皮细胞凋亡,促进血管出芽、迁徙、趋化,维持血管稳定,防止液体渗漏和减轻局部炎症等作用.应用载体携带血管生成素1基因表达血管生成素1治疗各种损伤正被广泛研究.目的:构建人血管生成素(human angiopoietin 1,hAng-1)真核表达载体pcDNA3.1+-hAngl.设计、时间及地点:单一样本观察.实验于2007-10/2008-03在唐都医院中心实验室完成.材料:人血管生成素1基因为中国医科大学马腾博士赠送;pcDNA3.1+为Invitrogen公司产品:JM109感受态细胞为TAKARA公司产品.方法:血管生成素1基因片段经巢式聚合酶链反应方法扩增,血管生成素1基因片段及载体pcDNA3.1+分别经HindⅢ和Xho Ⅰ双酶切,之后经T4连接酶连接,构成pcDNA3.1+_hAngl.主要观察指标:①酶切鉴定.②合成载体测序鉴定.结果:所构建的pcDNA3.1+.hAng1载体经HindⅢ和Xho Ⅰ酶切,TBE胶电泳可得1.5 kb的hAng1片段及5.4 kb的pcDNA3.1+片段.合成载体送北京奥科测序,结果正确,与GenBank中AY121504一致.结论:利用基因重组和双酶切构建出了pcDNA3.1+-hAng1,为进一步研究其功能和活性奠定了基础.

兔耳瘢痕成熟过程中组织内氧分压的变化

制作兔耳瘢痕从形成到萎缩成熟的动物模型,采用经皮氧监测仪测定术后14,30,60,90 d瘢痕和正常皮肤组织内氧分压,并作病理学检奁.术后14 d创面有肉芽生长,部分上皮化,鲜红色,组织内有大量的炎性细胞及新生血管,氧分压为(0.81±0.25)kPa:术后30 d为明显高出皮面的瘢痕,鲜红色,组织内有人量的成纤维细胞及微血管,氧分压为(1.98±0.26)kPa;术后60 d,瘢痕萎缩,颜色变淡,组织内成纤维细胞及微血管数日减少,氧分压为(7.86±0.60)kPa:术后90 d,瘢痕变平,颜色变白,组织结构接近正常皮肤,氧分压为(13.70±1.16)kPa,术后不同时间点氧分压比较差异有显著性意义(P<0.01).结果显示随着瘢痕的萎缩成熟,瘢痕组织内氧分压逐渐增加.提示组织内氧分压的提高可能有助于瘢痕萎缩成熟.

不同体育专项大学生的无氧工作能力

背景:无氧工作能力是影响许多运动项目成绩发挥的重要因素,测量和评价人体无氧工作能力对于客观地分析与评价人体运动能力、检测训练效果等具有重要意义. 目的:了解体育教育专业不同专项的大学生无氧能力特征.设计、时间及地点:试验于2006-12在山东理工大学体育学院运动人体科学实验审进行.参试者:选择山东理工大学体育学院体育教育系2002级学生48名,受试时身体状态良好,均无专业训练经历.方法:48名学生按其专项运动分为长跑组、体操组、投掷组、短跑跳跃组,每组12名.采用Wingate无氧功率试验法,利用瑞典产的Monark894E无氧功率自行车,在一定的负荷下以大负荷完成30 s的快速蹬车,所获测试数据运用SPSS 10.0软件进行统计分析.主要观察指标:峰值功率、平均无氧功率、无氧功率递减率、小无氧功率.结果:①与短跑跳跃组相比,投掷组和长跑组的无氧峰值功率降低(P=0.008,P=0.005):与体操组相比,投掷组和长跑组的无氧峰值功率亦降低(P=0.007,P=0.004).②投掷组平均无氧功率低于短跑跳跃组(P=0.024).⑨投掷组的无氧功率递减率均高于其他3组(P=0.046);但其他3组间相比,差异无显著性意义(P>0.05).④各组问小无氧功率差异无显著性意义(P>0.05).结论:体育专业不同专项大学生在无氧工作能力方面存在一定差异,短跑跳跃组的无氧工作能力较强,疲劳指数较低,而投掷组的无氧工作能力较差,疲劳指数较高.

针刺髓核构建退行性变椎间盘模型

背景:目前对椎间盘退行性变尚无有效治疗方法,实验性椎间盘退行性变模型的建立,是研究椎间盘退行性变病理过程和尝试基因治疗等的基础,建立的动物模型要求与人类的椎间盘退行性变具有相似性和可比拟性.目的:拟建立一种稳定、重复性强的椎间盘退行性变动物模型.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-1012006-03在哈尔滨医科大学附属第一临床医院中心实验室完成.材料:选用健康成年新两兰大白兔30只,按随机数字表法分为2组,手术组15只,对照组15只.方法:手术组以18#腰穿针针刺L1-5节段椎间盘,至少穿刺5次,直至胶冻样髓核组织出现为止;对照组做同样皮肤切口,拨开肌肉,暴露椎间盘后即缝合.主要观察指标:手术8周以后通过MRI 和组织病理学检查观察腰椎间盘退行性变情况.结果:①对照组腰椎MRI检查未见异常:手术组L1-2腰椎间盘则相继出现T2加权像低信号、T1加权像信号无明显改变等变化.②组织学切片显示,手术组椎间盘髓核纤维软骨样变性. 结论:针刺髓核的方法可以成功构建椎间盘退行性交新西兰大白兔模型.

以拉力参数构建兔腰骶神经牵拉损伤模型

背景:神经根牵拉损伤是腰椎手术失败综合征的近期发病原因之一,但确切的病理机制尚未经证实.目的:建立一种不同程度的腰骶神经根牵拉损伤动物模型,探讨脊髓、神经根牵拉损伤后光镜和电镜改变.设计、时间及地点:随机对照,形态学动物实验,于2004-04/2006-10在南通大学第二附属医院中心实验室和南通大学江苏省神经再生重点实验室完成.材料:清洁级健康12周龄雄性大白兔40只,随机分为对照组、轻度牵拉组、中度牵拉组、重度牵拉组4组,每组10只.方法:轻、中、重度牵拉组动物全椎板切除显露双侧S1神经根,用测力神经根拉钩分别以0.4,1和1.8 N的拉力水平牵拉左侧S1神经根造成神经根和脊髓的牵拉性损伤,分别定义为轻、中和重度牵拉,时间持续10min.对照组不牵拉.主要观察指标:术后2 周对受牵拉节段脊髓,两侧S1 神经根行光镜和透射电镜检测神经元和髓鞘.结果:轻度牵拉组牵拉侧前角个别神经元稍肿胀,神经元及神绛纤维形态基本上正常,个别白质小片状脱髓鞘样改变,神经根髓鞘和轴索轻度水肿,脱髓鞘不明显;中度牵拉组白质有脱髓鞘改变,神经纤维排列紊乱,轴索崩解、断裂:灰质神经元水肿明显加重,前角运动神经原细胞尼氏体消失,核崮缩、深染,神经根髓鞘和轴索水肿,局部轻度脱髓鞘改变;重度幸拉组牵拉侧白质为不规则的大片脱髓鞘区,前角运动神经元胞体固缩、变形、核深染,神经根有髓神经纤维萎缩、数目减少,重度脱髓鞘改变.结论:以拉力为参数可以稳定地建立不同程度的腰骶神经根牵拉性损伤动物模型,术后神经根和脊髓的病理分级改变与牵拉损伤程度一致.

大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α的变化

背景:研究发现,低氧诱导因子1α不仅与缺氧的生理反应有关,而且还参与了正常的胚胎发育过程.目的:观察大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α的变化.设计、时间及地点;随机对照动物实验,于2007-01/09在青岛大学医学院山东省分子病毒重点实验室完成.材料:成年未经产清洁型Wistar大鼠,体质量200-250g.方法;雌鼠和雄鼠1:1合笼,制成孕鼠.分别于孕12,16,20d时剖腹取胎,获得各阶段的鼠胚.出生后大鼠按日龄分别于1,5,10d和12个月龄麻醉处死后摘除眼球,分离视网膜及制作石蜡切片.主要观察指标:免疫组织化学方法、半定量反转录-聚合酶链反应检测大鼠视网膜在胚胎发育过程中各时间段低氧诱导因子1α蛋白及低氧诱导因子1α mRNA的表达.结果:胚胎期视网膜神经上皮层及色素上皮层均有低氧诱导因子1 α阳性表达,生后发育早期视网膜神经上皮层及色素上皮层也可见低氧诱导因子1 α阳性表达,以神经节细胞、内网层更明显,随着发育进展.其阳性表达主要位于视网膜节细胞层.大鼠视网膜低氧诱导因子1 α蛋白及mRNA的表达为胚胎期高、生后发育期逐渐下降、成年期低,3期之间相比,差异有显著性意义(P<0.01).结论:大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1 α随着发育的进展逐渐降低,并逐渐集中表达于视网膜节细胞层.

急性视网膜坏死动物模型的制备

背景:急性视网膜坏死综合征是一种严重的致盲性眼病,目前认为单纯疱疹病毒或水痘一带状疱疹病毒是其主要致病原.建立一个有效的、合理的急性视网膜坏死综合征模型是急件视网膜坏死综合征相关研究中小可缺少的步骤之一.目的:拟证实视网膜下注射单纯疱疹病毒1建立兔实验性急性视网膜坏死综合征模型的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-02/10在吉林大学第--医院中心研究室及吉林大学第二医院动物实验室、吉林大学基础医学院所完成.材料:健康成年灰兔40只,雌雄不限,体质量(2.5±0.5)kg;HSV-1 SM44毒株购自中国药品生物制品检定所疫苗三室;绿猴肾传代细胞(Vero)由长春生物制品研究所惠赠.方法:培养1型单纯疱疹病毒.将灰兔随机分为2组,每组20只.实验组,右眼视网膜下注射无菌的HSV-1 SM44病毒液(PFU值约10 000)10 μ L;对照组,右眼视网膜下注射同剂量无菌的Vero细胞上清液.主要观察指标:术后第2,4,7,10,12,14,21,28天及第6周观察实验动物眼底后,分批处死动物取出双眼眼球标本,分别行组织学观察及透射电镜观察.结果:'实验过程中,除实验组死亡3只外,其余兔均进入结果分析.实验组出现不同程度的炎症反应,玻璃混浊、视网膜坏死、脱离,主要发生在术后7-21d,第6周时玻璃体炎症减轻,视网膜炎稳定,未见活动性病灶;组织学检查视网膜及玻璃体发现人量的炎细胞及病毒包涵体;透射电镜下可见1型单纯疱疹病毒颗粒.对照组未发现1型单纯疱疹病毒所导致的玻璃体炎症及视网膜病变;组织学检查未发现玻璃体与视网膜内有病毒包涵体及炎性细胞浸润;透射电镜下未发现病毒颗粒.结论:通过在兔眼视网膜下注射1型单纯疱疹病毒的方法可以成功建立急性视网膜坏死综合征模型,方法简便、实用、有效.

磁力牵拉对骨增长影响的动物实验模型设计

背景:自由状态下实现运动性牵拉对骨骼变化趋势的影响研究较为少见,归纳其原因是求证方法困难.进行其相关研究重要的是设计实现自然状态下动态牵拉动物实验模型系统.目的:建立一种新型的、自然状态下的、动态磁力牵拉动物实验模型系统,分析自然运动牵拉力下骨骼应力性变化趋势.设计、时间及地点:分组对照观察,于2002-06/2003-06在河北科技师范学院动物科学系动物实验室完成.材料:7周龄近交系日本大耳白兔24只,体质量(2.5±0.3)kg,雌雄不限.永磁片16枚由沈阳钕铁硼永磁材料有限公司提供.方法:利用实验动物、磁体、粘扣和铁质垫板等器材建立了"磁力牵拉对骨增长影响的动物实验模型系统".将24只兔分为3组,每组8只.牵拉组采用磁力牵拉系统,放在有铁质挚板的饲养笼内饲养.磁力组仅将磁片固定于兔子右后腿脚底部,将兔放在有铁质垫板的饲养笼内饲养.对照组不附加任何装置放入普通竹条垫板笼饲养.主要观察指标:各组兔经不同处理4个月胫骨和股骨增长变化.结果:各组兔分别处理4个月时,与对照组比较,牵拉组胫骨增长2.61 mm,股骨增长1.56 mm,磁力组胫骨增长0.728 mm,股骨增长0.41 mm,差异均有显著性意义(P<0.01).结论:"模型系统"在可控制实验条件下模拟实现了自然运动状态下骨磁力牵拉全过程,且成本低、操作便捷、重复性强,能够满足运动牵拉对骨骼影响方面研究的实际需要.

长期耐力运动对大鼠腓肠肌的损伤及一氧化氮的调节作用

背景:长期耐力运动常引起肌肉损伤,但其机制尚不清楚.目的:观察长期游泳运动对骨骼肌的损伤作用以及内源性一氧化氮的调节作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-12/2007-04在江苏大学基础医学与医学技术学院营养科学研究室完成.材料:健康雌性sD大鼠60只,体质量190～250g,用于制备大鼠游泳模型;L-NG一硝基精氨酸甲酯(L-NAME)用于抑制大鼠体内一氧化氮的生成.方法:60只人鼠随机数字表法分为静息组、运动组、静息联合L-NAME组和运动联合L-NAME组,每组15只.在静息联合L-NAME组和运动联合L-NAME组人鼠的饮水中添加一氧化氮合酶拈抗剂L-NAME,1g/L.运动组和运动联合L-NAME组大鼠游泳5d,周,2h/d.主要观察指标:3个月后取各组大鼠腓肠肌测定氮氧化物(NOx)的含量:苏木精-伊红染色观察腓肠肌的形态变化.结果:纳入大鼠60只,其中静息联合L-NAME组死亡5只、运动组死亡2只、运动联合L-NAME组死亡6只,死亡原因包括自然死亡、溺水或药物长期作用,进入结果分析47只.①运动组NOx含量高于静息组(P<0.01).运动联合L-NAME组NOx含量低十运动组(P<0.05),但高于静息联合L-NAME组(P<0.05).②腓肠肌的肌纤维较细,数量较多,染色较浅,肌纤维结构完整;运动组腓肠肌纤维明显粗大,深染,偶见肌纤维有断裂,少量巨噬细胞浸润;静息联合L-NAME组肌纤维有分支,结缔组织增生;运动联合L-NAME组也町见运动组中的变化,且肌纤维断裂和巨噬细胞浸润现象更明显,还表现为肌纤维坏死溶解,肌纤维有分支.结论:长期游泳运动造成了骨骼肌纤维的损伤;运动诱导产生的一氧化氮对运动性损伤可能有保护作用.

人多形上皮黏蛋白与巨噬细胞集落刺激因子基因融合构建双基因多表位抗原的真核共表达质粒

背景:一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体,可提高转染和表达效率.目的:利用多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin,MUC1)多肽骨架中含有许多连续重复系列,构建人MUC1重复序列串联体基因与巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony sfimulating factor,GM-CSF)基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1(+).MUCI-GM-CSF,并观察重组质粒存COS-7细胞中的表达.设计、时间及地点:基因重组体设计实验,于2005-09/2006-12在解放军第四军医大学动物中心实验室完成.材料:真核表达载体pcDNA3.1(+)由英国Taylor-Papadimitriou 教授惠赠.pGEM.3zf(-)-GM-CSF质粒、COS-7细胞、pUC18载体及E.coli DH5 α为自备,雌性BALB/c小鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供.方法:将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片断经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF.以重组质粒转染COS-7细胞.主要观察指标:通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达.结果:酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒免疫小鼠可诱导产牛抗GM-CSF抗体.结论:成功构建了人MUC1基因重复序列串联体与免疫佐剂GM-CSF基因重组成为双基因多表位抗原的真核共表达质粒.

小鼠肝细胞胰岛素与表皮生长因子信号转导磷蛋白质组的对比分析

背景:表皮生长因子和胰岛素都主要通过P13K通路和MAPK通路进行信号转导,但各自的生理功能不同.目的:从细胞整体水平对比分析小鼠肝细胞内胰岛素与表皮生长因子信号转导磷蛋白质组的动力学行为差别,以此找出二者关键性的信号蛋白.设计、时间及地点:随机分组设计的对比观察实验,于2005-07/2006-04在泸州医学院分子生物学实验室完成.材料:实验用肝细胞来源于昆明种封闭群乳小鼠.方法:选取细胞长势相当的肝细胞,采用放射性同位素(32P)对其进行标记,标记后按随机数字表法分为3组,空白对照组、表皮生长因子刺激组(给予10 μg/L表皮生长因子)及胰岛素刺激组(给予100 nmol/L胰岛素).主要观察指标:表皮生长因子、胰岛素分别作用0,5,20,60,120min,采用双向电泳技术分析比较表皮生长因子与胰岛素分别介导的磷酸化蛋白质组的动力学行为,即磷酸化水平.结果:参与两者信号转导的磷蛋白质种类没有多大差异,大多数信号磷蛋白磷酸化水平的动力学行为也表现为一致性,但有4个蛋白点其磷酸化水平随时间变化趋势明显不同.结论:胰岛素与表皮生长因子在同一细胞内参与信号转导的个别信号蛋白其磷酸化水平的动力学行为差别较大,估计这些蛋白就是导致表皮牛长因子与胰岛素终生物学活性的关键蛋白.

克隆高鸟嘌呤与胞嘧啶含量大鼠bcl-2基因的编码序列

背景:卵巢颗粒细胞的过度凋亡是诱发卵巢早衰的根本途径,bcl-2基因具有抗细胞凋亡的特性.但实验表明,大鼠bcl-2基因序列中鸟嘌呤与胞嘧啶含量高达60.6%,应用常规聚合酶链反应方法,无法扩增出此基因.目的:拟克隆大鼠基凶组中高鸟嘌呤与胞嘧啶含量的bcl-2基凶编码序列.设计、时间及地点:开放性实验,于2007-05/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成.材料:Wistar大鼠购自中山大学实验动物中心生产供应部,大肠杆菌DH5 α由中山大学分子医药生物学实验室保种,载体pMD18-T购自TakaRa大连宝生物技术公司.方法:采用改进的反转录一聚合酶链反应方法从大鼠脾脏组织中扩增出鸟嘌呤与胞嘧啶含量为60.6%的bcl/-2 cDNA编码序列,将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,用单菌活聚合酶链反应扩增快速鉴定DNA片段后进行序列分析.主要观察指标:①大鼠bcl-2基因cDNA克隆与纯化.②bcl-2基因cDNA与pMD18-T载体的连接、转化、鉴定阳性克隆及测序结果.结果:在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠bcl-2基因,DNA序列分析结果与Genebank中序列相比,同源性为99%.结论:高鸟嘌呤与胞啼啶含量基因的扩增属于困难聚合酶链反应,实验采用改进技术成功克隆了大鼠bcl-2基因,此技术也适用于其他富含鸟嘌呤与胞嘧啶的基因快速扩增.

强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立

背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨.目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成.材料:强力霉素调控基因表达系统,3T3细胞系.方法:通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基冈阻遏子(mCREG)cDNA序列:将mCREG cDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中,构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体:分别经G418(新霉素)及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆;反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达.主要观察指标:Western blotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达.结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞兜隆:反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及捅入基冈表达均为阳性;Western blotting检测发现随强力霉素诱导荆量的增加(0,0.01,0.1,1 me/L),NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加.结论:成功建立强力霉索调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系.

间歇低氧暴露对运动性贫血大鼠血红蛋白及血清一氧化氮、一氧化氮合酶的影响

背景:低氧刺激既可诱导促红细胞生成素的分泌,又易促使一氧化氮的释放,合理利用低氧刺激干预,可以促进机体造血机能和改善血流调节.目的:观察低氧暴露对运动性贫血机体血红蛋白及血清一氧化氮、一氧化氮合酶的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-07109在广东省高等学校运动生物化学教学重点实验室完成.材料:清洁级6周龄健康雄性SD人鼠60只,体质量(155+10)g,随机分为安静对照组10只,其余50只采用6周递增负荷跑台运动方式建立运动性贫血动物模型,再随机分为运动造模组,常氧恢复组、1 h低氧组、2 h低氧组、间歇低氧组,每组10只.方法:采用6周递增负荷跑台运动建屯运动性贫血模型后,在人工常压低氧环境T(14.5%O2),分别进行1 h,2 h低氧暴露和低氧暴露1 h、间歇3 h、再低氧暴露1 h 3种低氧暴露方式实验.主要观察指标:3周后测试运动性贫血大鼠血红蛋白、血清一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性,并与常氧恢复组比较.结果:①经6周递增负荷跑台运动后,运动造模组人鼠血红蛋白与安静对照组相比显著下降(P<0.01),血清一氧化氮和一氧化氮合酶显著上升(P<0.05).②与常氧恢复组比较,3种低氧暴露方式均能促使运动性贫血大鼠的血红蛋白含量提高(P<0.05或P<0.01),血清一氧化氮含量显著性增加(P<0.05),血清一氧化氮合酶活性显著性升高(P<0.05).3种低氧暴露组间相关指标差异无显著性意义(P>0.05).结论:低氧暴露能加速机体血红蛋白生成,提高血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性,能有效地治疗运动性贫血及改善机体组织的缺血状态.

人类风湿关节炎滑中B7-H1分子的表达及意义

背景:B7同系物l(B7-H1)分子是共刺激分子B7家族的重要成员,在淋巴细胞及大部分外周组织可以广泛诱导性表达.研究表明,B7-H1在自身免疫性疾病中发挥重要作用,其在人类类风湿关节炎中的作用国内外均无报道.目的:观察类风湿关节炎关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达,探讨B7-H1在类风湿关节炎发病中的意义.设计、时间、地点:分组对照观察,于2007-07/12在河南省分子生物学重点实验室完成.对象:收集51例标本系2004-09/2007-07郑州大学第一附属医院微创骨科关节镜术中所取膝关节滑膜组织,其中类风湿关节炎35例,男16例,女19例,年龄11-62岁;骨关节炎10例:男4例,女6例,年龄45-72岁:正常对照组6例:男4例,女2例:年龄14-33岁.方法:关节滑膜标本均在手术中收集,病变滑膜取自镜下典型病变处,并经组织病理学检查证实.主要观察指标:采用免疫组织化学SABC法检测受试者膝关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达.结果:35例类风湿关节炎患者膝关节滑膜中的30例(85.7%)B7-H1蛋白表达阳性,10例骨关节炎患者中3例(30.0%)B7-H1蛋自表达阳性,而6例正常对照组中有1例(16.7%)表达阳性.且B7-H1蛋白在滑膜增生严重的类风湿关节炎患者中表达更高.结论:B7-H1在类风湿关节炎患者的膝关节滑膜组织中高表达,推测其可能直接参与了类风湿关节炎的发病过程.

健康儿童膝关节屈伸工作时的生物力学规律

背景:在等速肌力测试的人群中,关于儿童的等速肌力测试研究报道较少.目的:通过对儿童膝关节屈伸肌力情况的测试,探讨儿童膝关节屈伸工作时的生物力学规律.设计、时间及地点:对比观察,于2006-10-12在河北师范大学体育学院实验室进行测试.对象:志愿受试的健康儿童选自石家庄市部分小学10岁左右的学生66名,男31名,女35名.方法:运用澳大利业Kylingk公司生产的"Kinitech"等速肌力测试系统进行等速肌力测试,采用60,120,240(°)/s 3种速度测试儿童膝关节屈伸肌力.主要观察指标:男女儿童屈伸肌峰力矩值比较和大功率比较.结果:①3种不同测试速度中,男女儿童膝关节屈伸肌峰力矩值呈现随测试速度的增加而下降,大功率随测试速度的增加而增加的趋势.儿童左侧峰力矩值大于右侧.③男女儿童各自屈伸肌峰力矩值均值比值F/E>0.7,并且随测试速度的增加而增大.④在60,120(°)/s的测试中.膝关节屈肌和伸肌峰力矩值性别差异无显著性意义(P>0.05),240(°),s测试中左右侧屈肌峰力矩值性别差异具有显著性意义(P<0.01.P<0.05),男生左侧伸肌峰力矩值大于女生(P<0.05).结论:儿童在不间的测试速度中,峰力矩及大功率表现出的变化趋势与成人一致.提示儿童早期参加体育活动时应注意发展屈肌力量,使屈伸肌力量平衡发展.

血管内皮生长因子在原核细胞中的活性检测术

背景:目前血管内皮细胞生长因子制备困难,来源有限,限制了临床的应用.目的:用基因工程的方法在人肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子165,分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性.为后期构建携带血管内皮生长因子165蛋白的预成血管化组织工程骨提供了充足的蛋白来源.设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2005-04/2007-01在陕两省疾病预防控制中心病毒室完成.材料:携带目的基因血管内皮生长因子165的克降质粒PUC18-VEGF165由西安交通大学第二医院时志斌博士构建,PGEM-T easv 质粒购自美国Promerga公司,原核表达质粒购自德国Qiagen公司,DH5 α、M15、JM109菌株由陕西省疾病预防控制中心病毒研究室保存.方法:利用聚合酶链反应亚克隆的方法获得目的基因片段,构建表达质粒pQE30-VEGF165,在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2+-NTA进行蛋纯化.经过纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白.主要观察指标:①人血管内皮生长因子165基因的亚克隆结果.②重组表达载体pQE30-hVEGF165的鉴定结果.③人血管内皮生长因子165蛋白的诱导表达、纯化.④使用ELISA和Western blot技术检测人血管内皮生长因子165蛋白免疫学活性.⑤鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性.结果:重组表达质粒pQE30-VEGF165在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为23 000的蛋白,其以不溶性的包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%左右,经过分离和Ni柱纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白,浓度约为0.2g/L,ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验显示表达蛋白具有良好的生物学活性.结论:实验在原核细胞中稳定、高效表达了具有活性的血管内皮生长因子165蛋白,为后期预构血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源.

血管组织工程种子细胞原代培养技术的改良

背景:如何获取高质量的种子细胞是构建组织工程血管的先决问题.目的:改良血管组织工稃种子细胞原代培养技术并观察其生物学特性.设计、时间及地点:以细胞为培养对象,观察性实验,于2006-12/2008-03在江西省分子医学重点实验室完成.材料:新曲兰家兔,体质量2kg左右,用十血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的原代培养.方法:以胶原酶胰酶序贯消化法获得血管内皮细胞、快捷贴擘法培养血管平滑肌细胞.主要观察指标:免疫细胞化学法对两者进行鉴定:流式细胞术检测第2代和第6代血管内皮细胞的增殖指数.结果:培养的种子细胞符合各自特征.免疫细胞化学鉴定其为血管内皮细胞和血管平滑肌细胞.内皮细胞第2代和第6代细胞增殖指数分别为(20.87±2.05)%和(9.75±1.76)%.结论:胶原酶胰酶序贯消化法和快捷贴壁法可以较稳定地获取血管内皮细胞及血管平滑肌细胞;第2代的内皮细胞较第6代更适用于构建组织工程血管.

外源性神经生长因子对失神经大鼠股骨生物力学的影响

背景:现已发现在骨折愈合过程中有神经生长因子的表达,且外源性神经生长因子有促进骨折愈合的作用.目的:拟观察外源性神经生长因子对去神经大鼠失用性骨质疏松股骨生物力学的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/05在成都体育学院运动医学系动物实验室完成.材料:2月龄SD雄性大鼠50只,体质量(180.2±10.2)g,用于建立失神经失用性骨质疏松模型.方法:50只大鼠随机抽签法分为5组.假手术组不切除坐骨神经和股神经,每天注射等体积的生理盐水;其他各组均切除大鼠右侧坐骨神经和股神经,去神经组每天注射等体积的生理盐水:被动运动组每天用自行设计的被动训练仪按设定的节奏和运动量对其患肢进行被动运动:神经生长因子组注射外源性神经生长因子2U/(kg·d):被动运动与神经生长因子联合组被动运动方式和注射方式分别同被动运动组和神经牛长因子组.主要观察指标:30 d后取材,剥离右侧股骨进行生物力学检测,包括大载荷、破断载荷、结构刚度、能量吸收,弹性模量、极限强度、大应变.结果:50只SD大鼠均进入结果分析.与假手术组相比,去神经组各指标均明显降低(P<0.01):被动运动与神经生长因子联合组大载荷和弹性模量下降(P<0.05);被动运动组、神经生长因子组大载荷、结构刚度、弹性模量均降低(P<0.05).与去神经组相比,被动运动与神经生长因子联合组除能量吸收和极限强度指标差异不明显外,其他指标均明显偏高(P<0.01).结论:去神经后骨失去肌肉应力作用,股骨力学性能下降,神经的修复和再生有利于防止或延缓骨质疏松的发生.

17 β-雌二醇对青年期ISA蛋鸡骨代谢的影响

背景:青年期蛋鸡在性成熟前形成髓质骨,体内雌激素水平的升高对骨代谢有直接的影响.目的:观察外源性17 β-雌,醇对青年期ISA蛋鸡骨代谢的影响.设计、时间及地点:随机分组设计、动物对照观察,于2007-10/2008-02在南京农业大学动物医学院畜禽骨骼生物学实验室完成.材料:92日龄青年期ISA蛋鸡180羽.17 β-雌二醇南美国Cayman公司提供,玉米油为国产分析纯.方法:180 羽蛋鸡按随机数字表法分成3组,空白对照组、溶剂对照组、雌激素组,每组60羽.空白对照组蛋鸡,不做任何处理;溶剂对照组为每天肌肉注射玉米油1 mL,雌激素组为每天肌肉注射2 g/L 17 β-雌二醇玉米油溶液1 mL.两组均注射20 d.主要观察指标:于实验第0,5,10,15,20天,每组取12只鸡翼静脉采血5mL,用半自动生化分析仪测定血Ca、P和碱性磷酸酶活性.分光光度计测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性.采用放射免疫法,运用智能放射免疫Y测量仪测定血浆雌二醇与睾酮.每个时间点取血后,麻醉后处死,取股骨中段样本,厚度为4 mm,置于扫描仪上直接扫描后,运用Imago J图像处理系统分析扫描图像,计算皮质骨厚度、皮质骨面积和皮质骨面积比例、皮质骨骨内径、皮质骨骨外径.结果:从实验第5天开始,雌激素组雌二醇显著高于空白对照组和溶剂对照组,睾酮水平显著低于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P<0.05).实验第10,15,20天雌激素组碱性磷酸酶活性显著高于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P<0.05).实验第15,20天雌激素组血钙、血磷水平显著高于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P<0.05).实验第15,20天雌激素组抗酒石酸酸性磷酸酶活性显著低于空白对照组和溶剂对照组,差异有显著性意义(P<0.05).空白对照组和溶剂对照组之间差异无显著性意义(P>0.05).雌激素组皮质骨厚度、皮质骨面积、皮质骨面积比例、骨内径及骨外径与空白对照组和溶剂对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05).结论:外源性雌激素能够促进青年期蛋鸡骨形成,抑制骨吸收,促进骨骼发育.

与胶原浮胶细胞共培养中内皮细胞血管新生相关基因的表达

背景:内皮细胞和平滑肌细胞的相瓦调节是稳定血管壁结构的关键因素,两者共同培养能够分别影响各自的形态和功能.目的:利用Ⅰ型胶原浮胶建立人脐静脉内皮细胞与人血管平滑肌细胞共培养体系,分析细胞之间的相互作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-10/2008-01在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意.方法:取新鲜脐带,利用胶原酶灌注法分离人脐静脉内皮细胞,组织块培养法分离人血管平滑肌细胞.人血管平滑肌细胞直接种植十培养板表面,人脐静脉内皮细胞种植十鼠尾Ⅰ型胶原表面制成胶原浮胶,并与培养板上的人血管平滑肌细胞共培养.以人脐静脉内皮细胞单独在浮胶底面培养,培养板表面无人血管平滑肌细胞为对照.主要观察指标:①免疫荧光方法鉴定人血管平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞.光镜和电镜观察人脐静脉内皮细胞形态.②反转录一聚合酶链反应进行基因表达分析.结果:原代培养的内皮细胞呈铺路石样形态,CD31染色阳性.原代培养的人血管平滑肌细胞免疫荧光染色a-SMA呈阳性.胶原支架上内皮细胞伸展,胶原纤维重新排列,24h后出现管腔样结构.在共培养体系中,人脐静脉内皮细胞的金属蛋白酶1和金属蛋白酶9基因表达量显著高于单独培养组人脐静脉内皮细胞的表达量(P<0.05).但层枯蛋白Y2 和组织因子途径抑制物2的基因相对表达量在两组间末见明显变化. 结论:实验建市的共培养体系,可以观察到与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞形成更加丰富的网络状管腔样结构,更易于血管结构的形成.

卵巢切除骨质疏松小鼠骨折愈合不同时期骨微结构及力学性能变化

背景:骨组织力学性能除受其自身的材料力学性能影响外,与骨量及结构形态等密切相关.骨质疏松的发病机制、微结构和力学性能还不是很清楚.目的:检测骨质疏松性骨折愈合不同时期骨密度、骨微结构与力学性能的变化,以期能为临床治疗提供科学指导与理论依据.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005年在上海第二医科大学实验室完成.材料:选择6周龄雌性C57BL/6J小鼠,体质量25 g,共40只.方法:将小鼠分别行双侧卵巢切除的骨质疏松组与行假手术的对照组,每组20只,3周后所有小鼠行右侧股骨横断骨折建立骨质疏松性骨折模型,采用髓内钉阎定,并与对照侧比较.主要观察指标:于术后1,2,4和8周采用x射线检测骨折愈合情况.采用双能X射线检测骨痂组织骨密度;Micro-CT测定骨痂形成和矿化;3点弯曲法测定力学性能.结果:①卵巢切除组骨痂骨密度明显低于对照组.②与对照组比较,卵巢切除组骨痂体积在骨折后1,2周明显减少,骨折后4,8周没明显改变.卵巢切除组在骨折后2周有明显高的矿化比例,在1,4和8周没有明显改变.③骨折后2,8周,对照组小鼠股骨后负载和后压力大于卵巢切除组.结论:骨质疏松性骨折修复过程中,显微结构、骨密度等随愈合时间而不断改变,并终影响着骨痂组织的力学性能.

糖尿病足部非缺血性溃疡皮肤血管内皮生长因子受体3的表达

背景:糖尿病足部溃疡的发病机制和溃疡修复的机制尚不清楚,有研究表明和炎症反应延迟有关,而炎症和淋巴管形成关系密切.目的:探讨糖尿病足部非缺血性溃疡淋巴管内皮标志物血管内皮生长因子受体3表达.设计、时间及地点:分组对比观察,于2007-06/2008-05在南方医科大学南方医院内分泌代谢科完成.材料:标本来自2007-05,2008-03南方医院内分泌代谢科、急诊科、创骨科患者自愿捐献皮肤组织.分为正常对照组10例,男6例,女4例,平均年龄(51.2±4.1)岁;非糖尿病足溃疡组10例,男6例,女4例,平均年龄(55.2±4.7)岁,溃疡出现时间为(67.3±10.1)d;糖尿病足溃疡组10例,男5例,女5例,平均年龄(52.3±4.7)岁,溃疡出现时间为(64.0±10.4)d.方法:采用半定量反转录一聚合酶链反应的方法检测3组皮肤中血管内皮生长因子受体3mRNA的表达.采用免疫组织化学的方法检测以上3组皮肤中血管内皮生长因子受体3蛋白表达.主要观察指标:①反转录一聚合酶链反应结果.②免疫组织化学各组阳性细胞定位,表皮组织中阳性细胞数量,真皮组织中积分吸光度值.结果:与正常对照组比较,非糖尿病足溃疡组血管内皮生长因子受体3mRNA表达增加(P<0.001),糖尿病足溃疡组表达减少(P<0.001).正常组皮肤表皮层基底层细胞中可见明显的阳性细胞,非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组表皮层基底层细胞阳性信号消失.正常对照组、非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组真皮组织中血管内皮生长因子受体3积分吸光度值比较,差异有非常显著性意义(82.800±1.643,179.400±2.608,71.800±3.347,P<0.01).结论:糖尿病足非缺血性溃疡血管内皮生长因子受体3表达减少,提示淋巴管形成减少.

保存人鼻中隔软骨活性的3种体外方法比较

背景:软骨损伤后难以自身修复,以活性软骨进行修复效果较好,但活性软骨的可靠来源尚未根本解决.目的:以3种不同方法体外保存成人鼻中隔软骨块的活性比较.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-06/2008-03在解放军第四军医大学唐都医院耳鼻喉科实验室及西京医院全军耳鼻咽喉-头颈外科中心实验室完成.材料:材料为临床常规手术中切除的成人正常鼻中隔软骨20块,按国务院2006年<医疗机构管理条例>规定,已与患者签订知情同意书.方法:将所取软骨,块剪成大小约15 mm×10 min×2mm软骨块,分别置于4,-20,80℃冷冻及RPMI-1640液于37℃培养保存,于保存24h,7,14,21 d和30d时取样品.主要观察指标:以苏木精-伊红、AB/PAS及Masson三色染色和锥虫蓝排斥试验检测软骨活性.结果:用RPMI-1640培养液保存的成人鼻中隔软骨,在整个保存期中均能保持较好活性,软骨细胞活件率保持在80%左右.以-80℃冷冻保存7d及-20℃保存14d时,软骨基本失去活性.当4℃保存在21d时,软骨可保持较好活性,保存30d时,软骨活性明显降低.结论:与低温保存方法相比,用组织培养法保存成人软骨块能较好地保持其活性,有望为临床治疗提供一种取材方便、新型有效的软骨修复材料.

血管内皮细胞生长因子对免异体重建后交叉韧带血管再生的影响

背景:膝关节后交叉韧带重建的研究目前大多集中在手术技巧和移植物材料的选择上,而对重建后移植物血管再生情况的相关报道不多,尤其对异体移植物血管再生情况的相关研究更少.目的:拟观察应用血管内皮细胞生长因子对兔异体重建后交叉韧带血管再生的影响.设计、时间及地点:析因设计,于2006-03/2007-09在潍坊医学院第三附属医院骨科实验室完成.材料:68只成年雌性日本大白兔,体质量(3.3±0.1)kg,其中23只用于切取股骨-前交叉韧带-胫骨复合体以建立兔后交叉韧带异体重建动物模型.方法:45只兔随机分为3组,每组15只.对照组不作任何处理:磷酸盐缓冲液组向患膝关节腔内注入0.2 mL磷酸盐缓冲液;血管内皮细胞生长因子组向患膝关节腔内注入30μg血管内皮细胞生长因子(溶于0.2 mL磷酸盐缓冲液).主要观察指标:①重建后移植物的免疫排斥情况.②第3,6,12周每组各随机选5只兔取标本作免疫组织化学染色,Chalkley计数法对移植物韧带部分的中1/3处微血管密度计数.结果:45只兔均进入结果分析.每只兔切开关节后未见积液及软骨破坏,移植物大体形态接近正常后交叉韧带,无变性坏死及融解脱落等免疫排斥表现.血管内皮细胞生长因子组实验兔关节内可见大块血运丰富的组织,而对照组和磷酸盐缓冲液组没有.3组各时间点移植物微血管密度相比,血管内皮细胞生长因子组高于对照组和磷酸盐缓冲液组(P<0.01);第6周高于第3周和第12周(P<0.01),第12周低于第3周(P<0.05);微血管密度计数中组别与时间无交互效应.结论:局部应用血管内皮细胞生长因子对兔异体移植重建后交叉韧带移植物血管再生具有明显促进作用.

肝细胞生长因子基因转染脂肪细胞对移植组织工程脂肪存活的影响

背景:在脂肪组织工程的研究中,若将种子细胞与支架材料复合后移植,则此组织工程脂肪将可替代颗粒脂肪.肝细胞生长因子可以促进血管生成、减少纤维组织增生.目的:观察肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞对大鼠组织工程脂肪移植存活的影响.设计、时间及地点:随机区组设计的动物实验,于2006-08,2007-07在解放军兰州军区兰州总医院医学科学实验中心完成.材料:纳入Wistar大鼠用于分离、培养骨髓间充质干细胞及植入细胞-支架复合物. 方法:①分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,诱导成脂,携带绿色荧光蛋白基因及肝细胞牛长因子基因的苇组腺病毒毒株分别转染脂肪细胞,流式细胞仪测定转染效率,应用酶联免疫吸附试验法测定培养上清中肝细胞生长因子的表达,将脂肪细胞接种于聚乳酸聚乙醇酸共聚物支架.②将75只Wistar雌性大鼠按随机数宁表法分为3组:脂肪细胞组、Ad-肝细胞生长因子转染组及Ad-绿色荧光蛋白转染组分别将脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染肝细胞生长因子基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染绿色荧光蛋白基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物移植于大鼠腿部肌肉之间.主要观察指标:移植后3,7,14,28,60 d.每组各取5只大鼠麻醉后处死,取出移植物.电镜观察国;并行苏木精一伊红、油红O、Masson's染色,观察病理改变;同时用免疫组织化学法检测组织中肝细胞生长因子表达,观察并计数血管生成.结果:①骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞胞浆内富含丰富的脂滴,重组腺病毒感染复数=100时,携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒株转染脂肪细胞效率可达64.39%.②移植3,7,14 d时,Ad-肝细胞生长因子转染组移植物中肝细胞生长因子的表达高于其他组(P<0.05),且3 d达到高峰.③移植3,7,14,28,60d时,Ad-肝细胞生长冈子转染组移植物中血管生成高于其他组(P<0.05),且7d时血管增加的幅度大.④移植28,60d时,Ad-肝细胞生长因子转染组坏死程度均小于其他组,电镜下脂肪细胞也多于其他组.结论:携带肝细胞生长因子基因的脂肪细胞在移植物中能够表达肝细胞生长因子,促进移植组织工程脂肪血管生成,进而促进移植组织的成活.

组织工程软骨细胞体外培养技术要点

通过组织工程技术,采用自身软骨细胞体外增殖构建软骨来修复关节软骨损伤,在临床上已成为一种有效的新方法.近年来,有关体外软骨细胞培养技术的研究较多.通过对入选文献进行分析、整理,对影响体外构建软骨的因素包括培养空间、应力、细胞密度和氧张力等方面进行分析,体外采用三维多条件联合培养软骨细胞可以改善构建软骨的生物品质.但是影响软骨细胞生长的因素众多复杂,在体外如何更好地构建软骨,有待进一步研究.

皮肤病理性瘢痕的基础理论研究与进展

皮肤病理性瘢痕是整形外科的常见疾病,包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,病理性瘢痕发病机制参与的因素众多,目前并未完全清楚.研究认为病理性瘢痕的形成主要是由于成纤维细胞的过度牛长和胶原蛋白合成、分泌紊乱以及过度沉积所造成.本文对病理性瘢痕发生的背景、瘢痕成纤维细胞的培养及检测、胶原蛋白的检测及瘢痕动物模型的研究等进行了分析和总结,通过对瘢痕的基础研究,希望能为下一步基础研究和临床治疗提供证据和启发.

非灵长类艾滋病动物模型的研究现状

艾滋病(获得件免疫缺陷综合征)由于其特殊性,25年来,一直没有一种真正理想的动物模型.灵长类作为人类艾滋病动物模型由于其局限性运用的越来越少.转基因小鼠和猫免疫缺陷是日前国内外运用多的动物模型,是艾滋病动物模型的新趋势.文章综述了日前国内外关于艾滋病动物模型研究的新进展,着重分析国外常用的非灵长类动物小鼠和猫模型,并对各个模型的应用范围和优缺点进行对比.

全身骨密度及骨矿含量与体质量指数的关系:287例汉族健康志愿者调查

背景:骨密度及骨矿物含量是诊断骨质疏松及评价骨质量的重要指标,肥胖是否影响骨质疏松的发生尚无定论.目的:调查分析287例汉族健康志愿者全身骨密度、骨矿物含量与肥胖的关系.设计、时间及地点:调查分析,于2006-01/12在济南市妇幼保健院完成.对象:选择健康志愿者287人,年龄(37±17)岁.方法:测量287例汉族健康志愿者的身高、体质量、全身各部位的骨密度及骨矿物含量.以体质量指数对样本进行分组:体质量指数≥28 kg/m2为肥胖:体质量指数≥24 kg/m2 ,<28 kg/m2为超重;体质量指数≥18.5 kg/m2,<24 kg/m2为正常体质量.主要观察指标:采用协方差分析比较不同体质量指数调查对象的骨密度及骨矿物含量:采用偏相关分析法分析体质量指数与全身各部位骨密度及骨矿物含量的关系.结果:协方差分析显示,在排除性别和年龄的影响后,肥胖组全身、头部、上肢、下肢、躯干、脊柱部位的骨密度及骨矿物含量均高于超重组和正常体质量组(P<0.05～0.01).偏相关分析显示.在排除性别和年龄的影响后,体质量指数与伞身总骨密度、全身总矿物含量、头骨密度、头骨矿物含量、上肢密度、上肢矿物含量、下肢密度、下肢矿物含量、躯下密度、躯干矿物含量、脊柱密度、脊柱矿物含量均呈显著正相关(P均=0.000).结论:全身骨密度及骨矿物含量与肥胖呈正相关.

经关节突滑膜和椎板肌肉附着点感受器通路给药治疗椎间盘突出性腰腿痛:1236例分析

背景:髓核中炎症递质诱导神经根炎症是产生腰腿痛主要因素.感受器通路系列研究发现,神经系统存在自身循环,经感受器通路给药有靶向给药的功效.目的:分析经腰椎关节突滑膜和椎板肌肉附着点给药治疗椎间盘突出性腰腿痛1236例治疗效果.设计、时间及地点:病例分析,于2002-03/2007-03在连云港市第一人民医院完成.对象:选择疼痛科就诊的椎间盘突出性腰腿痛患者1236例.男370例,女866例.年龄20-80岁.患者腰腿痛伴有腰椎间盘膨出、突出物小于椎管的1/3.方法:患者经腰椎间盘膨出、突出的椎关节突和椎板注射药物,药物配方:复方倍他米松(得宝松)5 mg+左氧氟沙星0.1 g+20 g/L利多卡因5 mL+生理盐水氯化钠至20mL+透明质酸钠(施沛特)20 mg.1次/周,2,3次为1个疗程.1个月以内不要过度负重.主要观察指标:治疗效果和复发率.结果:1236例椎间盘突出性腰腿痛患者1个疗程临床治愈1142例(94%),好转89例(7.2%),无效5例(0.4%).1年随访资料完善的322例,未复发250例(77.6%),复发72例(22.4%);2年随访资料完善的206例,未复发155例(75.2%),复发51例(24.8%):3年随访资料完善的91例,未复发74例(81.3%),复发17例(18.7%);4年随访资料完善的62例,未复发52例(83.8%),复发10例(16.2%);5年随访资料完善的32例,未复发27例(84.3%),复发5例(15.6%).结论: 经腰椎芙节突滑膜和椎板肌肉附着点感受器通路给药治疗椎间盘突出性腰腿痛简单有效.

安庆地区原发性高血压人群良性前列腺增生患者梗阻症状的影响因素

背景:良性前列腺增生患者梗阻症状被认为是动力性因素和静力性因素共同引起,梗阻的动力性因素主要与前列腺和膀胱颈部平滑肌的张力有关,静力性因素丰要与增人的前列腺体积压迫尿道有关.原发性高血压町导致前列腺体积增大.目的:分析原发性高血压人群中良性前列腺增生患者梗阻症状的各种影响因素.设计、时间及地点:调查分析,于2005-0712006-02在安徽省安庆市及其周边地区完成.对象:来自于安庆及其周边地区的特拉唑嗪联合氨氯地平治疗的老年男性原发性高血压人群,选取其中的272例被诊断为良性前列腺增生的患者,年龄50-75岁.患者对调查知情同意,自愿参加本次调查.方法:采用问卷调查、体格检查及尿动力学检查,对梗阻症状各种影响因素进行分析.主要观察指标:国际前列腺症状评分(IPSS)、梗阻症状评分(IPSS梗阻)、生活质量评分、大尿流率、收缩压、舒张压以及其他一般人口学特征.结果:高血压伴良性前列腺增生患者,梗阻症状严重程度随着年龄增加而加重;间断排尿评分随着收缩压的升高而增加,而IPSS梗阻评分、尿线变细以及排尿用力评分随着舒张压的升高而增加;体力劳动强度的增加,梗阻症状的严重程度有减轻的趋势(差异未达到显著性);随着每天坐位时间的增加,IPSS总评分、IPSS梗阻评分及尿线变细评分随之增加;logistic 逐步回归分析显示:高血压人群中良性前列腺增生梗阻症状程度受年龄、舒张压、坐位时间、饮酒、首次性生活年龄以及30岁性生活频率6种因素影响较大.结论:①年龄、高舒张压状态、首次性生活年龄过早和30岁性生活过频是良性前列腺增生患者梗阻症状的重要影响因素.②适当的增加体力劳动和减少每天的坐位时间对减轻梗阻症状有保护作用.③饮酒可能是良性前列腺增生梗阻症状的影响因素.

十七个少数民族1804名男大学生体质水平的因子分析

背景:课题是2008年广西民族大学重大项目,调查并分析民族地区学生膳食结构、营养、体质与健康及其变化的规律.目的:通过建立数学模型寻找支配因子,探寻学生体质状况的评价方法.设计、时间及地点:横断面调查,于2006-11/2007-05在广西大学、广西民族大学完成. 对象:随机取样17个少数民族在校人学生1826人,平均年龄18-20岁.方法:采用现场调研、小样本可行性试验、大样本正式测试和建立指标体系等4个研究步骤,对1804名有效样本(父母双方均为少数民族)进行12项指标测试分析,包括:50m、铅球、立定跳远、引体向上、800m、立位体前屈、体质量、身高、胸围、肺活量、收缩压、舒张压.通过建立初始因子模型和旋转后的因子模型,计算因子特征向量、特征值和贡献率.对受试者健康水平因子总分及标准总分进行排序.主要观察指标:①男件少数民族大学生12项指标测量结果.②12项指标因子特征值、特征向量、贡献率.③初始因子分析模型.④旋转后的因子分析模型.⑤影响少数民族大学生健康因素的素质、发育、生理3个共性因子取值.结果:①影响少数民族大学生体质健康水平有3个主要因素:41.17%来自于身体素质,10.07%来自于发育水平,38.01%来自于生理机能.②满族、蒙古族、壮族、侗族、苗族、傣族、京族、回族、瑶族、毛南族的身体素质在平均水平之上.③满族、蒙古族、苗族、侗族、藏族、彝族、土家族、水族的发育状况高于平均水平.④蒙古族、壮族、苗族、满族、侗族、藏族、京族、彝族、白族、水族的生理机能也高于平均水平. 结论:①因子分析法在机体体质评价中的运用,能观测变量间极其复杂的相关关系,寻找变量变化潜在的支配因子,建立因子分析模型,通过各共性因子所处的状态,解释共性因了的实际意义,能客观评价各少数民族学生的健康水平.②因子评价法较原始数据得分直接相加求和法、原始数据标准化分法更科学.

沈阳体育学院张日辉教授

河南中医学院第二附属医院杨豪教授