分子影像在干细胞治疗中的应用

背景：目前干细胞治疗的研究已能够持续广泛地观察不同种类的干细胞，但是还没有任何一种单独的成像模式能够全面评价干细胞治疗的效果。
　　目的：介绍追踪干细胞治疗的不同细胞标记方法、成像技术，对分子影像学与干细胞治疗未来的临床应用做一展望。
　　方法：由第一作者检索2005年1月至2012年12月PubMed数据库有关分子影像学用于追踪干细胞治疗，细胞的标记方法和成像技术的应用，干细胞治疗理想的成像模式，以及不同干细胞进行分子影像学跟踪的进展相关文献，英文检索词为“Molecular imaging，Stem cel therapy，Cel transplantation，Regenerative medicine”，计算机初检得到269篇文献，根据纳入标准保留20篇进一步归纳总结。
　　结果与结论：目前，为了持续追踪移植细胞的生存能力和生物学功能，大多数细胞治疗需在不同时期处死动物进行免疫组织化学分析，不仅操作复杂而且浪费了大量的实验资源。分子影像学运用影像技术显示组织、细胞和亚细胞水平的特定分子，反映活体状态下分子水平变化，非侵入性的对参与生理和病理过程的分子进行定性或定量的可视化观察，增加了干细胞治疗的可行性，帮助阐明治疗过程中新的生物学机制。

内皮祖细胞移植治疗糖尿病足的协同作用因素

背景：糖尿病足治疗已经走到瓶颈，自体骨髓/外周血内皮祖细胞移植是近年来治疗糖尿病足的新方式。
　　目的：针对血管内皮细胞生长因子受体2和整联蛋白在内皮祖细胞移植治疗糖尿病足过程中发挥作用的研究进展进行综述。
　　方法：第一作者应用计算机检索1998年1月至2012年12月PubMed数据库、中国期刊全文数据库有关内皮祖细胞治疗糖尿病足、整合素与血管内皮细胞生长因子受体2的相互作用以及整合素与血管内皮细胞生长因子受体2在内皮祖细胞增殖与血管新生作用方面的文章，英文检索词“diabetic foot，endothelial progenitor cel s，VEGFR-2，integrin，synergistic effect”；中文检索词“糖尿病足，内皮祖细胞，血管内皮细胞生长因子受体2，整合素，协同作用”。共检索到98篇相关文献，排除重复研究，60篇文献符合纳入标准。
　　结果与结论：在糖尿病足治疗中，自体骨髓/外周血内皮祖细胞越来越受到重视，并逐渐成为令人瞩目、鼓舞人心的焦点，内皮祖细胞移植已经逐渐发展成为糖尿病足治疗的新模式。血管内皮细胞生长因子受体2和整合素在糖尿病足治疗的血管生成中可能发挥了协同作用，但仍有许多机制还不清楚，要彻底明确整合素和血管内皮细胞生长因子的作用机制尚需进一步研究。

间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt信号通路

背景：研究表明Wnt信号通路在间充质干细胞向成骨分化中具有重要作用。
　　目的：归纳总结Wnt信号通路的机制、调控以及其参与间充质干细胞成骨分化的作用。
　　方法：应用计算机检索Pubmed和CNKI数据库中1998年9月至2013年3月相关文献，在标题和中以“Wnt，间充质干细胞，Wnt信号通路，成骨细胞分化，经典Wnt信号传导通路，非经典Wnt信号传导通路”或“Wnt，Mesenchymal stem cel s，Wnt signaling pathways，osteoblastic differentiation，canonical Wnt signaling，non-canonical Wnt signaling”为检索关键词进行检索。后选择31篇符合标准的文献进行综述。结果与结论：Wnt信号传导通路在间充质干细胞向成骨细胞中充当着关键的角色，包括经典Wnt信号、非经典 Wnt 信号以及其内部多种因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。经典 Wnt 信号传导通路与非经典Wnt信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化，其中Wnt信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中，Wnt11，FZD6，sFRP2，sFRP3和Ror2等因子的表达升高，而Wnt9a和FZD7的表达下降。但Wnt信号的各因子如何相互影响，如何利用Wnt信号的机制促使间充质干细胞更快、更准确地分化值得更进一步探讨与研究。

自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的新进展

背景：自体造血干细胞移植是治疗多发性骨髓瘤的有效手段，诱导化疗后行自体造血干细胞移植已成为多发性骨髓瘤的标准治疗方案，多单位、多中心进行了大规模的研究报道。如何减少药物毒副反应、移植相关并发症及改善长期生存是目前关注的重点。
　　目的：综述自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的新进展。
　　方法：应用计算机检索2006年1月至2012年11月PubMed、CNKI数据库、维普数据库、万方数据库、free medicaljournals.com网络资源关于自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的文献。英文检索词“Autologous hematopoietic stem cel transplantation, multiple myeloma”；中文检索词“自体造血干细胞移植，多发性骨髓瘤”。选中相关性强的46篇进行综述。
　　结果与结论：大剂量化疗联合自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的疗效优于传统化疗。但单次自体造血干细胞移植后仍有许多患者不能得到很好的缓解，疾病终难免复发；异基因造血干细胞移植受到供体来源限制，且治疗相关病死率高，运用受到限制。因此目前的新发展方向包括：在单次自体造血干细胞移植的基础上进行2次自体造血干细胞移植、自体联合减低预处理强度的异体移植以及药物巩固维持治疗。新型药物蛋白酶体抑制剂及免疫调节剂在诱导缓解、预处理、尤其是巩固维持阶段的使用，使多发性骨髓瘤的治疗总体反应率及长期生存得到显著改善。

清洗式自体回收血液的红细胞特点

背景：清洗式自体血液回输是将术野血经回收、抗凝、过滤、离心、浓缩、清洗后回输给患者的自体血液回输方式，在临床中已大量应用。
　　目的：归纳总结清洗式自体回收血液的红细胞特点，包括红细胞的回收率和红细胞压积，红细胞的形状、变形能力、血流动力学和体内生存期的变化，红细胞携氧及供氧能力的变化以及红细胞免疫以及其表面膜受体的变化。
　　方法：由第一作者检索1987年1月至2013年1月 PubMed数据及万方数据库相关文献，英文检索词为“Blood transfusion，autologus，blood preservation，erythrocytes”，中文检索词为“输血；自体；血液保存；红细胞”。计算机初检得到与清洗式自体回收血液的红细胞特点相关文献200篇文献，排除重复性研究，保留60篇做进一步总结分析。
　　结果与结论：由于受负压吸引、离心分离等机械力、各种受损组织及细胞释放的炎性递质和酶类以及激活的补体等因素的共同作用，回收红细胞有一定程度的破坏，所以血液回收机对红细胞的总回收率取决于采集时的回收率、贮存破损率和清洗时的丢失率。自体血液回收对红细胞的携氧能力无明显影响，即回收血红细胞具有与正常红细胞相同的携氧能力。红细胞在自身输血前后免疫功能和表面受体的数量有所下降，但优于库存2周的红细胞。研究提示应提高血液回收技术以降低红细胞免疫黏附功能下降程度。

干细胞：代谢综合征治疗的新资源

背景：代谢综合征是以糖、脂等代谢紊乱及向心性肥胖、高血压为特征的系列症候群，传统的治疗尚不能从根本上改善、治愈代谢综合征。
　　目的：综述干细胞移植治疗代谢综合征的研究进展，并提出干细胞使用方面许多亟待解决的问题。
　　方法：使用计算机检索Pubmed数据库及中国学术期刊全文数据库(CNKI)2002至2011年有关干细胞移植治疗代谢综合征胰岛素抵抗、高血糖、高血脂、高血压等组分的研究文献。英文检索词为“stem cel s，metabolic syndrome，insulin resistance，diabetes，hyperlipidemia，hypertension，stem cel s transplantation”，中文检索词为“干细胞、代谢综合征、胰岛素抵抗、糖尿病、高脂血症、高血压、干细胞移植”。排除陈旧性和重复性研究，收集到43篇相关文献纳入综述。
　　结果与结论：干细胞是机体组织细胞的起源，具有自我复制、高度增值和多向分化的能力，干细胞治疗可促进各种损伤修复和衰老死亡细胞的更新，从而改善组织器官的结构与功能，促进代谢产物的利用及排泄。相关研究证实干细胞可通过各种机制治疗代谢综合征的脂代谢紊乱、胰岛素抵抗、高血压、高血糖、动脉粥样硬化等病变。关于干细胞移植治疗代谢综合征，目前还有很多尚待解决的问题，但现有研究资料已经证实，干细胞移植治疗代谢综合征是一个充满希望的新途径。

骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足过程中血管内皮生长因子的表达

背景：目前已有研究证明骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足能够获得良好的效果。
　　目的：评价骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足溃疡的效果以及血管内皮生长因子的表达情况。
　　方法：应用文献检索的方法获取骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足及血管内皮生长因子表达的相关研究文献，对符合研究标准的文献进行深入的数据分析，文章选取骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足的实验研究和临床应用进行分析，实验研究中，建立大鼠糖尿病足溃疡模型，给予骨髓间充质干细胞移植治疗，观察创面溃疡的愈合情况，并分析血管内皮生长因子的表达情况。临床应用研究中，对应用骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足的患者进行观察随访，观察创面溃疡的愈合情况以及不良反应发生情况。
　　结果与结论：实验研究显示骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足创面溃疡的愈合快于常规治疗，但是与正常足溃疡愈合相比仍较慢，且移植治疗后血管内皮生长因子的表达升高，但是低于正常足溃疡对照的水平。临床应用研究显示糖尿病足溃疡患者经骨髓间充质干细胞移植治疗后，创面溃疡基本均可完全愈合，且无心、脑血管疾病、肝肾功能损伤以及出凝血时间改变等不良反应发生。

神经干细胞移植与脑梗死

背景：将神经干细胞移植到脑梗死病灶区可以促进受损神经细胞的修复。目的：分析神经干细胞移植治疗脑梗死的相关影响因素。
　　方法：文章通过数据库检索的方式分析近年来关于神经干细胞移植治疗脑梗死的实验研究，从中国临床试验注册和基础实验研究两方面分析神经干细胞与脑梗死的研究进展。
　　结果与结论：脑梗死后神经干细胞的增殖和分化与脑内微环境密切相关，梗死区域有大量的神经细胞丢失。细胞因子在神经干细胞移植修复神经功能损伤时发挥一定作用，能够诱导大鼠脑梗死后神经干细胞的增殖、分化和迁移，目前被证实的有表皮生长因子、脑源性神经营养因子、胰岛素样生长因子1、神经生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等。针灸和中医药对脑梗死后室管膜下区神经干细胞的增殖、迁移和分化有促进作用。神经干细胞移植治疗脑梗死的研究已经取得了阶段性进展，未来仍有许多问题需要进一步解决。

人软骨细胞培养上清诱导脐血间充质干细胞向软骨细胞分化

背景：人脐血间充质干细胞作为软骨缺损修复的种子细胞日益受到关注，现有常用诱导方法无论是应用诱导培养基还是诱导因子，因其价格昂贵、用量大等因素限制了实际应用。
　　目的：验证人软骨细胞培养上清诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性。
　　方法：利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离新生儿脐血，获取并培养人脐血间充质干细胞，流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。切取股骨头置换或全髋关节置换患者透明软骨组织，体外分离培养软骨细胞，利用其培养上清培养人脐血间充质干细胞，培养2周后观察细胞表型外观变化，免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达结果。
　　结果与结论：密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞，流式细胞仪鉴定表面标记CD90，CD105高表达，不表达CD34，CD45。软骨细胞培养上清诱导2周后，人脐血间充质干细胞向多角形、圆形转变，Ⅱ型胶原免疫组化检测表达阳性。提示软骨细胞培养上清可诱导人脐血间充质干细胞表达Ⅱ型胶原，向软骨细胞分化。

脐带间充质干细胞联合番茄红素的抗衰老作用

背景：研究证实脐带间充质干细胞、番茄红素均有不同程度的抗衰老作用，而关于二者联合抗衰老作用的研究国内外研究甚少，目前基本处于空白状态。
　　目的：观察人脐带间充质干细胞联合番茄红素对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用。
　　方法：实验选用ICR小鼠，通过颈背部皮下注射D-半乳糖复制亚急性衰老小鼠模型，分为对照组、模型组、干细胞治疗组、番茄红素治疗组和干细胞联合番茄红素治疗组。实验8周后处死，测定各组小鼠血清、肝脏、脑组织中丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性及皮肤中羟脯氨酸含量。
　　结果与结论：与对照组相比，模型组小鼠超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量降低，丙二醛含量升高，差异有非常显著性意义(P ≤0.01)。与3个治疗组相比，模型组超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量偏低，丙二醛含量偏高，且差异有显著性意义(P ≤0.05)，但模型组大脑中丙二醛含量与番茄红素治疗组差异无显著性意义(P>0.05)。3个治疗组相比，干细胞联合番茄红素治疗组中超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量较高、丙二醛含量较低，差异有显著性意义(P ≤0.05)。提示干细胞、番茄红素具有不同程度的抗衰老作用，且二者联合的抗衰老作用优于单独使用。

视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞的分化

背景：骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化可为神经系统受损伤后的修复和再生带来了新的希望。
　　目的：探讨骨髓间充质干细胞在视网膜干细胞培养上清液诱导条件下向神经元细胞分化。
　　方法：采用全骨髓培养方法，用视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞，通过免疫荧光染色鉴定其分化的结果。
　　结果与结论：诱导72 h，骨髓间充质干细胞表达神经干细胞的特异性抗体巢蛋白和神经元中的标志性微管相关蛋白微管相关蛋白2。视网膜干细胞培养上清液能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化，提示视网膜干细胞可能分泌神经生长因子。

Ca2+参与骨髓间充质干细胞存活增殖及向肝细胞的诱导分化

背景：骨髓间充质干细胞增殖和分化中的具体机制仍不清楚，Ca2+信号、骨髓间充质干细胞增殖与分化信号如何协调和交叉成复杂信号网络等问题仍有待研究阐明。
　　目的：探讨细胞内Ca2+在骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导分化过程中的作用。
　　方法：用全骨髓贴壁法从大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞后进行纯化和扩增，并加入肝细胞生长因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化，应用流式细胞技术分别检测肝细胞生长因子诱导分化骨髓间充质干细胞和对照骨髓间充质干细胞内游离[Ca2+]i。将不同浓度的尼莫地平加入肝细胞生长因子诱导的骨髓间充质干细胞(肝细胞生长因子组)培养液中进行干预后分为3组：肝细胞生长因子+尼莫地平10 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平50 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平100 mg/L组，在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况并用免疫细胞化学法检测AAT的表达；并用RT-PCR检测对照组和尼莫地平干预组钙调蛋白mRNA的表达，免疫印迹法检测上述各组磷酸化ERK的表达。
　　结果与结论：①加入肝细胞生长因子诱导分化的骨髓间充质干细胞内[Ca2+]i显著高于对照组(P<0.05)。②加入较大剂量的尼莫地平干预后，未见分化细胞且骨髓间充质干细胞的生长状态差；肝细胞生长因子+尼莫地平各组表达AAT的阳性细胞很少。③与对照组比较，肝细胞生长因子组和肝细胞生长因子+尼莫地平10 mg/L组钙调蛋白mRNA表达显著增加了(P<0.05)，肝细胞生长因子+尼莫地平50 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平100 mg/L组与对照组比较组间差异无显著性意义(P>0.05)。说明Ca2+不仅参与细胞因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的定向分化，而且也参与维持骨髓间充质干细胞的存活和增殖。

SiRNA沉默Sox-9基因调控骨骺干细胞的增殖及凋亡

背景：目前有研究表明，很多细胞生长因子可促进骨骺干细胞的增殖和分化，并且这种调控作用与Sox-9有密切的关系。
　　目的：观察小分子干扰RNA沉默Sox-9基因及对大鼠骨骺干细胞增殖、凋亡的影响。
　　方法：采用酶消化法分离、免疫磁珠法纯化及免疫组织化学SABC法鉴定得到大鼠骨骺干细胞，首先进行预转染Sox-9 siRNA，判断转染效率，实验分2组：对照组常规培养，实验组采用Sox-9 siRNA转染。
　　结果与结论：实验成功分离、纯化了原代骨骺干细胞，生长状态稳定、贴壁牢固，光学显微镜下细胞多呈梭形。免疫组织化学染色和免疫荧光鉴定显示，Sox-9 siRNA转染的大鼠骨骺干细胞可稳定表达相对特异性标志物成纤维细胞生长因子受体3。RT-PCR，MTT，流式细胞仪检测检结果提示，与对照组相比，实验组Sox-9 mRNA表达及细胞存活率降低(P<0.05)，凋亡率增加(P<0.05)。结果证实，siRNA沉默Sox-9基因可调控大鼠骨骺干细胞的增殖和凋亡。

人胚胎成纤维细胞饲养层的制备

背景：极小胚胎样干细胞是近年来发现的一种具有类似胚胎干细胞生物学特性的非造血干细胞，但对其体外培养扩增的方法报道极少。有研究推测，人胚胎成纤维细胞能为人骨髓极小胚胎样干细胞体外培养扩增提供良好的微环境。
　　目的：从人胚胎躯干中分离、培养人胚胎成纤维细胞，制备人胚胎成纤维细胞饲养层用于人骨髓极小胚胎样干细胞的培养。
　　方法：利用胰酶消化法从孕5-9周龄人胚胎躯干中分离培养人胚胎成纤维细胞。制作饲养层，使用不同浓度丝裂霉素C处理后，用于培养分选后的人骨髓极小胚胎样干细胞，以细胞形态、生长曲线作为胚胎成纤维细胞和饲养层的评价指标。
　　结果与结论：从人胚胎中成功分离培养出人胚胎成纤维细胞，该细胞可传代24代以上，且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变。丝裂酶素C低于12 mg/L时，人胚胎成纤维细胞增殖不能完全抑制；高于14 mg/L，人胚胎成纤维细胞可能死亡。12 mg/L丝裂霉素C作用3 h后能较好地抑制人胚胎成纤维细胞的增殖，并且保持其活力约2周，可以在很长一段时间内用作人骨髓极小胚胎样干细胞的饲养层。

地塞米松诱导牙周膜干细胞的定向成骨分化及凋亡

背景：牙周膜干细胞是一类起源于牙组织的成体干细胞，具有良好的成骨分化能力，有望在骨组织工程中得到应用。
　　目的：观察成骨诱导液对牙周膜干细胞成骨分化能力及细胞早期凋亡的影响。
　　方法：从原代牙周膜组织中分离得到牙周膜干细胞，以1×104/cm2浓度铺板后开始诱导。利用1，10，100 nmol/L地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C为成骨诱导剂，以碱性磷酸酶活性检测、茜素红矿化结节染色、荧光定量PCR等方法对细胞成骨情况进行鉴定，采用AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。
　　结果与结论：地塞米松可有效诱导牙周膜干细胞成骨分化，可显著提高碱性磷酸酶活性，促进茜素红矿化结节形成，提高成骨相关基因骨粘连蛋白及Ⅰ型胶原表达。根据碱性磷酸酶活性和矿化结节实验结果，地塞米松的成骨诱导具有浓度梯度效应，其中100 nmol/L 地塞米松具有佳成骨诱导能力。细胞凋亡结果提示，地塞米松诱导的成骨分化具有一定促凋亡作用，可诱导牙周膜细胞的早期凋亡。

慢病毒介导稳定过表达β-catenin可促进间充质干细胞的增殖和迁移

背景：β-catenin 是 wnt/β-catenin 信号通路中关键的信号分子，参与调控细胞增殖、分化以及组织自我修复的平衡。
　　目的：建立慢病毒介导的过表达β-catenin基因的大鼠间充质干细胞株，观察β-catenin基因对间充质干细胞增殖和迁移的影响。
　　方法：构建靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体pLV-catenin-RFP，采用人胚肾上皮细胞293T进行包装，收集、浓缩病毒，感染间充质干细胞株，经过嘌呤霉素加压筛选，建立稳定过表达β-catenin基因的间充质干细胞。通过实时荧光定量 PCR、细胞生长曲线、MTT 实验、Transwel 体外细胞迁移实验研究稳定过表达β-catenin基因对间充质干细胞增殖和迁移的影响。
　　结果与结论：成功包装靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体pLV-catenin-RFP，建立稳定过表达β-catenin基因的间充质干细胞。与空载对照pLV-RFP组和正常间充质干细胞组相比，实时荧光定量PCR证实，慢病毒pLV-catenin-RFP组mRNA表达明显增高(P<0.05)；MTT和生长曲线显示pLV-catenin-RFP组使细胞倍增时间缩短(P<0.05)，增殖能力增加；细胞迁移实验显示pLV-catenin-RFP组使细胞迁移能力增加(P<0.01)。结果可见慢病毒介导稳定过表达β-catenin基因能使间充质干细胞的增殖能力及迁移能力增强。

异丙肾上腺素影响下颌下腺干/祖细胞增殖的数量还是能力？

背景：异丙肾上腺素注射能够促进啮齿类动物涎腺腺泡细胞增殖、肥大。然而，异丙肾上腺素注射后涎腺干/祖细胞的增殖能力目前仍不清楚。
　　目的：研究异丙肾上腺素腹腔注射对SD大鼠下颌下腺干/祖细胞激活、增殖能力。
　　方法：SD大鼠随机分为2组，分别腹腔注射异丙肾上腺素与生理盐水，连续注射5 d后取下颌下腺，酶消化法制取下颌下腺细胞悬液，体外培养，获得下颌下腺类上皮细胞集落并计数。挑取增殖较快的集落，进行CD90.1、层粘连蛋白、α6β1等免疫细胞化学检测。
　　结果与结论：与对照组相比，异丙肾上腺素注射组中、低增殖集落数量较少，高增殖集落数量较多，差异有显著性意义(P<0.05)，而集落总数无明显区别(P>0.05)。高增殖下颌下腺类上皮细胞集落CD90.1、层粘连蛋白、α6β1抗体均为阳性表达。实验结果显示，异丙肾上腺素注射不能明显增加下颌下腺中的干/祖细胞数量，但是能提高腺体中干/祖细胞的增殖能力。

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3在乳腺癌干细胞中的表达

背景：新研究显示，血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3可能与某些肿瘤的发生有着密切关系，且对白细胞介素3撤退所诱导的乳腺癌细胞凋亡具有保护作用。另据相关报道显示，血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3可能参与调节细胞内Wnt信号通路。
　　目的：观察乳腺癌干细胞中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3及β-Catenin蛋白的表达。
　　方法：采用双波段流式细胞分选仪从71例人乳腺癌组织中分选乳腺癌干细胞，并进行鉴定及传代培养，以30例正常乳腺组织作为对照。应用SP免疫法检测乳腺癌干细胞和正常乳腺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3、β-Catenin蛋白的表达。
　　结果与结论：乳腺癌干细胞中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3、β-Catenin的表达均显著高于正常乳腺组织(P<0.01)。二者在乳腺癌干细胞中的表达呈正相关(r=0.318，P<0.05)。说明血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3可能通过调控Wnt/β-Catenin信号通路，参与乳腺癌的发生发展过程。

脂肪源性干细胞的体外分离培养与鉴定

背景：脂肪间充质干细胞来源丰富、取材方便、体外有较强增殖能力并具有多向分化的潜能，有望成为组织工程的种子细胞。
　　目的：体外分离培养SD大鼠脂肪干细胞并进行鉴定。
　　方法：取SD大鼠腹股沟区皮下脂肪组织，0.075%I型胶原酶消化分离、培养脂肪源性干细胞，倒置相差显微镜下观察脂肪源性干细胞的细胞形态和增殖特征。取第3代细胞用 MTT 比色法描绘生长曲线，免疫荧光法鉴定干细胞标志物CD44，含有体积分数10%胎牛血清、地塞米松和胰岛素的 DMEM/F12定向诱导成脂分化，油红“O”染色成脂分化鉴定。免疫组化法鉴定向神经细胞诱导分化的结果。
　　结果与结论：分离出的大鼠脂肪源性干细胞生长曲线呈“S”形，强烈表达干细胞标志物CD44。成脂诱导分化经油红“O”染色呈橘红色。向神经细胞诱导分化后表达神经元标志物神经元特异性烯醇化酶。说明SD大鼠脂肪源性干细胞在体外具有易于分离培养和扩增，表达间充质干细胞相关表型，特定条件下可诱导分化的特点。

脂肪干细胞与可吸收明胶海绵的组织相容性

背景：在骨组织工程中寻找优良的种子细胞和支架材料非常重要。目前尚未见脂肪干细胞与可吸收明胶海绵在体外进行复合培养的相关报道。
　　目的：诱导脂肪干细胞成骨细胞后，观察其在可吸收明胶海绵上的黏附、增殖情况以及两者的生物相容性，以期为可吸收明胶海绵作为脂肪干细胞的有效载体进行体内移植提供实验基础。
　　方法：体外培养脂肪干细胞，通过免疫组织化学及流式细胞术对其进行鉴定。取第3代脂肪干细胞对其成骨诱导分化，将其接种于多聚赖氨酸处理后的可吸收明胶海绵，进行扫描电镜观察，观察其在明胶海绵上的黏附、生长情况。
　　结果与结论：兔脂肪干细胞48 h内呈圆形、椭圆形贴壁生长，以后逐渐呈长梭形贴壁生长，阳性表达CD29、CD44，阴性表达CD33、CD34。在加入成骨诱导液培养3 d后，脂肪干细胞可诱导为成骨细胞，将诱导后的成骨细胞与可吸收明胶海绵复合培养，24 h可见85%以上已黏附生长，48 h见成骨细胞伸出伪足，7 d见成骨细胞已呈片状黏附生长并分泌大量细胞基质，10 d可见可吸收明胶海绵已开始吸收、降解。提示脂肪干细胞与可吸收明胶海绵具有良好的组织相容性，可吸收明胶海绵可以作为脂肪干细胞的生物载体。

BACKGROUND:Adipose-derived stem cells are easily col ected and abundantly cultured, which can proliferate rapidly when being cultured in vitro. With multi-directional differentiation potential, adipose-derived stem cells are expected as seed cells for tissue engineering.
OBJECTIVE:To isolate, culture and identify of adipose-derived stem cells from Sprague-Dawley rats in vitro.
METHODS:The subcutaneous adipose tissue was obtained from the iliac region of rats under the aseptic condition, and then was digested with 0.075%type Ⅰ col agenase and cultured in vitro. The morphology and proliferation characteristics of the cells were observed under an inverted phase contrast microscope. The third passage was put into gauge for growth curve by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, and the cells were also identified by CD44, a stem cellmarker, with immunofluorescence staining. Adipose-derived stem cells were induced and differentiated into adipocytes in Dulbecco’s modified Eagle’s medium/Ham’s nutrient mixture F-12 containing 10%fetal bovine serum, dexamethasone and insulin, and then the cells were identified with oil red“O”staining. Adipose-derived stem cells were induced and differentiated into neural cells, and then the cells were identified with immunohistochemical staining.
RESULTS AND CONCLUSION:The growth curve of adipose-derived stem cells was opposite-like“S”shape, and it strongly expressed CD44 that can designate a stem cell. The passage cells were exposed to a defined medium for adipocyte differentiation, and then could be stained with oil red. After being induced and differentiated into nerve cells, the cells expressed neuron-specific enolase. The adipose-derived stem cells of Sprague-Dawley rats are characterized by easy isolation, culture and proliferation in vitro, expressing related phenotypes of mesenchymal stem cells, as wel as induction and differentiation under certain conditions.

体外扩增传代对骨髓间充质干细胞归巢相关因子的影响

背景：间充质干细胞移植后在体内的归巢能力，会随着供体细胞在体外的培养传代而下降，从而严重影响了间充质干细胞对靶组织的修复作用。
　　目的：探讨体外扩增传代对人骨髓来源间充质干细胞归巢相关因子的影响。
　　方法：应用 Ficol 密度梯度离心法将间充质干细胞自骨髓中分离出来，利用其贴壁生长的特性加以纯化，在常规培养条件下培养至第7代，观察原代及第3，5，7代细胞的形态学特点。采用MTT法检测第3，5，7代间充质干细胞的生长增殖特性，并绘制生长曲线。Real-time PCR法检测第3，5，7代间充质干细胞中归巢相关因子CXCR4、CXCR6、CXCL12(SDF-1)、CD44的表达，以2-△△Ct计算各代细胞目的基因的相对表达量，比较不同代次间充质干细胞中各细胞归巢因子表达的差异。
　　结果与结论：采用密度梯度离心法自骨髓获得单个核细胞，将其贴壁培养传至第3代，可获得纯度较高的间充质干细胞。其在体外的增殖能力较强，但随着传代扩增次数增加，形态从细长梭形逐渐缩短变宽，增殖速率、总体扩增倍数以及CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等细胞归巢因子的表达亦随传代培养而呈下降趋势。结果显示，间充质干细胞的归巢能力随扩增传代而逐渐下降，其机制可能与CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等归巢相关因子在间充质干细胞中的表达水平下降有关。

脊髓损伤后运动功能恢复中粒细胞集落刺激因子的作用

背景：近期有文献报道了粒细胞集落刺激因子在脑梗死模型及急性脊髓损伤模型中的神经保护作用，但应用的动物模型均非击打模型，与人体脊髓损伤的病理生理过程存在一定差距。
　　目的：观察粒细胞集落刺激因子对Al en’s脊髓损伤大鼠模型运动功能恢复的影响。
　　方法：使用改良Al en’s法制作T10节段Wistar大鼠脊髓损伤撞击模型，随机分为2组，粒细胞集落刺激因子组应用粒细胞集落刺激因子治疗，vehicle组注射等剂量PBS。于造模后第1，7，14，21，28，35天分别应用BBB运动功能评分法和Rivlin斜板实验评估大鼠运动功能，造模后第7，14，21，28，35天使用网格步行实验评估大鼠四肢肌力。
　　结果与结论：所有大鼠造模后均出现后肢瘫痪症状。造模后第7，14，21，28，35天粒细胞集落刺激因子组BBB运动功能评分及Rivlin斜板实验评分高于vehicle组(P<0.05-0.01)，造模后第14，21，28，35天粒细胞集落刺激因子组网格行走实验错误数低于vehicle组(P<0.05-0.01)，结果显示，粒细胞集落刺激因子治疗后大鼠运动功能及四肢肌力恢复情况均优于vehicle组。提示粒细胞集落刺激因子疗法对脊髓损伤起到了积极的治疗效果。

阳光灿烂的向日葵

沐浴在晴朗灿烂的阳光下，面向太阳绽放出美丽的花朵，具有光艳的形象和性格，正如她的花语明朗一样，凡是受到这种花祝福的女孩子，就会有火焰般的热情，就会天天笑得阳光灿烂，就会幸福快乐地生活着每一天，在法语中这花的意思是掉在地上的太阳。
　　你知道这花叫什么名字吗？她就是向阳而生、明媚温暖的向日葵呀。
　　她可是你童年深刻了解的第一朵花儿？
　　我认识向日葵是从上小学开始的，她是美术课老师教我们画的第一朵花。

本期推荐阅读

传统常规的关节软骨修复方法如关节镜下微骨折术及骨软骨移植等，一般只能缓解关节疼痛、改善关节功能、延缓关节退变进程，临床疗效有限。目前，基于细胞移植和新型支架材料的软骨组织工程已经成为当前研究解决关节软骨损伤的热门领域。