中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70融合蛋白的克隆与表达及其活性鉴定
目的:为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题,拟克隆入骨保护素功能区与分枝杆菌热休克蛋白70肽段融合基因,进一步观察其在大肠杆菌中的表达并鉴定活性.方法:实验于2006-05/2007-09在首都医科大学免疫学系实验室完成.采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因,构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒.以此为模板,聚合酶链反应扩增骨保护索-热休克蛋白70功能区DNA,构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70,将其转化E.coli.BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷诱导后收集菌体蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白的表达,以破骨细胞生长抑制实验及抑炎实验检测该融合蛋白的生物学活性.结果:①实验终获得人骨保护素全长基因片段,人骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA片段已被正确插入到pET-28a载体中,转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白.②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示约在Mr22000处有蛋白的超表达,而未诱导菌株未发现有此条带.③蛋白免疫印迹检测表明,融合蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合.④破骨细胞生长抑制实验表明,该融合蛋白能够减少破骨细胞的生成数量,具有体外抑制骨破坏的生物活性.⑤抑炎实验表明,融合蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应程度的作用,说明融合蛋白中热休克蛋白70具有抑制炎症的生物学活性.结论:在E.coli.BL21(DE3)中表达了骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白,体外功能实验证实该融合蛋白具有一定的生物学活性.
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血管紧张素(1~7)受体mas稳定转染细胞株的构建及mas激活对于ERK1/2信号通路的调节
背景:近几年有关mas基因与心血管疾病的关系成为研究的热点,但有关血管紧张素(1~7)-mas轴在调节心血管功能及在心血管疾病发病过程中发挥作用的信号转导途径还不甚清楚.目的:实验拟构建血管紧张素(1~7)受体mas稳定转染细胞株及mas基因表达和活化对ERK MAPK信号通路的影响.设计、时间及地点:重复测量设计,实验于2006-07/2008-03在首都医科大学生物化学与分子生物学实验室完成.材料:人mas全长cDNA,原核表达载体pEGFP C2,菌株E.coli DH5 α,COS-7细胞均由s本实验室保存.方法:将mas cDNA克隆到真核表达载体pEGFP C2中,构建重组质粒pEGFP-mas.再将重组质粒转染COS-7细胞,筛选稳定表达细胞株.主要观察指标:经血管紧张素(1~7)刺激后,检测稳定转染mas的COS-7细胞中ERK磷酸化水平变化.结果:与对照组相比,稳定转染mas的COS-7细胞经血管紧张素(1~7)刺激后,ERK磷酸化水平显著升高(P<0.05).p-ERK水平在10 min内达到高值,并且随着血管紧张素(1~7)浓度的增加(10-12~10-6mol/L),P-ERK水平逐渐升高.结论:成功构建mas稳定表达细胞模型,并显示出血管紧张素(1~7)受体mas活化可以引起下游ERK1/2信号通路的激活.
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肥胖青年平地自然行走时足底压力分析与步态特征
目的:观察肥胖青年人平地自然行走过程中左右双足平均峰力值、受力间期、冲量等参数特征,探索足底压力参数的分布规律.方法:实验于2007-11在河北师范大学体育学院步态分析室进行.抽取河北师范大学20~22岁、体质量指数>28 kg/m2的肥胖学生94名,采用比利时Footscan USB2平板式足底压测试系统对其进行动态足底压力测试.所有受试者测试期间足踝关节活动正常,测试时均脱鞋袜,以个人平常步态自然行走,每人行走3次,记录动态足底压力,计算足底各个区域的平均峰力值、受力间期、冲量等参数特征.结果:94名受试者进入结果分析.①平均峰力值:足部大受力部位在足跟和前掌第2,3跖骨头,各部位大压力由大到小依次为足跟、第2,3,1跖骨、足弓、第4跖骨、第1趾骨、第5跖骨、第2~5趾骨.②受力间期:足部大受力间期部位在前掌第3,4跖骨头,各部位受力间期由大到小依次为第3,4,2,1跖骨、第5趾骨、足弓、第1趾骨、足跟、第2~5趾骨.③冲量:足底所受冲量大的部位是足跟内侧,各部位所受冲量由大到小依次为足跟内侧、第2跖骨、足跟外侧、第3,1,4跖骨、足弓、第1趾骨、第5跖骨、第2~5趾骨.④肥胖青年行走时重心运动轴线在跟部和第1~3跖骨头的范围内,但压力中心移动速度过快且不均匀.结论:①肥胖青年平地自然行走时的足底应力-时间曲线呈明显的双峰型.②肥胖人群足底各区域所受地面反作用力的冲量大,所以其鞋的设计应尽可能增大与脚的接触面积,进而增加足与地面的接触时间,达到减小冲击力值的目的.③肥胖青年行走时重心运动轴线符合正常人体生理规则,前脚掌处压力中心过于密集,若长期大负荷刺激第2,3跖骨头处易形成胼胝体.
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不同给药方案阿仑膦酸钠治疗绝经后骨质疏松的效果及不良反应的比较:6个月随访
目的:阿仑膦酸钠是临床常用的防治骨质疏松药物.实验拟观察不同剂量及用法的阿仑膦酸钠(固邦)对绝经后骨质疏松患者骨密度的影响,以及不良反应的发生情况.方法:①对象:选择2007-05/12在河北医科大学第三医院门诊就诊绝经后妇女100例,年龄46~59岁,绝经年限1~10年.阿仑膦酸钠均为石家庄欧意药业生产,70 mg批号:152070301,10 mg批号:007070501.②分组及给药:将100例患者随机分为2组,分别给予70 mg/周及10 mg/d阿仑膦酸钠口服6个月.③评估:服药前后应用法国MEDILEINK公司Osteocore3二维DEXA骨密度仪测定L2~4前后位、髋部、股骨颈和大转子内侧骨密度,骨密度均值增加0~25%为有效;观察服药前后不良反应及服药前后肝肾功能变化.结果:100例患者全部进入结果分析.①骨密度测定:两组治疗后各部位骨密度均增加(P<0.01),其中L2~4:70 mg/周组有效47人,总有效率94%;10mg/d组有效46人,总有效率92%.股骨颈:70mg/周组有效43人,总有效率86%;10mg/d组有效41人,总有效率82%.大转子内侧:70mg/周组有效44人,总有效率88%:10mg/d组有效43人,总有效率86%.②不良反应:主要为上腹部不适,70mg/周组发生1例,10mg/d组发生6例.③肝肾功能:两组治疗前后肝肾功能无变化.结论:阿仑膦酸钠70mg/周及10mg/d均可有效增加骨密度,但70mg/周的给药方案不良反应少.
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大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体.方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara):真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠:大肠杆菌TOP10购自英俊公司:清洁级新生一两天SD大鼠2只.②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞.Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长.将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认.测序正确后抽重组质粒,bgl Ⅱ和pst Ⅰ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体.结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞.②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致.③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中.结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体.为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础.
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钩骨第5掌腕关节面的解剖学特征
背景:依据钩骨第5掌腕关节面的形态及功能特点,可否能成为手骨缺损的关节移植供区?目的:基于钩骨第5掌腕关节面关节移植供区的解剖学特征,提供其移位修复和重建手功能的解剖学参数.设计、时间及地点:于2007-07/12在上海交通大学附属第六人民医院进行非随机对照实验.材料:22侧冷冻成人手腕标本(男14侧,女8侧;左10侧,右12侧),由上海交通大学附属第六人民医院显微外科研究所实验室提供.方法:解剖观测钩骨第5掌腕关节面和近节指骨基底关节面的形态、结构特点,测量各关节面的尺桡径、掌背径、关节面凹面的深度及关节面面积.主要观察指标:比较钩骨第5掌腕关节面和近节指骨基底关节面在形态、结构特点、面积及各径线长度的相似度.结果:①钩骨第5掌腕关节面呈类椭圆形,中央凹陷,尺桡径短,掌背径长.各近节指骨底关节面形态近似,近节指骨基底关节面尺桡径长,掌背径短.②钩骨第5掌腕关节面的尺桡径和示、中指近节指骨基底关节面的掌背径相比,差异无显著性(P>0.01):掌背径和近节指骨基底关节面的尺桡径相比,差异显著(P<0.01):凹面深度和拇、示、中指近节指骨基底关节面的凹面深度相比,差异无显著性(P>0.01);面积和环指近节指骨基底关节面面积相比,差异无显著性(P>0.01).结论:钩骨第5掌腕关节面可作为一个新的良好关节供区,用于修复和重建各近节指骨基底关节面.
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U937巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立
目的:建立稳定的人类单核细胞源性泡沫细胞模犁,对研究动脉粥样硬化有重要的意义.实验拟以人类单核细胞株U937体外细胞培养的方法,模仿体内生理过程,建立一个新的人单核细胞源性泡沫细胞模型.方法:实验于2006-03/09在承德医学院基础医学研究所进行.①实验材料:实验中应用的U937细胞株由中科院细胞研究所提供.②实验方法:将16瓶密度为109L-1的U937细胞悬液分成对照组8瓶和实验组8瓶,实验组培养液中含100 μg/L佛波酯、100mg/L低密度脂蛋白胆固醇,对照组细胞培养液中含100mgmg/L低密度脂蛋白胆固醇,不加佛波酯,置于37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度培养箱培养72 h.③实验评估:收集细胞涂片采用油红O染色观察细胞形态,并测定细胞内总胆固醇含量.结果:实验组细胞内可见大量油红O染色阳性的脂质颗粒,对照组细胞形态无变化,细胞内无脂质颗粒.实验组细胞内总胆同醇高于对照组,两组差异具有显著性意义[(520.13±37.52),(39.47±9.26)mg/g,t=35.18,P<0.001].结论:U937巨噬细胞源性泡沫细胞模型建立成功.
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构建伴高血压与胰岛素抵抗的大鼠模型
目的:研究表明,长期食用以脂肪为代表的高热量饮食可导致胰岛素抵抗,而高盐饮食和高血压的发生密切相关.以高脂高盐饮食诱导Wistar大鼠建立伴高血压与胰岛素抵抗大鼠模型.方法:实验于2006-10/2007-03在泰山医学院生命科学研究所完成.①实验分组:选用SPF级雄性Wistar大鼠24只,8周龄,体质量140g左右,随机数字法将大鼠分为对照组和胰岛素抵抗组,每组12只.②实验方法:实验大鼠适应性饲养7 d后,对照组继续以普通标准大鼠饲料喂养,胰岛素抵抗组则以高脂饲料取代普通标准大鼠饲料喂养,两组均饮用大鼠专用纯净水,共16周.③实验评估:实验过程中每周测食量、水量和体质量,每4周测1次空腹血糖和尾动脉血压.实验结束前,取血测空腹血浆胰岛素并进行高胰岛素-正常血糖钳夹实验判定胰岛素敏感性.结果:24只大鼠全部进入结果分析.①实验前8周两组大鼠食量差异无显著性意义(P>0.05),8周后胰岛素抵抗组食量较对照组有所下降(P<0.05);实验全程中胰岛素抵抗组饮水量高于对照组(P<0.01):两组大鼠体质量差异无显著性意义(P>0.05).②喂饲高脂高盐饲料16周后,与对照组相比,胰岛素抵抗组尾动脉血压升高(P<0.01);葡萄糖输注速率降低(P<0.05);胰岛素抵抗组空腹胰岛素浓度高于对照组(P<0.05);两组空腹血糖差异无显著性(P>0.05).结论:长期高脂高盐饮食可成功诱导出伴高血压胰岛素抵抗大鼠模型.
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大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响
背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.
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构建卵巢切除模型大鼠睑板腺腺泡上皮细胞脂质的变化
目的:建立人工绝经期模型,在降低雌激素水平的状态下,观察卵巢切除对睑板腺腺泡上皮细胞脂质的影响.方法:实验于2006-08/2007-05在河北工程大学医学院人体解剖学与组织胚胎学教研室完成.①实验材料:56-60 d SD雌性大鼠72只,体质量200~240g:苏丹Ⅲ为天津科密欧化学试剂厂产品.②实验分组及过程:随机对72只青春期SD雌性大鼠分为3组:手术组、假手术组和正常组,每组24只.分别饲养2,4,6,8周后,用2%荧光索钠滴入大鼠结膜囊内,瞬目后在裂隙灯显微镜下用钴蓝光扫描照射观测大鼠的泪膜破裂时间,然后麻醉下颈椎脱臼法处死大鼠.③实验评估:采用放射免疫分析方法检测血清雌二醇水平;采用组织化学苏丹Ⅲ染色方法对睑板腺腺泡上皮做脂质染色阳性和强度检测.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.结果:①手术组随术后时间的延长血清雌二醇水平逐渐降低,术后第4,6,8周低于正常组和假手术组(分别P<0.05,P<0.01,P<0.01).②手术组泪膜破裂时间于术后第4,6,8周明显缩短,与正常组、假手术组之间比较差异有显著性(P值均<0.05).③手术组苏丹Ⅲ染色强度随时间延长逐渐减弱,术后第6周、第8周与正常组和假手术组之间比较差异有统计学意义(分别为P<0.05,P<0.01).④血清雌二醇水平与泪膜破裂时间、苏丹Ⅲ染色强度有显著性相关关系(相关系数分别为r=0.9957,P=0.004 3:r=0.972 3,P=0.0036).结论:卵巢切除后血清雌二醇水平降低,可造成睑板腺腺泡上皮细胞脂质减少,是导致睑板腺机能障碍的原因之一.
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钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞超微结构的影响
目的:钙通道阻滞剂可诱导瘢痕成纤维细胞向变圆且相互分离的方向改变,导致胶原蛋白的分泌减少.实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞超微结构的影响.方法:实验于2006-03/06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成.①实验材料:2月龄清洁级Wistar大鼠10只,体质量200~220 g.②实验方法:制作双侧坐骨神经损伤模型,术后2周取损伤处神经瘢痕,按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞,实验所用细胞为4~8代,分两组,维拉帕米组加入含维拉帕米的DMEM培养液,浓度为100 μmol/L,对照组不加药.③实验评估:48 h后制备扫描电镜和透射电镜标本,观察细胞超微结构的变化.结果:维拉帕米组神经瘢痕成纤维细胞呈球形或椭圆形,细胞突起细小,胞间网状物质少,胞浆中粗面内质网萎缩且数量减少,囊泡丰富:对照组成纤维细胞呈梭形或多角形,细胞间基质较多,细胞浆内粗面内质网及核糖体丰富,囊泡少见.结论:钙通道阻滞剂能使体外培养神经瘢痕成纤维细胞形态趋于球形变,可能对胶原蛋白的合成和分泌具有抑制作用.
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同型半胱氨酸对体外培养人单核细胞株细胞TNFSF4基因及白细胞介素10因子表达的影响
背景:炎症反应是高同型半胱氨酸血症加速动脉粥样硬化潜在的分子机制之一,但其具体机制还有待阐明,TNFSF4基因及白细胞介素10因子是动脉粥样硬化的炎症相关因子,两者与高同型半胱氨酸血症的关系报道较少.目的:实验拟验证同型半胱氨酸对体外培养人单核细胞株细胞TNFSF4基因及白细胞介素10因子表达的影响.设计、时间及地点:随机对照体外细胞实验于2007-07/12在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学实验室完成.材料:THP-1单核细胞株由本室提供;高同型半胱氨酸、地塞米松和维生素D3由Sigma公司提供.方法:在由0.1 μmol/L佛波脂诱导分化的THP-1单核细胞中加入200 μmol/L的高同犁半胱氨酸培养24,48,72 h,将各时间点细胞上清液及裂解液作为条件培养基,加入经地塞米松及维生素D3作用6 d后的培养瓶中继续培养24 h.分为空白对照组;200 μmol/L高同型半胱氨酸组;地塞米松+维生素D3组;24 h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组;48 h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组;72 h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组.主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测TNFSF4基因mRNA表达水平差异;应用ELISA法检测其白细胞介素10蛋白表达的改变.结果:与空白对照组相比,高同型半胱氨酸处理24 h TNFSF4基因mRNA表达变化不明显;48,72 h TNFSF4基因mRNA表达显著增加;与地塞米松+维生素D3组相比,200 μmol/L高同型半胱氨酸组各时间点白细胞介素10蛋白表达水平显著降低.结论:同型半胱氨酸可致THP-1巨噬细胞TNFSF4基因mRNA表达水平增加,同时致其白细胞介素10蛋白表达水平降低.
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老年男性2型糖尿病患者骨密度变化与不同病程及体质量的相关性
目的:多数研究认为1型糖尿病患者骨质疏松较为普遍且严重,而2型糖尿病患者骨密度与正常人相比是否有差异目前仍有争议.以不同病程、不同体质量为条件,分析老年2型糖尿病男性患者的骨密度变化与相关影响因素的关系.方法:①试验对象:选择2005-01/2006-01在解放军总医院内分泌科住院的老年2型糖尿病男性患者97例,年龄65~76岁;糖尿病病程1~360个月,体质量指数(25.14±2.89)kg/m2,均符合1997年美国糖尿病协会(ADA)的2型糖尿病诊断标准.患者对试验及治疗均知情同意.排除影响骨代谢的其他疾病及偏瘫、长期卧床、局部制动等患者.②试验方法:依据亚洲和中国2002年体质量指数标准分为正常体质量(n=20,体质量指数:18.5~23.9 kg/m2)、超重(n=45,体质量指数:24.0~27.9 kg/m2)和肥胖(n=32,体质量指数≥28.0 kg/m2);按照糖尿病病程分为≤10年和>10年.所有患者均测定空腹血糖、早餐后2h血糖、血脂、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白,并同时应用双能X射线骨密度仪进行腰椎(L2~4)、左侧股骨颈、大转子、华氏三角区的骨密度测定.③实验评估:通过测定数值确定患者是否合并骨质疏松.在对数据进行分析时,根据97例患者的相关数据,进行以不同体质量分组分析,以不同病程分组分析,以是否有骨质疏松分组分析.参照1994年世界卫生组织颁布的针对白人妇女的骨质疏松诊断标准分为骨质疏松组与非骨质疏松组,对可能的危险因素进行分析.结果:纳入老年2型糖尿病男性患者97例,均进入结果分析.①以不同体质量分组分析结果:老年男性2型糖尿病患者中各部位骨密度均为肥胖组>超重组>正常体重组,腰椎、大转子部位组间比较差异有显著性意义(P<0.05).②以不同病程分组分析结果:糖尿病病程分组后各部位骨密度组间比较差异无显著性意义(P>0.05).③以是否有骨质疏松分组分析结果:对骨质疏松可能危险因素进行分析发现只有体质量指数在两组间比较差异有显著性意义(P<0.05).结论:老年男性2型糖尿病患者各部位骨密度随体质量指数增加而增加,与糖尿病病程无相关性.
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内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠心肌细胞对苯福林诱导的过度增殖反应
目的:通过RNA定量检测和细胞面积测定两种方法,观察内皮型一氧化氮合酶基因敲除与野生型新生小鼠的离体心肌细胞对心肌肥大诱导因子反应性的差异.方法:实验于2007-08在顺德职业技术学院医学系实验研究中心完成.①实验材料:出生1~3 d C57BL/6品系内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠和野生型小鼠,雌雄不拘.②实验方法:对小鼠心肌细胞及成纤维细胞进行培养,72 h后分为实验组和对照组,将肾上腺素能受体激动剂苯福林掺入培养心肌细胞,另设空白对照组:在基础培养液中加入与实验组等量的DMEM.③实验评估:采用DNA、RNA定量检测、细胞面积测定方法,在细胞水平观察内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠和野生型小鼠心肌细胞增殖、肥大反应之间的差异.结果:①培养的心肌细胞在加入苯福林72 h后于显微镜下观察两组细胞均呈椭圆形、长菱形.②与对照组相比,实验组心肌细胞与成纤维细胞RNA检测及荧光值均增高(P<0.05);空白对照组心肌细胞与成纤维细胞RNA检测荧光值均较实验组和对照组tE(P<0.05).③与空白对照组相比,实验组和对照组心肌细胞与成纤维细胞面积荧光值均增高(P<0.05);其中实验组心肌细胞面积荧光值较对照组高(P<0.05).结论:内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠其离体心肌细胞在心肌肥大诱导因子刺激下产生过度增殖反应.
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两种台阶实验间接推算和直接测试大摄氧量的比较
目的:通过两种间接测试方法和直接测试方法比较及其相关性分析,拟找出大学生大摄氧量更方便、有效的测定方法.方法:①对象:2003-05/09同济大学普通大学生345名,男218名,女127名.②实验过程:实验时间持续4个月,同一批测试对象测试时,测试时间间隔1周,所有对象都参加间接测试方法,即两种台阶实验(35,40cm一步台阶实验法,二步18 cm台阶实验法),随机抽取其中16名男生进行直接法测试.③评估:Polar表记录测试前起始时以及测试整个过程中的心率,比较两种台阶测试法和直接测试法测试大摄氧量结果,并进行相关性分析.结果:参加两种台阶实验345名和参加直接测试法16名进入结果分析.①两台阶实验前男女生心率差异无显著性(P>0.05),一步台阶实验过程中平均心率和高心率高于二步台阶实验(P<0.05).②小样本实验表明,两种台阶实验结果与直接法相比较,相差不大(P>0.05),但二步台阶实验与直接测试法结果相关性高,r=0.46(P<0.05),而一步台阶相关性低(r=0.16,P>0.05).③两台阶实验之间结果相比较,男生测试结果具有高度的相关性(r=0.73,P<0.001),且其差异无显著性(P>0.05),而女生两种方法的测试结果差异均具有显著性(P<0.001),且相关性为低度相关(r=0.33,P>0.05).结论:间接测试方法还需要进一步加以改进,但是从测试效率和精确性上相比较而言,两步台阶更加适用于大样本体质测试调查与研究.
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颈伸肌群对颈椎间盘和小关节内压力变化的影响
目的:颈椎周围肌群是维系颈椎关节稳定和功能的动力系统,其性能改变对颈椎病发生发展具有重要意义.实验拟观察新鲜颈椎标本椎问盘和小关节内压力变化,探讨颈周肌群在颈椎发病机制中的作用.方法:①实验材料:实验于2005-03107在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院推拿生物力学实验室完成.5具新鲜尸体颈椎结构标本由原解放军第一军医大学提供.②实验方法:将C3~4、C4~5、C5~6、C6~7的颈椎间盘前缘和关节突关节C3~4、C4~5、C5~6、C6~7等处同时埋置8个微型压力传感器,并应用模拟颈伸肌正常生理段性能的弹簧.③实验评估:观察颈椎结构包括颈伸肌等在颈椎活动时的压力变化情况.结果:随前屈角度的增加,颈椎间盘内的压力和颈伸肌的拉力明显增加.而随后伸角度的增加,小关节内的压力明显增加.加载模拟伸肌后,椎间盘和小关节的压力明显减低.结论:颈伸肌群分担了一部分颈椎载荷,屈颈几率和强度的增加是颈椎病发生发展的关键因素.
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脱氢表雄酮对体外培养大鼠成骨细胞和骨保护素的影响
背景:脱氢表雄酮主要来自肾上腺皮质,在相关外周组织中转化为雄激素或雌激素而发挥间接的生物学作用.目的:实验拟验证脱氢表雄酮促进成骨细胞增殖的作用及其机制.设计、时间及地点:分组对照观察,于2006-01/2007-02在上海交通大学附属第六人民医院和上海复旦大学放射医学研究所合作完成.材料:1日龄SD新生大鼠10只,雌雄不拘.脱氢表雄酮为美国Sigma公司产品.方法:体外分离培养SD大鼠成骨细胞,取传l代细胞,分别给予(1×1-5,1×10-7,1×10)mmol/L脱氢表雄酮培养72h,以1×108 mmol/L雌二醇为阳性对照,另设空白对照组.主要观察指标:以细胞形态学和碱性磷酸酶染色进行成骨细胞鉴定.应用光镜、四甲基偶氮唑盐法检测细胞的生长和增殖.茜素红染色观察成骨细胞矿化结节形成功能;同时双抗体夹心ABC-ELISA法测定不同浓度脱氢表雄酮培养液中对骨保护素浓度的影响.结果:①原代培养细胞碱性磷酸酶染色成阳性鉴定为成骨细胞.②不同浓度脱氢表雄酮组成骨细胞增殖能力均有上升,其中以1×107mmol/L脱氧表雄酮组显著(P<<0.01),其作用和雌二醇相似(P>0.05).③不同浓度脱氢表雄酮组碱性磷酸酶的活性均升高.亦以1×107mmol/L脱氢表雄酮组显著(P<0.01),1×10-7mmol/L,1×1-9mmol/L脱氢表雄酮的作用和雌二醇和相似(P>0.05).④1×10-9mmol/L脱氢表雄酮组单位细胞数的碱性磷酸酶活性高于空白对照组(P<0.05).⑤不同浓度脱氧表雄酮组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P<0.01),其作用和雌二醇相似.⑥l×109mmol/L脱氢表雄酮组培养72 h时骨保护素反应活跃(JD<0.01),与成骨细胞增殖能力呈正相关.结论:脱氢表雄酮能够促进SD大鼠成骨细胞生长和增殖,浓度适当时与雌二醇无显著差别,佳浓度为1×107~109)mmol/L,其作用可能与刺激骨保护素因子有关.当浓度升高至1×10-5mmol/L时,并不利于成骨细胞的增殖.
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人肺上皮细胞感染呼吸道合胞病毒后核内活性因子κB与诱导型一氧化氮合酶的表达
目的:呼吸道合胞病毒感染呼吸道上皮细胞后,诱导细胞过度表达活性递质.实验拟观察呼吸道合胞病毒感染人肺上皮细胞A549后核内活件核因子κB,诱导型一氧化氮合酶mRNA和蛋白、一氧化氮和丙二醛表达的变化.方法:实验于2006-12/2007-05在安徽医科大学基础医学院病原与免疫学实验中心完成.①实验过程:将冻存的病毒株复苏后经Hep-2细胞增殖.用呼吸道合胞病毒感染体外培养的A549细胞,分别于感染4,8,16,24h后收集细胞和细胞培养上清.以未感染病毒的细胞为正常对照组.②实验评估:反转录聚合酶链反应检测诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的变化:免疫印迹法(Western-Blot)分别检测核内活性核因子κB、诱导型一氧化氮合酶蛋白的变化:用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法分别检测细胞培养上清一氧化氮和丙二醛的表达.结果:①A549细胞中核内活性核因子κB有基础表达,经由呼吸道合胞病毒感染后,核内活性核因子κB表达升高.且随着感染时间的延长而增加.②呼吸道合胞病毒感染A549细胞后,诱导型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表达均升高且有时间依赖性,24 h的诱导犁一氧化氮合酶mRNA表达量是基础表达量的近12倍,诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达亦显著高于正常对照组.核内活性核因子κB与诱导型一氧化氮合酶的mRNA和蛋白升高表达呈正相关.③呼吸道合胞病毒感染能促进A549细胞培养上清中一氧化氮和丙二醛的表达升高,24 h内细胞上清中的一氧化氮呈缓慢升高变化.结论:在呼吸道合胞病毒感染A549细胞的炎性反应中核内活性核因子κB升高,与诱导型一氧化氮合酶基因和蛋白的上升表达呈正相关.
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构建组织工程气管上皮细胞和成纤维细胞联合培养的模式:与常规培养的比较
目的:构建体外组织工程化气管种子细胞的共培养模式,并与常规培养相比较,为细胞复合材料构建组织工程化气管奠定研究基础.方法:实验于2006-0512007-05在解放军第四军医大学唐都医院呼吸科实验室完成.①实验材料:1个月龄雄性健康新西兰兔3只,体质量(250.00±0.75)g.②实验过程:联合培养模式:分离气管上皮细胞和成纤维细胞,联合培养7~10 d后,根据两种细胞对胰酶浓度耐受性不同的特性,A孔中加入0.5 g/L胰酶消化,用体积分数为0.05的胎牛血清的培养液DMEM重悬细胞后移入培养板B孔中(成纤维细胞):A孔中再次加入2.5 g/L胰酶继续消化后,用K-FSM培养液重悬细胞后移入培养板C孔中(气管上皮细胞).常规培养法:分别进行气管上皮细胞分离培养和成纤维细胞分离纯化.③实验评估:观察细胞生长曲线与四甲基偶氮唑盐检测细胞的生长状态,并与常规培养的细胞进行比较.结果:①细胞生长状态:联合培养的两种细胞生长状态良好,A孔加入胰酶消化后,细胞间隙增大;B孔细胞呈现长梭形,未见铺路石状细胞;C孔出现片状生长的铺路石状细胞,未见长梭形细胞.②细胞生长曲线:分离后的细胞与常规方法培养的细胞生长曲线一致.③细胞增殖情况:四甲基偶氮唑盐检测联合培养组细胞增殖与常规方法培养差异无显著性(P<0.05).结论:联合培养模式较常规方法更加简便易行,可以作为一种较好的气管组织工程种子细胞体外培养模式得到应用.
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一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响
目的:研究表明,白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用,但其是否可抑制人的软骨细胞增殖?这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚.实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响.方法:选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊梓骨病科住院的膝骨关节炎患者8例.所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准,排除其他疾病(创伤性、风湿性及感染性)所导致的骨关节炎.所有患者均在术前告知,并签有试验知情同意书.分离培养关节软骨细胞,将不同浓度(0,1,10,100 μg/L,其中0 μg/L作为对照)白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24,48,72 h,一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素,与白细胞介素1β共同作用72 h,收集细胞上清液,一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测,并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段;四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖;xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1,基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达.结果:①不同时间点1,10,100 μg/L白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比,差异显著(JP<0.05,P<0.01);相同浓度白细胞介素1β在24,72h的吸光度值相比较,差异显著(P<0.01).②白细胞介素1β和氨基胍(100 μmol/L)共同作用软骨细胞72 h后,各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比,差异显著(P<0.01).③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达,并呈剂量依赖关系.④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01),而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到.结论:白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖,诱导基质金属蛋白酶表达,这些影响可被氨基胍抑制,白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用.
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干扰素γ与甲强龙联合应用对人胚肺成纤维细胞增殖的影响
目的:目前间质性肺疾病的发病机制尚不完全清楚.实验拟进一步验证干扰素γ与甲强龙联合应用对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,探究可否成为间质性肺疾病的有效治疗方法之一.方法:实验于2005-07/2006-05在河北医科大学细胞研究室完成.①实验分组:选用第8代人胚肺成纤维细胞进行体外培养.参考两药人体常用药物剂量范围,选取细胞单独用药浓度将实验分为对照组、甲强龙组(15 mg/L)、干扰素γ(250,500,750,1000.1250 U/mL)组及甲强龙与γ干扰素联合应用组.②实验方法:不同浓度的干扰素γ与甲强龙单独或联合应用于人胚肺成纤维细胞48 h.③实验评估:应用四甲基偶氮唑盐法观察人胚肺成纤维细胞的抑制率;应用流式细胞技术观察人胚肺成纤维细胞的细胞周期变化并计算增殖指数;应用免疫细胞化学方法检测增殖细胞核抗原的表达.结果:①甲强龙和干扰素γ对人胚肺成纤维细胞均有抑制作用(P<0.05),两药联合应用具有相加乃至协同作用(Q>0.85).②干扰素γ主要作用于G1和G2M期,甲强龙作用于S期,两药联合应用后细胞的增殖指数较两药单独应用降低(P<0.05).③甲强龙与不同浓度干扰素γ单独或联合应用均具有抑制人胚肺成纤维细胞增殖细胞核抗原表达的作用(P<0.05),两药联合应用抑制增殖细胞核抗原表达作用增强(P<0.05).结论:甲强龙及干扰素γ均可抑制人胚肺成纤维细胞增殖,两药联合应用具有协同作用.干扰素γ与甲强龙联合应用的抗纤维化效果可能优于两药单独应用.
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黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞黏附能力及细胞核转录因子κB表达的影响
目的:采用人脐静脉内皮细胞缺氧复氧模型模拟器官组织缺血-再灌注所诱导的血管改变,观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤血管内皮细胞与中性粒细胞黏附及细胞核转录因子κB表达的干预作用.方法:实验于2005-0912006-05在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所细胞生物工程实验室进行.①实验材料:新生儿脐带(由青岛大学医学院附属医院妇产科提供,产妇及其家属知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准).②实验过程及分组:人脐静脉内皮细胞原代培养,传至3代后,随机分为3组.对照组:常规培养:缺氧/复氧组:先缺氧处理1 h,再复氧1 h;药物干预组:在培养液中加入终浓度分别为20,40,80 mg/L的黄芪甲苷预处理,12 h后进行缺氧/复氧处理.③实验评估:分别用硫代巴比妥法和酶联免疫吸附试验测定细胞培养液中丙二醛的含量和细胞间黏附分子1浓度:免疫化学法测人脐静脉内皮细胞核转录因子κB的表达:虎红染色法检测人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞黏附.结果:①与对照组比较,缺氧/复氧组细胞培养液中丙二醛含量增多(P<0.01);随着黄芪甲苷预处理剂量的增加,丙二醛含量降低(P<0.01),呈剂量依赖性.②与对照组比较,缺氧复氧组人脐静脉内皮细胞核转录因子κB阳性细胞率、细胞培养液中细胞间黏附分子1浓度及中性粒细胞黏附率升高(P均<0.01);随着黄芪甲苷预处理剂量的增加,核转录因子κB表达阳性细胞率、中性粒细胞黏附率下降(P<0.05或P<0.01),细胞间黏附分子1浓度减少(P<0.01),呈剂量依赖性.结论:黄芪甲苷通过抑制缺氧复氧引起的血管内皮细胞核转录因子κB表达,减轻血管内皮细胞与中性粒细胞黏附,对缺氧/复氧损伤血管内皮细胞具有保护作用,且呈剂量依赖性.
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优化酶消化法体外培养及鉴定SD大鼠的成骨细胞
背景:体外成骨细胞的培养技术已经有了很大的发展.但是,在培养过程中,如果胰蛋白酶的消化时间过长,成骨细胞膜便易受到损伤;同时,传统的培养方法存在所获得的成骨细胞数量少、纯度不高等不足.因此,有必要探求一种新的体外培养成骨细胞的方法.目的:优化成骨细胞在体外条件下的培养方法并对其进行鉴定.设计:观察性实验.单位:暨南大学附属第一医院骨科.材料:实验于2007-03/05在暨南大学附属第一医院骨科完成.选用出生24h的SD大鼠8只,由南方医科大学实验动物中心提供,雌雄不拘.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.实验用Ⅱ型胶原酶由美国Sigma公司分装,胰蛋白酶为Sigma公司产品,碱性磷酸酶试剂盒由南京建成生物制品公司生产,SABC-1021试剂盒由武汉博士德公司进口分装.方法:挑选24h之内的新生SD乳鼠麻醉后处死,无菌条件下取出颅骨,剔除附着的结缔组织及骨膜,D-Hank's液冲洗3次.不强调对颅骨内、外膜,骨缝连接处等附着的结缔组织及颅顶的透明软骨结节等进行反复多次的剔除,避免操作时间过长影响细胞的存活率.结合0.1%Ⅱ型胶原酶来消化SD乳鼠颅骨,减少并严格控制胰蛋白酶的消化时间.组织块经0.25%胰蛋白酶消化20 min,继以0.1%Ⅱ型胶原酶消化60 min,收集上清离心,所得成骨细胞接种于培养瓶中并行"多次贴壁法"纯化.主要观察指标:应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、扫描电子显微镜观察成骨细胞形态特点.采用碱件磷酸酶Gomori钙钴法染色、钙结节茜素红法染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色方法进行鉴定成骨细胞生物学特性.结果:原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力,细胞呈多角形或梭形,具有多个突起可互相连接,细胞核较幼稚,细胞器丰富,具有典型的成骨细胞形态特征.体外培养的成骨细胞可分泌碱性磷酸酶,改良钙钴法染色阳性率可达90%,并可形成钙结节,Ⅰ型胶原染色阳性,具有成骨细胞的生物学功能.结论:实验用优化后的酶消化法分离、培养的SD大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞生物学特征.
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大鼠颈动脉球囊损伤局部A20基因转染后内皮细胞再生及血管超微结构的影响
目的:锌脂蛋白A20是核因子κB信号系统活化的产物.研究证实核因子κB的激活是球囊损伤动脉后血管狭窄发生的重要机制之一.实验拟脱察锌指蛋白A20对大鼠颈总动脉球囊损伤局部血管内皮再生和血管超微结构的影响.#方法:实验于2006-03/2007-06在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成.①实验材料:健康雄性SD大鼠42只,体质量350-400g.②分组及实验过程:采用随机数字表法将大鼠分为3组,每组14只.制备A20质粒DNA,建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型(假手术组只进行颈动脉结扎,不进行球囊损伤术);对照组:球囊损伤术后局部灌注Lipofectamine 2000 Reagent+TE缓冲液:治疗组:球囊损伤术后局部灌注Lipofectamine 2000 Reagent+TE缓冲液+pCAGGS-GFP/A20重组质粒.A20质粒DNA在球囊损伤大鼠颈动脉的局部转染.③实验评估:荧光显微镜观察A20在损伤动脉壁的转染效率;伊文思蓝染色法评估损伤后颈动脉内皮再生情况:透射电镜观察血管超微结构改变.实验过程对动物的处理符合动物论理学标准.结果:①球囊损伤术和A20转染治疗后2周,治疗组再内皮化百分比大于对照组(P<0.05).②假手术组大鼠颈动脉平滑肌细胞电镜下呈典型的"收缩表型";对照组球囊损伤后3d可见合成型细胞及过渡型细胞,7d血管平滑肌细胞表型发生明显改变,呈典型的"合成表型",治疗组术后7 d可见接近收缩型的血管平滑肌细胞.结论:局部转染A20基因可促进损伤血管内皮再生,抑制损伤处血管平滑肌细胞表型转化.
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精索静脉曲张管壁肌动蛋白和胶原的定性与定量分析
背景:目前关于心脏、大血管疾病的血管重塑及其病理学、分子生物学、免疫组织化学以及药物对血管重塑的影响有大量的研究报道,而对于精索静脉曲张的有关报道较少.目的:观察精索静脉曲张过程中管壁肌动蛋白和胶原的定性与定量的变化.设计、时间及地点:同期非随机对照观察,于2006-03/2007-06在重庆医科大学附属第一医院泌尿外科完成.对象:实验组精索静脉取自2006-03/2007-06在重庆医科大学附属第一医院泌尿外科接受手术治疗的精索静脉曲张患者30例;年龄(26.29±9.12)岁;病程(2.76±1.83)年.对照组选取同期该科肾移植供体正常精索静脉,共24例,年龄(39.56±8.32)岁.患者及供体亲属对治疗完全知情同意.方法:采用V-G染色、免疫组织化学、扫描电镜定性和定量观察30例曲张精索静脉和24例正常精索静脉壁中肌动蛋白及胶原纤维变化,并进行图像分析.主要观察指标:两组精索静脉平滑肌细胞、胶原纤维、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-肌动蛋白的变化及吸光度和面密度的变化.结果:①曲张精索静咏内膜、中膜改变以增厚为主,平滑肌细胞从收缩表型向合成表型转化.②曲张静脉α-肌动蛋白的吸光度和面密度均比正常静脉增多(P<<0.01);曲张静脉Ⅰ型胶原及Ⅲ胶原的吸光度和面密度均比正常静脉增多(P<0.01).结论:精索静脉曲张管壁的平滑肌细胞异常增生,从收缩表型向合成表型转化,细胞外基质中胶原异常改变,可能是精索静脉曲张发生和发展的机制之一.
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番茄红素对去势大鼠骨量和骨生物力学的影响
目的:番茄红素作为自然界中的抗氧化剂,能够减低人类某些与年龄老化有关的疾病的发生.实验拟进一步验证番茄红素对实验性骨质疏松大鼠骨密度和骨生物力学的影响.方法:实验于2006-07/2007-11在青岛大学医学院附属医院动物实验基地完成.番茄红素油树脂由新疆智星科技投资开发有限公司提供,使用时玉米油稀释至所需浓度.选择6个月龄SPF级雌性wistar大鼠50只,按体质量随机分成5组,即假手术+玉米油组(2 mL/d)、卵巢切除+玉米油组(2 mL/d)、卵巢切除+苯甲酸雌二醇组(0.2 mg/kg,1次/周)、番茄红素低剂量组(10me/kg,1次/d)、番茄红素高剂量组(20 mg/kg,1次/d).每组10只,除假手术组外其余各组均切除双侧卵巢,建立骨质疏松动物模型,按组给予灌服给药,治疗12周.结果:术后2周内假手术组死亡1只,低剂量组死亡2只.47只大鼠进入统计学分析.①卵巢切除组大鼠腰椎及股骨的骨密度和大应力均较假手术组降低,差异有显著性(P<0.05).②摄取番茄红素和雌激素的大鼠,股骨及腰椎骨密度和大应力比卵巢切除组明显升高,差异有显著性(P<0.05).③番茄红素增加骨密度和提高大应力作用不如雌激素明显;高剂量组作用强于低计量组.结论:番茄红素可提高骨质疏松大鼠的骨密度和骨生物力学特性,但其作用低于雌激素,是否与用药时间和样本例数不多有关尚需观察.
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不同预湿方法对构建组织工程骨膜细胞黏附率的影响
目的:将经成骨诱导的兔骨髓来源的间充质干细胞与猪小肠黏膜下层复合,构建的组织工程骨膜,与天然骨膜在形态结构和功能上非常类似.实验着重观察不同预湿方法对构建的组织工程骨膜细胞黏附率的影响,为有效构建组织工程化骨膜奠定理论基础.方法:实验于2005-09/2007-03在兰州大学附属第二医院骨科研究所完成.①实验材料:20 d的新西兰纯种兔2只.②实验过程及分组:取健康新西兰幼兔骨髓,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行体外扩增、诱导分化,然后与经过胎牛血清(实验组)、磷酸盐缓冲液(对照组)预湿处理的猪小肠黏膜下层复合构建组织工程骨膜,体外培养2周.③实验评估:计算贴附率、测定碱性磷酸酶活性,并用倒置显微镜、扫描电镜观察生长、分裂、增殖情况.结果:①细胞贴附率:接种后5h实验组细胞贴附率高于对照组[(57.34±2.23)%,(39.16±5.22)%,P<0.01];12 h实验组细胞贴附率高于对照组[(72.45±1.15)%,(54.47±3.46)%,P<0.01].②倒置显微镜观察:实验组比对照组更易黏附、伸展.③扫描电镜观察:复合培养第3天,实验组可见材料表面的细胞已完全伸展,附着在材料表面;对照组细胞大多呈不规则形,未完全伸展.培养7 d以后两组细胞差异不大.④碱性磷酸酶活性测定:复合培养第5,10,14天,实验组的碱性磷酸酶活性均明显高于对照组,差异有非常显著性(P<0.01).结论:用胎牛血清预湿小肠黏膜下层,有利于提高接种效率,从而能更有效的构建组织工程骨膜.
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部分骺板挖除后立即充填构建股骨远端周围型骺板部分早闭实验兔模型
背景:用于骺板部分早闭的实验动物模型多为周围型骺板部分早闭.目的:在周围型骺板部分早闭模型的基础上,改进建立股骨远端周围型骺板部分早闭动物模型.设计、时间及地点:自身对照设计实验,于2007-03/10在解放军总医院实验动物中心完成.材料:健康普通级新西兰幼兔20只,兔龄4~6周,体质量1.0~1.5 kg.方法:将20只新西兰白兔取膝外侧直切口,长约2 cm,切开皮肤、皮下组织,并于外侧髌旁切开膝关节囊后显露股骨远端外髁,此时股骨远端的骺扳线清晰可见.将右侧股骨外髁的骺板挖两个相邻的孔,深度约3.0~4.0 mm,以去除部分正常骺板,面积为股骨远端骺板总面积的33%~44%.左侧仅切开至骨膜作为自身对照.主要观察指标:术后X射线片测量同时大体观察双侧股骨的长度、股骨远端外翻角度及股骨的畸形情况;组织学检查双侧股骨远端的骨桥形成情况.结果:1只实验兔术后31 d因腹泻死亡,19只术后生长良好,进入结果分析.①术后4个月,X射线观察显示左侧股骨平均长度>右侧,外翻角度<右侧,两组之间相比,差异显著(P<0.01).股骨远端左侧平均生长2.27 cm,占股骨生长的57.6%,右侧平均生长0.45 cm,占股骨生长的21.4%.②术后4个月,对照组股骨形态正常,两髁及髌骨关节面光滑完整.实验侧股骨明显短缩,远端出现严重的外翻畸形.③术后5周,对照组骺板各层细胞排列整齐.实验组骨缺损腔内可见大量纤细的骨小梁,周围剩余骺板细胞层数减少.术后10周,对照组骺板已基本闭合;实验组骨小梁变得更为粗大.结论:本方法建立的模型操作简单,成功率高,应用灵活,造成的骨桥面积大小可以控制,适用骺板部分早闭疾病动物模型的要求,对治疗过程中充填物的选择亦有一定意义.
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基因多态性与运动训练敏感性的关联
学术背景:运动训练引起机体生理功能、解剖结构发生适应性变化,这种因训练引起的生理功能、解剖结构适应性改变在不同个体之间存在着明显的差异.这种个体差异性很大程度上是由遗传因素--基因多态性所决定.目的:总结近些年来基因多态性与运动训练敏感性的关联性研究进展.检索策略:应用计算机检索Pubmed数据库2002-01/2006-12的相关文献,检索词"Gene polymorphism,endurance training,strength training,aerobic training",限定文章语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库2002-01/2006-12期间的相关文章,检索词"基因多态性;耐力训练:力量训练",限定文章语言种类为中文.共检索到58篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与有氧耐力训练敏感性相关联的相关基因多态性.②与力量训练敏感性变化相关联的相关基因多态性.③与低氧训练敏感性变化相关联的相关基因多态性.文献评价:文献的来源丰要是相关基因多念性与运动训练过程中生理、生化指标敏感性变化关联性方面的前瞻队列研究.资料综合:①运动训练引起机体生理、生化指标敏感性变化的个体差异性主要是由遗传因素-基因多态性所决定的.②近年来,有关基凼多态性与运动训练后生理、生化指标敏感性变化关联性研究较多,主要集中在相关基因多态性与耐力训练、力量训练和低氧训练后生理、生化指标敏感性变化关联.③研究表明,ACE基因I/D多态性、HIF-1α基因C1772T多态性等相关功能基因多态性与耐力训练、力量训练及低氧训练后生理、生化指标的敏感性变化相关联.结论:基因多态性虽是决定了人类生理表型特征的遗传标记,但同一基因多态性的各种基因型在不同种族间进行运动训练引起生理表型特征的敏感性变化却有不同.随着对基因多态性与运动训练敏感性关联研究的不断深入,将进一步揭示其相关机制.
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老年骨质疏松症治疗药物的特点
学术背景:老年骨质疏松症药物治疗大多能使患者骨质量、构型和强度增加,还可使已发生骨折的患者减轻疼痛,防止其功能丧失.目前,临床上治疗骨质疏松的药物主要有抑制骨吸收和促进骨形成两类.目的:总结老年骨质疏松症药物治疗的研究进展.检索策略:应用计算机检索Pubmed数据库1995-01/2007-12的相关文章,检索词"Osteoporosis,Eswogens,Alendronate,Ipriflavone,Parathormone"限定语言种类为English,同时检索中国期刊网,万方数据库1995-01/2007-12相关文章,检索词"骨质疏松,雌激素,阿仑膦酸盐,依普黄酮,甲状旁腺激素",限定语言种类为中文.共检索到56篇文章,对资料进行初审,纳入标准:①与老年骨质疏松症的药物治疗密切相关.②同一领域选择近期发表在权威杂志上的文章.排除标准:重复性研究.文献评价:文献的来源主要是药物治疗老年骨质疏松症方面的随机对照实验.所选用的56篇文献中6篇为综述,其余均为临床或基础实验研究.资料综合:①抑制骨吸收药物:包括雌激素替代疗法、二膦酸盐、维生素D及其代谢产物、异黄酮衍牛物和降钙素,主要通过抑制骨转换.减少破骨细胞数量和抑制其活性;抑制骨吸收;降低髋部和其他非椎骨骨折的发生率等发挥作用.②促进骨形成药物:包括氟化物、甲状旁腺激素和他汀类药物,通过促进微骨折愈合,形成新骨小梁,强化骨结构,刺激成骨细胞及骨小粱的增长,促进新骨形成,增加骨密度等发挥作用.③其他药物:包括雄性激素、钙剂、锶盐等.任何治疗骨质疏松的方法必须同时补钙,单纯补钙是无效的,临床观察已证实,给以雄性激素补充治疗是有效的.另外,选择性的组织蛋白酶K抑制剂可能成为治疗骨质疏松的新药.结论:骨质疏松症治疗常用雌激素作为主要的疗法,辅助其他种类繁多的药物,因此需要全面了解这些药物的功能及副作用.
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混沌医学、稳态与猝死
学术背景:临床研究发现心率变异性与植物性神经系统、亚健康及猝死密切相关,理论医学研究总结了一些混沌医学和稳态相关理论.但至今为止未见将二者结合对临床现象进行系统解释并总结出亚健康的诊断标准和预防猝死的有效指标.目的:用混沌医学和稳态相关理论阐述、植物神经、亚健康及猝死的关系.为实践中应用心率变异性评价亚健康状态和预防猝死提供理论依据.检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1995-01/2007-06的相关文献,检索词为"Chaotic medicine,heart rate variability(HRV),Sudden death,Sub-health,homoestasis",限定文章语言种类为English.同时计算机检索博客和中国期刊全文数据库1995-01/2007-06期间的相关文章,检索词为"混沌医学,心率变异性,猝死,亚健康,稳态,"限定文章语言种类为中文.共检索到文献56篇,对资料进行初审,纳入标准:①混沌医学及与心率变异性、猝死、亚健康密切相关.②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:重复件研究.文献评价:选取其中的30篇文献的来源主要是混沌医学,心率变异性,猝死,亚健康,稳态等方面的综述、基础和临床实验研究和相关博客发表在网上的文章.资料综合:①任何一个多细胞、多系统组成的个体,存在着至少三级混沌系统,整体混沌系统、维持血压的心血管混沌系统和细胞混沌系统.健康状态是三级混沌系统均处于正常状态.疾病和亚健康状态是某些细胞或心血管系统代谢障碍,反馈信息传到中枢神经系统,导致中枢神经过度紧张,交感神经过度兴奋,心率变异性下降,导致混沌系统处于亚稳态.②根据混沌医学和稳态理论,个体的混沌运动可能处于4种状态:健康、疾病、亚健康和猝死之前的失稳边缘状态.健康时机体处于稳态,疾病和亚健康时机体处于亚稳态,可能某种凶素导致健康状态发展成业健康和疾病,他们可能互相转化,并且二者都可能因失稳导致猝死.③中枢神经系统极度紧张,交感神经极度兴奋,整体混沌运动处于失稳的边缘,受刺激导致系统迅速失稳,表现为不能维持动脉血压而猝死.结论:长期健康状态无法预测,但町以通过短期心率变异性的测试结果预测一两天的健康状况,通过定期或每天清晨512次心率变异性测试的动态以观察,可以判断一个人睡眠之后的健康状态,以及整体健康状态的变化趋势,并推测其处于健康状态、亚健康状态或处于失稳边缘的可能发生猝死状态.
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运动中NO信号传递途径及其对骨骼肌摄取葡萄糖的调节
学术背景:NO能影响葡镛糖的转运,虽然其信号传递途径与具体机制不明了,但已确认其与胰岛素介导途径不同.目的:探讨运动中NO信号传递途径及其对骨骼肌摄取葡萄糖的调节机制.检索策略:由第一作者检索Pubmed(布尔逻辑)1996-0112007-11收录的运动中NO信号传导及其调节肌肉摄取葡萄糖相关文章,检索词"(nitric oxide AND signal AND glucose)NOT patient";并由第二作者手工检索国家图书馆外文库(中图法分类)相关书籍.纳入标准:人和啮齿动物在运动应激情况下NO调节肌肉血流量、信号传递和调节葡萄糖相关文献;排除标准:病理条件下相关基础研究.文献评价:共检索到60篇相关文献(书籍),30篇符合标准.其中5篇是综述类文献,23篇为基础研究,2本相关专业书籍.其中20篇关于NO的调节血流量和舒血管作用,4篇文献和2本书籍关于信号传导,4篇涉及NO为运动中信号分子.资料综合:NO有强烈舒血管作用,是细胞间信使分子,能介导许多生物现象.运动时体内NO生成增多,NO通过在骨骼肌内的传导能刺激肌肉摄取葡萄糖.结论:运动中NO大量生成对骨骼肌摄取葡萄糖有积极影响,肌肉收缩和摄取葡萄糖与NO的生成、传递联系密切,但其机制尚不明了.
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北京市崇文区居民亚健康状态发生率及其危险因素的流行病学特征
目的:目前,对亚健康的病因及发病率和分布等研究并不多见,本实验调查北京市崇文区所辖社区居民亚健康状态的自然发生率(分布)及其危险因素.方法:选择北京市崇文区7个社区服务中心2335名所辖居民,进行包括个人社会人口学调查表、亚健康状态自测-16问卷、压力水平、应对方式、家庭功能评估表、生命质量问卷、家庭亲密度与适应性量表、居民对亚健康或抑郁状态认识和态度问卷、艾森克人格问卷、生活事件量表、社会支持评定量表、医院用焦虑抑郁量表等内容调查.以亚健康状态自测-16作为筛查问卷,在该问卷评分≥30分的亚健康状态高危人群中随机抽取300例,于1年后进行国际疾病分类第十版精神障碍症状检查表随访及诊断标准的临床评定其转归.主要评估亚健康状态居民社区流行状况、社会心理危险因素、精神障碍分布以及对疾病知晓态度情况.结果:实际调查居民2 355名,回收有效问卷2 335份,男1 006名,女1 329名.①流行状况:既往和现患亚健康(状态)者检出率为22.48%(525/2 335),与欧洲一些国家公布的调查结果相近.男221例,女304例.亚健康状态分布以41~50岁和71岁以上人群比例显著高于总体检出率,差异有显著性意义(P<0.05),其中离婚和初中人群中比例明显增高,与出生地、民族等因素无关.②社会心理危险因素:崇文区居民亚健康的生活事件、家庭功能及压力水平等社会心理学方面的异常比例明显高于非亚健康状态,差异有显著性意义(P<0.01).③精神障碍分布:亚健康状态者较为常见的精神障碍有心境障碍、躯体形式障碍和器质性精神障碍.④疾病知晓态度:居民对亚健康或精神障碍诊疗知识缺乏,认为到综合医院诊疗较多.结论:亚健康状态者存在着较多的社会心理方面因素,中壮年及老年以及初中人群的发病比例较高,发病率与出生地、民族等因素无关.
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广州市成年2056人体质量指数水平与身体机能素质的相关性调查
目的:人类发育学的相关指标对组织构建有重要指导意义.了解2005年广州市成年人超重和肥胖的发生率,以及肥胖对身体机能、素质的影响.方法:2005年对广州市成年人2056人进行国民体质监测,其中男性1 027人,女性1 029人.根据受试者的身高和体质量,计算出体质量指数,用中国肥胖问题工作组建议的体质量指数超重和肥胖标准对受试者进行分类,分析不同体质量指数水平成年人的身体机能、素质特征.结果:2005年广州市成年人男性总体超重和肥胖检出率分别为28.7%和5.2%,女性分别为18.6%和5.3%.收缩压、舒张压随体质量指数增大而增大,台阶指数和肺活量/体质量随体质量指数增大而下降.高血压一次性榆出率随体质量指数的增大而升高,各体质量指数组男性高血压一次性检出率高于女性.成年男女纵跳、柔韧性表现为肥胖组差;平衡能力方面,男、女均表现为体质量指数正常组好于超重组及肥胖组.结论:广州市男、女成年人的超重和肥胖比例已经达到了较高的水平.一定范围内的体质量增加或减轻,有利于部分机能和素质的提高,但达到肥胖时,对身体机能和素质都有很大影响.
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国民体质监测与受试者体质、体育行为的关系
目的:试验拟了解实施国民体质监测对受试者体育行为、体育态度及体质健康的影响.方法:试验于2005-03/12在郴州市体育局体质监测中心完成.选择郴州市机关工作人员285名作为测试对象,在2005年第一次测试后,间隔9个月做第二次测试,年龄以第一次测量为准.此次获得有效数据283份(有2人不适合参加体质测定),男168人,女115人.并辅以问卷调查.2006年调查问卷内容丰要涉及体质监测后个人体育意识、体育行为、体育态度、体育参与率、是否按照第一次体质监测所提供的运动处方实施科学锻炼的问题进行问询.结果:受试者在反映心血管功能和力量、灵敏性等指标上与全国均值差异显著,尤以男性和中青年人群为甚.9个月后复测,经配对检验,受试者在台阶试验、肺活量改善呈显著性意义,其他素质指标改善存在年龄、性别差异.结论:国民体质测量有助于受试者了解自己的身体机能状况差距,从而利于其提高体育意识,增大参与频率,并针对性的参加体育锻炼,使受试者体质状况、身体机能获得较大改善,尤以中老年为甚.
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使用核心讨论组研究残疾人照顾质量的构成领域和方面
目的:目前,国内外还没有深入研究人们对残疾人照顾的质量,也没有出现对残疾人照顾质量的评价量表.本试验使用核心讨论组探讨中国残疾人照顾质量的构成领域和方面.方法:试验于2006-12/2007-01在本单位完成.选择包括残疾人、残疾人的照顾者或家属以及医护专业人员共39人组成7个核心讨论组,分别是智力残疾组(n=6)、肢体残疾组(n=6)、帕金森病组(n=3)、听力残疾组(n=6)、视力残疾组(n=6)、家属或照顾者组(n=5)、专业人员组(包括医生护士等)(n=7).残疾人的纳入标准:①年龄18~80岁.②经指定的医疗机构诊断为残疾人.③广州户口.排除标准:有严重的认知障碍、交流问题、抑郁、痴呆者以及不愿意参加讨论的残疾人.使用半结构化的形式开展核心讨论,进行书面记录和录音,并使用定性和定量分析方法对材料进行分析.结果:纳入受试者39人,均进入结果分析.残疾人的照顾质量主要包含17个方面,组成6个领域.6个领域分别为:生理领域,包含能力、残疾程度等方面:心理领域,包含精神状况等方面;社会关系领域,包含人际关系、社会支持等方面;环境领域,包含居住环境、无障碍设施/辅助器械、卫生和社会服务的可及性及其质量、经济状况、娱乐休闲、交通6个方面;社会参与领域,包含就业、教育、尊重与接纳、歧视和嘲笑等方面:政策与社会机构领域.结论:①残疾人照顾质量的17个构成方面跟普通人生存质量的构成大致相同,区别在于残疾人还重视卫生和社会服务的可及性及其质量、无障碍设施/辅助器具、国家政策等方面.②核心讨论组可以作为一种有效的工具研究残疾人的照顾质量,有助于构建评估残疾人照顾质量量表的领域和方面.