中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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运动训练与骨代谢和脂代谢:运动强度和持续时间是影响的重要因素
背景:适宜的运动训练对骨代谢和脂代谢具有积极促进的作用,而过度训练则会对骨代谢和脂代谢造成不利影响.骨代谢和脂代谢过程中存在很多反应其状态的标志物和所需经过的信号通路,不同的研究方法可选取相适宜的标志物和信号通路进行研究.目的:总结骨代谢指标、脂代谢指标及其共同相关指标和信号通路,探讨运动训练对骨代谢和脂代谢影响的因素.方法:检索 PubMed 数据及 CNKI 中国期刊全文数据库,检索摘要包含运动训练、骨代谢、指标、信号通路或者运动训练、脂代谢、指标、信号通路,或者同时包含上述检索词的文献.提取有价值信息,终纳入52篇文章进行分析.结果与结论:骨代谢指标有:25羟基维生素D(25-OH-D)、降钙素、甲状旁腺素、肿瘤坏死因子、白细胞介素(1,2,4,6,11)、胰岛素样生长因子1、转换生长因子β、骨形态发生蛋白、干扰素、巨噬细胞集落刺激因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、抗酒石酸性磷酸酶(TRACP)、Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX)、尿吡啶啉(Pyr)、尿脱氧吡啶啉(D-Pyr)、碱性磷酸酶、骨钙素、骨保护素、Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)等;脂代谢指标有:三酰甘油、血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、瘦素、脂联素、APOE、氧化型低密度脂蛋白胆固醇、LPR5等.运动强度和持续时间是影响骨代谢和脂代谢的重要因素,强度过大和持续时间过长都将不利于骨代谢和脂代谢,而大强度运动短期内对骨代谢是有利的.两者共同对骨代谢和脂代谢的影响有待进一步研究.
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脂联素通过调控骨代谢在骨质疏松症中的研究与进展
背景:脂联素是近年来发现的与肥胖呈负相关的脂肪细胞因子之一,作为一种内源性的生物活性多肽类物质,除研究发现它与胰岛素抵抗、2 型糖尿病、代谢综合征等病变的发生密切相关外,它还重要参与骨代谢的调控.目的:叙述脂联素在骨代谢中的作用机制,主要阐述脂联素与成骨及破骨之间的相互内在关系.方法:由第一作者检索2003至2017年PubMed及CNKI等数据库收录的有关于脂联素在骨代谢方面的实验研究及研究进展.中文检索词分别为:"脂联素、骨质疏松、骨代谢、骨形成、骨吸收",英文检索词分别为:"adiponectin;osteoporosis;bone metabolism;osteogensis;bone absorption",文章主要从脂联素及其受体,骨组织的生理代谢,脂联素分别对骨形成及骨吸收的作用四个方面进行综述.结果与结论:脂联素对骨代谢的影响是一种综合作用的效应,主要是通过自分泌、旁分泌及内分泌影响胰岛素信号通路3种方式发挥作用的,而这3种方式大多是通过OPG/RANKL/RANK轴系统的调控来发挥主要的生物学作用,尤其是在对骨形成和骨吸收方面的作用效应更为重要.脂联素有可能通过调控骨代谢防治骨质疏松症的发生.
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针刺治疗脊髓损伤后尿潴留的Meta分析
背景:针刺是治疗脊髓损伤后尿潴留的常用方法,因其不良反应小、操作简便,被广泛应用于脊髓损伤后尿潴留的临床治疗中.但目前仍缺乏循证医学证据.目的:对针刺治疗脊髓损伤后尿潴留的随机对照试验进行系统评价和Meta分析,以明确针刺干预的疗效.方法:计算机检索中国生物医学、中国知网、万方、Cochrane Library、PubMed、EMBASE、Web of Science数据库,检索时间均从建库至2017年3月.中文检索词包括"脊髓损伤、尿潴留、针刺";英文检索词包括"spinal cord injury, neurogenic bladder, acupuncture".纳入针刺或针刺联合常规治疗与单纯常规治疗相比较的随机对照试验,采用RevMan 5.3 软件进行Meta分析.结果与结论:①研究共纳入9个随机对照试验,632例患者;②Meta分析结果显示:在尿动力学方面,针刺治疗对患者残余尿量[MD=-144.26,95%CI(-252.15,-36.37),P=0.009]及大膀胱容量[MD=35.69, 95%CI(3.15,68.22),P=0.03]的改善效果均优于对照组,差异有显著性意义;③在排尿次数方面,针刺干预对患者日平均排尿次数的改善效果与对照组相比较,差异无显著性意义[MD=-1.66,95%CI(-3.40,0.07), P=0.06];④在总有效率方面,针刺干预脊髓损伤后神经源性膀胱患者的疗效优于对照组,差异有显著性意义[RR=1.24,95%CI(1.11,1.37),P < 0.0001];⑤结果提示:与常规治疗相比,针刺能更为有效地改善脊髓损伤后尿潴留患者的残余尿量、大膀胱容量,提高治疗总有效率.
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跑台运动和益生菌干预对大鼠不同组织细胞膜的保护作用
背景:长时间的力竭性运动应激引起机体不同组织器官免疫功能发生变化及益生菌干预引起机体机制尚不明确.目的:通过力竭性运动和益生菌干预观察大鼠不同组织器官形态学变化和细胞膜的保护作用.方法:40只 SD 雄性大鼠随机分为安静对照组(正常对照),运动对照组,安静给药组,运动给药组.运动对照组与运动给药组进行6周力竭训练,速度为19.3 m/min,坡度为5°,每天训练1次,6 d/周.安静给药组与运动给药组每日灌胃浓度为107CFU/mL益生菌溶液10.0 mL/(kg.d).6周力竭训练结束后,通过光学显微镜下观察其病理组织学变化和测定大鼠肝、肠和胃组织Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、T-ATP酶的指标.结果与结论:①力竭运动引起大鼠肝、胃和肠组织结构紊乱、肿胀和有炎症细胞浸润现象,各组织中Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、T-ATP酶的活性有所下降;②通过服用益生菌溶液后大鼠肝、胃和肠组织结构排列紧密、清晰、无明显的充血和水肿,但仍有少量的炎症细胞和轻微的溃疡,各组织中Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、T-ATP酶的活性增高;③结果表明,益生菌溶液能够保护长时间力竭运动引起肝、胃和肠组织结构的变化和增高各组织中Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、T-ATP酶的活性来保证细胞膜的完整性及流动性.
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低氧环境振动训练条件下2型糖尿病骨质疏松大鼠骨质代谢及胰岛素敏感性
背景:利用低氧干预缓解2型糖尿病胰岛素抵抗的方案已被众多学者推荐,但是低氧因素对糖尿病患者造成骨质疏松的风险导致方案存在争议.目的:探讨低氧环境下振动训练对2型糖尿病骨质疏松大鼠骨密度、骨结构力学、骨质代谢、胰岛素敏感性等的影响.方法:90只清洁级SD大鼠随机分出60只大鼠进行高脂饲料喂食,30只大鼠正常喂食,饲养8周后,高脂饲料喂食组的60只大鼠注射链脲佐菌素,构建2型糖尿病骨质疏松动物模型,4周后对所有大鼠进行糖代谢、胰岛素敏感性、骨质代谢、骨密度前测和评价造模情况;正常喂食的30只大鼠随机分为常氧对照组、低氧对照组,造模成功的2型糖尿病骨质疏松大鼠随机分为低氧糖尿病组、低氧糖尿病振动训练组(低氧糖尿病运动组)、常氧糖尿病组、常氧糖尿病运动组,利用低氧仓和powerplate振动训练平台执行低氧和振动方案,进行为期12周干预.干预后对所有大鼠胰岛素敏感性指标、代谢指标、骨密度、骨质代谢进行检测.结果与结论:①12周干预后低氧糖尿病运动组大鼠空腹胰岛素水平、空腹血糖、稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、均显著优于常氧糖尿病组、低氧糖尿病组、常氧糖尿病运动组(P < 0.05);②常氧糖尿病运动组和低氧糖尿病运动组大鼠骨密度、大应力、大载荷、断裂载荷、弹性模量显著低于常氧对照组和低氧对照组(P < 0.05);振动训练后各项指标显著提高(P < 0.05);③结果说明,低氧环境能够促进2型糖尿病大鼠胰岛素敏感性提升,改善糖、脂代谢,但也能够导致骨密度下降,骨质代谢异常,骨吸收增加;低氧环境下进行振动训练能够显著改善糖尿病骨质疏松大鼠的胰岛素敏感性;并能够避免低氧因素对大鼠造成骨密度下降、骨质代谢异常和骨生物力学性质的风险.
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失用性骨质疏松模型大鼠血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽与骨密度的相关性
背景:Ⅰ型胶原羧基端交联肽和Ⅰ型胶原氨基端前肽是目前敏感性较好的骨代谢标记物,能够反映骨形成和骨吸收的状态.目的:分析Ⅰ型胶原羧基端交联肽与失用性骨质疏松症的关系.方法:雄性SD大鼠,体质量180-220 g,随机分成对照组和失用性骨质疏松症组.大鼠采用踝尾固定法将右后肢固定4周,建立失用性骨质疏松症大鼠模型;其余大鼠为对照组,麻醉后不做任何处理.造模前后行腹腔静脉采血,再取出股骨,检测SD大鼠血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽和两侧股骨骨密度值.结果与结论:①造模前,两组大鼠血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽水平相近(P > 0.05);造模4周后,失用性骨质疏松症组血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽水平显著高于造模前和对照组(P < 0.01);对照组2个时间点血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽浓度比较差异无显著性意义(P > 0.05);②失用性骨质疏松症组造模前后血清Ⅰ型胶原羧基端交联肽差值与两侧股骨骨密度差值呈正相关性(r=0.426,P < 0.01);③失用性骨质疏松症组左股骨骨密度高于右股骨骨密度(P < 0.01),对照组两侧股骨骨密度比较差异无显著性意义(P > 0.05),失用性骨质疏松症组右股骨骨密度显著低于对照组(P < 0.01);④结果说明,踝尾固定建立失用性骨质疏松症模型切实可行;失用性骨质疏松症可促进Ⅰ型胶原羧基端交联肽的生成,致骨密度减少,Ⅰ型胶原羧基端交联肽与骨量丢失程度呈正相关,可用于骨质疏松的疗效评价和诊断.
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门静脉动脉化治疗大鼠急性肝衰竭
背景:部分门静脉动脉化可通过增加肝脏血供的方式减缓急性肝衰竭的发展.目的:观察部分门静脉动脉化对肝衰竭模型大鼠肝脏功能及病理学变化的影响.方法:将130只SD大鼠随机分为3组,动脉化组(n=50)切除左肾,以同种异体腹主动脉血管为移植材料,采用套入式缝合及袖套法建立门静脉动脉化模型,造模成功后一次性腹腔注射D-氨基半乳糖1300 mg/kg,诱导急性肝功能衰竭;肝衰竭组(n=50)切除左肾,游离门静脉,阻断门静脉16 min后开放,关闭腹腔后一次性腹腔注射 D-氨基半乳糖1300 mg/kg,诱导急性肝功能衰竭;对照组(n=30)切除左肾,阻断门静脉16 min后开放,关闭腹腔后一次性腹腔注射生理盐水1300 mg/kg.术后12,24,36,48,72 h,观察各组血清学及肝脏组织病理变化.结果与结论:①动脉化组与肝衰竭组均造模成功30只,术后72 h成活率分别为70%、53%,组间比较差异有显著性意义(P < 0.05);对照组术后72 h存活率为100%;②对照组不同时间点的血清门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、白细胞介素6、肿瘤坏死因子水平α及门静脉内毒素水平均低于其余两组(P < 0.05);动脉化组术后不同时间点的血清门冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶低于肝衰竭组(P < 0.05),术后24-72 h的总胆红素、白细胞介素6、肿瘤坏死因子水平α及门静脉内毒素水平均低于肝衰竭组(P < 0.05),36-72 h的白蛋白低于肝衰竭组(P < 0.05);③术后72 h,对照组肝脏结构完整;肝衰竭组正常肝小叶结构已破坏,大量炎细胞浸润;动脉化组病变清于肝衰竭组;④结果表明,门静脉动脉化可在一定程度上上改善肝脏功能,减缓肝衰竭的发展.
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放射性脑损伤模型小鼠纤维蛋白原的变化
背景:前期研究发现放射破坏小鼠血脑屏障,而放射致损伤的血脑屏障是继发性脑损伤的原因,但目前有关放射因素对血浆纤维蛋白原及脑组织中纤维蛋白原沉积的影响报道甚少.目的:建立放射性脑损伤模型,观察放射后血浆中纤维蛋白原的变化及其在脑组织中沉积的情况,探讨放射性脑损伤机制.方法:50只昆明小鼠随机分为放射组、对照组,每组各25只,放射组予60Coγ射线照射,15 Gy/次,隔天照射,共30 Gy.放射前、后分别采用Morris水迷宫观察小鼠学习记忆能力的变化,神经行为结束后,检测血浆中纤维蛋白原的含量,采用免疫组织化学方法观察海马CA3区纤维蛋白原的表达,并在电镜下观察其血脑屏障结构变化.结果与结论:①与对照组相比,放射组小鼠放射后在目标区域停留的时间和路程明显减少(P＜ 0.05);②血浆纤维蛋白原显著升高(P＜ 0.001),海马CA3区有大量纤维蛋白原沉积,电镜下血脑屏障基膜周围出现透亮区;③结果说明,放射可致血浆中纤维蛋白原升高,沉积于脑组织的纤维蛋白原可能是继发性脑损伤的原因.
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白细胞介素17A在视神经损伤模型小鼠神经再生中的作用
背景:实验证明在角膜损伤模型中,白细胞介素17A参与的炎症反应在角膜神经再生过程中发挥着重要作用.目的:进一步验证白细胞介素17A对视神经损伤模型小鼠神经再生的作用.方法:构建白细胞介素17A过表达腺病毒载体(AV-IL-17A-GFP),构建白细胞介素17A表达载体,包装并纯化腺病毒,以绿色荧光蛋白空载体包装的腺病毒为对照组(AV-GFP对照组);用病毒感染PC12细胞并通过ELISA检测白细胞介素17A表达效率,采用显微注射方法将病毒注射到小鼠玻璃体内,利用免疫荧光检测视神经中白细胞介素17A的表达,构建小鼠视神经损伤模型,检测受损视神经再生情况.结果与结论:①与AV-GFP对照组相比,ELISA检测发现AV-IL-17A-GFP组中白细胞介素17A在PC12细胞中高度表达;②免疫荧光染色表明白细胞介素17A 在小鼠视神经节细胞和视神经中有效表达, AV-IL-17A-GFP组中再生的视神经纤维数量显著多于对照组,且长度显著长于对照组(P < 0.05);③结果说明,白细胞介素17A腺病毒载体可在小鼠视神经节细胞和视神经中表达,并且能够促进受损视神经的再生.
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局部应用降钙素基因相关肽对小鼠肩袖损伤后早期愈合的影响
背景:骨腱界面的损伤修复一直是骨科和运动医学领域里的一大难题,新生骨的形成有利于骨腱界面的愈合.降钙素基因相关肽在维持组织稳态和组织损伤后修复过程中发挥着非常重要的作用,但是其在骨腱界面损伤中的作用至今未见报道.目的:建立小鼠肩袖损伤模型,观察降钙素基因相关肽对损伤处成骨因子骨钙素表达的影响,评估其对小鼠肩袖损伤后早期愈合的作用.方法:建立小鼠冈上肌止点-肱骨损伤模型,随机分成2组:实验组术后当天经盂肱关节注入5 nmol/kg降钙素基因相关肽,每周3次,共2周;对照组注入等量的生理盐水.术后4,6周安乐死动物获取肩袖损伤标本,行苏木精-伊红染色观察其组织病理变化,实时荧光定量PCR检测骨钙素 mRNA的表达,免疫组织化学、免疫印迹实验观察骨钙素的蛋白表达水平,生物力学检测两组肩袖损伤标本的拉断载荷.结果与结论:术后4,6周实验组成骨因子骨钙素的mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P < 0.05);与对照组比较,实验组术后4周有更多的纤维软骨生成,术后6周有更多的新生骨生成;实验组术后4周的力学拉断载荷比对照组轻微上升,但没有统计学差异(P > 0.05);术后6周,实验组的力学拉断载荷比对照组高(P < 0.05).结果证实局部注射降钙素基因相关肽能提高损伤处骨钙素的表达及新生骨的形成,有利于肩袖损伤后早期愈合.
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血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂EMA401作用于神经病理性疼痛模型大鼠的行为学评估及镇痛效应机制
背景:慢性疼痛的发病率高,病程长,治疗效果差,疼痛的发病机制未完全明确,镇痛药物的研究及镇痛机制的探索是目前研究的热点.目的:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 EMA401对大鼠坐骨神经缩窄致神经病理性疼痛模型机械缩足阈的影响及可能的作用机制.方法:SD大鼠随机分为5组,假手术组只暴露坐骨神经,不做任何结扎;其余各组均建立坐骨神经缩窄模型.根据EMA401灌胃剂量分为2 mg/kg,5 mg/kg,10 mg/kg组,假手术组和模型对照组大鼠每天灌胃NaCl溶液.在术前1 d及术后3,7,14 d,检测各组大鼠机械缩足阈行为学指标;行为学检测完毕后取各组大鼠取脊髓背根神经节,采用Western Blotting法检测胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3的表达.结果与结论:①与模型对照组相比,EMA401可提高坐骨神经缩窄大鼠机械缩足反射阈值(P < 0.05);②与模型对照组相比,EMA401可降低背根神经节内胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3表达(P < 0.05),与2 mg/kg EMA401组相比,5 mg/kg,10 mg/kg EMA401组术后3,7,14 d胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3表达量均显著降低(P < 0.05);③结果表明,EMA401对坐骨神经缩窄模型大鼠有明显的镇痛效应,其机制可能与抑制脊髓背根神经节内星形胶质细胞活化,降低脑源性神经营养因子表达,进而抑制以活化转录因子3表达增多为特点的背根神经节神经元活化有关.
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独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用
背景:Meta 分析显示:独活寄生汤可改善膝骨关节炎患者的临床症状,缓解患者的疼痛,但具体的作用机制与途径还不十分清楚.目的:进一步验证独活寄生汤药物治疗食蟹猴自发性膝骨关节炎模型疗效.方法:自然条件下,从12只食蟹猴选取清洁级青年型(年龄3-5岁)6只食蟹猴为正常组,老年型(年龄≥20岁)食蟹猴建立自发性膝骨关节炎模型6只为模型组;再将老年型食蟹猴随机分为模型对照组和干预组,干预组采用独活寄生汤进行干预,对比两组间全血白细胞计数、C-反应蛋白、血沉,以及关节液性状和肿瘤坏死因子α的表达变化.结果与结论:①老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型会出现典型与人类相似的骨关节炎相关指标的改变;②独活寄生汤干预可下调肿瘤坏死因子 α 的表达,降低全血白细胞水平、C-反应蛋白,干预前后差异有统计学意义;③结果说明,老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型是一个能有效模拟人类自发性膝骨关节炎发生发展的动物模型,独活寄生汤干预可能通过抑制肿瘤坏死因子α的表达,降低关节软骨的炎症因子水平,从而缓解膝骨关节炎病程,产生治疗作用;全血白细胞水平、C-反应蛋白可作为疗效判断的重要参考指标.
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荨麻提取物诱导骨膜细胞增殖分化:构建组织工程骨及超微结构的变化
背景:荨麻作为一种传统的中草药,目前认为其主要的药理作用是抗炎、抗风湿等作用,其对骨膜细胞的效果的相关研究较少.目的:探讨荨麻诱导人骨膜细胞增殖及分化特性,并诱导其体外构骨,为荨麻运用于骨组织工程提供理论依据.方法:实验取材于成人锁骨.体外组织块培养法获得骨膜原代细胞,恒温培养扩增后,取第3代骨膜细胞种植于细胞培养板中.实验分为3组,实验组分别加入10-6,10-5及10-4g/L荨麻提取物,阳性对照组加入50 μg/L骨形态发生蛋白7,对照组仅加入纯净水.分别在第1,4,7和10天MTT法检测骨膜细胞增殖情况,碱性磷酸酶染色和Von Kossa染色检测碱性磷酸酶和钙结节的表达.分别将10-4g/L荨麻提取物及骨形态发生蛋白7加入到含有聚己内酯三维支架中和骨膜细胞复合培养构建组织工程骨,培养24 d,电镜下观察不同组细胞形态学情况.结果与结论:①MTT 结果显示各时间点荨麻提取物不同浓度组和阳性对照组的吸光度值均显著高于对照组(P < 0.05),荨麻提取物不同浓度组的各时间点吸光度值相比,10-4g/L组>10-5g/L组>10-6g/L组(P < 0.05),表明10-4g/L为佳浓度;②实验组各时间点碱性磷酸酶和钙结节的染色阳性率与阳性对照组相比,差异无显著性意义(P > 0.05),但2组各时间点表达量均显著高于对照组(P < 0.05);③电镜下观察实验组细胞膜表面有大量微绒毛状突起,线粒体基质致密有少量嵴,细胞增殖和分化活跃.且阳性对照组和荨麻组细胞内线粒体数量显著多于对照组(P < 0.05);④结果提示,荨麻能促进骨膜细胞增殖,同时能诱导骨膜细胞分化为成骨细胞,可作为组织工程中的诱导剂.另外,荨麻可诱导骨膜细胞在聚己内酯三维支架中扩增并构建组织工程骨.
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基于内质网应激研究蛇床子素对成骨细胞增殖与分化的影响
背景:研究表明,蛇床子素可以通过促进成骨细胞分化而促进骨形成,但是蛇床子素抗骨质疏松效应的机制尚不明确.目的:观察蛇床子素对体外培养大鼠成骨细胞增殖与分化的影响,探究其抗骨质疏松效应的机制.方法:采用二次酶消化法分离大鼠成骨细胞,并使用碱性磷酸酶染色以及矿化结节染色进行鉴定.实验分5组,分别为溶剂对照组、β-雌二醇组以及蛇床子素低、中、高剂量组(1×10-6,1×10-5,1×10-4mol/L).用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,通过检测各组细胞内碱性磷酸酶活力以及矿化结节染色评价细胞分化情况,蛋白免疫印迹法检测GRP78、PDI、CHOP蛋白表达.结果与结论:①1×10-4,1×10-5mol/L蛇床子素可抑制成骨细胞增殖;②10-4mol/L蛇床子素可增加成骨细胞碱性磷酸酶活力、增强成骨细胞矿化能力;③10-4mol/L蛇床子素可降低GRP78蛋白水平,增加PDI及CHOP蛋白表达;④结果表明,蛇床子素可促进成骨细胞分化,可能通过内质网应激抑制成骨细胞增殖.
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内皮素1调控P19细胞向心脏传导细胞分化的机制
背景:内皮素1作为一种来源于心内膜和动脉血管内皮的旁分泌信号,能够诱导心脏传导细胞的分化成熟.目的:探讨内皮素1在体外诱导P19细胞向心脏传导细胞分化的作用.方法:P19 细胞分别与1%二甲基亚砜和100 nmol/L浓度内皮素1孵育,通过Western blot、免疫荧光和qRT-PCR鉴定早期心肌细胞特征性转录因子GATA4、MEF2C和心肌细胞分化标志物MHC-α、cTnT,以及重要的传导细胞转录因子Nkx2.5、Tbx5和分化标志物Cx40、ANP的变化.qRT-PCR鉴定内皮素1特异性受体阻断剂和阻断PI3K-AKT-mTOR信号通路对内皮素1诱导P19细胞分化的影响.结果与结论:①内皮素1能够上调P19细胞早期心肌转录因子、心肌结构基因和传导系统特征表型表达;②与二甲基亚砜相比,内皮素1能够确实诱导P19细胞向心脏传导细胞分化;③内皮素1主要通过ETA通路上调 Nkx2.5 和 Cx40表达水平从而诱导 P19细胞向传导细胞分化,ETB通路可能还参与了一条负反馈调节通路;④内皮素1能够通过PI3K-AKT-mTOR信号通路调控Nkx2.5表达进而影响传导细胞分化.
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低氧对内皮祖细胞迁移的影响
背景:研究证明,低氧微环境下局部内皮祖细胞通过释放基质细胞衍生因子1等细胞因子促进内皮祖细胞的动员、归巢.目的:分析不同低氧时间点对内皮祖细胞基质细胞衍生因子1蛋白表达的影响,及对内皮祖细胞迁移影响,为治疗缺血性疾病提供新的思路.方法:①取SD大鼠的四肢长骨骨髓,分离、培养内皮祖细胞并鉴定;②将分离培养的细胞分4组置于常氧和低氧条件下:常氧对照组、低氧6 h组、低氧12 h组、低氧24 h组;③采用ELISA法、免疫荧光法检测不同氧气浓度和时间条件下内皮祖细胞上清液基质细胞衍生因子1的表达;RT-PCR及Western Blot检测不同条件下基质细胞衍生因子1 mRNA和蛋白的表达;Transwell检测低氧对内皮祖细胞迁移的影响.结果与结论:①实验分离培养的细胞经鉴定为内皮祖细胞;②ELISA 和免疫荧光检测结果均显示:与常氧对照组比较,培养上清液中基质细胞衍生因子1的表达在低氧6 h开始增强,12 h表达强,24 h又有所减弱;④RT-PCR 及 Western Blot 检测结果显示:与常氧对照组相比,低氧诱导基质细胞衍生因子1的mRNA和蛋白相对表达量显著上调(P < 0.01),其中,低氧12 h条件下基质细胞衍生因子1的表达强,依次为低氧24 h和低氧6 h;⑤与常氧对照组比较,低氧组24 h穿膜细胞数显著增加(P < 0.05),低氧12 h组显著多于低氧6 h组和低氧24 h组;⑥结果表明,低氧能够促进基质细胞衍生因子1的分泌,并诱导内皮祖细胞迁移.
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亚甲蓝对人髓核细胞毒性的CCK-8法检测
背景:亚甲蓝在腰椎椎间孔镜手术中具有鉴别及显影退变椎间盘的作用,但是很多专家学者提出亚甲蓝会加速椎间盘的退变,然而国外文献研究发现亚甲蓝具有嗜酸性,推测对具有酸性环境的退变椎间盘具有治疗作用.因此,亚甲蓝对椎间盘是否具有毒性作用一直存在争议.目的:使用CCK-8法测定亚甲蓝对髓核细胞是否具有毒性作用.方法:选取2例椎间盘突出患者的废弃髓核组织,消化后提取髓核细胞,培养至细胞长满培养皿80%后消化细胞并制作细胞悬液,分6组接种到96孔板,一组为空白对照(只有培养基、CCK-8溶液而没有细胞),一组为0加药对照组(只有培养基、细胞和CCK-8溶液),其余分别加入1%,2%,3%,4%浓度的亚甲蓝干预细胞生长繁殖.在培养24,48,72,96 h后使用CCK-8法测定吸光度,计算细胞活力并观察每一组颜色变化.结果与结论:0加药对照组颜色深,亚甲蓝各浓度组随着亚甲蓝浓度升高浓度变浅,细胞活力0加药组活力强,随着亚甲蓝浓度增高,活力下降.推测亚甲蓝对人髓核细胞具有一定的细胞毒性.
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细胞块技术在胸腔积液病理诊断评估中的应用
背景:目前细胞学涂片是胸腔积液的常规检测方法,但其结果往往不能令人满意,实验利用胸腔积液制成细胞块并且结合免疫化学和基因检测的方法完善其结果准确性以及对预后治疗的帮助.目的:探讨胸水细胞块技术在胸腔积液病理诊断和分析中的应用价值.方法:收集2016年1月至2017年8月北京大学第一医院病理科胸腔积液标本105例,离心后提取有效成分制作石蜡块切片并苏木精-伊红染色,同时进行免疫组织化学标记,对诊断为肺癌者进一步切蜡膜卷提取脱氧核糖核酸行相关基因检测.结果与结论:常规细胞学涂片恶性检出率30.5%(32/105),明显低于细胞块切片恶性检出率44.8%(47/105),细胞块切片结合免疫组织化学染色分析恶性检出率高达57.1%(60/105),并可诊断肿瘤具体组织类型.105例中19例肺腺癌细胞块标本行肺癌相关基因检测,核酸质量均合格,其中13例检测到基因突变.结果说明,细胞块合并免疫组织化学染色是胸腔积液诊断良恶性肿瘤及肿瘤来源有效的方法,并且能够进一步检测基因突变情况.
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细胞凋亡和丙二醛在长时间大强度运动模型大鼠骨骼肌中的表达
背景:骨骼肌细胞凋亡会导致多种骨骼肌疾病的出现,常规疗法效果都不太理想.目的:分析不同强度运动对大鼠骨骼肌形态结构和细胞凋亡的影响,可以起到预防骨骼肌细胞凋亡的作用.方法:健康3月龄雄性SD大鼠30只随机分为3组:安静对照组、一般有氧运动组和长时间大强度运动组.安静对照组不进行游泳运动,运动组运用游泳运动制备动物模型,运动组的训练周期都为10周,10周后对大鼠全部实施麻醉后取腓肠肌,用以苏木精-伊红染色观察骨骼肌形态和TUNEL检测细胞凋亡情况;并检测骨骼肌组织超氧化物歧化酶、丙二醛含量,做丙二醛与积分吸光度的相关分析.结果与结论:①骨骼肌苏木精-伊红染色结果:长时间大强度运动组肌纤维排列紊乱、结构模糊;②丙二醛和超氧化物歧化酶含量:与安静对照组相比,一般有氧运动组、长时间大强度运动组的丙二醛增加,一般有氧运动组与安静对照组相比较超氧化物歧化酶有显著性增加(P < 0.05),长时间大强度运动组与有氧组相比较超氧化物歧化酶显著性减少(P < 0.05);③TUNEL检测结果:长时间大强度运动组细胞凋亡积分吸光度值显著高于一般有氧运动组和安静对照组(P < 0.01);④相关分析:丙二醛与积分吸光度值之间显著相关,呈正相关关系;⑤结果说明,长时间大强度运动组骨骼肌组织中的长丙二醛增多,机体疲劳程度更为严重.有氧运动使机体骨骼肌逐渐有适应性,而由于过度运动负荷较大,对骨骼肌形态结构有一定损伤,使得细胞凋亡增加.随着运动强度增加导致丙二醛生成增加而清除相对不足,细胞凋亡积分吸光度值增大.
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川芎嗪干预早期膝骨关节炎大鼠软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因与血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达
背景:课题组前期研究发现川芎嗪能明显降低骨关节炎关节液中NO、前列腺素E2水平,对减轻骨性关节炎的炎症有一定作用,但具体机制还不清楚.目的:观察川芎嗪治疗膝骨关节炎模型关节软骨中Ⅱ型胶原纤维 α1基因、血管内皮生长因子 mRNA 及miR20b表达水平,并探讨川芎嗪治疗早期膝骨关节炎大鼠的作用机制.方法:健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组,后4组通过木瓜蛋白酶关节腔注射制作早期膝骨关节炎大鼠模型.造模后川芎嗪高、低剂量组分别灌胃川芎嗪100 mg/kg和50 mg/kg,阳性对照组灌服塞来昔布24 mg/kg;正常组、模型组灌服等量生理盐水.干预6周后取材,分别行鼠软骨大体组织学评分、qRT-PCR检测软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达水平.结果与结论:①软骨Mankin评分:川芎嗪高、低剂量组和阳性对照组均较正常组高(P < 0.05),较模型组低(P < 0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;②川芎嗪各剂量组和阳性对照组的Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA表达较正常组上调(P < 0.05),较模型组下调(P < 0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;③川芎嗪各剂量组、阳性对照组及正常组的 miR20b 表达均较模型组上调(P < 0.05),其中川芎嗪低剂量组<阳性对照组<川芎嗪高剂量组;④提示:川芎嗪对早期膝骨关节炎大鼠治疗具有积极作用,可能通过上调软骨中miR20b从而抑制血管内皮生长因子mRNA的表达,促进软骨的修复.
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骨骼肌中筋膜源性细胞分化为软骨细胞的能力
背景:骨骼肌中的肌源性细胞在骨形态发生蛋白4与转化生长因子β3的作用下具有成软骨分化的能力,但由于骨骼肌组成复杂,其中包括肌纤维组织、筋膜组织、血管组织、神经组织等,所以其中具备向软骨分化能力的细胞组织来源尚未确定.目的:观察骨骼肌中筋膜源性细胞分化成软骨细胞的能力,以明确骨骼肌来源的细胞中具有成软骨分化能力的种子细胞.方法:分离大鼠的臀大肌筋膜组织,剪成细小组织块后于含骨形态发生蛋白4和转化生长因子β3的软骨形成培养基中培养,在第14天收集样本,使用阿尔新蓝、苏木精-伊红染色和番红O染色来鉴定筋膜源性细胞的成软骨细胞分化能力;使用结蛋白、CD34、波形蛋白、v-WF和α平滑肌肌动蛋白相应抗体的免疫染色来研究筋膜源性细胞上各种不同细胞标志物在的表达情况;筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞不同比例混合(1:0,4:1,1:1,1:4,0:1),用免疫染色方法分析筋膜源性细胞和L6细胞分化成软骨细胞的能力.结果与结论:①当在软骨形成培养基中培养第14天时,在阿尔新蓝和番红O免疫染色为阳性结果,表明筋膜组织块中的细胞具有分化成软骨细胞的能力;②分离的筋膜源性细胞的结蛋白,CD34、v-WF 抗原和 α平滑肌肌动蛋白的表达是阴性的,但超过90%的细胞表达波形蛋白;③纯筋膜源性细胞成软骨分化能力强,随着L6大鼠成肌细胞比例增高,其成软骨分化能力逐渐下降;④结果提示,从骨骼肌中筋膜源性细胞表面标记物分析、免疫染色及筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞混合培养对比后,表明筋膜源性细胞具有分化成软骨细胞的能力,是骨骼肌来源的细胞中具有成软骨能力的种子细胞.
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骨软骨前体细胞分离鉴定及转化生长因子β3对其成软骨分化的影响
背景:关节软骨中存在着前软骨干细胞,可能成为软骨组织工程潜在的种子细胞,转化生长因子β3对前软骨干细胞的增殖及成软骨分化具有正向调节作用.目的:分析转化生长因子β3对骨软骨前体细胞成软骨的分化作用.方法:分离筛选出晚期骨关节炎患者软骨组织 CD146+软骨细胞并鉴定.培养 CD146+软骨细胞团块分为4组:为普通培养基组,转化生长因子β3-诱导组,转化生长因子β3+诱导组(含2.5 μg/L重组人转化生长因子β3)和转化生长因子β3++诱导组(含10 μg/L重组人转化生长因子β3).培养4周后行组织块Ⅱ型胶原、Aggrecan免疫组织化学及相关基因实时荧光定量PCR检测.结果与结论:①成软骨诱导培养时,转化生长因子β3++诱导组所形成软骨块＞转化生长因子β3+诱导组＞转化生长因子β3-诱导组;②免疫组织化学结果显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达明显高于转化生长因子β3+诱导组(P＜ 0.05),转化生长因子β3+诱导组表达明显高于转化生长因子β3-诱导组(P＜ 0.05);③实时荧光定量PCR检测显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA的表达明显强于转化生长因子β3+诱导组(P＜ 0.05),转化生长因子β3+诱导组2指标表达明显强于转化生长因子β3-诱导组(P＜ 0.05);转化生长因子β3++诱导组和转化生长因子β3+诱导组性别决定区Y框蛋白-9的表达均明显强于转化生长因子β3-诱导组(P＜ 0.05);④结果表明,晚期骨关节炎患者残余关节软骨中存在着具有干细胞特性的骨软骨前体细胞;转化生长因子β3具有较强促骨软骨前体细胞成软骨分化的能力,其有可能成为软骨组织工程中理想的细胞因子.
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原发性干燥综合征周围神经病的神经电生理特点分析:前瞻性病例系列研究方案及预试验结果
背景:干燥综合征是一种慢性进展性自身免疫性疾病,其中原发性干燥综合征患者发生周围神经系统损害比率为10%-30%.既往研究仅展示了原发性干燥综合征周围神经病患者会出现多种电生理表现,但对其神经电生理特点无统一认识,易与其他病因导致的周围神经病混淆.目的:观察原发性干燥综合征周围神经病变患者神经电生理特征表现.方法:此项试验涉及参与患者100例,在中国昆明医科大学第一附属医院神经内科完成,预实验纳入52例符合原发性干燥综合征周围神经病变的患者.主要观察指标为运动神经传导速度异常率,次要观察指标为末端运动潜伏期异常率、复合肌肉动作电位波幅异常率、感觉神经传导速度异常率、感觉神经动作电位波幅异常率、F波异常率及皮肤交感反射异常率.结果与结论:预试验纳入的52例患者的结果是,上、下肢不同电生理检测指标异常率接近,运动神经传导速度异常率远高于复合肌肉动作电位波幅异常率,感觉神经传导速度异常率明显比感觉神经动作电位波幅异常率高,且运动神经传导速度与感觉神经传导速度异常率接近,复合肌肉动作电位与感觉神经动作电位波幅异常率接近,F波异常率明显低于神经传导异常率,皮肤交感反射异常率与神经传导异常率接近.试验结果能够展示原发性干燥综合征周围神经病神经电生理异常情况,为疾病的诊断提供帮助.
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唇红、面部皮肤颜色测量及其相关性
背景:在颌面部肿瘤和创伤造成的颌面部软组织缺损的修复中,赝复体仿真性至关重要.关于唇红等软组织颜色方面的研究却较少,面部皮肤和唇红颜色相关性的研究则更少.目的:采集人群唇红、面部皮肤的色度值数据,明确人群唇红、面部多个部位皮肤色度值范围及其相关性.方法:采用日本柯尼卡美能达CM-700d分光测色计采集、测定202例志愿受试者唇红、面部皮肤色度值,测定结果用CIELAB表色系统来描述,以L*值代表着明度;a*值表示颜色从绿色(-a*)到红色(+a*)之间变化, b*值表示颜色从黄色(+b*)到蓝色(-b*)之间变化;分析唇红、颊部皮肤色度值之间的相关性.结果与结论:①受试者202例人群中唇红的色度值L * 53.25±3.42,a * 11.19±1.70,b * 8.77±2.12;颊部皮肤色度值L * 61.87±3.59,a * 7.21±1.29,b * 12.98±1.64;②有牙颌人群中唇红L *值与唇红a *值呈负相关,与唇红b *值呈正相关,与颊部皮肤L *值呈正相关,与颊部皮肤a *值呈负相关;唇红a *值与颊部皮肤a *值呈正相关;唇红b *值与与颊部皮肤b *值呈正相关;颊部皮肤L *值与唇红b *值呈正相关,与颊部皮肤a *值呈负相关;颊部皮肤a *值与唇红b *值呈负相关,颊部皮肤a *值与颊部皮肤b *值呈负相关;③结果说明,通过此项研究初步得出唇红、面部皮肤色度值范围及其相关性,为赝复体制作及临床医生选色提供了依据.
