中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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苦杏仁甙抑制成人肾脏成纤维细胞的增殖
背景:苦杏仁甙在体外具有抑制纤维细胞增殖的作用,而肾脏移植后一定时间内的肾活检均提示有程度不同的纤维化,苦杏仁甙是否能抑制肾脏移植后的纤维化是一个有临床意义的课题.目的:观察苦杏仁甙对成人肾脏成纤维细胞增殖的影响.设计、时间及地点:前瞻性随机对照实验,于2003-06/2007-12在南京军区福州总医院实验科完成.实验室为南京军区重点实验室.材料:苦杏仁甙经中国药品生物制品检定所鉴定,批号020903.方法:采用消化法原代培养人肾成纤维细胞,并以免疫细胞化学方法鉴定.采用MTT比色法检测含25,50,80,100,200 mg/L苦杏仁甙的培养液对人肾成纤维细胞增殖的影响,以不含苦杏仁甙的培养液为对照.主要观察指标:苦杏仁甙培养液对肾脏成纤维细胞的增殖活性的影响.结果:分离出的成纤维细胞免疫细胞化学方法进行鉴定显示,vimentin呈阳性表达,keramin和desmin呈阴性表达,确认为成纤维细胞.随着培养时间的延长,对照组肾脏成纤维细胞明显增殖.不同质量浓度苦杏仁甙组肾脏成纤维细胞增殖明显低于对照组.不同质量浓度苦杏仁甙对成纤维细胞的增殖活性均有抑制作用,且呈一定剂量依赖性,以100 mg/L苦杏仁甙抑制作用强.结论:苦杏仁甙能明显抑制人肾成纤维细胞增殖,并呈剂量依赖性.
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半肝切除术后血清白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素8、肿瘤坏死因子及胰岛素样生长因子变化
目的:机体在严重创伤诱导下产生的应激不良反应可激活自由基、内皮细胞、单核-巨噬细胞等,介导炎症介质大量产生和释放.实验观察半肝切除对血清细胞因子的影响.方法:实验于2006-04/07在大同市第七人民医院临床实验室完成,对动物处置方法符合动物伦理学要求.选用25只健康大白兔.按随机数字表法分为2组,肝切除组(n=20)麻醉后按正规肝切除方式切除左半肝组织,创面无活动性出血后关腹;对照组(n=5)仅行开腹、关腹术.分别于术前1 d、术后24 h、术后1,2,3,4周取外周静脉血,应用放射免疫法测定白细胞介索2、白细胞介素6、白细胞介素8、肿瘤坏死因子及胰岛素样生长因子表达水平.结果:25只大白兔全部进入结果分析.与对照组相比,肝切除术后24h外周血白细胞介素2有一定程度升高,术后1周降至低于术前水平,以后缓慢回升,术后4周接近术前水平:白细胞介素6术后24 h开始升高,术后3周达高峰,然后逐渐下降,术后4周近术前水平;白细胞介素8变化规律与白细胞介素6类同;肿瘤坏死因子术后24 h略有下降,以后逐渐升高,术后4周略有下降:胰岛素样生长因子术后24 h开始缓慢上升,术后2周升至高.以后缓慢回落,术后4周恢复至正常水平.结论:肝切除手术刨伤可引起大白兔外周血T细胞生长因子白细胞介素2降低,肝再生启动因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子,炎症因子白细胞介素8及促生长因子胰岛素样生长因子升高.
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正常小鼠巨噬细胞及外周血淋巴细胞亚群对防风多糖干预的反应
目的:有研究证明,防风多糖具有明显的体内抗肿瘤作用.实验拟进一步探讨防风多糖对正常小鼠巨噬细胞及外周血淋巴细胞亚群的影响.方法:实验于2006-8/11在河北北方学院实验中心完成.防风多糖提取方法:取已粉碎、真空干燥的一定量防风用85%乙醇回流提取1 h,挥干溶剂,加入适量三蒸水回流提取4 h,趁热滤过,滤渣加入三蒸水继续回流2 h,合并2次滤液,减压浓缩,4倍体积无水乙醇醇沉,静置过夜,沉淀分别用无水乙醇、丙酮、石油醚依次洗涤即得防风粗多糖.采用苯酚-硫酸法测多糖含量.昆明种健康小白鼠120只,雌雄不拘,体质量20～25 g,由本院动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验方法:将120只昆明种小白鼠按随机数字表法分为4组:空白对照组和防风多糖250,500,1 000 mg/kg剂量组,每组30只.每天给药1次,连续7 d.每组10只末次给药后1 h.取腹腔液制片瑞士染色,观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况.另10只剥取脾脏称重,计算脾指数,碘化丙啶综合染液染色.采用FACSAria流式细胞仪进行检测,ModFit软件进行细胞周期分析脾细胞增殖指数.剩余10只采用FACSAria流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群的比例.结果:120只小鼠均进入结果分析.①与对照组比较,中、高剂量组防风多糖均可提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.05～0.01).②各剂量组均可明显提高小鼠脾细胞的增殖指数,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01);各剂量组小鼠的脾指数虽高于对照组(P＜0.05),但组间无统计学意义(P＞0.05).⑨随着防风多糖浓度的增加,CD3+CD4+与CD3+CD8+比值增高(P＜0.05～0.01).与对照组比较,实验组CD19+的比例增高(P＜0.05～0.01),但变化无剂量依赖性.结论:防风多糖具有剂量依赖性的提高小鼠特异性免疫和细胞免疫功能,并促进小鼠脾淋巴细胞的增殖;对小鼠体液免疫功能的影响无剂量依赖性.
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银杏叶提取物对大鼠胰岛细胞获取和冻存的影响
背景:能否获取到足够的具有生物活性的胰岛细胞是影响胰岛细胞移植成功与否的主要原因之一,细胞冻存是收集足够胰岛的可行于段,但冻存复苏过程可引起细胞的凋亡.目的:观察银杏叶提取物对大鼠胰岛获取及冻存后功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-10/12在西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室完成.材料:选用成年SD大鼠40只用于分离提取胰岛细胞.方法:按随机数字表法将40只大鼠分为2组(n=20),银杏叶提取物组取胰腺前经尾静脉注射银杏叶提取物25 mg/kg,获取胰岛后冻存.复苏后分别在含银杏叶提取物的培养基中培养3,7,14,21 d(n=5).对照组尾静脉注射等量盐水,冻存、培养时间同银杏叶提取物组.主要观察指标:电镜下观察胰岛细胞形态:应用原位末端标记法检测细胞凋亡情况:以免疫组化法检测Bcl-2表达.结果:①银杏叶提取物组胰岛细胞复苏损失率明显低于对照组(P＜0.05).②与对照组相比,银杏叶提取物组胰岛细胞复苏培养3 d时内分泌颗粒及酶原颗粒增多明显.③银杏叶提取物组复苏培养21 d后胰岛细胞仍可保持45%左右的存活率,对照组胰岛细胞存活率＜35%,两组比较差异具有显著性意义(P＜0.05).④复苏培养7,14d,银杏叶提取物组胰岛细胞凋亡率低于对照组(P＜0.05),Bcl-2表达高于对照组(P＜0.05).结论:银杏叶提取物能够减少胰岛冻存复苏的损失,阻止胰岛细胞的凋亡,从而保护了胰岛细胞的活性.
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胎鼠肺泡Ⅱ型细胞的原代培养及鉴定
实验于2007-10/12在北京军区总医院附属八一儿童医院实验室完成.取孕19 d SD大鼠胎鼠肺组织进行原代培养,通过IgG包被瓶培养进行筛选纯化.分别于培养24,48,72 h后检测细胞的活力;利用共聚焦显微镜及电镜对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行鉴定.各时间点Ⅱ型细胞活力均在90%以上,细胞纯度在91%以上,电镜下细胞胞浆内含有丰富的板层小体,细胞表面有微绒毛:共聚焦显微镜下细胞浆中有呈绿色荧光的SP-C阳性表达.胰蛋白酶加胶原酶消化,IgG包被瓶进行筛选所得肺泡Ⅱ型细胞活力及纯度均较高,可以作为肺泡Ⅱ型细胞的原代培养的常规方法;电镜和免疫荧光均可达到鉴定目的.
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人内皮型一氧化氮合成酶基因转染桡动脉的表达
目的:桡动脉作为血管桥材料在冠状动脉旁路移植术中具有重要作用,但血管桥痉挛一直是困扰桡动脉移植的难题.实验通过腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因(AdCMVeNOS)转染人桡动脉,体外培养后检测人内皮型一氧化氮合成酶基因的表达,观察其对内膜增生的影响.方法:①实验于2005-03104在解放军沈阳军区总医院完成.实验用Enos-Ad由该院麻醉科张铁铮主任惠赠.桡动脉来自15例冠状动脉旁路移植手术患者剩余桡动脉.将桡动脉横切成5 mm血管环,采用随机数字表法分为3组,对照组、空载腺病毒液感染组、内皮型一氧化氮合酶基因转染组,每组8份.空载腺病毒液感染组、内皮型一氧化氮合酶基因转染组桡动脉血管环分别置于空载腺病毒液和AdCMVeNOS溶液中1 h,取出后体外培养14 d.应用多聚寡核苷酸探针和高敏感标记技术检测外源性基因内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达:免疫组织化学染色方法检测内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达:苏木精-伊红染色及弹性纤维染色后,应用计算机图像分析系统检测桡动脉内膜、中膜增生情况.结果:①3组培养的桡动脉在14 d后有新内膜形成和显著的中膜增厚,内皮型一氧化氮合酶基因转染组内膜厚度及内膜/中膜厚度比值低于对照组(P＜0.01),空载腺病毒液感染组与对照组差异无显著性(P＞0.05).②培养14d后,内皮型一氧化氮合酶基因转染组内膜和中膜可检测到内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白质表达,对照组及空载腺病毒液感染组未见明显表达.结论:腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因成功转染体外培养桡动脉中并有效表达,内皮型一氧化氮合酶基因具有防治体外培养桡动脉内膜增生的作用.
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应用人工血管移植物转流治疗Leriche综合征78例
背景:针对腹主动脉闭塞引起下肢慢性缺血的Leriehe综合征的治疗,尚缺乏有效恢复血管弹性和闭塞血管再通的药物.应用人工血管移植血管流出道重建可迅速改善远端肢体的血运.目的:评估人工血管移植干预Leriche综合征的生物相容性,并观察治疗效果.设计:前后对照观察.单位:解放军总医院普通外科,北京市石景山医院心胸血管外科.对象:选择Leriche综合征患者78例,包括于1995-0112007-01解放军总医院普通外科收治的62例及2001-01/2007-01北京市石景山医院心胸血管外科收治的16例.男66例,女12例;年龄46～75岁,平均58岁.发病时间6个月～8年,平均2年6个月,患者对治疗方案均知情同意.方法:均在全身麻醉或硬膜外麻醉下行血管转流,其中主-股转流63例,主髂转流15例,采用人工血管作为移植物,其中PTFE人工血管18例,聚酯(polyester)人工血管60例.PTFE人工血管由美国Gore公司提供,为膨体聚四氟乙烯人工血管,是一种惰性材料,生物反应较轻,其纤维呈非规则的随意排列,并具有微孔.聚酯人工血管为法国Intervascular公司生产的针织聚脂产品,这种针织聚脂人工血管采用高纯度I犁牛胶原制成,具有高度生物相容性,同时在胶原涂层的血管表面镶嵌能保留4周的肝素分子,具有预防血栓形成和抑制平滑肌细胞过度增生的作用;所用型号IGK1608,主干内径为16 min,分支内径为8mm.治疗方案经医院伦理委员会批准.采用回院复查的方法通过彩色血管多普勒、SCTA三维重建或DSA血管造影,SCTA检查对患者进行3个月～5年随访.主要观察指标:人工血管生物相容性;人工血管移植治疗效果.结果:①人工血管生物相容性:人工血管移植后3个月复查.彩色超声以及SCTA检查血管吻合口及人工血管内均未见血栓.77例获得1年以上的随访,吻合口均通畅.76例获得5年以上随访,吻合口通畅率为89%(68/76).血管移植后血小板、白细胞计数、血红蛋白、肝肾功能无与血管移植相关的变化.②疗效:血管移植后7 d,患肢缺血症状均得到改善.人工血管移植后3个月,患肢缺血症状消失,64例阳痿现象得到明显改善.结论:利用人工血管移植行血管重建,人工血管生物相容性良好,主动脉股动脉转流或主动脉骼动脉转流后治疗Leriche综合征疗效佳.
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雷帕霉素滴眼液对兔角膜新生血管的抑制作用
背景:雷帕霉素为抗移植排斥反应的药物,近年来有实验证实雷帕霉索能有效抑制小鼠视网膜及虹膜新生血管.目的:验证新型免疫抑制荆雷帕霉素对碱烧伤诱导兔角膜新生血管的影响,并与地塞米松相比较.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-02在重庆医科大学基础研究所免疫组织化学实验室及神经病学重点实验室完成.材料:选用健康成年新西兰家兔30只30眼,制作中度碱烧伤诱导的兔角膜新生血管模型.方法:将造模成功的30只兔30眼按随机数字表法分为5组(n=6),即10,20 mg/L雷帕霉素组、2.5 g/L地塞米松组、雷帕霉素溶媒组及空白对照组,空白对照组不给予任何干预措施,其余各组均于碱烧伤后第2天给予相应药物滴眼,4次,d.主要观察指标:于碱烧伤后第3,7,14天应用显微镜观察各组兔角膜新生血管的长度及面积,用免疫组织化学方法定性观察血管内皮生长因子的表达.结果:①10,20 mg/L雷帕霉索组、2.5 g/t,地塞米松组兔角膜新生血管的长度与面积均小于雷帕霉素溶媒组及空白对照组(P＜0.01).其中10,20 mg/L几雷帕霉素组小于2.5 g/L地塞米松组(P＜0.05),不同剂量的雷帕霉素组差异不明显.②角膜血管内皮生长因子在10,20mg/L雷帕霉索组及2.5 g/L地塞米松组表达减弱.在雷帕霉素溶媒组与空白对照组表达增强.结论:局部滴用10,20 mg/L雷帕霉素滴眼液及2.5 g/L地塞米松滴眼液均可抑制碱烧伤诱导兔角膜新生血管的生长,雷帕霉素作用强于地塞米松.
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肾移植术后检测血清促红细胞生成素的临床意义
目的:研究认为,肾移植后贫血得到纠正与血中血清促红细胞生成素水平升高有关.检测肾移植术后患者血清促红细胞生成素变化情况,并分析其评估价值.方法:收集于2005-05/12在中南大学湘雅三医院移植中心行肾移植手术的肾移植患者20例,对治疗及实验方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.分别于肾移植术前1天、术后3,5,7天、第2,3,4周采用放射免疫法测定息者血清促红细胞生成素水平.结果:20例患者全部进入结果分析,无脱落.肾移植术后患者血清促红细胞生成素水平显著高于移植前(P＜0.05),并于术后3周左右达到高峰(P＜0.01),峰值为术前水平的3.5倍左右.结论:肾移植患者术后血清促红细胞生成素水平逐渐升高.监测血清促红细胞生成素水平,有助于预测和评估移植肾功能恢复和发生移植术后红细胞增多症的可能性.
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真核表达载体血管内皮生长因子转染血管内皮细胞及对新生血管形成的影响
背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)能与存在内皮细胞表面的特异性受体结合,刺激体内新生血管形成,但在体内半衰期极短,在移植局部难以维持足够的浓度,限制了其临床应用.目的:观察VEGF与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent,EGFP)共表达载体转染对大鼠血管内皮细胞形成新生血管的影响.设计、时间及地点:随机分组设计、对照动物实验,于2004-09/2005-01在中国医科大学附属第一医院器官移植实验室完成.材料:30只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只.质粒pIRES2-EGFP/VEGF165由第四军医大学提供.方法:采用层析法大量提取pIRES2-EGFPNEGF165质粒,采用阳性脂质体法进行转染,计数1×106血管内皮细胞植入雄性Wiser大鼠肾被膜下.实验组:植入转染质粒pIRES2-EGFP/VEGF165的内皮细胞:空白转染组:植入转染质粒pIRES2-EGFP的内皮细胞:对照组:植入正常大鼠血管内皮细胞.主要观察指标:①转染72 h后观察EGFP及VEGF表达情况.②流式细胞仪检测转染效率.③植入后14 d苏木精-伊红染色观察植入血管内皮细胞处组织形态学变化.结果:30只大鼠均进入结果分析.①荧光显微镜下实验组内皮细胞有特异性的EGFP表达.②流式细胞仪分析转染效率为13.06%.③实验组血管内皮细胞胞核和胞浆中均有VEGF表达.反转录-聚合酶链反应显示实验组大鼠血管内皮细胞中有人源化VEGF165基因在mRNA水平表达.④移植后14 d.实验组大鼠肾被膜下可见成团的新生毛细血管网形成,而对照组及空白转染组虽血管内皮细胞仍存活,但未形成明显血窦.结论:转染VEGF基因是促进内皮细胞早期(14d内)形成新生血管的有效途径.
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荧光定量聚合酶链反应法比较标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠不同组织中的表达
背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因.人鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要.目的:比较分析使用广泛的4个标准管家摹因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况.设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成.材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况.方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾,心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体RNA的表达情况.主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异.结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异小.②老年大鼠肾组织中表达稳定的管家基因是β-肌动蛋白:心脏组织和肺组织中表达稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶.结论:老年大鼠组织间信使RNA分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体RNA:另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸廿油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白.
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穿透性角膜移植治疗高危真菌性角膜溃疡36例:同期非对照随访
背景:单纯药物治疗高危真菌性角膜溃疡效果不佳,目前穿透性角膜移植已是挽救眼球和视力的主要手段.目的:观察穿透性角膜移植治疗高危真菌性角膜溃疡的随访结果.设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2000-01/2005-01在青岛大学医学院附属医院眼科完成.对象:选择在青岛大学医学院附属医院行穿透性角膜移植的高危真菌性角膜溃疡患者36例(36眼),其中9例穿孔,前房积脓25例.术前合并白内障6例,合并青光眼3例.方法:移植前给予抗真菌联合抗细菌治疗,36例患者均在入院4 d内完成了穿透性角膜移植,术后局部和全身给予抗炎和抗真菌药物治疗,随访6～24个月.主要观察指标:观察移植后视力变化和真菌复发、植片排斥、继发性青光眼、并发性白内障等并发症的发生情况.结果:①36例患者中13例随访6～12个月,17例随访13～18个月,6例随访19～24个月.②35例患者(97%)成功地保存了眼球.34例(94%)患者视力有不同程度提高.③移植后4例患者(11%)真菌复发,其中3例药物治疗后治愈,1例摘除眼球:13例患者(36%)植片发生排斥,其中10例经抗排斥治疗植片转为透明,3例因药物治疗无效而行二次穿透性角膜移植术;3例患者(8%)植片发生溃疡,其中2例治愈,1例因合并角膜内皮功能失代偿而行再次穿透性角膜移植;5例患者(14%)继发青光眼,眼压均得到成功控制:4例患者(11%)发生并发性白内障,其中2例行白内障摘除.其余患者移植后随访期间眼部情况稳定,植片保持透明.终随访时,32例患者(89%)角膜植片透明.结论:对于保守治疗无效的高危真菌性角膜溃疡患者,穿透性角膜移植是挽救眼球和视力的有效方法.
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急性排斥期大鼠角膜移植物肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体4表达变化与环孢素A的干预
目的:研究提示,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其死亡受体4可能参与角膜移植免疫排斥反应.观察免疫抑制剂环孢素A对急性排斥期角膜移植物肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体死亡受体4表达的影响.方法:实验于2007-07/10在南方医科大学珠江医院中心实验室完成,对动物处置方法符合动物伦理学要求.选用Wistar大鼠18只为供体,SD大鼠36只为受体,钻取供体双眼角膜植片,于受体右眼行穿透性角膜移植术;另取5只Wistar大鼠做正常对照.按随机数字表法将受体大鼠分为2组(n=18),即生理盐水组及环孢素A组,术后药物滴眼,2次/d,1滴/次,连用2周.应用免疫组织化学法检测急性排斥期角膜植片肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体4表达情况.结果:36只受体大鼠全部进入结果分析.①肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体4在正常角膜均有表达.主要分布于上皮层,在基质层及内皮层有少量表达.②环孢素A组和生理盐水组大鼠角膜植片各层肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体4表达均增高,生理盐水组增高尤为明显.结论:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体4的表达参与角膜移植免疫排斥反应的发生,环孢素A可通过下调其表达抑制角膜移植免疫排斥反应.
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自体桡动脉作为非体外循环冠状动脉旁路移植材料的评估
同顾性分析25例2005-01/2007-01在昆明医学院第一附属医院应用乳内动脉和桡动脉进行全动脉化冠状动脉旁路移植患者的临床资料.全组取左乳内动脉25例:左侧桡动脉15例,右侧桡动脉6例,双侧桡动脉4例;人均重建旁路3.14(2～4)支.出院后1,3,6个月门诊随访,以后每半年1次,术后随访11～35个月,血管通畅率良好,取桡动脉侧无前臂运动障碍及缺血并发症.结果说明自体桡动脉是冠状动脉搭桥理想的第2种动脉移植物,重建血管后通畅率高.
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膀胱无细胞基质移植物重建兔阴茎白膜
背景:阴茎弯曲的矫正需用材料替代缺损的白膜或增大病变处白膜,目前的白膜替代材料没有达到理想的效果,国外学者开始考虑用脱细胞的细胞外基质重建阴茎白膜.目的:应用膀胱无细胞基质移植物重建新西兰兔阴茎白膜,动态观察其重建效果.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-12/2007-06在四川大学华西实验动物中心、四川大学组织工程实验室及贵阳医学院组织上程实验室完成.材料:选用健康封闭新两兰兔50只,均为雄性,体质量2.6～3.0 kg,10只新西兰兔用于膀胱无细胞移植物的制备.方法:将剩余40只兔按随机数字表法分为对照组和膀胱无细胞基质移植物组(n=20),在阴茎背侧切除白膜造成10 mm×5 mm缺损,分别采用白膜原位缝合及膀胱黏膜无细胞基质修复.主要观察指标:分别于术后2.6,12和24周.每个时间点取5只动物进行阴茎海绵体内快速注射生理盐水诱导阴茎勃起,观察阴茎弯曲情况:然后处死动物术区取材,进行苏木精-伊红、Masson和Stirus染色,检测炎性标志因子诱导型一氧化氮合成酶和促纤维化因子转化生长因子β1的表达:应用图像采集系统测量胶原纤维的面积.结果:①术后6周时弯曲发生率高.以后逐渐减少,到24周只有对照组发生弯曲1例.②术后2周时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维共同存在,比例相当;以后Ⅰ型胶原纤维逐渐增加(P＜0.05),Ⅲ型胶原纤维逐渐减少(P＜0.05):到24周以Ⅰ型胶原纤维为主,Ⅲ型胶原纤维已不明显.③诱导型一氧化氮合成酶和转化生长因子在术后2周时表达强,6周时表达明显下降.结论:膀胱黏膜无细胞基质移植物修复新西兰兔阴茎白膜显示了良好的组织相容性,未出现明显的炎症反应和纤维化,是较为理想的阴茎白膜修复材料.
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体外循环术后经不同途径留置中心静脉管道发生感染的比较
目的:中心静脉留置管道感染是体外循环心脏手术后面临的重要课题.比较分析体外循环心脏手术后经不同途径留置中心静脉管道而发生感染的差异.方法:西京医院心血管外科重症监护病区2002-12/2004-11收治体外循环术后患者2218例,共行经皮穿刺留置中心静脉管道治疗2 743例次,其中经股静脉放置573例次,经颈静脉放置1 997例次,经锁骨下静脉放置136例次,经外周静脉放置37例次.对出现明确的或可疑的感染患者,留取外周血和中心静脉导管标本进行培养,比较不同途径留置的中心静脉管道的感染情况.结果:共观察留置导管2 743例次,无漏检现象.①经股静脉途径留置的中心静脉管道感染率为12.6%,经锁骨下静脉途径的感染率为8.1%,经颈静脉途径的感染率为4.1%,经外周静脉途径留置的感染率为2.7%.不同留置途径的中心静脉管道感染率差异具有显著性意义(P＜0.01).②中心静脉留置管道感染的致病菌以革兰氏阳性菌为主.结论:体外循环术后中心静脉留置管道的感染率与留置途径有一定相关性,中心静脉留置管道感染的致病菌以革兰氏阳性菌为主.
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大鼠肝部分切除后肝细胞再生及肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达变化与肝细胞生长因子的干预作用
背景:肝细胞的再生主要受细胞因子的整体控制,肝细胞生长因子在肝细胞的再生过程中发挥着重要的作用,但其对肝星状细胞再生替代的研究较少.目的:观察肝细胞生长因子对大鼠肝部分切除后肝细胞再生及肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-11/2007-05在河南省组织再生重点实验室完成.材料:选用健康SD雌性大鼠52只,体质量(200±20)g,用于制造肝切除动物模型.肝细胞生长因子由北京生物药业有限公司提供.方法:将52只大鼠按随机数字表法分为3组,假手术组(n=12)打开腹腔,重新关腹.术后第2天腹腔注射生理盐水1 mL/d;肝部分切除组(n=20)行肝部分切除,术后第2天腹腔注射生理盐水1 mL/d;肝细胞生长因子组(n=20)肝部分切除术后第2天腹腔注射肝细胞生长因子12mg/(kg·d),1次,d.主要观察指标:各组分别于术后第1,2周末采血行血清学检测;取肝组织行苏木精-伊红及α-平滑肌肌动蛋白免疫组化染色,并行电镜观察.结果:52只大鼠全部进入结果分析.①与假手术组相比,术后第1周肝部分切除组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性升高,总蛋白含量降低,肝再生指数降低(P＜0.05),肝细胞生长因子组上述指标明显改善(P＜0.05).②术后第1,2周各组肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达灰度值相近.③术后第1周肝细胞生长因子组肝细胞内的粗面内质网、线粒体均明显增多.第2周后各组肝细胞超微结构无明显差异.结论:应用外源性肝细胞生长因子可以改善大鼠肝部分切除后的肝功能,促进肝细胞增殖,但在肝部分切除术后2周内对肝星状细胞无明显影响.
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膀胱逼尿肌细胞与Cajal间质细胞结构和功能联系的实验研究
背景:膀胱运动的效应细胞是逼尿肌细胞,而膀胱Cajal间质细胞如能在膀胱运动中作为起搏细胞而存在,必须能对逼尿肌细胞进行调控.因此,二者在结构和功能上的联系可以从一个方面证明Cajal间质细胞是否具有起搏细胞地位.目的:观察膀胱逼尿肌细胞与Cajal间质细胞结构和功能上的联系,分析膀胱Cajal细胞在逼尿肌细胞兴奋调控中的作用.设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-04/10在解放军第三军医大学基础部中心实验室完成.材料:选用SD大鼠用于取膀胱逼尿肌新鲜组织块.方法:应用透射电镜观察Cajal间质细胞和逼尿肌细胞之间的超微结构联系:利用荧光漂白技术模拟信号从Cajal间质细胞传递到逼尿肌细胞的过程,观察Cajal间质细胞与逼尿肌细胞之间的信号交流情况.主要观察指标:Cajal间质细胞和逼尿肌细胞之间的超微结构联系及荧光强度变化.结果:①Cajal间质细胞和逼尿肌细胞之间有缝隙连接.②对单个Cajal间质细胞相邻的逼尿肌细胞进行荧光漂白后,发现逼尿肌细胞内的荧光强度明显恢复,同时Cajal间质细胞的荧光强度逐渐减弱.说明Cajal间质细胞与逼尿肌细胞之间有信号通讯通路.结论:逼尿肌细胞与Cajal间质细胞之间存在结构上的联系,Cajal间质细胞可以将兴奋信号传递给周围的逼尿肌细胞.
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不同遗传背景NK细胞对转化细胞的杀伤效应
目的:细胞免疫治疗的着眼点不仅是杀伤局部异常生长的肿瘤细胞,还要应对潜在转化细胞的影响,为此观察3种不同遗传背景NK细胞对转化细胞杀伤效应的差异.方法:实验于2007-03/09在南方医科大学珠江医院血液科完成.①材料:SPF级8～10周龄的C57BL/6(H-2b)小鼠10只、Balb/C(H-2d)d,鼠10只、Balb/C(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代(H-2d/b)小鼠10只,均购于南方医科大学实验动物中心,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.YAC-1细胞株由本室冻存;C57BL/6鼠源性红白血病细胞株FBL-3由周健博士惠赠.②实验方法:脱臼处死3种不同遗传背景小鼠,无菌取脾,密度梯度离心法常规分离脾单个核细胞,免疫磁珠细胞阳性分选得到3种不同遗传背景小鼠的NK细胞,即全相合C57BL/6组、不相合Balb/C组、半相合F1代组,以其作为效应细胞.将培养至对数生长期的YAC-1、FBL-3细胞株以及ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞作为靶细胞.相对于靶细胞,不相合Balb/C组与半相合F1代组为同种异体反应性NK细胞,全相合C57BL/6组为自体NK细胞.③实验评估:通过流式细胞术检测CD49b+的表达鉴定NK细胞纯度.调整靶细胞YAC-1密度为2×108 L-1,按效靶比5:1,10:1,20:1,40:1以乳酸脱氧酶释放法测定NK细胞的杀伤活性.调整靶细胞FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞密度均为2×108 L-1,按效靶比20:1,40:1同法测定NK细胞的杀伤活性.结果:①NK细胞的纯度鉴定:CIM9b+细胞率全相合C57BL/6组为(90.93±2.46)%,不相合Balb/C组为(89.50+1.04)%,半相合F1代组为(91.93±2.01)%,分选所得NK细胞的纯度满足实验要求.②NK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性:3组NK细胞的杀伤活性均随效靶比5:1,10:1,20:1.40:1的升高而增强:同一效靶比时3组NK细胞对YAC-1的杀伤活性差异无显著性意义(F=0.557.P=0.600.F=0.550,P=0.604:F=0.503,P=0.628.F=0.946,P=0.439)③NK细胞对FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应:效靶比为20:1,40:1时,半相合F1代组与不相合Balb/C组对FBIL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应均明显高于全相合C57BL/6组(P均=0.000).结论:NK细胞的遗传背景能够影响其对靶细胞的杀伤活性,同种异体反应性NK细胞的杀伤效应强于自体NK细胞,为NK细胞介导的细胞免疫治疗提供实验依据.
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器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测
目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比.方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体.①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7 mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性.②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3 mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测.结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落.①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状.②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史.③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者.结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考.
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内窥镜辅助与全程切开采集大隐静脉的组织学变化
背景:保持大隐静脉旁路材料结构和功能的完整性对于维持良好的远期通畅率至关重要.目的:对比传统全程切开与内窥镜辅助两种方案采集的大隐静脉组织学改变,评价内窥镜辅助采集对大隐静脉的组织学损伤情况.设计、时间及地点:病例对比观察,于2006-06/2007-03在解放军北京军区总医院心肺血管中心外科完成.对象:应用大隐静脉为旁路移植材料择期行非体外循环冠状动脉搭桥术的患者印例,根据手术方案分为2组,内窥镜辅助组及全程切开组各30例.方法:两组分别采用传统全程切开皮肤方式和内窥镜辅助方式采集大隐静脉.主要观察指标:应用苏木精一伊红、Marson 3色和弹力纤维3种方法染色,光镜下从组织连续性、均匀一致性方面评价大隐静脉内皮细胞层、内膜下弹力纤维层、中层平滑肌层及外膜层血管损伤程度.结果:内窥镜辅助组及全程切开组患者大隐静脉内皮细胞层、内膜下弹力纤维层、平滑肌层、外膜层血管损伤程度差异无显著性意义(P＞0.05).结论:与传统的全程切开方案相比,内窥镜辅助采集大隐静脉未增加对大隐静脉的组织学损伤.
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钥孔戚血蓝蛋白诱导Balb/C小鼠脾细胞Th1/Th2失衡
背景:建立具有一定特征的、稳定的、可重复性强的Th1/Th2失衡动物模型是研究Th1/Th2失衡机制的重要基础.目的:分析钥孔戚血蓝蛋白诱导Balb/C小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的特点.设计:随机对照探索性实验.单位:河北医科大学基础医学院河北省法医学实验室.材料:实验于2005-09/2007-02在河北医科大学基础医学院河北省法医学实验室完成.实验选用Balb/c小鼠,对动物处置方法符合动物伦理学要求.方法:①以钥孔戚血蓝蛋白+完全弗氏佐剂免疫Balb/C小鼠,分离脾细胞,细胞因子分泌高峰点测定实验分为3组,分别为钥孔戚血蓝蛋白6.25,12.5,25 mg/kg组:不同免疫剂量和免疫次数实验分为7组.分别为钥孔戚血蓝蛋白6.25,12.5,25 me/kg组,6.25,12.5,25 mg/kg二次免疫组及对照组.主要观察指标:以酶联免疫吸附法检测小鼠脾细胞培养上清中Th1型细胞因子γ-干扰素、白细胞介素2、白细胞介素12 p40及Th2型细胞因子白细胞介素4、白细胞介素5的分泌量及血清中Th1型抗体IgG2a和Th2型抗体IgG1水平.结果:①钥孔戚血蓝蛋白免疫使小鼠出现脾肿大,脾细胞计数增高.②体外同种抗原再刺激使免疫小鼠脾细胞培养上清中4种细胞因子浓度增高,其中白细胞介素2分泌量于24h即明显增高,48 h达高峰:白细胞介素4、γ-干扰素和白细胞介素5在24 h轻度增高,以后逐渐上升,96 h达高峰.各时间点培养上清中白细胞介素12p40含量均较低,与对照组无明显差异.③不同剂量单次或二次免疫均可致4种细胞因子不同程度增高,白细胞介素4/γ-干扰素比值增高,其中12.5 mg/kg钥孔戚血蓝蛋白二次免疫组细胞因子分泌量明显高于其他各组(P＜0.01).④钥孔戚血蓝蛋白免疫小鼠血清IgG1,IgG2a水平发生不同程度增高,其中IgG1增高更为明显.结论:钥孔戚血蓝蛋白加完全弗氏佐剂可诱导Balb/C小鼠脾细胞发生Th2型优势反应.
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供体凋亡淋巴细胞预输注诱导猪肝移植的免疫耐受
背景:作者先前已成功建立小动物移植模型,并验证了受者经供体凋亡细胞预处理后能够诱导免疫耐受.目的:验证60Co γ射线体外处理后的供者淋巴细胞预输注诱导猪肝移植特异性免疫耐受的可能性,为不作常规免疫抑制处理成年大动物的移植免疫耐受诱导提供可行的途径.设计、时间及地点:于2004-06/2007-02在南方医科大学南方医院动物研究所完成随机对照动物实验.材料:版纳小型猪16只为供体组,西藏小型猪16只为受体组,五六月龄,体质量15～17 kg,雌雄不拘,共行原位肝移植手术16只次.方法:将受体猪按随机数字表法分为2组(n=8),空白对照组受体猪无特殊处理;供体淋巴细胞预处理组受体猪在术前7 d经耳静脉注射60Co γ射线处理过的供体淋巴细胞.主要观察指标:应用AnaexinV/PI双标法检测60Co γ射线处理后的淋巴细胞凋亡率,并与正常淋巴细胞进行对照.观察两组受体猪移植术后的存活时间,术后检测肝功能指标及肝脏病理变化.结果:成功建立非转流小型猪原位肝移植模型16例.①60Coγ射线体外处理后的淋巴细胞凋亡率明显高于正常淋巴细胞(P＜0.01).②两组受体猪移植术后中位存活时间相同.③移植术后3 d,两组病理活检均呈急性中、重度排斥反应;术后6 d,两组均呈急性重度排斥反应.④两组移植术后肝功能检测血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性及总胆红素、总蛋白及白蛋白含量测定结果均为肝细胞破坏表现,两组无明显差异(P＞0.05).结论:60Coγ射线体外照射可以诱导淋巴细胞凋亡,60Co γ射线体外处理过的淋巴细胞预输注未能够诱导小型猪同种异体肝移植特异性免疫耐受.
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环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长同种大鼠移植心脏存活时间
背景:同种异体器官移植后需长期使用免疫抑制剂控制机体免疫状态以免发生排斥反应,但免疫抑制治疗使受者的感染发生率增高,诱导移植免疫耐受是解决这一问题的理想方法.在啮齿类动物,已能诱导出长期免疫耐受,其中供者骨髓细胞输注在诱导免疫耐受中具有重要作用.目的:观察环孢素A联合供者骨髓细胞输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响.设计:随机对照动物实验.单位:浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心.材料:实验于2002-03/2004-12在浙江大学医学院实验动物中心完成.选用SPF级近交系雄性Lewis大鼠40只和雄性BN大鼠60只,实验方法符合动物伦理学要求.方法:①制作Lewis→BN大鼠的异位(腹部)心脏移植模型(n=40),将40组动物模型按随机数字表法分为4组(n=10):对照组不进行特别处理;环孢素A组术后连续7 d给予环孢素A:联合处理组分别于术中及术后第6天输注供者骨髓细胞,术后连续7 d给予环孢素A;供者骨髓细胞组分别于术中及术后第6天输注供者骨髓细胞.另以BN大鼠间的异位(腹部)心脏移植作为BN对照组(n=10).②观察各组受体大鼠移植心脏的存活时间,检测术后第6天血清白细胞介素2含量以及移植心脏组织中肿瘤坏死因子mRNA表达水平,应用流式细胞仪检测术后第6,12,18天时受体外周血有核细胞中的供体来源细胞、CD3+CD25+细胞、CD4+CD25+细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达水平、CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC-比率等.主要观察指标:各组受体大鼠移植心脏存活时间、血清白细胞介素2含量及心肌组织中肿瘤坏死因子α mRNA水平、排斥反应分级、外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3+CD25+细胞、CD4+CD25+细胞的百分比及共刺激分子CD86表达、CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC-比率等.结果:Lewis大鼠40只及雄性BN大鼠60只全部进入结果分析.①联合处理组大鼠移植心脏存活时间长于对照组和供者骨髓细胞组(P＜0.05).②联合处理组大鼠血清白细胞介素2含量及心肌组织中肿瘤坏死因子α mRNA表达水平均低于对照组和供者骨髓细胞组(P＜0.05).③联合处理组大鼠排斥反应程度轻于其他3个移植组.④联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制:术后6.12d联合处理组的CD4+CD45RC+/C134+CD45RC比率及D3+cD25+细胞百分比均低于对照组和供者骨髓细胞组:接受供者骨髓细胞输注大鼠外周血中供者来源的有核细胞多于未输注大鼠.结论:短疗程环孢素A治疗联合供者骨髓细胞输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度,延长移植心脏存活时间.
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胰高血糖素样肽2对移植小肠结构和功能恢复的作用
背景:胰高血糖素样肽2是新近发现的肠上皮生长因子,具有肠道特异性的促生长作用.目的:实验拟进一步验证胰高血糖素样肽2对小肠原位移植大鼠小肠结构和功能恢复的促进作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2005-08/2006-09在大连医科大学生理教研室完成.材料:将75只Wistar大鼠按随机数字表法分成3组.小肠移植组30只(供、受体各15只),胰高血糖素样肽2组30只(供、受体各15只),假手术组15只.方法:小肠移植组及胰高血糖素样肽2组大鼠采用改良的kort法行2步法原位小肠移植;假手术组仅行开关腹手术.胰高血糖素样肽2组小肠移植后给予胰高血糖素样肽2以250μg/(kg·d)分2次皮下注射,间隔12 h,连续给3 d.主要观察指标:术后2周用免疫组化法检测增殖细胞核抗原,并行肠黏膜组织病理学检查:分别于术后2,4,8周检测移植小肠功能酶(Na+,K+-ATP酶、双糖酶)活性.结果:①术后2周胰高血糖素样肽2组肠黏膜绒毛高度、隐窝深度均高于小肠移植组,增殖细胞核抗原表达水平高于小肠移植组.②小肠移植组肠黏膜功能酶活性在术后2周下降明显,术后4周双糖酶活性恢复正常,术后8周Na+,K+-ATP酶活性也接近正常.胰高血糖素样肽2组术后2周时双糖酶活性恢复正常,术后4周时Na+,K+-ATP酶活性恢复正常.结论:外源性胰高血糖素样肽2能促进原位移植小肠结构和功能的恢复.
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肾移植受者人类白细胞抗原体液免疫致敏状态的监测及其临床意义
背景:器官移植受者在受到同种抗原人类白细胞抗原(HLA)免疫致敏后,外周血中容易产生群体反应性抗体,如何提高致敏受者肾移植的成功率和移植物长期存活率值得深入研究.目的:通过检测肾移植受者的HLA-IgG抗体水平及其特异性,评估受者体液免疫致敏状态,并观察HLA交叉反应组配型可接受性错配情况与移植肾存活率的关系.设计:临床观察.单位:南方医科大学附属珠江医院.对象:选择1998-01/2005-12在南方医科大学附属珠江医院器官移植科接受肾移植1297例患者,男824例,女473例,平均(42±16)岁,其中HLA-IgG抗体阳性受者165例,阴性受者1 132例.初次肾移植受者1217例,2次移植77例,3次移植2例,4次移植1例.所有患者在接受本实验相关检测及治疗前均签署知情同意书,本实验经过医院伦理委员会批准许可.试剂:莱姆德抗原板和混合抗原板购自美国One Lambda公司.HLA-Ⅰ类单克隆抗体湿板和HLA-Ⅱ类DNA分型试剂购自美国OneLambda公司:Taq多聚酶购自美国PE公司:DNA抽提试剂购自德国QIAGEN公司.抗人C4d多克隆抗体和显色底物DAB购自奥地利Biomedica公司.方法:①通过酶联免疫吸附试验筛查受者术前血清中的HLA-IgG抗体,对阳性血清进一步用抗原板(LAT1240和LATIHDS)检测抗体阳性率及其特异性,采用序列特异性引物聚合酶链反应技术进行HLA基因分型.②对40例Scr升高的受者进行抗HLA抗体检测和移植肾穿刺活检,并通过免疫组织化学染色观察肾小管周围毛细血管壁上C4dd的沉积.⑧移植受者术后1,3,5年移植肾存活率及性别、移植与抗体阳性率的关系,并分析不同HLA交叉反应组错配数受者移植肾存活率的差别.主要观察指标:①肾移植患者手术前后HIA-IgG抗体阳性率及HLA分型.②移植肾活检组织中肾小管周围毛细血管壁上C4d的沉积特征.③移植肾存活率差别.结果:患者1297例均进入结果分析.①HLA-IgG抗体阴性受者1132例,阳性受者165例,Ⅰ类HLA-IgG抗体阳性受者126例,Ⅱ类HLA-IgG抗体阳性受者90例,51例受者同时存在Ⅰ类和Ⅱ类HLA-IgG抗体,抗体阳性率＞50%的高致敏受者94例.②40例移植肾穿刺活检标本中,13例患者观察到肾小管周围毛细血管壁上存在C4d的沉积.27例未见C4d沉积;13例C4d阳性受者中10例外周循环中抗HLA抗体阳性.③抗体阳性受者移植物功能延迟恢复的发生率显著高于阴性受者(P＜0.01).抗体阳性受者的1,3及5年移植肾存活率与抗体阴性受者无明显学显著性差异(P＞0.05).女性受者中抗体阳性率明显高于男性受者(P＜0.01),再次移植受者中抗体阳性率显著高于初次移植受者(P＜0.01);随着HLA交叉反应组错配数的增加,移植肾存活率呈下降趋势,0错配受者的1,3,5年移植肾存活率分别为97%,94%和92%.2错配受者1.3,5年移植肾存活率分别为91%,82%和77%,3错配受者较0错配受者下降更为明显,分别为9%,15%和24%.结论:肾小管周围毛细血管壁上C4d的沉积可作为抗体介导体液性捧斥反应的客观指标,供受者间良好的HLA配型能显著降低排斥反应发生率和改善移植物存活.
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丙酮酸作用下大鼠移植小肠缺血再灌注损伤中核转录因子的变化
目的:研究证实丙酮酸对移植小肠缺血再灌注损伤具有保护作用,并且与其影响细胞因子水平有关.核转录因子在各种细胞外刺激介导的细胞信号转导调控中起核心作用,实验拟观察丙酮酸作用下移植小肠缺血再灌注损伤中核转录因子κ B的变化并分析其意义.方法:①实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.选用成年雄性SD大鼠78只,动物处置方法符合动物伦理学标准.②按随机数字表法分为3组:假手术组(n=6)行剖腹、左侧肾切除与移植组对照:移植小肠缺血再灌注组和丙酮酸处理组(n=36)均建立移植小肠缺血再灌注动物模型,丙酮酸处理组于供体小肠阻断血流、灌冼前10 min向肠腔内注入含有分析纯丙酮酸的营养液.③分别于缺血45.90 min和再灌注30,180 min留取移植小肠组织标本(n=6),光镜下观察组织学改变:另外分离、提取核蛋白并定量,通过电泳迁移改变分析实验检测肠组织中的核转录因子KB的活性.结果:78只大鼠全部进入结果分析.①缺血再灌注不同时相移植小肠缺血再灌注组小肠黏膜组织损伤程度均重于假手术组(P＜0.01);而丙酮酸处理组损伤程度轻于移植小肠缺血再灌注组(P＜0.01),与假手术组差异无显著性意义(P＞0.05).②再灌注30min时移植小肠缺血再灌注组核转录因子κ B活性高于其他两组(P＜0.01):丙酮酸处理组核转录因子κB活性高于假手术组(P＜0.05).再灌注180 min时移植小肠缺血再灌注组核转录因子κ B活性略降低.但仍高于其他两组(P＜0.01),丙酮酸处理组核转录因子κ B活性与假手术组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:丙酮酸作用下大鼠移植小肠缺血再灌注损伤过程中核转录因子κ B的活性降低,该结果可能是丙酮酸保护移植小肠缺血再灌注损伤的重要作用途径之一.
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肝移植术后胆系并发症影像学特点及对防治的提示
背景:胆道并发症是肝移植术后常见的并发症,影像学检查能直观地了解其形态学改变.目的:系统分析肝移植术后胆系并发症的影像学表现,以期评估术后疗效,并对术后并发症的防治提供依据.设计、时间及地点:于2002-01/2006-12在解放军南京军区福州总医院医学影像科完成回顾性病例分析.对象:选择资料完整的解放军南京军区福州总医院肝胆外科34例同种异体原位肝移植术后患者,男27例,女7例,所有病例均为胆总管对端吻合.方法:对34例肝移植术后患者CT,MRI及内镜逆行胰胆管造影的影像学表现进行回顾性分析,24例行螺旋CT检查,其中5例另行内镜逆行胰胆管造影检查,5例中2例同时行引流管造影;8例行MR及磁共振胰胆管造影检查.主要观察指标:肝移植术后胆总管及肝内胆管有否扩张、狭窄、胆泥形成、胆管内积气及术后继发感染、胆瘘等,原发肝肿瘤患者术后是否出现胆管转移.结果:胆总管扩张18例:所有病例均同时伴有肝内胆管扩张,左侧肝内胆管较右侧肝内胆管扩张明显,其中单纯性胆管扩张5例,13例由于胆泥致胆总管及肝内胆管扩张;胆管感染合并肝内胆管扩张积气2例,胆漏4例;肝外胆管转移性肿瘤2例.结论:双螺旋CT和MR均能显示肝移植术后胆系并发症影像,MRI及磁共振胰胆管造影、内镜逆行胰胆管造影、引流管造影均能清楚显示胆管形态及胆管胆泥,MRI较CT更能清楚显示胆泥形成.
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氯高铁血红素诱导内源性血红素加氧酶1对大鼠肾移植急性排斥反应的防护
背景:研究表明,血红素加氧酶1系统及其代谢产物可通过多条途径发挥对器官移植物的保护作用,显著延长移植物生存时间.目的:实验拟进一步评估氯高铁血红素诱导产生的内源性血红素加氧酶1对大鼠肾移植急性排斥反应的防护作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-05/08在解放军第三军医大学动物实验中心完成.材料:以27只BN大鼠为供体(54个供肾),54只雄性Lewis大鼠为受体,建立双侧供肾大鼠原位肾移植模型.方法:以硬膜外导管为支架行供肾静脉与受体肾静脉端端吻合,供肾动脉带腹主脉瓣与受体腹主动脉行端侧吻合,供肾输尿管膀胱瓣与受者膀胱吻合.Lewis受鼠按随机数字表法分为3组(n=18):肾移植模型组术后不予免疫抑制治疗:氯高铁血红素诱导组供鼠于术前1 d腹腔注射氯高铁血红素50 mg/kg,受体于术后腹腔注射氯高铁血红素50 mg/(kg·d)至处死;环孢素A组术后予环孢素A灌胃5 mg/(kg·d).主要观察指标:各组分别于肾移植术后第1,5,7天处死6只受鼠,观察肾组织病理改变,血红素加氧酶1蛋白表达及其对急性排斥反应的影响,同时采集血标本测血肌酐含量.结果:①氯高铁血红素可促进大鼠肾脏血红素加氧酶1蛋白表达水平(尸＜0.05).②移植术后肾移植模型组、氯高铁血红素诱导组的血红素加氧酶1表达水平高于环孢素A组(P＜0.05～0.01),且随着排斥反应的加重,表达逐渐增强;环孢素A组在移植术后血红素加氧酶1表达也有所增强,但明显低于氯高铁血红素诱导组(P＜0.01),排斥反应相对较轻.③氯高铁血红素诱导组大鼠肾组织病理学表现较肾移植模型组明显减轻,但比环孢素A组重.④氯高铁血红素诱导组血肌酐水平低于肾移植模型组(P＜0.05),高于环孢素A组(P＜0.05).结论:血红素加氧酶1在大鼠同种异体肾移植抗捧斥反应、保护移植器官中起到了一定的作用,但其作用远远不及环孢素A等强力免疫抑制剂.
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肾移植术后巨细胞病毒肺炎发病特征及治疗:12例分析
目的:肾移植术后巨细胞病毒肺炎病情进展迅速,治疗效果欠佳,已逐渐成为肾移植术后患者死亡和移植肾失功的重要原因之一.总结肾移植术后巨细胞病毒肺炎的发病特征,探寻其治疗方案.方法:①2003-01/2007-09首都医科大学附属北京同仁医院移植中心收治的同种异体肾移植患者156例,其中12例肾移植术后发生巨细胞病毒肺炎.②细胞病毒肺炎患者的治疗方案主要包括抗病毒、尽早减少或完全停用免疫抑制剂、辅助呼吸等.③回顾分析其临床资料,包括巨细胞病毒肺炎的发病率、发病年龄、发病时间、临床表现、治疗经过及死亡率,总结其治疗经验.结果:①156例肾移植患者中12例术后出现巨细胞病毒肺炎,发病率为7.7%.②患者年龄21～67岁,平均37岁.③发病时间为术后53～900d,其中术后3个月内8例,4～6个月3例,6个月以后1例.④主要临床表现为发热、憋气以及进行性呼吸困难.⑤患者诊断为巨细胞病毒肺炎后立即予更昔洛韦抗病毒治疗.尽早减少免疫抑制剂用量,将环孢素A和他克莫司血药浓度分别维持在75 μg/L和2 μg/L左右,病情加重甚至出现急性呼吸窘迫综合征时停用所有免疫抑制剂.⑥12例患者痊愈10例(占83.3%),死亡2例(占16.7%).结论:抗病毒治疗同时尽早减少或停用免疫抑制剂是治疗肾移植后巨细胞病毒肺炎的关键.
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肝移植术后早期肠内营养支持治疗效果评估:同期对照比较
背景:国肝移植术后早期开始肠内营养的主要目的是恢复和保护肠道功能,保证正常的胃肠道功能对术后的免疫抑制治疗有极其重要意义.目的:对肝移植患者术后采用早期肠内营养支持治疗,观察患者肠道功能的恢复情况.设计:病例分析.单位:解放军八一医院.对象:选择20(13-04/2006-06解放军八一医院肝移植中心进行肝脏移植患者86例,男57例,女29例,年龄21～68岁,平均48岁.其中原发性肝癌37例,肝炎后肝硬化49例;Child A级8例(均为肝癌患者),Child B级34例,Child C级44例.其中重症肝炎肝功能衰竭伴肝昏迷5例.所有患者家属均对治疗知情同意,移植手术经过医院伦理委员会批准许可.方法:患者手术方式主要采取腔静脉成形的原位肝移植术80例,4例行非转流原位经典手术;2例行背驮式.供肝热缺血时间平均(4.8±2.4)min,冷缺血时间平均(8.6±3.2)h.无肝期(84±28)min.术后常规三联免疫抗排斥治疗:他克莫司(Fujisawa产品)+吗替麦考酚酸酯(美国罗氏产品)+强的松(Pred).根据术中有无放置鼻饲管将患者分为对照组(n=49)及早期肠内营养组(n=37),两组患者性别、年龄及一般情况差异无统计学意义.对照组术后早期以肠外营养为主,早期肠内营养组患者术中置入鼻肠营养管建立肠道喂养的通道,术后24 h开始使用短肽肠内营养制剂,如百普素.用量从63～126 g/d开始,逐渐增加至372 g/d.两组患者根据胃肠功能恢复情况术后3～5 d可酌进流质饮食.主要观察指标:①观察术后患者临床症状恢复及并发症情况.②术后1,3,5 d检测包括血清总蛋白、白蛋白、前臼蛋白水平等肝功能恢复指标及c反应蛋白水平.③术后7 d检测血清免疫球蛋白水平.结果:纳入患者86例均进入结果分析.①临床症状恢复及并发症情况:早期肠内营养组10例患者术后并发腹胀,5例患者表现为腹泻,3例患者喂养导管堵塞或滑脱,未见呕吐、返流及吸入性肺炎等并发症.对照组胆漏2例,早期肠内营养组无胆漏发生.②肝功能恢复指标检测结果:早期肠内营养组术后3,5 d前白蛋白水平高于对照组,C反应蛋白水平低于对照组.差异均有统计学意义(P＜0.05).③血清免疫球蛋白水平:早期肠内营养组术后7 d 血IgA,IBM均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:肝移植术后早期肠内营养支持.能降低机体应激反应,加快分解代谢向合成代谢的转变.促进肝细胞的修复,减少感染的机会.
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血红素加氧酶1对模拟移植后犬肺功能的影响
背景:血红素加氧酶1是机体调节和抵抗氧化应激反应的重要生物分子,参与器官移植、缺血再灌注损伤等过程.目的:应用犬离体肺移植再灌注模型模拟肺移植后的循环过程,观察预先诱导犬肺血红素加氧酶1过表达对模拟移植犬肺功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-12/2006-03在解放军空军总医院实验动物中心完成.材料:健康杂种犬12只用于制备犬离体肺移植再灌注模型.方法:按随机数字表法分3组(n=4):模型组即单纯肺缺血再灌注组;诱导剂组和抑制剂组预先给予血红素加氧酶l诱导剂氯化血红素,抑制剂组于再灌注时向灌注液中加入血红素加氧酶1抑制剂锌原卟啉.主要观察指标:比较分析各组犬肺组织中血红素加氧酶1 mRNA的表达水平.以及模拟移植后血气指标、肺动脉压、肺组织丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性.结果:12只犬全部进入结果分析.①诱导剂组血红素加氧酶1 mRNA表达水平高于模型组和抑制剂组(P＜0.01).②模拟移植后各组肺动脉压均呈先增高后降低的趋势.模拟移植后30 min左右肺动脉压达高峰.③模拟移植后120 min,诱导剂组动脉血氧分压高于模型组和抑制剂组(P＜0.05),动脉血二氧化碳分压低于模型组和抑制剂组(P＜0.05):模型组与抑制剂组以上指标差异均无显著性意义(P＞0.05).④模拟移植后120min.各组丙二醛含量均升高,诱导剂组低于模型组和抑制剂组(P＜0.05):各组超氧化物歧化酶活性均下降,诱导剂组高于模型组和抑制剂组(P＜0.05).结论:过表达血红素加氧酶1能明显改善模拟移植的犬肺功能.
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移植用表皮细胞培养的安全性标准
表皮细胞培养为皮源匮乏的大面积烧伤患者的创面封闭提供了新的思路和途径.然而.由于涉及到人体应用,对于实验室培养的表皮细胞临床移植可能引发的人体安全性问题尚需进行全面的评价,以期为表皮细胞的临床移植提供安全性保障.同时建立严格控制的标准化表皮细胞培养体系对于保证表皮细胞生物学特征的稳定及增强移植安全性具有重要意义.文章系统阐述了表皮细胞体外培养的安全性标准.
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肝移植手术的麻醉管理
肝移植患者术前具有复杂的血流动力学改变、内环境紊乱及凝血功能异常,手术期间受体原有的病理生理改变进一步加剧,加之缺血再灌注损伤均给麻醉带来很大的困难,麻醉中应加强多系统功能监测,给予正确的容量治疗及维持受体血流动力学稳定、电解质平衡及一定的凝血功能.肝移植术前应详细了解病情,术中尽量维持各项指标的平稳,减轻缺血再灌注带来的损伤,麻醉中正确处理肝功能衰竭和手术引起的循环不稳定状态、代谢紊乱及凝血障碍是肝移植手术成败的关键.
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器官移植患者的社会心理因素特征
器官移植患者围手术期经常出现焦虑、抑郁等心理反应,在各个阶段出现心理反应的原因不同.多数器官移植受者出院后存在不同程度的社会功能缺陷,尤其表现为工作能力下降.仅能从事较轻工作或不能工作.患者均表现为生活自理能力很好,但同时比较突出的问题是责任心、计划性降低,对外界的兴趣和关心降低,家庭外的社会活动减少,不愿与他人交往.分析器官移植患者术前及术后的心理特征,并进行心理干预,能改善异常心理及提高患者的生活质量.对器官移植患者的治疗不仅要重视生物因素的影响,也应重视社会心理因素的影响.
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下斜方肌肌皮瓣解剖学特点及在头面颈部缺损修复中的移植应用前景
下斜方肌肌皮瓣移植的临床应用广泛,尤其是超长下斜方肌肌皮瓣移植大大扩展了其临床应用范围.斜方肌有多支营养血管,下斜方肌的主要营养血管是颈横动脉浅降支和颈横动脉深支,位置恒定,解剖简单.副神经是斜方肌的支配神经,下斜方肌肌皮瓣的切取一般不会损伤副神经.下斜方肌肌皮瓣的临床应用灵活,可以设计成超长下斜方肌肌皮瓣,扩大其临床应用范围.下斜方肌肌皮瓣血流动力学的研究有"超灌注学说"和"血管网学说",但其可切取的末端位置还不明确.下斜方肌肌皮瓣的适应证及优缺点可以指导临床应用.随着血流动力学的进一步研究,下斜方肌肌皮瓣必将有广阔的临床应用前景.
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肝移植术后乙型肝炎复发及乙型肝炎病毒聚合酶YMDD基因序列变异的研究现状
目的:目前国内主要联合乙型肝炎免疫球蛋白和拉米夫定预防肝移植术后慢性乙型肝炎病毒再感染,取得了很好的疗效.但长期应用拉米夫定会出现慢性乙型肝炎病毒聚合酶YMDD基因序列变异.导致耐药甚至乙型肝炎复发.分析肝移植术后乙型肝炎复发及乙型肝炎病毒聚合酶YMDD基因序列变异的主要病因及防治方案.方法:应用计算机检索Pubmed数据库2002-01/2008-01以及中国期刊全文数据库2003-01/2007-12有关肝移植术后乙型肝炎复发及YMDD变异的文献,对资料进行初审,并查看每篇论文后的引文.纳入标准:文章所述内容为肝移植术后乙型肝炎复发及YMDD变异的主要研究进展:以近5年且发表在较权威杂志者优先.排除标准:重复研究或Meta分析类文章.结果:肝移植术后乙型肝炎复发的病因与慢性乙型肝炎病毒DNA水平、肝外组织慢性乙型肝炎病毒入侵、免疫抑制治疗、病毒基因变异等因素有关.国内肝移植术后慢性乙型肝炎病毒再感染的主要防治方案是联合应用乙型肝炎免疫球蛋白与拉米夫定,既经济又取得了良好的治疗效果;但长期应用拉米夫定会出现慢性乙型肝炎病毒聚合酶YMDD基因序列变异,导致耐药,乃至乙型肝炎复发.目前阿地福韦等药物可作为YMDD变异的补救治疗方法.结论:病毒变异和乙型肝炎复发是影响慢性乙型肝炎病毒相关终末期肝病肝移植预后的重要因素,防治方法正在不断改进,目前正在寻找一个适合中国国情的廉价、安全、方便及有效的防治策略.此外,应强调个体化治疗和风险/利益评估.
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肝移植患者术后的抑郁状态及其干预
目的:对肝移植患者术后抑郁状态进行相关资料评估,分析相关因素,寻找提高患者术后生活质量的有效方案.方法:综合近年肝移植患者术后精神状态分析相关文献并结合解放军第四五一医院普外科接受肝移植、并有完整临床资料的20例患者术后的心理状态,应用Zung抑郁自评量表和Hamilton抑郁量表对术后患者进行常规筛选评估,对诊断为抑郁状态的患者应用盐酸舍曲林50 mg/d连续治疗5周,并进行心理疏导、人为关怀.结果:①20例患者中,6例抑郁自评量表的粗分＞加分,检出阳性率为33.3%.Zung抑郁自评量表阳性者汉密顿抑郁量表评分均＞14分.其中＞24分者2例,占受检的10%.6例Zung抑郁自评量表评定阳性患者中4例得分＜56分,为轻度抑郁,2例得分＞56分,为中度抑郁.②治疗前Zung抑郁自评量表的平均得分为47.62分,汉密顿抑郁量表评分为20.31分,治疗后5周Zung抑郁自评量表的得分为平均32.23分,汉密顿抑郁量表得分为8.97分,与治疗前比较,差异有显著性意义(P＜0.01).③经过抗抑郁治疗后,临床症状改善明显,生活质量评分显著升高.结论:肝移植患者术后抑郁状态明显,在此期间加强心理干预并以抗抑郁药物治疗,对可提高肝移植患者术后生活质量并对其预后产生积极的影响.
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活体器官移植供体短缺心理因素的分析
检索Pubmed数据库和中国期刊全文数据库文献,寻找活体器官移植供体短缺的心理因素.结果显示:活体器官捐献是将有灵性的器官与其主人分离,不仅捐献者要承受巨大的心灵疼痛、器官移植受者亦显现异物感的心理变化.健康人捐献身体器官使之失去了对本应属于自己器官的占有感与支配感,造成一定程度的器官缺陷而失去优越感,导致其生理自我不完整,而新的生理自我与固有的生理自我产生冲突,并进一步降低了其心理自我与社会自我,从而出现更为严重的心理困扰或障碍.活体器官捐献,不仅需要器官捐献者的自我调适,也需要社会的帮助.以求在严重供求矛盾阻碍下大限度实现生命质量的提高.
