首页 > 文献资料
-
镉与雌二醇联合作用对MCF-7细胞增殖活性实验
目的研究镉在体内单独作用和与雌二醇联合作用,对MCF-7细胞增殖的影响.方法 (1)MCF-7细胞分别给予去离子水、10-12、10-10、10-8、10-6、10-4和10-2 mol/L Cd2+和10-9mol/Lβ-Estrodiol,分别在2、4和6 d加CCK-8入孵育体系,酶标仪上酶标仪450 nm波长测定,620 nm参比,根据测量的A值判断其增殖情况.
-
白附子水提物抑制人骨髓神经母细胞瘤细胞增殖的实验研究
目的 探讨白附子水提物体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 以白附子水提物处理人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞24、48 h后,应用细胞增殖检测试剂Kit-8 (CCK-8)细胞增殖和毒性实验检测白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用,运用蛋白印记反应(AV/PI)对该细胞株生长抑制机理进行初步探讨.结果 白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用,与细胞作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.862 mg/mL,与细胞作用24 h的IC50为1.158 mg/ml.Western-blot法检测结果表明,白附子水提物可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡抑制其生长.结论 白附子水提物有抑制SH-SY5Y细胞增殖作用.
-
传统"热补"针法对实验性关节炎家兔的镇痛效应及脑脊液中β-EP、CCK-8含量的影响
目的:观察传统"热补"针法对实验性关节炎家兔的镇痛效应和探求其中枢作用机制.方法:以卵蛋白诱导的关节炎家兔为疼痛模型,连续治疗6 d后比较药物组、捻针组、电针组和热补组关节炎家兔关节局部痛阈和脑脊液中β-EP和CCK-8的含量.结果:治疗后各治疗组痛阈和β-EP含量均升高,热补组β-EP含量明显高于药物组和捻针组(P＜0.01),但不及电针明显(P＜0.05);各治疗组CCK-8含量均向正常水平恢复,热补组CCK-8含量比药物组和捻针组恢复明显(P＜0.01),但不及电针组恢复显著(P＜0.01).结论:"热补"针法的镇痛效应和捻转针法、药物(()痹冲剂)相同,但不及电针的镇痛效应;升高脑脊液中β-EP含量和促使CCK-8含量向正常水平恢复,可能是其镇痛的中枢机制之一.
-
CCK-8法检测狗脊不同炮制品对成骨细胞的影响
该文采用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法进行成骨细胞原代培养并接种、传代,碱性磷酸酶染液鉴定,制备狗脊不同炮制品正丁醇提取部位及原儿茶酸、原儿茶醛、曲酸三者混合对照药液等与上述成骨细胞共同培养,以CCK-8法对其进行增殖检测.各炮制品正丁醇提取部位对于成骨细胞的增殖作用显著,酒狗脊＞烫狗脊＞盐狗脊＞砂烫酒制狗脊＞醇制狗脊＞蒸狗脊＞生狗脊,q检验显示砂烫酒制狗脊、醇制狗脊、蒸狗脊无显著差异,烫狗脊、盐狗脊无显著差异;各对照品对于成骨细胞增殖具有一定作用,其中混合对照＞原儿茶醛＞原儿茶酸＞曲酸,q检验显示原儿茶醛、原儿茶酸无显著差异.狗脊各炮制品正丁醇提取部位均显著促进成骨细胞增殖,以酒狗脊为佳;原儿茶酸、原儿茶醛、曲酸等酚类化合物对成骨细胞均具有一定的促进增殖作用.
-
上调分子伴侣 mortalin 经由 MAPK-ERK 信号转导通路促进卵巢癌细胞增殖
目的：通过获得稳定表达mortalin的卵巢癌细胞株（A2780、A2780/cis），检测mortalin与卵巢癌细胞增殖的关系及可能机制。方法 CCK-8实验检测mortalin过表达组和对照组细胞增殖的变化；通过流式细胞术检测mortalin过表达对卵巢癌细胞周期的影响；Western blotting检测mortalin上调表达后，卵巢癌细胞中MAPK/ERK和JNK/SAPK信号通路蛋白的变化。结果 Mortalin 上调表达促进卵巢癌细胞 A2780和 A2780/cis 的增殖。Mortalin通过加快卵巢癌细胞由G1期快速过渡到G2/M期，促进细胞增殖，且MAPK/ERK信号通路参与该过程。结论 Mortalin上调表达促进了卵巢癌细胞的增殖，与其对MAPK-ERK信号通路的激活有关。
-
抑制KAI1诱导的自噬对胰腺癌MiaPaCa-2细胞增殖及凋亡的影响
细胞自噬是一种重要的促细胞生存途径,同时也是一种不同于凋亡和坏死的死亡方式.KAI1是缺氧目的基因,体内缺氧时亦可诱导细胞自噬[1].我们前期报道了KAI1诱导MiaPaCa-2自噬,并增加细胞的存活[2],本研究进一步探讨抑制KAI1诱导的自噬对该细胞增殖及凋亡的影响.一、材料与方法1.CCK-8检测细胞增殖:应用KAI1抑制剂3-MA预处理MiaPaCa-2细胞1h,以未处理组作为对照,应用100 MOI的Ad5-KAI1及Ad5 -null分别感染细胞,具体步骤参考我们前期报道[3].取转染细胞接种96孔板,培养0.5、1、2、3、4、5d后每孔分别加人10μl的CCK-8( Dojindo Molecular Technologies公司,日本)继续培养1h,在酶标仪(Themo,Germany)测定450 nm吸光值(A450).每组设3个复孔,实验重复3次,取均值.
-
热打击对培养人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响
目的:研究梯度热打击对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响.方法:设置培养HUVEC细胞的温度梯度(39、41、43 ℃)进行热打击1 h,相差显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8比较细胞增殖率,流式细胞术研究细胞周期改变.结果:与正常对照组比较,1 h热打击结束时,各热打击组均出现部分细胞形态变圆,伪足变短,细胞间隙增大,以43 ℃组为明显.随热打击程度加深,未伸展细胞占培养细胞百分比增加(P<0.05).细胞增殖实验显示,与正常对照组比较,热打击后24 h,41 ℃和43 ℃组增殖率显著下降(P<0.01),48 h时仅43 ℃组增殖率显著下降(P<0.05),至72 h,各热打击组与正常对照组无显著差异.流式细胞术检查显示,1 h热打击结束即刻,与正常对照组比较,各热打击组细胞呈现显著的G0/G1期阻滞,以43 ℃组显著(P<0.05);至48 h时各热打击组细胞周期基本恢复正常.结论:热打击对HUVEC具有细胞毒效应,可抑制HUVEC的增殖,造成细胞周期G0/G1期阻滞.
-
噻唑兰法和CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖反应的比较
目的:比较噻唑兰(MTT)法和CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖反应的佳实验条件,并比较两种不同检测方法的灵敏度.方法:分离小鼠脾脏淋巴细胞,分别比较不同培养时间(69、70、71、72、73 h)、不同反应剂量(5、10、15、20、25 μl)、不同细胞数量(0、2.5×104、5×104、10×104、20×104)反应体系的MTT法和CCK-8法的吸光度值.结果:对于2×105的反应体系,MTT法的佳培养时间为71 h,佳反应剂量为15 μl.而CCK-8法的佳培养时间为72 h,佳反应剂量为10 μl.同时,通过对比两种不同检测方法对于相同细胞数量培养体系的吸光度值发现,CCK-8法的灵敏度要高于MTT法.结论:CCK-8法是一种较MTT法更优的检测小鼠淋巴细胞增殖反应的实验方法.
-
不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响
目的 研究不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响规律.方法 MC3T3-E1细胞接种到培养板24 h后,试验组分别加入1.25、2.5、5、10μg/ml的rhBMP-2进行药物干预,对照组加入全培.试验组应用CCK-8法检测细胞增殖活性,PNPP法检测细胞ALP活性,RT-PCR法检测成骨标志蛋白mRNA的表达情况.结果 rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时开始促进细胞的增殖(P＜0.05),rhBMP-2浓度为5μg/ml时促进作用达到峰值(P＜0.05).rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时ALP活性显著提高(P ＜0.05);rhBMP-2浓度为5μg/ml和10 μg/ml时,ALP活性较浓度为2.5 μg/ml时继续升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).ALP、COL1-α以及转录因子RUNX-2的mRNA含量均在加入浓度5μg/ml rhBMP-2后明显升高(P＜0.05),继续加大rhBMP-2浓度,mRNA含量没有明显增加.结论 在研究范围内,rhBMP-2对MC3T3-E1的影响呈浓度依赖性.
-
聚乙二醇水凝胶膜为载体的人角膜上皮细胞原代培养研究
目的 观察人角膜上皮细胞(corneal limbal epithelial cells,CLEC)的生物学特性,探讨CLEC在普通培养皿和聚乙二醇水凝胶膜(poly(ethylene glycol)-based hydrogel films,PHF)上的增殖率差异.设计 实验研究.研究对象 人角膜上皮细胞.方法 采用组织块培养法体外扩增CLEC,待细胞生长至指数生长期,分别种植于普通培养皿和PHF上,倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点,利用免疫荧光对其鉴定,利用CCK-8比色法观察两组细胞相对增殖率(relative growth rate,RGR)的差异.主要指标 光镜下CLEC的生长,AE1染色,CCK-8比色法的吸光度(optical density,OD)值.结果 光镜下可见CLEC在普通培养皿和PHF上均能移行扩增、融合成片,在PHF上的生长速度与普通培养皿组相近.两组细胞AE1荧光染色均呈阳性,PHF组阳性率(73.26％±8.84％)与普通培养皿组(70.84％±3.51％)基本相同.PHF组在12 h(0.89±0.06)、24 h(1.13±0.10)、48 h(1.24±0.03)的OD值与普通培养皿组(0.89±0.03、1.08±0.04、1.28±0.09)差异无统计学意义(P=0.79,0.36,0.76).PHF组细胞在12 h(99.12％±4.81％)、24 h(103.74％±5.55％)、48 h (97.83％±13.37％)的RGR均大于75％,各时间点间差异无统计学意义(P=0.37,0.90).结论 PHF可以作为体外扩增角膜上皮细胞的良好载体.
-
L1(ORF1)基因通过编码和非编码RNA表达对细胞增殖的影响
目的 探索L1(ORF1)基因过量表达对细胞增殖的影响.方法 PCR方法制备L1(ORF1)全长以及5′端不同截短的天然序列以及各种突变体,构建真核重组表达载体,利用脂质体方法瞬时转染HEK293细胞,Western 印迹方法验证蛋白表达,利用活细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞增殖能力分析.结果 过表达天然全长蛋白[L1(ORF1)]的重组体能明显促进细胞增殖,终止密码位于第109个氨基酸位置的全长序列重组体[L1(ORF1)109]对细胞增殖同样具有非常明显的促进作用,但仅含有氨基端109个氨基酸的基因片段的重组体对细胞增殖没有促进作用.另外,终止密码位于其他位置的全长序列重组体[L1(ORF1)48,终止突变在第48个氨基酸位置]以及含有多处突变的全长序列重组体[L1(ORF1)m]对细胞的增殖也未见有显著影响.结论 L1(ORF1)全长序列编码蛋白具有显著地促进细胞增殖作用,同时在特殊位点含有终止突变的全长序列转录产物对细胞的增殖也具有显著促进作用,L1(ORF1)全长序列可能通过其编码的蛋白以及非编码RNA两种形式对细胞增殖进行调控,位于序列中的关键位点在此过程中起着重要的作用,为探索L1(ORF1)序列在细胞增殖中的调控机制奠定了基础.
-
硫酸镁抑制经辐射后人脐静脉血管内皮细胞γ-H2AX的表达
目的 探讨不同浓度硫酸镁对照射后人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial,HUVEC)存活率及γ-H2AX表达的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度的硫酸镁对HUVEC存活率的影响;激光共聚焦显微镜检测4GyX射线照射后不同时间HUVEC中γ-H2AX簇集点(foci)的数量;流式细胞术和Western blot检测γ-H2AX蛋白的表达情况.结果 CCK-8法显示,1.25 mg/ml浓度的硫酸镁能提高照射后的细胞存活率(t=-6.34,P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,照射后0.5～1 hfoci焦点数达到高值,平均达45个,随着时间的延长loci点数变少,强度减弱,具有时间依赖性,而硫酸镁在照后0.5、1、2、6、12 h均可以明显减少loci的形成(t=12.62、6.36、11.93、5.75、9.43,P＜0.05);流式细胞仪检测表明,硫酸镁在照后0.5、1、2h可以抑制X射线照射后γ-H2AX蛋白表达量的增加(t=6.07、5.32、11.85,P＜0.05);Western blot结果与细胞免疫荧光结果一致.结论 硫酸镁可以增加照射后HUVEC的存活率,降低X射线诱导的DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达.
关键词： 硫酸镁 人脐静脉血管内皮细胞 X射线 CCK-8 γ-H2AX -
胸腺肽α1缓释注射微球的研究
制备胸腺肽α1(Tα1)的长效注射微球,并对微球的体外释放特性、体外活性及药效学进行考察.采用复乳法(W/O/W)制备了载Tα1聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)的微球;考察微球的粒径大小、外观及包封率等理化特性;以HPLC法测定微球的体外释放速率;采用CCK-8法评价微球制备工艺和体外释放过程中Tα1的生物学活性;体内药效学研究中采用流式细胞仪检测免疫抑制模型大鼠给予Tα1微球后所产生的CD4+,CD8+因子的量,根据CD4+/CD8+的比值变化评价体内药效.微球球形圆整,分散性好,两个优选处方(外水相中加入5%氯化钠和10%葡萄糖)的微球包封率分别为87.8%和90.2%;Tα1微球1个月的体外累积释放可达90%以上.使用含10%葡萄糖的PVA溶液作为外水相,较好地保持了制备工艺过程中的Tα1生物学活性,在体外释放过程中Tα1的生物学活性略有下降;Tα1微球可显著提高免疫抑制模型小鼠的免疫力.用可生物降解的聚合物PLGA作为载体材料,可以将Tα1制备成缓释1个月的注射微球.
-
薏苡茎叶提取物石油醚部位的体外抗肿瘤活性研究
目的 探讨薏苡茎、叶提取液的石油醚萃取部位的体外抗肿瘤作用.方法 用CCK-8法检测薏苡茎、叶不同萃取液对3种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用.结果 薏苡茎、叶4种提取液对所试肿瘤细胞株的体外生长均有抑制作用,其中薏苡茎的水提物石油醚萃取液对人宫颈癌(HeLa)和薏苡茎的醇提物石油醚萃取液对胃癌(SGC-7901)的半数抑制浓度(IC50)分别为51.78和74.44μg·mL-1,薏苡叶的水提物石油醚萃取液对HeLa和薏苡叶的醇提物石油醚萃取液对SGC-7901的IC50分别为45.22和45.91 μg·mL-1.结论 薏苡茎、叶提取液的石油醚萃取部位具有较好的抗肿瘤活性.
-
医用小型猪骨加工工艺与免疫原性的检测与分析
目的制备医用小型猪骨的浸出性异种蛋白，检测和分析其皮质和松质混合骨（以下简称混合骨）与单纯皮质骨（以下简称皮质骨）浸出性异种蛋白刺激和诱导人淋巴细胞增殖的应答反应。方法应用化学和物理学方法制备获得医用小型猪混合骨与皮质骨粉，以定量RPMI-1640搅拌和浸泡4℃72h后高速离心获取上清液且进行蛋白定量检测；随即应用 CCK-8方法检测和分析混合骨与皮质骨浸出性异种蛋白刺激和诱导人外周血淋巴细胞增殖的差异性；以及人外周血淋巴细胞增殖培养上清中四种细胞因子表达的异同。结果 CCK-8实验结果表明：CCK-8实验未见混合骨与皮质骨浸出性异种蛋白具有刺激和诱导人淋巴细胞增殖的应答反应的统计学差异；而应用 ELISA 酶联免疫吸附实验对人淋巴细胞培养上清中IFN-r、IL-1、IL-10和TNF-a的检测结果提示：与对照组相比，经工艺处理后小型猪骨组的四种炎症相关因子均较处理前组具有统计学的显著性差异（P＜0.05），而皮质骨组较混合骨组其炎症相关因子的表达同样具有统计学差异。结论本实验结果提示，应用已建立的小型猪骨加工工艺可有效处理和抑制异种蛋白对人淋巴细胞增殖的刺激和诱导作用，表明小型猪混合骨与皮质骨其异种蛋白的抗原性存在一定的差异；本小型猪骨加工工艺和免疫原性的检测和分析系统的建立为医用性异种骨的使用提供了理论与实验数据的参考。
-
胆囊收缩素对中枢阿片系统的调节作用
胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)是 1928年由 Ivy 和 Oldberg 在狗的胃肠道中发现的一种多肽激素,其不但具有胃肠道激素的功能,还以神经递质和神经调质的形式发挥着重要的生理作用,是一种典型的脑肠肽[1].有研究发现,阿片肽、胆囊收缩素及其受体在中枢神经系统重叠分布,并且八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)是目前已知作用强的内源性抗阿片肽[2],在抗伤害性反应(antinociceptive effects)、镇痛耐受及成瘾过程中具有重要的拮抗作用.因此,两种神经肽之间的相互作用关系已成为当今的研究热点,本文将对CCK在中枢阿片系统的相关调节作用及其机制方面的研究进展进行简要综述.
-
莽草酸抑制BLM解旋酶活性及肝癌细胞的研究
目的：研究莽草酸( shikimic acid)对BLM解旋酶的生物学特性的影响及对肝癌细胞的抑制作用。方法2012年11月—2013年7月应用荧光偏振技术研究莽草酸对 BLM解旋酶的 DNA结合活性,CCK-8检测莽草酸对肝癌细胞增殖的抑制作用。结果培养24 h,A100(100μmol/L)﹑A50(50μmol/L)﹑A25(25μmol/L)三组与不加药对照组相比,抑制率分别为25.73%﹑21.31%﹑18.25%,对肝癌细胞HepG2增殖具有抑制作用(P<0.05)。结论①莽草酸不能结合BLM 解旋酶,不能抑制其与 DNA 的结合,不能抑制BLM解旋酶的生物学活性。②莽草酸对HpG2细胞的生长有一定的抑制作用,HpG2细胞的生长抑制作用随药物作用时间的延长有减弱的表现。③莽草酸抑制肿瘤细胞生长的作用机制不是其通过对BLM解旋酶DNA结合活性的抑制来实现的。
-
CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中佳实验条件的筛选
目的 筛选CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中的佳实验条件.方法 采用正交实验设计,对初始细胞浓度、培养时间、LPS浓度、显色时间这4个主要因素各水平对人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞增殖的影响进行试验研究,对各实验组合测得的刺激指数进行方差分析.结果 CCK-8检测人PBMC增殖试验的佳条件:初始细胞浓度为2.5×106/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h;检测小鼠脾细胞增殖试验的佳条件:初始细胞浓度为5.0×106/mL,培养时间为48 h,LPS浓度为1μg/mL,加入CCK-8后孵育4.5 h.结论 CCK-8法便捷、灵敏、重复性好,可作为检测淋巴细胞增殖的稳定方法.本研究建立的CCK-8佳实验条件可为免疫调节作用的药物体外筛选和免疫药理学作用的研究提供依据.
-
肺康饮口服液对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响
目的 通过观察肺康饮口服液对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应.方法 体外培养A549细胞,以不同浓度的肺康饮口服液作用为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应,透射电镜观察药物对细胞形态学的影响,流式细胞术检测A549细胞中p53和Bcl-2蛋白表达情况.结果 不同浓度肺康饮口服液作用A549细胞24 h增殖抑制明显(P＜0.05),其抑制效应具有剂量依赖的特点,并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调Bcl-2基因表达(P＜0.05).结论 肺康饮口服液可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关.
-
斑蝥酸钠对体外培养的EJ细胞的实验研究
目的 观察斑蝥酸钠对体外培养的人膀胱癌系EJ细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 EJ细胞贴壁后分为对照组、1组、2组、3组、4组、5组,分别给予0、0.5、1、5、10、15 g/L浓度斑蝥酸钠处理,24 h后采用流式细胞仪检测细胞周期情况,CCK-8法检测斑蝥酸钠对EJ细胞增值抑制的影响,荧光倒置显微镜下观察细胞的凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况.结果 以0.5、1、5、10、15 mg/L 5个浓度的斑蝥酸钠作用于EJ细胞24 h,EJ细胞的增殖出现不同程度的抑制,且与药物浓度成正相关.1、2、3、4、5组抑制率与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组S期细胞比例为8.94％,G2/M期为4.16％,G0/G1期为86.91％,与1、2、3、4、5组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).使用斑蝥酸钠作用EJ细胞24h后,电泳出现凋亡特有的阶梯状条带,随着药物浓度的增加,凋亡带增多,而对照组则没有出现凋亡带.荧光显微镜下,对照组未出现凋亡小体,加入斑蝥酸钠的药物组有凋亡小体出现,0.5、5g/L斑蝥酸钠药物组凋亡细胞数较少,15 g/L斑蝥酸钠药物组凋亡细胞数较多.结论 斑蝥酸钠对体外培养EJ细胞增殖有显著的抑制作用,诱导EJ细胞凋亡.
