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通补消积饮对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响
目的 探讨通补消积饮对肺癌A549细胞凋亡诱导作用.方法 采用Annexin V/PI双染色流式法检测不同含药血清对肺癌A549细胞诱导凋亡的影响.结果 通补消积饮低、中、高剂量含药血清组作用24h凋亡率分别为(5.92±2.04)％,(12.57±1.96)％,(16.51±1.52)％;作用48h凋亡率分别为(13.15±1.60)％,(26.42±2.30)％,(31.47±2.08)％;作用72h凋亡率分别为(18.73±1.89)％,(31.72±1.99)％,(36.92±1.38)％,与空白血清组相应时间作用比较[(0.40±0.08)％、(0.58±0.16)％、(0.85±0.13)％],差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论通补消积饮可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡.
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贞芪酪蛋白肽复合物血清对人肺腺癌A549细胞分化抑制作用及相关机制研究
目的:探索贞芪酪蛋白肽(ligustri-astragali casein co-peptid,LACP)复合物对人肺腺癌A549细胞分化的诱导作用及作用机制.方法:MTT法检测贞芪酪蛋白肽含药血清5%,10%,15%,20%浓度对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;通过贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞核质比和端粒酶活性的影响观察其诱导分化作用;免疫细胞化学方法观察贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞Bax/bcl-2基因表达的影响.结果:4种不同浓度的贞芪酪蛋白肽含药血清均对A549细胞增殖有抑制作用,其中以浓度为20%的贞芪酪蛋白肽血清的抑制率高;能降低细胞的核质比,并抑制人肺癌细胞端粒酶活性的作用;贞芪酪蛋白肽血清能促进A549细胞凋亡基因bax/bcl-2的表达,与无药血清对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:贞芪酪蛋白肽含药血清对人肺腺癌细胞A549有一定抑制作用;有诱导人肺癌细胞A549分化的作用,其主要机理可能是抑制了A549细胞端粒酶活性;贞芪酪蛋白肽诱导A549细胞凋亡的作用机制之一可能是促进促凋亡基因bax/bcl-2的表达.
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金雀异黄素对肺泡Ⅱ型上皮细胞发生上皮-间质转化的影响
目的：观察金雀异黄素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌 A549细胞发生上皮-间质转化（EMT）的影响，探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度 GEN 和/或 TGF-β1干预细胞72 h 后的活性；RT-PCR 检测上皮及间质标记物的转变以及在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子；Western blot 检测 p38及 JNK 信号通路的变化。结果 TGF-β1连续刺激 A549细胞72 h 可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多间质标记物升高，内皮标记物降低；RT-PCR 检测结果显示，金雀异黄素可呈浓度依赖性逆转这种现象；Western blot 检测结果显示，金雀异黄素与 TGF-β1协同刺激 A549细胞24 h 可显著抑制TGF-β1诱导 p38及 JNK 信号通路的磷酸化水平。结论金雀异黄素可抑制 TGF-β1诱导 A549细胞发生 EMT而发挥抗纤维化的作用。
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鸡血藤抗肿瘤有效部位诱导A549肺癌细胞非凋亡性程序化死亡的研究
目的:探讨鸡血藤抗肿瘤有效部位(SSCE)对人非小细胞肺癌A549细胞的杀伤特点和作用机制.方法:采用四氮唑溴盐(MYT)法、绘制生长曲线观察药物对A549细胞增殖的影响.采用流式细胞术分析药物对肿瘤细胞周期的影响.通过HE染色和激光共聚焦扫描荧光显微镜技术、AnnexinV-PI双标法,Caspase-3活性检测以及DNA琼脂糖凝胶电泳,观察药物对细胞凋亡的诱导作用.结果:SSCE对A549细胞有明显杀伤作用,24 h药效强,IC50为25.54 mg·L-1.细胞周期分析显示,药物作用12 h,s期细胞增多,G0-G1和G2-M期细胞减少,细胞周期变化在24 h后明显减弱,48 h恢复正常.形态学观察可见,药物作用短时间内(8～12 h),细胞核发生皱缩扭曲,胞浆内出现较多空泡及颗粒状物,胞膜完整;随后细胞核固缩.细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻在用药后12 h显著,具有时间一剂量依赖关系.Caspase-3活性无明显升高,且与剂量成反比.DNA琼脂糖凝胶电泳未见片断化梯形条带.结论:SSCE对A549细胞具有直接杀伤作用,药效迅速,细胞周期受到干扰(S delay),主要表现为非凋亡性程序化细胞死亡.
关键词： 鸡血藤 A549 细胞周期 非凋亡性程序化细胞死亡 -
木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549凋亡和G2周期阻滞
目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制.方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50.Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化.Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制.结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2 μmol·L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达.Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组.Westem blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-KB (p65)的磷酸化水平.免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡.结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性.
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桔梗皂苷D诱导人肺癌细胞A549的凋亡及机制
目的:研究桔梗皂苷D(platycodin,PD)抑制人肺癌A549细胞株增殖和诱导凋亡的分子机制.方法:体外培养人肺癌细胞株A549,PD作用终浓度分别为5～ 20μmol·L-1.MTF法测定PD对细胞的增殖抑制作用,显微镜观察细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测PD对Caspase-3,Caspase-9,PARP的剪切片段和Bax,Bcl-2,Bak,Bcl-xl蛋白表达的影响.结果:PD抑制A549细胞的增殖,并随药物浓度的增加和作用时间的延长,作用更显著；与对照组相比,不同浓度的PD作用24 h后,细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低,且差异显著.蛋白电泳检测结果显示蛋白Caspase-3,Caspase-9均出现剪切片断,并随着时间的增加断裂更明显.PD处理A549细胞后,Bax和Bak蛋白表达升高,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达下降.结论:PD具有明显的细胞毒作用,能诱导A549细胞凋亡,通过对Bax,Bak和Bcl-2,Bcl-xl表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase终导致肺癌细胞死亡.
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PKCα siRNAs有效序列的筛选及其对肺癌A549细胞的作用
目的 探讨人蛋白激酶Cα(PKCα)小干扰RNA(siRNA)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响.方法 设计并化学合成6条PKCα siRNAs,转染A549细胞,通过改良MTY法及RT-PCR筛选;对3条效果较好的PKCαsiRNAs,进一步采用克隆形成抑制实验、Hoechst 33258染色、PI单染和Annexin V/PI双染以及Western blot检测.结果 6条PKCa siRNAs均显著下调了PKCα mRNA水平;除No.5 siRNA外,其他5条siRNA均显著地抑制了A549细胞增殖(P<0.05).3条效果较好的PKCα siRNAs转染组PKCα蛋白的表达显著下调,克隆形成抑制率、亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均显著高于对照组(P<0.05),并出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化.结论 本实验发现3条能显著抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡的PKCα siRNAs.
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人肺癌组织中MCPH1基因过表达后协同化疗药物抑制肺癌A549细胞的增殖
目的 检测人肺癌组织中MCPH1基因表达,并用MCPH1真核过表达载体,检测其协同化疗药物对人肺癌细胞A549的影响.方法 用real-time PCR法检测肺癌标本中MCPH1基因相对表达量.用前期已构建的真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1及对照空白质粒pcDNA3.1(-)转染A549细胞,实验分为3组:实验组(OVER)、空白对照组(W/O)、未处理组(NC).然后分别用real-time PCR和Westen blot检测转染后细胞基因转录和蛋白表达.结果 肺癌组织中MCPH1基因表达低于正常组织(P＜0.05).在肺癌A549细胞中分别加入阿霉素1.0 μmol/mL、紫杉醇20 μg/mL、顺铂0.1μg/mL,48 h后转染MCPH1组抑瘤率明显高于对照组及未处理组(P＜0.05).结论 肺癌组织中MCPH1基因表达下调.MCPH1基因过表达后协同化疗药物抑瘤率明显升高.
关键词： MCPH1 Real-time PCR A549 化疗药物 -
二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡
目的 检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制.方法 通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是否被切割成两个片段.结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中easpase-3的活性上调,其下游底物PARP-1被大量切割成小片段.结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节.
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MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路的作用.方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物(mimics)组和negative-mimics组(miR-NC)以及antago miR-145组(抑制剂组)和antago miR control组(antago-NC),采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响;Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3 K/AKT通路的影响.此外,采用细胞外调节蛋白激酶(ERK)及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变.结果 miR-145 mimics组穿过细胞数(90.67 ±10.33)明显少于miR-NC组(175.33±23.67),miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数(153.33±22.33)少于miR-NC组(77.33±13.67),P＜0.05;antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组(P＜0.05),结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力;miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90％、78％以及73％的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115％、125％以及129％,而当抑制MAPK通路及PI3 K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降.结论 miR-145通过MAPK和PI3 K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭.
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叉头蛋白O1在黄连素抗人肺腺癌A549细胞中作用机制研究
目的 探讨黄连素(BBR)抗肺腺癌A549细胞及叉头蛋白O1 (FKHR)在其中的作用机制.方法 实验分为对照组、BBR 25 μM组、BBR 50 μM组、BBR 75 μM组,分别检测各组A549细胞活性、凋亡率以及FKHR和凋亡相关蛋白含量的变化.FKHR siRNA特异性抑制FKHR表达后,BBR(0、50 μM)处理细胞24h,重复上述检测.构建裸鼠移植瘤模型,腹腔注射BBR(10 mg/kg、20 mg/kg),对照组注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS).检测细胞活力和细胞凋亡率,Western-blot检测FKHR及凋亡相关蛋白的表达.结果 BBR有效降低A549细胞活力并促进细胞凋亡(P＜0.05);Western-blot检测结果显示BBR上调FKHR和Bax的含量(P＜0.05),抑制Bcl2的表达(P＜0.05);FKHR siRNA转染显著抑制其表达,同时抑制BBR抗肺腺癌作用(P＜0.05).结论 黄连素可有效抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡,此作用可能与激活FKHR有关.
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CpG ODN增强人肺癌细胞株A549放射增敏作用的研究
目的 初步探讨CpG ODN增强人肺腺上皮细胞株A549放射增敏作用.方法 ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12和INF-γ的分泌水平,Griess检测细胞NO的含量并观察CpGODN1826与β射线诱导A549细胞AP-1活化的抑制作用.结果 CpG ODN增加了人肺癌细胞株A549 TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌,在联合β射线照射后对A549细胞的杀伤作用更加显著,并显著抑制A549细胞AP-1的活化.结论 CpG ODN对A549有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN增强+4549细胞分泌TNF-α、IL-L2、INF-γ、NO和抑制A549细胞AP-1的活化有关.
关键词： 辐射耐受性 CpG ODNI826 A549 -
人肺腺癌细胞超保守区的生物信息学分析
目的:使用生物信息学的方法,分析肺癌细胞(A549)经慢病毒感染后,过表达超保守区基因与正常肺癌细胞之间的差异基因,并进行基因功能和信号通路分析,为肺癌研究提供差异基因.方法:在公共数据库(GEO)中下载6个肺癌细胞差异基因表达阵列数据进行生物信息学分析,筛选出相关的差异基因.使用DAVID和STRING数据库对差异基因表达进行基因功能、信号通路和蛋白互作用分析.结果:共得到230个差异基因,其中217个表达上调,13个表达下调;GO富集分析显示差异基因主要定位于细胞膜外,参与血管内皮生长因子的调节;KEGG信号通路分析显示差异基因主要表现在化学致癌上;蛋白互作网络显示主要的相关蛋白是CFH、MUC5B、PTGS2、LRRK2.结论:本研究从生物信息学方法对数据进行处理,在基因水平上表明肺癌细胞过表达超保守区后存在差异基因,为基础研究筛选出差异,进而服务于临床.
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Wnt5a对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响
Wnt5a是Wnt家族中的重要成员之一[1,2],在肺的发育及其分化过程中起着重要作用[3],并可能参与非小细胞肺癌(non-small cell-lung cancer,NSCLC)的发生与发展[4].我们通过构建Wnt5a基因正义及RNAi重组质粒并将其导入NSCLC细胞株H157和A549,观察Wnt5a基因表达的变化对NSCLC细胞侵袭及迁移等行为的影响,探讨Wnt5a在NSCLC发生与发展中的作用及机制.
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乙酰胆碱联合长春新碱对人类肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响
目的 探讨乙酰胆碱联合长春新碱( VCR)对肺腺癌细胞生长及化疗的影响,检测其是否通过影响bcl-2及p53发挥作用.方法 将乙酰胆碱单独或与VCR(浓度为IC50)联合作用于肺腺癌细胞株A549,测定其对A549细胞的抑制率.用免疫组织化学法及Western blot法测定乙酰胆碱联合VCR对bcl-2及p53蛋白表达的影响.结果 0.1、1、10 μmol/L的乙酰胆碱对A549细胞的抑制率分别为( 0.050±0.032)％、(0.101±0.021)％、(0.169±0.015)％；0.1、1、10μmol/L的乙酰胆碱分别与0.2 μg/ml VCR联合,对肿瘤细胞的抑制率分别为(0.529±0.023)％、(0.545 ±0.011)％、(0.589±0.015)％,与VCR组比较差异均有统计学意义(q'值分别为1.09、1.37、1.83,均P＜0.05),0.1～10 μmol/L的乙酰胆碱单独作用于A549细胞表现出浓度依赖性的抑制作用,与VCR联合后显著提高A549对VCR的敏感性(P＜0.05)；此外,联合用药后各组bcl-2及p53蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 乙酰胆碱单独及联合VCR均能抑制A549细胞的生长,其机制可能是乙酰胆碱与VCR协同或相加作用影响了bcl-2及p53蛋白的表达.
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转染4.1N基因对人肺癌A549细胞株生物学行为的影响
目的：探讨4.1N在肺癌A549细胞株中的表达以及细胞转染前后增殖、侵袭、迁移等的变化。方法脂质体介导真核表达载体pEGFP-4.1N转染人肺腺癌细胞株A549，同时设空载体组及未转染组为对照，48 h后用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测各组细胞4.1N在mRNA和蛋白水平的表达；通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定各组细胞的增殖能力；Transwell小室模型检测各组细胞的体外侵袭、迁移能力。结果 A549转染pEGFP-4.1N 48 h后，4.1N的mRNA及蛋白表达水平均提高（P＜0.05），细胞增殖活性显著降低（P＜0.05），细胞的体外迁移及侵袭能力明显减弱（P＜0.05）。结论转染4.1N基因能显著上调人高转移肺腺癌A549细胞株中4.1N mRNA和蛋白的表达水平。4.1N基因可以抑制A549细胞株的增殖、黏附、侵袭和迁移，在肺癌转移中起重要作用，有可能成为肺癌转移的分子标志物。
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反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用
目的研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法.方法选择以端粒酶、PKC-α、Bcl-2和IGF-1R为靶点的4种反义寡核苷酸,进行两药组合.以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析.结果联合用药对A549细胞增殖的抑制作用显著高于单药(P＜0.05),并筛选出有协同作用的药物组合(Q≥1.15).结论反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果.
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伊马替尼和十字孢碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响
目的 探讨伊马替尼(STI571)、十字孢碱(STS)对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响.方法 经STI571和STS处理后,通过Western印迹检测A549细胞内凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)的变化,然后利用膜联蛋白(annexin)V-FITC PI凋亡试剂盒,借助流式细胞仪,检测A549细胞凋亡;利用Hoechst染色检测A549细胞凋亡现象并通过免疫荧光技术检测细胞内AIF和线粒体的变化.结果 Western印迹检测结果显示,STI571和STS处理能够提高AIF在A549细胞内以相对分子质量为57×103的形式表达;流式细胞仪检测结果显示,STS处理组膜联蛋白V FITC染色的细胞数随着STS处理时间的增加呈现先增后降的趋势,溴化乙锭PI染色的细胞数随着处理时间增加到20 h呈现增多的趋势;STI571处理组膜联蛋白V FITC的染色结果和溴化乙锭的染色结果与对照组相比,变化均不显著;STI571与STS共同作用组膜联蛋白V FITC染色细胞数少于STS单独处理组结果,溴化乙锭染色的细胞数明显多于STS单独处理组;Hoechst染色结果显示,STS处理组和STI571、STS共同处理组细胞核内染色质发生凝集;间接免疫荧光结果显示,AIF发生聚集且细胞内线粒体染色亮度减弱.结论 STS和STI571处理能够引起细胞内AIF分布形式上的变化,STS可引起A549细胞发生细胞凋亡,STI571处理不能引起细胞发生凋亡,但能引起细胞内AIF发生聚集并对STS引起的细胞凋亡有促进作用.
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miR-195重组腺病毒表达载体构建及在细胞中的表达
目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195.
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高效反义STAT3对A549细胞辐射敏感性的影响
目的 探讨高效反义STAT3转染肺腺癌A549细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的探索思路和途径.方法 用自行设计成功的高效反义STAT3(AS10)转染A549细胞后,以不同剂量γ射线照射,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察;用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化;Western blot检测STAT3蛋白表达及磷酸化变化情况,以及其下游基因表达变化情况.结果 高效反义STAT3(AS10)转染后,加以γ射线照射,A549细胞的增殖相比于单独作用组受到明显抑制,细胞早期凋亡水平也增加,STAT3蛋白及其下游Bcl-Xl、Cyclin D1蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低.结论 反义STAT3(AS10)联合γ射线对A549细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了A549细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段.
