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siRNA沉默CHD6基因表达对细胞增殖和辐射敏感性的影响
目的通过建立siRNA介导的染色质重构蛋白CHD6基因表达抑制的细胞模型,研究CHD6对人肺腺癌细胞A549细胞增殖及辐射敏感性的影响.
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HIV-1Tat 对辐射后细胞周期、DNA损伤的基因表达和功能
目的在HIV-1编码的为数不多的蛋白中,Tat蛋白是影响宿主细胞对环境因素敏感性的重要潜在蛋白,是一个与宿主细胞多种蛋白/因子存在相互调节作用的功能蛋白.现试图探讨表达Tat蛋白的细胞在受到电离辐射时其细胞周期的变化及其细胞损伤修复的分子生物学改变.
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DAB2IP基因沉默引起膀胱癌细胞辐射耐受与化疗抵抗
目的 观察DAB2IP基因对膀胱癌细胞放化疗敏感性的影响.方法 RNA干扰建立DAB2IP表达抑制的膀胱癌细胞,克隆形成实验比较不同DAB2IP表达的细胞对射线放射敏感性的差异,噻唑蓝方法检测不同DAB2IP表达的细胞对常用化疗药物敏感性的变化.结果 DAB2IP基因沉默造成细胞对射线与化疗药物均出现耐受.结论 DAB2IP可能用作预测膀胱癌患者放射或化学治疗预后的分子标志物.
关键词： 卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白 膀胱癌 辐射敏感性 化学敏感性 -
骨髓间充质干细胞抗辐射基因Survivin和HO-1的表达
本研究探讨人骨髓间充质干细胞抗辐射基因survivin和HO-1的表达.采用Fircoll密度梯度离心法自人骨髓中分离MSC并进行纯化和扩增,通过流式细胞术检测其表面标志并进行鉴定;用地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、吲哚美辛等定向诱导BM-MSC分化为脂肪细胞;RT-PCR检测MSC中survivin和HO-1基因表达.结果表明:体外分离培养的MSC中CD34、HLA-DR表达为阴性,CD71、CD44表达为阳性,并且可诱导为脂肪细胞.RT-PCR检测MSC显示有survivin和HO-J抗辐射基因表达.结论:MSC具有较低的辐射敏感性,这可能与抗辐射基因survivin和HO-1表达相关.
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放射联合基因治疗在肿瘤治疗中的研究进展
放射治疗是继手术治疗后应用广泛的肿瘤治疗方法之一，技术已经比较成熟，但长期以来，各种肿瘤的辐射抗性以及放疗过程中造成的肿瘤临近部位正常组织的损伤，一直制约着肿瘤放疗疗效与应用。基因治疗是目前肿瘤治疗的研究热点之一。目前更加实际的策略，就是与现有治疗手段相结合。基因治疗通过沉默异常细胞信号、DNA修复，促进免疫监视及细胞凋亡等增强辐射敏感性，降低放疗的辐射剂量，保护正常组织免受放射损害。另外，辐射诱导基因的成功构建也增强了基因治疗的靶向性和可控性。但目前的研究多在细胞水平，而且不同肿瘤的差异较大，本文就放射治疗联合基因治疗在以上各方面的研究进展做一综述。
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低剂量CT研究进展及其在儿童心血管和气道病变中的应用
由于科技的不断进步,自从20世纪70年代初CT的概念被提出后,CT在全世界的应用越来越广泛,给人类疾病的诊断带来了福音.然而,随着大家对辐射危害认识的加深,CT所伴随的辐射问题也越来越受大家的重视.相比于成人,儿童具有对辐射敏感性更强及平均期望寿命更长等特点[1],低剂量CT在儿童检查中的应用显得尤为重要.本文就低剂量CT的提出背景、近年研究进展及其在儿童心血管和气道病变中的应用做一概述.
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鼻咽癌多层螺旋CT动态灌注扫描预测放射敏感性初步研究
目的初步探讨螺旋CT灌注成像扫描在预测鼻咽癌放射敏感性的应用价值.方法对经病理证实的52例鼻咽癌行治疗前螺旋CT动态扫描,通过时间-密度曲线计算鼻咽部肿瘤和未受侵犯的翼外肌的灌注数据.患者均接受常规放射治疗,外照射至DT50Gy时行鼻咽部CT复查,分别测量治疗前和外照射DT50 Gy时肿瘤大截面积.分析各灌注参数与肿瘤消退率(RSO-50)关系.结果全组病例鼻咽肿瘤的血流量(BF)、血容量(BV)、平均通过时间(MTT)和表面通透性(PS)的平均值分别为401.8ml·min-1·100 g-1、9.0ml/100g、3.1s和66.0ml·min-1·100g-1.Pearson相关分析结果显示各灌注参数与RSO-50均无明显直线相关关系.将RSO-50≤0.75定为放射治疗低敏感组,＞0.75为高敏感组.肿瘤与肌肉组织的BF、BV比值结果显示高敏感组rBF平均值为16.1,低敏感组为9.7(t=1.92,P=0.06);高敏感组rBV平均值为3.0,低敏感组为2.3(t=1.84,P=0.07).结论螺旋CT动态灌注扫描预测鼻咽癌放射敏感性需要更进一步的研究.
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改良"彗星"分析法检测鼻咽癌放射敏感性的初步研究
目的评价改良"彗星"分析法应用于预测临床鼻咽癌放射敏感性的价值.方法应用改良"彗星"分析法对105例鼻咽癌患者放射治疗前的鼻咽活检组织标本进行分析.将鼻咽癌活检标本制备的单细胞悬液分为对照管和单次5Gy照射管.所有病例在放射治疗前及至50Gy时行螺旋CT或MRI检查,分别测量肿瘤大横截面积(S0为疗前,S50为疗中至50Gy时).临床放射敏感性评价应用肿瘤大横截面积的消退率表示[即Rs=(S0-S50)/S0],Rs≥0.9为高度敏感,0.7≤Rs＜0.9为中度敏感,Rs＜0.7为不敏感.实验室根据图像特点将"彗星"图分为Ⅰ A、Ⅰ B、ⅡA、ⅡB四类,根据尾力矩、DNA积分吸光度等参数设定实验室放射敏感性判断标准.统计分析采用SPSS10.0软件包,用Kappa分析法进行临床和实验室结果一致性分析.结果全组患者临床放射敏感性高度敏感41例,中度敏感21例,低敏感43例.改良"彗星"分析法放射敏感性敏感58例,不敏感47例.改良"彗星"分析法的敏感性为71.0%,特异性为67.4%,准确性为69.5%.两种检测方法接近中高度一致性(Kappa=0.38).结论改良"彗星"分析法检测人鼻咽癌活检标本,在放射治疗前能对鼻咽癌的临床放射敏感性作出预测,方法简单、检测周期短,具有较强的临床应用潜力.
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脑胶质瘤SHG-44细胞株受照后代辐射抗性的研究
放射抗拒是目前脑胶质瘤治疗的一大障碍,阐明其原理就有可能设计出针对性的放疗方案,提高疗效.人们既往对胶质瘤进行辐射敏感性的研究时大都采用单株细胞或不同种系不同脑胶质瘤细胞株进行比较,这些方法为探讨其辐射抗拒的机制提供了不少信息[1-3].如果以同一来源不同放射敏感性的一对细胞为对象进行对照研究,将有更多优势.为此,通过人脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后代辐射抗性及其发生机制的研究,为复发脑胶质瘤放射增敏治疗提供新思路和理论依据.
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60Coγ射线对肝癌细胞株p27kip1表达及其分布的影响
近研究表明电离辐射可以改变细胞周期的进程,而且不同的辐射敏感性细胞辐射后存在不同细胞周期变化规律[1].已有的研究发现60Co γ射线对于卵巢癌细胞(A2780)和血管平滑肌细胞(VSMCs)主要发生G1期阻滞[2,3],而对白血病细胞(HL-60)主要是G2+M期阻滞[4].p27kip1是一类细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制剂,作为细胞周期负性调因子,参与细胞周期调控[5].近有研究者发现细胞G2+M期阻滞p21蛋白高表达和p27kip1蛋白的低表达共同调控[6],但是p27kip1蛋白在γ射线引起的细胞周期改变过程中表达和分布的改变并不清楚.因此,笔者着重探讨60Co照射改变肝癌细胞(HepG2)周期改变过程中p27kip1蛋白在细胞核和细胞浆内分布和表达的变化.
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MDM2基因多态性与NSCLC辐射敏感性及易感性的相关性
研究表明鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)基因的扩增和(或)过度表达可见于多种肿瘤,如淋巴瘤、乳腺癌和睾丸精子细胞肿瘤[1],MDM2在肺癌中的表达是一个常见现象[2].因此,MDM2在非小细胞肺癌(NSCLC)易感性及辐射敏感性中的作用是值得肿瘤学家们探讨的问题.笔者采用PCR-RFLP方法检测80例NSCLC及82例正常人MDM2基因单核苷酸多态性(SNP),旨在探讨MDM2基因多态性与NSCLC易感性及辐射敏感性是否存在相关性.
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DNA依赖的蛋白激酶和检查点激酶1对卵巢癌细胞周期阻滞的研究
目的:探讨DNA-PK和CHK1对卵巢癌Skov3的细胞周期阻滞的机制.方法:通过对DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的构建及有效干扰载体的筛选,流式细胞仪检测G2期.结果:转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞和Hela细胞经2Gy X射线照射后进入G2期的细胞比率无差异;转染CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.618,P=0.026),28h时明显低于Hela细胞(t=2.705,P=0.022);转染DNA-PK shRNA和CHK1 shRNA的Skov3细胞经2Gy X射线照射后4h进入G2期的细胞比率显著高于Hela细胞(t=2.965,P=0.014),28h时明显低于Hela细胞(t=2.302,P=0.044).结论:干扰DNA-PK和CHK1的表达可增强卵巢癌细胞对辐射的敏感性.
关键词： 辐射敏感性 卵巢癌 DNA依赖的蛋白激酶 检查点激酶1 -
p53腺病毒重组体转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响
目的 观察p53腺病毒重组体(AdCMV-p53)转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响.方法 用腺病毒重组体(AdCMV-p53/GFP)转染经0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 Gy γ射线辐射的H1299(nullp53)和PC-3(nullp53)细胞,用流式细胞分析法检测外源性p53表达,用克隆形成法检测肿瘤细胞增殖能力.结果 辐射联合AdCMV-p53转染组p53阳性细胞所占比例均明显高于单纯辐射组、单纯AdCMV-p53转染组和辐射联合AdCMV-GFP转染组同种细胞p53阳性率(P<0.05);AdCMV-p53转染不仅明显提高肿瘤细胞辐射敏感性,而且与肿瘤细胞组织来源有关.结论 p53腺病毒重组体转染对p53基因缺失肿瘤细胞低剂量辐射敏感性的增强作用与肿瘤细胞来源的组织器官和细胞类型有关.
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肿瘤细胞中Ro60的表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响
目的 检测肿瘤细胞中RNA结合蛋白Ro60的表达定位,研究Ro60在肿瘤增殖和辐射敏感性中的作用.方法 构建带绿色荧光素酶标签的Ro60真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察电离辐射引发的DNA损伤反应中Ro60的表达定位规律;CCK8和锥虫蓝染色实验检测Ro60蛋白对肿瘤细胞增殖和辐射敏感性的影响.结果 多种肿瘤细胞中均有较高水平的Ro60蛋白表达.γ射线诱导的DNA损伤反应中Ro60发生显著的表达上调和亚细胞定位改变.过表达Ro60的肿瘤细胞增殖延缓,细胞死亡明显增多,辐射引发的细胞增殖抑制和死亡显著增强.结论 辐射引发肿瘤细胞中Ro60表达和定位改变,调控肿瘤细胞增殖和凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性.
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PIF1解旋酶在电离辐射诱发的细胞周期阻滞中的作用
目的 观察人PIF1解旋酶敲低对电离辐射致细胞生长及细胞周期阻滞的影响,以探讨人PIF1在电离辐射致DNA损伤应答中的作用.方法 采用慢病毒系统建立PIF1敲低稳转细胞系,实时荧光定量PCR及Western印迹检测PIF1敲低效果.细胞计数法观察PIF1敲低对4 Gy γ射线照射下细胞增殖的影响,流式细胞术观察PIF1敲低对8 Gy γ射线照射下细胞周期阻滞的影响.结果 建立了PIF1敲低的稳转细胞系,4 Gy γ射线照射后,PIF1敲低细胞系的生长受到明显抑制,在照后第2~4天几乎无任何增殖,直到第5天才开始缓慢增殖.8 Gy γ射线照射后,PIF1敲低细胞系的S期阻滞与G2/M期阻滞相对于对照细胞发生明显延迟.结论 PIF1敲低后显著增加了细胞的辐射敏感性以及电离辐射所致的S期阻滞与G2/M期阻滞延迟.
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三氧化二砷提高恶性淋巴瘤细胞放射敏感性的观察
目的研究三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞辐射敏感性的影响.方法采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和Bcl-2蛋白的表达.结果0.5～2.0μmol/L三氧化二砷和1～4 Gy γ射线均能抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长,诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测Raji细胞亚G1期细胞明显增多,Bcl-2蛋白的表达明显降低,呈现时间剂量依赖效应,联合应用比单独应用抑制作用显著.结论三氧化二砷能够提高恶性淋巴瘤细胞的放射敏感性.
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沙利度胺对食管癌TE1细胞DNA合成抑制作用和辐射敏感性的影响
目的 探讨不同浓度沙利度胺联合X线照射对食管癌TE1细胞放射敏感性的影响.方法 采用细胞划痕实验检测沙利度胺对细胞浸润转移能力的影响,H3-TdR掺入法研究沙利度胺单用及联合X射线对TE1细胞DNA合成抑制作用,用克隆形成法研究对TE1细胞辐射敏感性的影响.结果 沙利度胺对食管癌TE1细胞的浸润转移能力、DNA合成、克隆形成均有明显的抑制作用,并随药物浓度的升高而增强.TE1细胞的D0、Dq、SF2值随着沙利度胺浓度的增加而减小:沙利度胺100 μg/ml时放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.4±0.2和1.5±O.1;150μg/ml时的放射增敏比分别为1.4±0.2和1.8±0.2.结论 沙利度胺能够抑制TE1细胞的浸润转移、DNA合成能力,显著提高TE1细胞的辐射敏感性.
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siRNA抑制STAT3基因对HepG2细胞辐射敏感性的影响
目的 研究瞬时转染的siRNA抑制STAT3基因表达对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响.方法 以人肝癌HepG2细胞作为研究对象,脂质体包裹化学合成的siRNA进行转染.采用实时RT-PCR和Western blotting法分别从mRNA水平和蛋白水平检测STAT3基因的表达及编码蛋白磷酸化活化的改变,用CCK-8法和Hoechst 33258 DNA染色法检测辐射敏感性的变化.结果 STAT3特异性的siRNA转染后HepG2细胞中STAT3基因mRNA拷贝数、STAT3蛋白表达和磷酸化水平均明显降低.mRNA水平的抑制效率可达70%.siRNA转染联合60Coγ射线照射后HepG2细胞增殖活力显著低于对照组(P＜0.05).结论 针对人STAT3基因的siRNA能够抑制HepG2细胞STAT3基因的表达,降低STAT3蛋白活化水平,进而产生辐射增敏作用.
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DNA双链断裂残留损伤与癌细胞辐射敏感性研究
目的 了解不同组织来源癌细胞株和人体肿瘤组织原代细胞的DNA双链断裂损伤修复的个体差异性,探寻预测癌细胞辐射敏感性的生物指标.方法 60Coγ射线照射诱发DNA损伤,脉冲电场凝胶电泳检测DNA双链断裂损伤修复,细胞克隆形成能力法检测细胞辐射敏感性.结果 8个不同组织来源癌细胞株的辐射敏感性有较大的差异(D0为0.65～2.15 Gy),不同细胞株20 Gyγ射线照射诱发产生的DNA双链断裂原初损伤有一定的差别,但与细胞辐射抗性无相关性.辐射敏感细胞SX-10的DNA双链断裂修复缺陷发生在早期快速修复相,而A2780细胞的修复缺陷是发生在晚期慢速修复相.20 Gy照射修复2 h后DNA双链断裂残留量与细胞辐射敏感性指标D0或SF2值有显著的相关性.不同个体患者脑肿瘤组织原代细胞之间,辐射诱发DNA双链断裂的修复反应存在明显差异,修复2 h后残留损伤的个体差异性分布类似于癌细胞株.结论 DNA双链断裂残留损伤与癌细胞辐射抗性有显著相关性,可作生物指标预测肿瘤组织细胞对放射治疗的反应性.
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个体辐射敏感性对医用X射线工作者GPA基因突变频率的影响
目的探讨个体辐射敏感性对GPA基因突变频率的影响及其校正方法.方法利用彗星实验、CB微核+3AB指数实验和多元线性回归统计分析方法,检测个体辐射敏感性及其对X射线工作者GPA基因突变频率剂量-效应曲线的影响,建立多元线性回归方程.结果X射线工作者的辐射敏感性存在个体差异,个体辐射敏感性是GPA基因突变频率变异的影响因素;个体的辐射敏感性较高者,GPA基因突变频率较高;经个体辐射敏感性校正后GPA基因突变频率与剂量的相关性加强,GPA Nφ基因突变频率的多元线性回归曲线方程:YNφ=24.7×10-6+0.5×10-6X1-99.5×10-6X2+1.7×10-6X3,总相关系数r=0.673(P＜0.01).结论用个体辐射敏感性指标校正个体差异,改善了GPA基因突变频率剂量-效应关系;多元回归方程估算的累积剂量更接近估算的物理剂量;减少了GPA基因突变频率估算累积剂量和预测癌患风险的不确定度.
