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缺氧诱导因子1α在砷所致人肝细胞上皮间质转化及其恶性转化中的作用
目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在亚砷酸钠(NaAsO2)所致人肝细胞(L-02细胞)上皮-间质转化(EMT)及其在恶性转化中的作用.方法 用2.0μmol/L NaAsO2慢性处理L-02细胞0、10、20或30代,以0代为对照组.用LipofectamineTM2000将缺氧诱导因子1α对照小干扰RNA(con siRNA)和HIF-1α小干扰RNA(siRNA)转染砷诱导的恶性转化人肝细胞(T-L-02)后,将其分别设定为T-L-02+con siRNA和T-L-02+HIF-1αsiRNA组,并设立L-02组及T-L-02对照组.采用Western blots检测不同组别的EMT指标及HIF-1α表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测HIF-1α与Snail的结合水平,软琼脂集落形成实验检测细胞恶性程度,侵袭转移实验检测细胞侵袭转移能力.结果 NaAsO2处理10、20和30代L-02细胞后,其E-钙黏附蛋白水平均低于0代细胞组,P值均<0.05;而N-钙黏附蛋白和转录因子Snail相对表达量及HIF-1α水平均高于0代细胞组,P值均<0.05.siRNA处理后,T-L-02+HIF-1αsiRNA组的HIF-1α、N-钙黏附蛋白、Snail水平低于T-L-02对照组,而细胞E-钙黏附蛋白水平高于T-L-02对照组,P值均<0.05.同时,HIF-1α直接靶向Snail调控其表达,使其表达升高.细胞侵袭实验发现,T-L-02+HIF-1αsiRNA组细胞的集落形成数、侵袭细胞数和转移细胞数均低于T-L-02对照组,P值均<0.05.结论 HIF-1α通过调控Snail参与砷所致人肝细胞EMT及其恶性转化.
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常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响
目的:探讨常春藤皂苷元(HG)通过调控上皮-间质转化(EMT)途径抑制大肠癌侵袭转移的机制.方法:以肠癌细胞SW480细胞为研究对象,不同质量浓度HG干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW480细胞,作用24 h后噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力.转移小室(Transwell)实验检测细胞侵袭能力.实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(Snail)及侵袭转移标志分子信号传导蛋白和转录激活物(STAT3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP-14,伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达变化.结果:HG可抑制TGF-β1诱导的肠癌SW480细胞增殖、干预EMT和降低侵袭能力,降低EMT标志分子N-cadherin,Vimentin,Snail及侵袭转移标志分子STAT3,MMP-9,MMP-14表达,增强E-cadherin,RECK的表达,与TGFβ1组比较均具有统计学差异(P＜0.05).结论:HG可通过抑制EMT途径影响大肠癌细胞SW480侵袭转移.
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经络“调虚实”作用机制与损伤微环境
人体器官上皮细胞是其结构和功能活动的决定者,在致病因素的作用下则可能先受到影响,表现为活化、增生、结构改变,转分化以及器官功能结构的萎缩和间质的纤维化等,借助上皮细胞与间质成纤维细胞间的直接接触连接结构及其对上皮细胞功能活动的调控作用,人体中的腧穴-经络结构得以与内脏器官建立起特定相关的关系(络属关系),而其损伤微环境的形成及演变则可能在经络反映,治疗疾病的过程中起着关键性的介导作用,为经络“调虚实”的作用提供了组织结构方面的依据.而上皮细胞受致病因素作用的影响形成的炎症分子信号网络及其上皮-间质转化作用等,则为经络“调虚实”的作用提供了现代科学的理论依据.
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金雀异黄素对肺泡Ⅱ型上皮细胞发生上皮-间质转化的影响
目的：观察金雀异黄素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌 A549细胞发生上皮-间质转化（EMT）的影响，探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度 GEN 和/或 TGF-β1干预细胞72 h 后的活性；RT-PCR 检测上皮及间质标记物的转变以及在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子；Western blot 检测 p38及 JNK 信号通路的变化。结果 TGF-β1连续刺激 A549细胞72 h 可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多间质标记物升高，内皮标记物降低；RT-PCR 检测结果显示，金雀异黄素可呈浓度依赖性逆转这种现象；Western blot 检测结果显示，金雀异黄素与 TGF-β1协同刺激 A549细胞24 h 可显著抑制TGF-β1诱导 p38及 JNK 信号通路的磷酸化水平。结论金雀异黄素可抑制 TGF-β1诱导 A549细胞发生 EMT而发挥抗纤维化的作用。
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TSA体外抑制人肺癌细胞系A549细胞增殖及机制
目的 探讨TSA对人肺癌细胞系A549的作用及其对上皮间质转化(EMT)的调控机制.方法 用MTT实验分析TSA体外抑制A549细胞的增殖能力;用划痕实验检测细胞的迁移;用Western blot法检测EMT相关marker蛋白的表达.结果 TSA对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用(P＜0.01),TSA通过EMT途径抑制A549细胞的侵袭与迁移.结论 TSA可体外抑制A549细胞,其部分机制是通过抑制EMT途径实现的.
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Notch信号通路调控上皮-间质转化影响膀胱癌侵袭性和耐药性
目的：体外探讨Notch信号通路对膀胱癌细胞侵袭性与耐药性的影响及分子机制。方法采用Notch信号通路受体完全阻断剂（γ分泌酶抑制剂）处理膀胱癌T24、5637和J82细胞48 h后，倒置显微镜观察膀胱癌细胞增生及形态；用RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测上皮-间质转化（ EMT）分子标志物E-cadherin、N-cad-herin、vimentin和Alpha-smooth muscle actin的表达；MTT、Transwell检测膀胱癌细胞耐药性及侵袭能力。结果完全阻断Notch信号通路后，镜下显示膀胱癌细胞形态变小，细胞分散；EMT分子标志物E-cadherin mRNA和蛋白水平表达上调（ P＜0.05），N-cadherin、vimentin、Alpha-smooth muscle actin mRNA 和蛋白水平表达下调（ P＜0.05）；膀胱癌细胞T24、5637和J82增殖明显被抑制（ P＜0.05）；膀胱癌细胞T24、5637和J82穿过微孔膜的细胞数明显减少（ P＜0.05）。结论 Notch信号通路可通过调控EMT的变化而改变膀胱癌的侵袭性与耐药性。
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Napsin A基因转染干预A549细胞的上皮-间质转化
目的 探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制.方法 采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定.用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EMT模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化,观察Napsin A基因转染对A549细胞在体外EMT模型中细胞EMT和表达黏着斑激酶(FAK)的影响.结果重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A蛋白显著高于非转基因细胞组(P＜0.01).细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,E钙蛋白的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P＜0.01),相反Ⅰ型胶原则显著上调(P＜0.01),提示体外构建EMT模型获得成功.转Napsin A基因A549细胞在TGF-β1干预后,其细胞形态间质改变、E钙蛋白和Ⅰ型胶原的表达量也发生相似变化趋势,但变化幅度显著变小(其中E钙蛋白:P＜0.01,Ⅰ型胶原:P＜0.05).体外EMT模型中,细胞FAK蛋白表达量增多(P＜0.01),但转基因细胞上调趋势明显小于未转基因细胞(P＜0.01).结论转染Napsin A基因至A549细胞可以部分阻滞细胞EMT进程,其作用机制可能与抑制整合素信号转导通路有关.
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白细胞介素-34／集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导 A549细胞上皮-间质转化中的表达
目的：探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体（IL-34/CSF-1R）在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导A549细胞发生上皮-间质转化（ EMT）中的表达。方法体外培养A549细胞；CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响；选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞（0、12、24、48h），提取细胞蛋白和RNA， Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏连蛋白（E-Cad）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（ MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（ TIMP-1）蛋白的变化；Real-time PCR 法检测 IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响（ P＞0.05）。 TGF-β1刺激A549细胞后，间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高，上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降，纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高，MMP-9蛋白表达先升高后下降，TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后，呈持续降低趋势（ P＜0.01）。 IL-34 mRNA表达逐渐升高，CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降（P＜0.01）。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中，存在IL-34/CSF-1R的动态表达。
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上皮-间质转化在慢性呼吸系统疾病中的作用
上皮-间质转化(EMT)是指分化成熟的上皮细胞在各种刺激下转变成为具有间质表型细胞的生物学过程,与组织胚胎发育、器官纤维化、肿瘤转移密切相关.上皮细胞作为呼吸系统主要的屏障之一,接受着各种刺激的影响,其修复与损伤参与了众多呼吸系统疾病的发病过程.本文就上皮-间质转化机制在慢性呼吸系统疾病研究中的进展作一综述.
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天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞上皮-间质转化中的微RNA表达变化
目的 探讨天龙咳喘灵提取物抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞上皮-间质转化(EMT)过程中微RNA(miRNA)的表达变化.方法 体外培养A549细胞,TGF-β1刺激A549细胞60 min后加入天龙咳喘灵提取物,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化.反转录-PCR、免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表达.miRNA芯片检测A549细胞EMT前后miRNA表达的变化.结果 细胞形态学观察、反转录-PCR及免疫印迹检测均显示,5μg/L TGF-β1可以诱导A549细胞EMT且可以被50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制或逆转.miRNA芯片检测显示,与未处理的A549细胞比较,A549细胞EMT后有41种miRNA表达出现显著改变,其中26种表达上调2倍以上,15种表达下调2倍以上；与未处理的A549细胞比较,50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制TGF-β1诱导A549细胞EMT后有46种miRNA的表达出现显著变化,其中25种表达上调2倍以上,21种表达下调2倍以上；与TGF-β1诱导A549细胞EMT比较,50 mg/L天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞EMT时有17种miRNA差异表达,其中13种表达下调2倍以上,4种表达上调2倍以上.结论 天龙咳喘灵提取物可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT,并参与调控miRNA的差异表达,可能有助于阻止慢性肺部纤维化疾病的进展.
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PDCD5通过Wnt/β-catenin通路抑制肾细胞癌侵袭转移及其机制研究
目的 探讨肾细胞癌(RCC)患者PDCD5的表达水平及其参与调控RCC侵袭与转移的可能机制.方法 利用免疫组化检测RCC标本与癌旁组织中PDCD5的蛋白表达水平,同时分析PDCD5与疾病分期、预后的相关性;利用transwell及划痕实验检测PDCD5对肾癌细胞系A498侵袭与转移的影响;利用Western blot检测A498细胞转染PDCD5后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin及Wnt/β-catenin通路的变化.结果 ①与癌旁组织相比,RCC标本中PDCD5明显下调(P<0.001),且与疾病分期及预后正相关;②PDCD5明显抑制了肾癌细胞系A498的转移与侵袭能力(P<0.01);③PDCD5通过抑制A498细胞系中MMP2、MMP9及N-cadherin的表达水平,增强E-cadherin的表达水平调控EMT转化,同时Wnt/β-catenin通路关键蛋白下调.结论 PDCD5通过调控Wnt/β-catenin通路影响肾细胞癌EMT转化,负性调控了RCC病人的侵袭与转移进程.
关键词： 癌 肾细胞 肿瘤侵润 上皮-间质转化 程序化细胞死亡因子5 Wnt/β-catenin通路 -
E-cadherin和vimentin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征的相关性研究
目的 探究非小细胞肺癌中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达及其与临床病理特征的相关性.方法 通过免疫组织化学法对150例非小细胞癌患者的肿瘤细胞和50例患者的癌旁支气管上皮细胞中的vimentin和E-cadherin的表达进行检测.观察E-cadherin和vimentin蛋白表达与临床病理特征的关系.结果 E-cadherin在癌细胞中的阳性表达率明显低于癌旁支气管上皮细胞,vimentin蛋白在癌细胞中的阳性表达率明显高于癌旁支气管上皮细胞(P＜0.05);E-cadherin和vimentin蛋白在50例癌细胞和对应癌旁支气管上皮细胞上的表达均呈现正相关关系;E-cadherin蛋白在低分化腺癌中的阳性表达率明显低于高中分化腺癌,在男性中的阳性表达率明显低于女性(P＜0.05),与患者的年龄、淋巴结转移、吸烟情况和组织学类型不存在明显相关性(P＞0.05);vimentin蛋白在低分化腺癌中的阳性表达率明显高于高中分化腺癌(P＜0.05),与其他临床病理特征不存在明显的相关性(P＞0.05).结论 在非小细胞肺癌中存在肿瘤细胞的上皮-间质转化现象,尤其在低分化腺癌中的表现为显著.
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RNA干扰神经膜蛋白2基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响
目的 探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制.方法 回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织.RT-PCR和Westernbloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列).转染48h后Westernblo-ting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力.结果 鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、CyclinD1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P>0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、CyclinD1蛋白表达均显著低于空白组(P<0.01).结论 抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关.
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上皮-间质转化在肝癌非手术治疗后促进残癌侵袭、转移的研究进展
上皮-间质转化(EMT)以上皮表型的缺失伴随上皮间质特性的获得为主要特征.上皮-间质转化现象与肝癌非手术治疗后残癌的侵袭、转移能力增加关系密切.本文对近年来有关EMT在各种肝癌非手术治疗后,促进残癌侵袭、转移的研究进展进行综述.
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白细胞介素-22对转化生长因子β1诱导的大鼠肝细胞上皮-间质转化的调控作用
目的 研究白细胞介素-22(IL-22)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝细胞上皮-间质转化(EMT)的调控作用.方法 将大鼠正常肝细胞BRL-3A细胞分为空白对照组、模型对照组和梯度浓度的重组IL-22(1、10、50 ng/ml)干预组,除空白对照组外,各组均给予2 ng/ml的TGF-β1进行刺激,培养48 h,实时荧光定量PCR检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量;Western blot检测E-cadherin、vimentin蛋白的表达量.结果 空白对照组vimentin mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.99±0.11、0.67±0.08,E-cadherin mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.98±0.08、0.77±0.06;与空白对照组相比,模型对照组vimentin mRNA(1.24±0.02)和蛋白(0.96±0.06)的表达均增强(t值为-3.805和-4.946,均P<0.05),E-cadherin mRNA(0.81±0.06)和蛋白(0.58±0.03)的表达均减弱(t值为2.868和4.890,均P<0.05).与模型对照组相比,梯度浓度重组IL-22干预组vimentin mRNA(0.97±0.10、0.57±0.03、0.30±0.77)和蛋白(0.86±0.03、0.74±0.02、0.61±0.04)的表达均减弱(F值为115.068和45.057,均P<0.05),E-cadherin mRNA(1.03±0.07、1.31±0.02、1.61±0.09)和蛋白(0.70±0.02、0.80±0.03、0.88±0.03)的表达均增强(F值为81.163和59.197,均P<0.05);梯度浓度的重组IL-22(1、10、50 ng/ml)干预组之间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 TGF-β1能诱导大鼠肝细胞发生EMT,IL-22能够逆转TGF-β1介导的EMT,且呈剂量依赖性.
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RNA 干扰巨噬细胞移动抑制因子对宫颈癌 Caski 细胞上皮-间质转化的影响
目的：通过 RNA 干扰技术研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对宫颈癌 Caski 细胞上皮-间质转化（EMT）的影响作用。方法通过构建重组真核表达载体 pGenesil-1-MIF siRNA，转染宫颈癌 Caski 细胞（Caski-pGenesil-MIF siRNA 组），同时设空载体转染组（Caski-pGenesil-1组）和空白对照组（Caski 组），采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测 Caski 细胞中 MIF mRNA 相对表达量的变化，并检测转染前后 Caski 细胞中 EMT 相关指标E-cadherin 和 Vimentin 的表达变化。结果 pGenesil-1-MIF siRNA 转染 Caski 细胞后 MIF mRNA 的表达量减少，低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；RNA 干扰抑制 MIF 基因表达后，与对照组相比，pGenesil-1-MIF siRNA 组 Caski 细胞上皮标记物 E-cadherin mRNA 及蛋白表达水平上调（P＜0.05），间叶标记物 Vimentin mRNA 及蛋白表达水平显著下调（P＜0.05）。结论抑制 MIF基因表达可抑制宫颈癌 Caski 细胞发生 EMT 的能力。
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过表达KLF17对结直肠癌细胞SW480上皮-间质转化和体外侵袭能力的影响
目的 研究KLF17基因转染对人结直肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)和体外侵袭能力的影响.方法 将带有绿色荧光蛋白的重组KLF17表达质粒P1RES-EGFP-KLF17转染至SW480细胞中,以未转染质粒的SW480细胞作为对照,转染空载质粒的SW480细胞作为阴性对照.荧光定量PCR和Western blot法检测转染前后KLF17 mRNA和蛋白表达水平.采用QPCR和Westem blot检测转染前后SW480细胞EMT上皮标志物E钙黏素(E-cadherin)和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化.用Transwell小室实验检测KL F17基因转染对SW480细胞的体外侵袭能力的影响.结果 KLF17转染48 h后SW480细胞中KLF17mRNA和蛋白表达水平(2.5087±0.0288;0.6100±0.05790)均较对照组(1.0000±0.0198;0.3543±0.0340)明显升高(均P＜0.01);转染KLF17基因后,SW480细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达量(2.0704±0.0620;0.5446±0.0245)较对照组均(1.0000±0.0106;0.3952±0.0430)均显著升高(均P＜0.01),Vimentin mRNA和蛋白的表达量(0.4622±0.0279;0.3290±0.0367)较对照组(1.0000±0.0780;0.5229±0.0496)均显著降低(均P＜0.01);转染KLF17基因后SW480细胞的体外侵袭能力(86.67个±10.97个)较对照组(145.30个±11.37个)及阴性对照组(135.33个±12.66个)均显著降低(均P＜0.01).结论 KLF17基因可能通过抑制结直肠癌细胞EMT而降低其侵袭能力.
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重金属污染物镉通过EMT机制加强结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为
目的 探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法 选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验等,观察HCT-116细胞的恶性生物学行为的变化;蛋白免疫印迹法检测E-cadherin、Vimentin、E-盒结合锌指蛋白1、MMP-3、MMP-9等上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,Cd诱导组细胞的恶性生物学行为增强(P＜0.05),且转化后的细胞间呈间充质样链接;相较于对照组,Cd诱导24 h后,间质样标志物Vimentin蛋白的相对表达量明显增加(2.20±0.11 vs 1.03±0.08,P＜0.01)、MMP-3(5.76±0.20 vs 1.00±0.09,P＜0.01)、MMP-9(3.46±0.05 vs 0.99±0.04,P＜0.01)的蛋白相对表达量也上升,而上皮样标志物E-cadherin蛋白的相对表达显著下降(0.30±0.03 vs 1.01±0.05,P＜0.01),且他们均呈现时间依赖性.结论 形态学和分子生物学都提示HCT-116细胞在慢性低剂量Cd暴露后会引起EMT机制.
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TNF-α激活大鼠胆管上皮细胞Jagged-1的表达并诱导其上皮-间质转化
目的:检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)对体外培养的原代大鼠肝内胆管上皮细胞Jagged-1表达的影响以及诱导其间质-上皮转化的作用.方法:原代胆管上皮细胞分为对照组,TNF-α处理组(10 ng/mL),TNF-α加核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)(50μmol/L)处理组及PDTC单独处理组,72 h后Western blot法检测各组细胞Jagged-1蛋白、间质细胞标记成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein 1,FSP-1)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)和胆管细胞特异性标记角蛋白19片段(cytokeratin 19,CK19)的蛋白的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB蛋白结合活性.倒置显微镜观察各组胆管细胞的形态变化,Transwell小室法检测细胞的迁移能力.结果:TNF-α处理组胆管上皮细胞NF-κB的活性增强,Jagged-1、FSP-1、Vimentin和α-SMA蛋白的表达水平上调,CK19的表达下调,细胞迁移能力增强,细胞形态由鹅卵石样向梭形样转化.TNF-α+PDTC与TNF-α组相比其NF-κB活性明显减弱,Jagged-1,FSP-1,Vimentin和α-SMA蛋白水平降低,CK19表达升高,细胞迁移能力减弱,细胞形态向鹅卵石样转化.结论:TNF-α可通过激活NF-κB信号上调Jagged-1蛋白表达的同时诱导大鼠胆管上皮细胞向间质细胞转化.
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siRNA靶向干扰KLF17对结直肠癌细胞株SW480增殖和迁移的影响
目的 利用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术探究体外沉默Krüppel样因子17(Krüppel like factor 17,KLF17)的基因表达对结直肠癌细胞株SW480细胞增殖和迁移的影响,为抑制结直肠癌复发转移奠定理论基础、方法 使用基因重组方法构建LF17的siRNA真核质粒表达载体,用电转染法转染至人结直肠癌SW480细胞中.使用荧光定量PCR检测KLF17、E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的基因表达水平;用Western blot 检测KLF17的蛋白表达以及细胞转移相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达.用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖活性.结果 与对照组相比,转染siRNA后的SW480细胞培养48 h后增殖能力受到显著抑制,且细胞形态由圆形或多边形变成梭形并向外伸出多个细胞突起;转染siRNA后KLF17和E-cadherin蛋白表达以及基因表达水平显著降低,Vimentin的蛋白表达水平和基因表达水平显著升高.结论 抑制KLF17的表达可以通过诱导结直肠癌细胞发生上皮-间质转化而促进其细胞的增殖以及转移.
关键词： 结直肠癌 Krüppel样因子17 上皮-间质转化 侵袭
