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MMP-1在NSCLC中的表达及其作为NSCLC相关标志物的研究进展
本文主要是研究了MMP-1在NSCLC中的表达及其作为NSCLC相关标志物的临床研究进展.
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中药WCA对人胃癌细胞SGC-7901体内作用基因的筛选与验证
目的:探讨以四君子汤等健脾中药为基础的复方胃肠安(WCA)对胃癌细胞的体内作用分子机制.方法:采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型系统评价WCA对胃癌细胞的体内抑瘤作用;链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP法)检测增殖细胞核抗原PCNA表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL法)检测凋亡指数以及SP法检测caspase-3的活化表达;cDNA array筛选出WCA组N. S.对照组差异表达2倍以上基因,Real-time Quantitative PCR验证与增殖、凋亡、分化及信号转导密切相关的19条基因的表达;SP法检测部分有差异表达的基因在细胞内的蛋白表达.结果:与对照组比较,WCA组对皮下移植瘤生长的平均抑制率为(44.32+5.67)%,3次实验WCA组的平均瘤重分别为(0.99±0.76),(1.02±0.16),(0.88±0.47)g,分别低于对照组的(1.93±0.58),(1.65±0.46),(1.63±0.52)g(P＜0.05);WCA组移植瘤PCNA阳性表达率(35.73±6.01)%、强阳性表达率(3.39±1.48)%和总阳性率(39.03±7.37)%均分别低于对照组的(53.48±9.34)%,(8.78±5.43)%,(62.26±13.80)%(P＜0.05);凋亡指数为(9.72±4.51)%高于对照组的(2.45%±1.37)%(TUNEL法);WCA组活化caspase-3表达阳性率为(5.20±2.26)%,较对照组的(2.82±1.84)%高(P=0.0367);与对照组比较,全基因表达谱芯片筛选出WCA组共45个2倍以上差异表达基因,其中上调表达24个,下调表达21个.35个已克隆基因,10个表达序列标签(expression sequence tag,EST);2-△△CT法对19条目标基因的表达量进行评估,与对照组比较,表达量显著差异4倍以上的有Stat3(2-△△CT=0.16),RIPX(2-△△CT=0.18),ROD1(2-△△CT=0.23),bcl-2(2-△△CT=0.10),均为下调表达作用;WCA组P-Stat3阳性表达率(35.93±12.67)%、强阳性表达率(3.64%±1.72)%和总阳性率(39.57±13.31)%均分别低于对照组的(56.49±9.34)%,(13.16±7.06)%,(69.65±10.80)%,差异有显著性;bcl-2蛋白阳性表达率(1.62±0.82)%低于对照组的(7.53±3.73)%(P＜0.05).结论:健脾中药复方WCA在体内可抑制胃癌细胞增殖,诱导凋亡;WCA对胃癌细胞SGC-7901在核酸层次上有影响作用的已知基因主要为Stat3,RIPX,ROD1,bcl-2,均为下调表达作用;在蛋白表达水平的作用机制与抑制磷酸化的Stat3,bcl-2蛋白在细胞内的表达,上调活化caspase-3的表达有关.
关键词： 胃癌 健脾中药 基因表达 cDNA微阵列 实时定量聚合酶链反应 -
散癖平胃方含药血清对人胃癌细胞SGC-7901基因表达的影响与验证
目的:研究散癖平胃方(SPPW)对人胃癌细胞SGC-7901基因表达谱的影响,利用实时定量PCR( Real-time quantitative PCR,RT-PCR)对相关基因加以验证.方法:24只SD大鼠随机分为4组,每组6只,分别给予SPPW方高、中、低剂量(中剂量组相当于人临床等效剂量,按18.5 g·kg-1·d-1给药,高剂量与低剂量则分别为中剂量组的2倍及1/2倍)及等剂量生理盐水(阴性对照组)灌胃给药,每日早晚各1次,每次2 mL,连续3d.SPPW方组及阴性对照组在末次给药2h后行水合氯醛麻醉,无菌条件下腔静脉取血,制备阴性对照组及SPPW方高、中、低剂量组大鼠含药血清.分别将SPPW方中剂量组含药血清及阴性对照组含药血清加入对数生长期胃癌细胞SGC-7901中(体积为培养液的10％),24 h后提取胃癌细胞SGC -7901 mRNA,使用基因芯片技术筛选出SPPW方含药血清作用后表达有差异的基因.将高、中、低含药血清干预24h后的人胃癌细胞SGC-7901提取总RNA的提取,使用RT-PCR验证涉及肿瘤增殖,凋亡及生长等相关基因.结果:基因芯片筛选出203个差异表达基因,上调141个,下调62个,涉及MAPK信号通路,Wnt信号通路,AK/STAT信号传导通路,VEGF信号通路及其他多种代谢通路.与阴性对照组相比,SPPW组STAT2 mRNA减少(P＜0.05),MnSOD2,NDRG1,BNIP3 mRNA增加(P＜0.05).结论:RT-PCR证实SPPW含药血清显著下调STAT2表达,显著上调MnSOD2,NDRG1和BNIP3表达,从而在基因水平上探讨了SPPW方的抗癌作用及其具体机制.
关键词： 胃癌 基因芯片 实时定量聚合酶链反应 -
系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞干扰素诱导基因IFIT1和IFIT4 mRNA表达水平的研究
为分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中两个干扰素(IFN)诱导基因(IFIT1、IFIT4)的表达及其与SLE疾病活动度的相关性, 运用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测95例SLE患者与48名正常对照者的IFIT1、IFIT4的 mRNA表达水平,并且与抗ds-DNA抗体等指标比较,分析IFIT1、IFIT4的 mRNA表达水平以及与抗ds-DNA抗体、SLEDAI积分之间的相关性.结果显示: ①SLE组与正常对照组相比,IFIT1、IFIT4的mRNA表达显著增高(P＜0.01);SLE活动组与SLE缓解组比较,IFIT1、IFIT4的 mRNA表达增高(P＜0.05);SLE组IFIT1、IFIT4的 mRNA表达水平之间呈正相关(r>0.5,P＜0.05).②抗ds-DNA抗体与IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平及SLEDAI积分呈正相关(r>0.5,P＜0.05).结论: SLE患者IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平显著增高,并且与SLEDAI积分呈显著正相关,IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平对SLE患者病情活动程度的判断有较大价值,抑制这2个基因的表达可能为SLE的治疗提供新的靶点.
关键词： 系统性红斑狼疮 实时定量聚合酶链反应 疾病活动度 -
神经生长因子促进海马胆碱能神经再生过程中Lhx8的动态表达
目的探讨神经生长因子（ NGF）促进海马胆碱能神经再生与同源盒基因Lhx8之间的关系。方法SD大鼠72只，在制备切割右侧穹隆海马伞模型和NGF侧脑室注射的基础上，分为对照组、切割组、NGF组、切割联合NGF组；Real-time PCR和Western blotting分别检测各组动物海马中Lhx8蛋白的表达变化；免疫荧光技术检测各组动物海马齿状回颗粒下层中胆碱乙酰转移酶（ ChAT ）/Lhx8双标细胞数。结果切割组和NGF组中Lhx8蛋白的表达量较对照组增高，切割联合NGF组增高更为明显，且Lhx8基因表达也增高；NGF组和切割联合NGF组中海马齿状回颗粒下层（ SGZ）中的ChAT/Lhx8双标细胞数也较对照组和切割组明显增多。结论侧脑室注射NGF促进海马胆碱能神经再生与Lhx8的高表达有关。
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丙戊酸钠诱导神经干细胞分化过程中肝配蛋白A3的表达
目的 探讨丙戊酸钠(VPA) 促进神经干细胞分化过程中肝配蛋白A3(Efna3) 的表达以及Efna3在神经系统里的表达模式.方法 分离培养SD大鼠海马神经干细胞,在VPA诱导分化后24 h和48 h,利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR) 、免疫印迹法(Western blotting) 和免疫荧光技术检测Efna3的动态表达;Real-time PCR检测Efna3在成年SD大鼠各组织以及神经干细胞、星形胶质细胞和神经元中的表达水平.结果 VPA处理组与对照组相比,Efna3的表达量明显上升;Efna3在端脑和海马中呈现优势表达;Efna3在神经元中表达较高,而在星形胶质细胞中表达较低.结论 VPA促进神经干细胞分化可能与Efna3的表达上调有关.
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不同张力扩张子宫颈诱导大鼠延髓内脏带c-Fos及神经型一氧化氮合酶的表达变化
目的 观察不同张力扩张子宫颈(UCD)诱导大鼠延髓内脏带神经元c-Fos和神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达变化,探讨UCD疼痛在延髓水平的传导机制.方法 成年雌性SD大鼠随机分为对照组(UCD 0g)、宫颈扩张50g张力组(UCD 50g)和宫颈扩张100g张力组(UCD 100g).UCD组大鼠实施50g及100g张力扩张刺激,UCD刺激后2h,取延髓组织采用还原型辅酶Ⅱ(NADPH)组织化学和c-Fos免疫组织化学双重染色法观察c-Fos、nNOS和c-Fos/nNOS阳性神经元的分布,Western blotting和Real-time PCR法分别检测c-Fos及nNOS蛋白和mRNA水平.结果 c-Fos免疫阳性神经元的细胞核为棕黄色,呈圆形或卵圆形,胞质不着色.nNOS阳性神经元的胞体和突起呈蓝色,胞核不着色,呈空泡状.c-Fos/nNOS双标神经元的胞体和树突染成蓝色,细胞核呈棕黄色,这些神经元主要分布于延髓孤束核(NTS)和外侧网状核(LRN)内.与UCD 0g组相比,UCD 50g组和UCD 100g组大鼠NTS和LRN内c-Fos、nNOS以及c-Fos/nNOS阳性神经元数量明显增加,染色明显加深,c-Fos、nNOS蛋白及mRNA水平均明显升高(P＜0.01).结论 大鼠急性UCD可导致NTS和LRN神经元c-Fos及nNOS张力依赖性表达增加,NTS和LRN内的nNOS阳性神经元可能参与UCD疼痛在延髓水平的传导.
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MicroRNA-25在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡过程中的作用
目的 在体外培养的SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,观察microRNA-25(miR-25)对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的细胞凋亡的作用及其可能机制.方法 在体外培养的人SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,用氧葡萄糖剥夺/再恢复(OGDR)模拟脑缺血/再灌注损伤.合成miR-25过表达片段,并构建慢病毒载体质粒,用脂质体将载体质粒转导入细胞中.MTT法检测细胞活力、TUNEL法检测凋亡、RT-PCR、Real-time PCR和Western blotting分别检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况.结果 与正常培养组相比,OGDR组中细胞内miR-25表达下调,细胞活力明显下降,凋亡明显增多,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(n=3,P＜0.05);而与OGDR组相比,过表达miR-25组内细胞活力明显升高,凋亡明显减少,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达下降Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(n=3,P＜O.05).结论 I/R损伤后miR-25表达上调可能通过Bax/Bcl-2-Caspase-3途径进而抑制I/R损伤诱导的凋亡,为I/R损伤的临床治疗提供潜在的治疗靶点.
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远端同源异型盒2和叉头盒O3a在大鼠脑皮质发育过程中的分布与表达
目的 探讨远端同源异型盒2(Dlx2)和叉头盒O3a(FoxO3a)在SD大鼠脑皮质发育过程中的表达特点.方法 应用Real-time PCR法检测Dlx2 mRNA和FoxO3a mRNA分别在受孕11d(E11)、E13、E15、E17、E19及生后1d(P1)的表达情况;应用免疫组织化学技术显示Dlx2和FoxO3a在E11、E13、E15、E17、E19及P1蛋白的表达情况.结果 FoxO3a与Dlx2 mRNA在E11 ～ P1均有表达,而FoxO3a mRNA表达高峰明显早于Dlx2 mRNA;Dlx2mRNA表达在E15～E17时大幅度上升,而在此之后始终保持这一高水平的表达;Dlx2 mRNA与FoxO3a mRNA的表达在E15 ～ P1呈现出一致的变化趋势;Dlx2基因在E19时出现mRNA水平的高表达而未见蛋白表达.结论 Dlx2和FoxO3a基因在胚胎后期鼠脑皮质中均有表达,且其表达趋势具有一定的一致性;两基因的分布随皮质分层而改变.
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细叶远志皂苷对阿尔茨海默病大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1水平的影响
目的 探讨细叶远志皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)水平的影响.方法 60只SD大鼠随机分组,采用脑立体定位技术将p一淀粉样蛋白(Aβ)1-40注入大鼠右侧海马CA1区制备AD模型并给予细叶远志皂苷治疗4周.术后分别采用Morris水迷宫、Real-time PCR和Western blotting检测大鼠学习记忆能力及海马内LRP1 mRNA及蛋白的表达变化,并行免疫荧光检测海马区LRP1阳性神经元的变化.结果 1.Morris水迷宫:模型组大鼠学习记忆能力较正常组相比明显降低(P＜0.01),经TEN灌胃治疗后,TEN各剂量组逃逸潜伏期均不同程度缩短、游泳路程缩小、穿越虚拟平台次数增加,中、高剂量组差异具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);2.Real-time PCR和Western blotting:模型组LRPImRNA和蛋白的相对表达量均明显低于正常对照组(P＜0.01),给予TEN治疗后,治疗组LRP1mRNA和蛋白相对表达量随着TEN给药剂量的增加逐步升高,低剂量组差异不明显(P＞0.05),中、高剂量组与模型组之间的差异有统计学意义(P＜0.01);3.免疫荧光检测结果显示,海马区模型组LRP1阳性细胞明显减少,与正常组差异有统计学意义(P＜0.01);高剂量组LRP1阳性细胞数量增加明显,与正常组差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 细叶远志皂苷可能通过提高脑内LRP1的含量,从而改善Aβ1-40诱导的AD大鼠的学习记忆能力.
关键词： 细叶远志皂苷 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白1-40 海马 实时定量聚合酶链反应 大鼠 -
坐骨神经分支选择性损伤模型L4～6背根神经节水平不同时间点P2X3mRNA表达变化
目的 观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)动物制作型模后不同时间点L4～6背根神经节(DRG)水平P2X3mRNA的表达情况,探讨外周P2X3mRNA在神经病理性痛模型不同阶段中的作用.方法 54只健康雄性SD大鼠完全随机分为空白对照(control)组、假手术(sham surgery)组和手术(surgery)组.通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI模型.动态观察造模前、造模后1d、3d、7d和14d双侧足跖机械痛阈;Real-time PCR法检测患侧造模后3d、7d和14d L4～6 DRG水平P2X3mRNA表达情况.结果 模型制作后各时间点,surgery组大鼠患侧足跖痛阈明显降低(P＜0.05),sham surgery组大鼠与control组比较差异无显著性(P＞0.05);各组大鼠健侧足跖痛阈于模型制作后各时间点均无显著变化(P＞0.05).模型制作后3d、7d,surgery组大鼠L4、L5、L6 DRG水平P2X3mRNA表达均有不同程度的提高(P＜0.05);而模型制作后14d,surgery组大鼠L5、L6DRG水平P2X3mRNA表达明显减少(P＜0.05),L4 DRG水平P2X3mRNA表达仍显著多于sham surgery组(P＜0.05).模型制作后各时间点、各DRG水平,sham surgery组和surgery组大鼠P2X3mRNA表达差异均无显著性(P＞0.05).结论 外周P2X3mRNA参与SNI模型疼痛的产生和维持,且其在不同阶段发挥的作用不同.
关键词： 坐骨神经分支选择性损伤模型 背根神经节 不同时间点 P2X3 机械缩腿阈 实时定量聚合酶链反应 大鼠 -
RNA-Seq筛选脊髓损伤后的差异基因及部分基因功能分析
目的 应用RNA-Seq技术分析脊髓损伤后不同阶段基因表达差异情况.方法 使用IH脊髓打击仪制备脊髓损伤模型,SD大鼠48只随机分成两组,假手术组和实验组,实验组分别于损伤后1d、4d和7d取材.运用RNA-Seq技术筛选脊髓损伤后不同时间点的差异表达基因,对差异基因进行表达模式分析,功能注释,通路分析等,筛选出血红素氧化酶1(Hmox1)等感兴趣基因进行mRNA和蛋白水平的验证及功能分析.结果 RNA-Seq结果表明,与假手术组相比,脊髓损伤后1d、4d和7d发生显著变化的基因分别有944、1362和1421个.上述差异基因在损伤后不同时间点的变化趋势大致可分为8种形式.Real-time PCR结果显示,Hmox1、尿激酶型纤溶酶原激活剂(Plau)、纤溶酶原激活物抑制剂(Serpine1)和中性粒细胞胞质因子(Ncf2)的表达变化与RNA-Seq测序结果基本一致.Western blotting结果显示,脊髓损伤后Hmox1的蛋白表达变化趋势与核酸水平一致;免疫组织化学结果显示,损伤之后Hmox1主要表达于脊髓组织的神经元中.结论 RNA-Seq技术能高效分析脊髓损伤后的差异基因,从大量差异基因中筛选出感兴趣基因的验证和功能分析为阐述脊髓损伤的分子机制提供了部分资料.
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氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为
目的 探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响.方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组.慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水.采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况.结果 与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P＜0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P＜0.05),强迫游泳不动时间增加(P＜0.01),新事物辨别指数降低(P＜0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P＜0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658;1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P＜0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574;0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P＜0.05).结论 氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为.
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人脑组织库样本100例质量及影响因素分析
目的 检测人脑组织库中保存的脑组织蛋白质、DNA及RNA质量,分析影响其质量的主要因素.方法 选取中国医学科学院北京协和医学院人脑组织库保存的100例全脑组织样本,提取蛋白质、DNA及RNA,测定其浓度及吸光度,电泳检测完整性,用Western blotting及Rael-time PCR分别检测.根据不同年龄、死亡原因、取材延迟时间以及样本保存时间进行分组,统计学分析影响脑组织质量的因素.结果 人脑组织库中大部分脑组织的DNA、RNA和蛋白质质量保存完好,不同年龄、死亡原因对其质量无显著影响.取材延迟时间超过24h者,其蛋白质浓度及RNA浓度及质量有显著下降.样本保存时间对蛋白质及DNA质量无显著影响,但保存1年以上可能对RNA浓度有影响.结论 进行RNA相关分析的人脑组织标本取材延迟时间好控制在8h之内,-80℃环境下保存1年之内为佳.而DNA和蛋白质相关分析的时间可以适当延长.
关键词： 脑组织 质量控制 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 人 -
枝叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA).正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7～14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.桉叶油3个剂量组于孕第7～14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达.Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达.阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙.结果 维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率低值分别为55％(桉叶油高剂量+RA组)和45.8％(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P＜0.05).在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率高值分别为62.5％(桉叶油低剂量+RA组)和55.0％(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7％,73.7％)和溶剂对照组低(68.2％,63.6％,P＜0.05).与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P＜0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用.其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关.
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细胞外信号调节激酶/miR-133b在甲基苯丙胺致PC12细胞神经毒性的作用及机制
目的 探讨甲基苯丙胺(MA)致神经细胞毒性过程中细胞外信号调节激酶(ERK)和miR-133b的表达变化及调控机制.方法 用MA建立PC12神经细胞损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性及镜下形态观察确定MA佳损伤浓度;应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;通过Western blotting技术测定总ERK1/2和磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)的表达变化;并应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-133b的表达变化.为进一步分析ERK/miR133b分子通路的作用关系,经U0126特异阻断ERK通路,检测miR-133b的表达变化.结果 给予不同浓度的MA,均可导致PC12细胞损伤,其中800μmol/L MA处理后,大部分胞体变圆,神经突起退缩,神经网络消失.MTT结果显示细胞活性明显下降.进一步的细胞毒性机制分析显示,MA处理后,细胞内ROS水平升高,p-ERK表达增高,miR-133b表达降低;并且给予ERK通路抑制剂U0126(10μmol/L)后,miR-133b表达升高,细胞活性增强,胞内ROS水平降低,镜下细胞损伤改善.结论 MA可通过上调ERK磷酸化抑制miR-133b表达,介导神经元毒性损伤.
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MicroRNA-613在人胶质瘤中的表达及其对增殖与转移的影响
目的 探讨microRNA-613(miR-613)在人胶质瘤中的表达及其对增殖与转移的影响.方法 采用Real-time PCR法对30例人胶质瘤患者瘤组织和30例非胶质瘤患者的脑组织的miR-613表达水平进行检测,并分析其与胶质瘤临床病理特征及预后的关系;采用LipofectamineTM2000将miR-613模拟物(miR-613 mimics)和无关序列对照(miR-613 con)转入U87细胞中,Real-time PCR检测两组细胞miR-613的表达水平,CCK8法检测细胞增殖变化,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 miR-613在胶质瘤组织中表达低于正常的脑组织(P＜0.05).胶质瘤组织miR-613的表达水平与病理分级成负相关,与生存时间成正相关(P＜0.05);与miR-613con比较,miR-613 mimics细胞增殖水平、侵袭与迁移能力显著降低(P＜0.05).结论 miR-613具有抑制胶质瘤细胞的生长、侵袭与迁移的作用,有望成为胶质瘤的潜在治疗靶点.
关键词： microRNA-613 胶质瘤 U87 生长 转移 实时定量聚合酶链反应 人 -
抑郁症小鼠模型的神经免疫改变
目的 建立慢性束缚应激(CRS) 和慢性不可预见性应激(CUMS) 模型,观察C57BL/6小鼠行为学指标,海马区及脾脏结构及相关因子基因表达的差异,探讨不同慢性应激造模手段对小鼠神经免疫系统的影响,为抑郁症发病机制及抗抑郁药初筛选提供实验依据.方法 建立6周的对照组、CRS及CUMS小鼠模型共45只,通过行为学评价测定小鼠行为学指标;运用HE染色观察小鼠大脑海马区及脾脏组织形态;运用尼氏染色观察海马区神经元受损情况;Real-time PCR检测海马区抑郁相关基因脑源性神经营养因子(BDNF) 、五羟色胺转运体(5-HTT) ,吲哚胺2,3加双氧酶1(IDO1) 及脾脏炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6的表达情况.结果 慢性应激6周后, CRS组小鼠的水平穿格数及直立数无显著变化而CUMS组极显著下降;CRS组与CUMS组小鼠悬尾及强迫游泳试验累计不动时间均显著增加(P＜0.05);同时两种应激均能引起海马和脾脏结构的损伤,但CUMS组海马区的神经元损伤更严重;仅有CUMS组海马区相关基因显著改变;CUMS组脾脏IL-1β, IL-6的基因表达水平显著升高,而CRS组IL-6水平无显著变化.结论 应激6周后,CRS和CUMS均可不同程度地引起抑郁样症状;从神经免疫学角度观察,CUMS模型的抑郁样症状明显.提示,与CRS模型相比,CUMS模型更能反映机体的抑郁症状.
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脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因
目的 明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默.方法 利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果.结果 倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/LRNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80％以上(n=6).结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果.
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表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制烫伤诱导的小鼠皮肤巨噬细胞炎症蛋白-2的表达
目的 探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对局部烫伤诱导的小鼠皮肤组织巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达的影响.方法 将52只昆明种小鼠随机分为空白对照组、烫伤组和烫伤EGCG处理组,其中48只小鼠进行局部皮肤烫伤.利用实时定量PCR和ELISA法检测皮肤组织MIP-2 mRNA和MIP-2蛋白水平.结果 局部烫伤可引起受损部位皮肤组织的MIP-2 mRNA和MIP-2水平升高,而涂敷0.2g/kg EGCG膏剂可使MIP-2表达水平下降.结论 0.2g/kg EGCG膏剂抑制局部烫伤诱导的皮肤组织MIP-2表达,减弱由MIP-2引起的炎症反应,促进受损皮肤修复.
