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先天性巨细胞病毒感染导致脑组织损伤的研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)感染在人群中非常普遍,通常呈潜伏感染.先天性巨细胞病毒主要侵入脑组织,是宫内感染造成先天性中枢神经系统损害的主要原因.研究者通过对鼠巨细胞病毒感染造成小鼠脑损伤模型的观察发现脑室下区和皮质边缘区的神经干细胞,神经祖细胞和未成熟神经胶质细胞对MCMV具敏感性,并且这种敏感性随着脑组织的发育而逐渐衰退.在转基因鼠模型中MCMV早期基因e1启动子的激活受限于中枢神经系统提示CMV对中枢神经系统具有特殊的亲和力,且其在急慢性感染中的神经特异性激活与脑功能失调的发病机制有关.此外,脑组织中CMV潜伏感染的好发部位多为脑室下区的神经干细胞或祖细胞,而这正是脑发育的关键位置,潜伏感染的持续存在或是间歇的再激活也可能是引起长期感染后脑功能障碍的原因.
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干扰素-γ对大鼠胚胎神经干细胞发育的影响
目的 探讨感染后细胞因子干扰素(IFN)-γ对胎鼠神经系统发育的影响.方法 利用不同浓度IFN-γ(0、20、200、2,000 U/ml)对大鼠体外培养的胚胎16 d的神经干细胞进行刺激,观察神经干细胞生长状态、主要组织相容性复合体(MHC)表达和分化格局的变化.结果 高浓度的IFN-γ(2,000 U/ml)对神经干细胞具有毒性作用.中等浓度的IFN-γ(200 U/ml)能够显著上调神经干细胞MHC-I类和II类分子的表达.同时,中等浓度的IFN-γ能够促进神经干细胞的分化,使得神经干细胞向神经元和少突胶质细胞分化增加,而向星形胶质细胞的分化降低.结论 大剂量IFN-γ可改变神经干细胞的生长和分化状态,IFN-γ除了对胎儿神经系统具有直接毒性外,还可能通过影响MHC的表达引起母体对胎儿的排斥,也许对新生儿智力发育造成不利影响.
关键词： 发育 分化 干扰素-γ 主要组织相容性复合体 神经干细胞 -
异丙威对小鼠神经干细胞迁移和分化的影响
目的 探讨异丙威对小鼠神经干细胞(mNSC)迁移和分化的影响.方法 取孕13.5 d的ICR小鼠胚胎大脑皮层细胞培养,建立小鼠神经干细胞体外模型.以5、25、50和100 mg/L的异丙威对分化中的小鼠神经干细胞染毒,通过噻唑蓝(MTT)比色法测定染毒24和48 h的细胞毒性;采用免疫荧光细胞化学的方法分析小鼠神经干细胞迁移以及向星形胶质细胞和神经元的分化情况.结果 25 mg/L异丙威作用24 h后,神经球的迁移面积和迁移距离均下降;50mg/L异丙威作用48 h后,胶原纤维酸性蛋白GFAP和Tuj阳性细胞率均下降,但GFAP阳性细胞率下降的更明显.结论 在不引起明显细胞毒性的前提下,异丙威可抑制小鼠神经干细胞的迁移和分化,且向星形胶质细胞分化的抑制作用更明显.
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神经干细胞在神经发育毒性研究中的应用
人脑的发育需要一个相当长的时间,从胚胎期神经发生到出生后发育成拥有数百亿精确定位、高度特化、高度联系、细胞群集的复杂器官,在此期间每一发育阶段都必须有序、准时按期完成.胎儿期胎盘屏障和婴儿时期血脑屏障不能完全有效地阻挡化学物的暴露,使得神经系统发育早期如胚胎期、胎儿期和新生儿阶段更易受到环境神经毒物的影响.此类在神经系统发育阶段暴露于神经毒性物质后引起的神经系统结构和功能的异常性改变,即所谓的神经发育毒性(Developmental Neurotoxicity,DNT),这种改变可以发生在生命周期的任何阶段[1].美国EPA和欧盟都高度关注化学物的神经发育毒性,制定了相应的检测规范(USEPA,1998;OECD,2007).
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叶酸对体外胎鼠神经干细胞增殖分化的影响
目的 探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响.方法 采用无血清悬浮培养方法分离培养NSCs,光镜下观察不同时间点各组NSCs形态变化,并采用MTT法、生长曲线法检测叶酸对细胞增殖和功能的影响.培养6天后用含5%胎牛血清的培养基进行分化培养,于分化第7天用免疫荧光技术做Nestin/BrdU双标染色,共聚焦显微镜下观察,每组随机选择8个非重叠视野,计数做统计处理.结果 MTT结果显示,两叶酸干预组NSCs增殖较对照组快(P＜0.05),分化后免疫荧光双标试验中,两叶酸干预组NSCs增殖率高于正常对照组,且差异有显著性(P＜0.05).结论 叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进NSCs的生长与分化.
关键词： 叶酸 神经干细胞 体外 Nestin BrdU 细胞增殖 -
氯化镉对小鼠胚胎神经干细胞迁移的影响
目的 探讨氯化镉对小鼠胚胎神经干细胞(mNSC)细胞活性和迁移能力的影响.方法 建立小鼠神经干细胞体外模型,以0、0.1、0.3、1.0、3.0和10.0μmol/L的氯化镉作用于小鼠胚胎神经干细胞24 h,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;免疫荧光细胞化学法分析细胞迁移.结果 10.0μmol/L的CdCl2作用24 h后细胞存活率(70.08±6.21)％显著低于正常对照组(P＜0.05);在设定剂量下,氯化镉作用神经干细胞24 h后,Aa/Ab和Dm/Db呈下降趋势,存在剂量依赖性(rsAa/Ab=-0.90,rsDm/Db=-0.90,P＜0.05).结论 氯化镉对神经干细胞的迁移和活力均有影响,且在同一浓度和相同作用时间下对神经干细胞的迁移影响大于对细胞活力的影响.
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神经干细胞的分离培养方法研究进展
神经干细胞是神经科学进展快的领域,为神经发育机制的阐明、神经系统疾病的临床治疗、药物及化学物的神经毒性评价提供了崭新的思路和方法学手段.目前,神经干细胞体外培养主要通过直接从神经组织分离培养、由胚胎干细胞等其它组织来源的干细胞诱导获得、永生化的神经干细胞3种方法,但不同实验室间的方法存在较大的差异.本文针对神经干细胞的体外分离培养方法研究进展和其在毒理学中的应用进行综述.
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莫信干细胞“神话”
干细胞研究是近年来医学前沿的重点发展领域.追随干细胞研究的热潮,许多与干细胞相关的抗衰老等内容充斥各类商家和媒体,给予人们无尽的想象空间.然而,在这些动听的“神话”故事中,虚妄常常多过真实.研究报道,干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,具有分化并再生各种组织、器官的潜在能力,就像树干能不断生长出新的枝叶一样.无论心肝脾肺肾,还是神经、血液,理论上都能由干细胞分化生成.干细胞有着一个大家族,其中胚胎干细胞具有分化成各种细胞组织的能力;成体干细胞则只能分化成特定的几种组织细胞,如脂肪干细胞可以分化为脂肪、骨和软骨,神经干细胞可生成神经细胞.换而言之,并非每一种干细胞都是“万能”的.
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神经干细胞与颅脑创伤的研究进展
长期以来,人们普遍认为中枢神经系统的神经细胞的发生在出生前不久或出生后不久就停止了,成年中枢神经系统的神经细胞没有再生能力,但是近年来研究发现成年哺乳动物的中枢神经系统中存在神经干细胞(neural stem cells,NSCs),它是中枢神经系统中保持分裂和分化潜能的细胞,它具有增殖和多向分化的潜能,在移植部位分裂增殖,并在局部微环境的作用下分化成相应的细胞来补充替代受损的细胞,恢复中枢神经系统的正常结构和功能.随着对神经干细胞及其相关领域广泛深入的研究,神经干细胞对中枢神经系统损伤后功能修复作用愈来愈引起人们重视,本文就此研究予以综述.
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缺氧盒在建立新生鼠神经干细胞缺氧细胞模型中的应用
目的 探讨缺氧盒在建立新生鼠神经干细胞(NSCs)缺氧细胞模型中的应用. 方法 取2只购自中国人民解放军军事医学科学院、健康、新生1d、体重分别为8 g、9 g、雌雄不限的SD大鼠海马在无血清培养基进行NSCs原代培养并传代,分为两组.缺氧组通入5% CO2+95% N2混合气体,并将培养基更换为无糖培养基,缺氧时间分别为30 min、1h、2 h,在各时相点观察细胞形态学变化,并进行台盼蓝细胞计数和细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测NSCs细胞活性,后迅速复氧、更换无血清培养基,复氧复糖24 h、72 h.常糖常氧为对照组.结果 与对照组比较,缺氧30 min后NSCs死亡细胞数和细胞活性组间差异无统计学意义;缺氧1h、2 h NSCs死亡细胞数明显增多,NSCs细胞活性明显降低,组间差异有统计学意义;死亡细胞数随着缺氧时间的延长而增多;复氧复糖24 h、72 h后细胞活性降低,差异具有统计学意义. 结论 缺氧盒可以成功建立新生鼠 NSCs 缺氧细胞模型.
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神经干细胞移植的方法选择及其在脊髓损伤中的应用
脊髓损伤是一种创伤性中枢神经系疾病,常伴有脊髓损伤平面以下感觉、运动、自主神经功能丧失,常导致患者终身残疾,且并发症较多,甚至死亡.至今尚无有效的治疗方法从根本上修复已损伤的脊髓功能.神经干细胞具有自我更新、增殖和多向分化等潜能,其移植后可向神经元分化并替代已坏死的神经元,形成新的突触,重建神经通路促进脊髓功能的修复,为脊髓损伤患者的康复带来曙光.近年来许多科学家对神经干细胞进行基因修饰,基因调控,或联合其他细胞、生物材料以及改变移植时间、途径等多方面进行深入研究,来提高移植效率,虽然取得了长足的进展,但仍存在一些不足之处尚待进一步完善,如神经干细胞移植的途径、时机、次数的相关标准,移植细胞的免疫排斥、长期存活、定向分化,神经干细胞的来源及伦理,移植的安全性等.本文拟对神经干细胞移植方法,移植时间,移植途径进行综述,并对神经干细胞移植所存在的问题及应用前景进行展望.
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中药对神经干细胞生物学影响的研究进展
神经干细胞(neural stem cell,NSC)是一类能生成神经组织或源自神经系统,并具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,是近年来的一个研究热点.
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浅析神经干细胞增殖、分化与中医药延缓肾虚衰老理论之相关性
衰老是人体生、长、壮、老、已不可避免的过程，是不可违背的自然规律。人口老龄化已是不争的事实，与衰老相关的退行性疾病已是当前亟待解决的重要课题。21世纪是生命科学的世纪，分子生物学技术飞速发展，神经干细胞的研究日益深入，为神经系统退行性疾病的治疗和干预提供了新思路和新途径。肾虚衰老是中医理论中影响较大的学说之一，补肾中药在促进神经干细胞增殖与分化方面显示出其独特的优势，但其研究还不够深入，仍需广大临床和科研工作者进行探索。本文依据中医肾虚衰老理论，从现代医学角度浅析神经干细胞增殖、分化与中医药延缓肾虚衰老理论之相关性，从而为中医药延缓衰老学说增加新认识。
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中药复方“脊髓康”对神经干细胞分化作用的影响
目的:探讨中药复方“脊髓康”对神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)分化作用的影响.方法:制备“脊髓康”(JSK)含药血清;分离、培养原代NSCs;对NSCs进行鉴定;在胎牛血清(FBS)诱导NSCs分化后,加入不同剂量的JSK含药血清干预其分化,分为高、中、低剂量组,另设空白对照组,选取抗β3-微管蛋白(βⅢ-Tubulin)抗体、抗兔胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体对NSCs进行免疫荧光双标,检测其分化情况,并与不加含药血清的对照组进行对比;在荧光显微镜下,对不同视野βⅢ-Tubulin、GFAP的阳性细胞进行计数,并算出阳性细胞数占总细胞数的百分比,并进行荧光定量.结果:培养的神经球均表打巢蛋白(Nestin);JSK含药血清高、中、低剂量组βⅢ-Tubulin阳性细胞所占百分比明显高于空白组(P＜0.05);JSK含药血清高、中、低剂量组GFAP阳性细胞所占百分比均低于空白组(P＜0.05),且高剂量组与中、低剂量组比较均有统计学意义(P＜0.01).结论:中药复方JSK促进NSCs向βⅢ-Tubulin阳性细胞方向分化,为中医药治疗SCI提供一定的依据.
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止颤汤对神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化作用的研究
向多巴胺能神经元分化.
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止颤汤对移植入帕金森病大鼠脑内神经干细胞增殖分化作用的研究
目的:探讨止颤汤对移植入帕金森病大鼠脑内的神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用.方法:实验动物分为4组,正常组及模型组用生理盐水灌胃,同时脑内移植普通培养基;对照组脑内移植神经干细胞,生理盐水灌胃;中药组脑内移植神经干细胞,用止颤汤灌胃.分别在处理后7d、14d、28d取脑做切片,免疫组化法检测TH蛋白表达,Rt-PCR法检测各组Ptx3、Nurrl、Shh等mRNA表达.结果:与对照组比较,在动物处理后7d及14d,中药组大鼠脑内TH表达和对照组差异显著,脑内Ptx3、Shh等mRNA在部分时间点表达有显著改善.结论:止颤汤对移植入帕金森病大鼠脑内神经干细胞向多巴胺能神经元分化有一定促进作用.
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从补阳还五汤治疗脑卒中谈中药复方药理学新模式及发展方向
内源性神经干细胞是再生医学重要的治疗靶细胞,以促进干细胞生长和形成新生神经元,用于重建脑卒中及神经退行性疾病的神经功能和修复脑组织.在成年脑组织,内源性神经干细胞具有潜在的生长能力,缺血缺氧可以诱导神经干细胞或前体细胞增殖和分化,但是这种自发的脑修复机制并不能够有效重建功能性神经元,其原因是多方面的,既有新生神经干细胞生存能力的问题,又有微环境多种有害因子影响其生长及生存能力.因此,单靶点治疗策略在促进神经再生和脑修复方面收效甚微.中医药以其多成分和多靶点的治疗策略显示了极大的优势,历代医籍及当代临床为中医药治疗脑卒中及促进神经修复提供了大量研究素材.具有促进干细胞生长的中药单体、提取物及复方中药制剂多有补肾填精、活血化淤及化痰醒神之功效,与中医理论不谋而合.补阳还五汤是中医药治疗中风的代表方剂,本文以经典复方补阳还五汤为例,讨论中医药活性复方的药理学模式,根据补阳还五汤促进神经再生功能及其有效成分研究的新进展,讨论补阳还五汤促进神经再生功能的作用机制.研究表明:补阳还五汤能调节神经再生过程中的多种信号通路和分子靶点,其作用机制是通过网络调节而达到促进脑修复和神经功能的作用,其复杂的活性成分与效应靶点相互关系值得深入探究.
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银杏叶提取物促进帕金森病模型小鼠室管膜下区神经干细胞增殖作用的研究
目的:探讨银杏叶提取物促进帕金森病模型小鼠原位神经干细胞增殖分化的作用.方法:C57BL/6小鼠随机分成正常组、模型组和银杏叶提取物治疗组(简称治疗组).采用MPTP腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用免疫组化单标和双标技术观察银杏叶提取物对小鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖分化的影响.结果:银杏叶提取物治疗7 d,侧脑室室管膜下区的PCNA、Nestin阳性细胞较模型组明显增多,并可见大量从背外侧角沿胼胝体排列的PCNA、Nestin阳性细胞;银杏叶提取物治疗28 d,PCNA/Nestin双标细胞的数量较模型组明显增多.结论:银杏叶提取物可促进帕金森病模型小鼠脑内神经干细胞的增殖和迁移.
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人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究
目的 探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用.方法 从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10 μg·L-1表皮生长因子(EGF)和10 μg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球.在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用.采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响.结果 在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球.在2 μmol·L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖.2 μmol·L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成.缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为(4.09±0.49)分和(4.74±0.62)分,而模型对照组为(3.41±0.67)分,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用.结论 人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究.
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养肝熄风方药对脑缺血大鼠神经干细胞增殖的影响
目的:观察养肝熄风方药对成年大鼠缺血脑损伤后神经干细胞增殖的疗效.方法:采用大鼠局灶性脑缺血模型,观察大鼠缺血损伤后,侧脑室下区(SVZ)的细胞增殖.结果:(1)养肝熄风组再灌后第7天脑梗死灶体积明显小于模型组(P＜0.01);养肝熄风组大鼠在第7天、9天的神经功能缺损评分要明显好于模型组(P＜0.05).(2)和模型组相比,养肝熄风组大鼠SVZ巢蛋白阳性细胞表达于术后第7天显著增加(P＜0.05),缺血损伤后第14、21天SVZ 的神经干细胞增殖显著增加(P＜0.01).结论:(1)脑缺血损伤可激活SVZ神经干细胞,促使其增殖和表达.(2)养肝熄风方药能减轻急性大脑中动脉线栓法(MCAO)大鼠脑梗死灶体积,改善神经功能缺损.(3)养肝熄风方药可以促进MCAO大鼠SVZ 神经干细胞的增殖.
