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壮腰健肾丸对肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3 mRNA表达的影响
为了探讨壮腰健肾丸的缩尿作用及机制,该实验采用皮下注射150mg· kg-1剂量的D-半乳糖诱导亚急性衰老模型,并将其分为模型组、缩泉丸组(1.17g·kg-1·d-1)、壮腰健肾丸高、中、低剂量组(2.39,1.20,0.60g· kg-1 ·d-1),另取正常动物设为空白组,连续给药8周.选用代谢笼法测量大鼠24 h尿量及水负荷5h尿量;采用全自动生化仪检测尿中Na+,Cl-,K+浓度;应用ELISA法测定血清中醛固酮(aldosterone,ALD)、抗利尿激素(antidiuretic hormone,ADH)的含量;采用RT-PCR检测大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3 mRNA表达量的变化情况.结果显示壮腰健肾丸高、中剂量组对肾虚多尿大鼠24 h尿量及水负荷后5h内尿量均显著下调(P＜0.05,P＜0.01);对尿中Na+和Cl-浓度均显著降低(P＜0.01);血浆中ALD,ADH含量显著性升高(P＜0.05,P＜0.01);膀胱组织中P2X1与P2X3 mRNA表达量显著下调(P＜0.01);壮腰健肾丸低剂量组尿中Na+和Cl-浓度均显著降低(P＜0.01).结果说明壮腰健肾丸可能是通过下调肾虚多尿大鼠膀胱组织中P2X1与P2X3 mRNA表达量从而发挥缩尿的作用.
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坐骨神经分支选择性损伤模型L4～6背根神经节水平不同时间点P2X3mRNA表达变化
目的 观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)动物制作型模后不同时间点L4～6背根神经节(DRG)水平P2X3mRNA的表达情况,探讨外周P2X3mRNA在神经病理性痛模型不同阶段中的作用.方法 54只健康雄性SD大鼠完全随机分为空白对照(control)组、假手术(sham surgery)组和手术(surgery)组.通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI模型.动态观察造模前、造模后1d、3d、7d和14d双侧足跖机械痛阈;Real-time PCR法检测患侧造模后3d、7d和14d L4～6 DRG水平P2X3mRNA表达情况.结果 模型制作后各时间点,surgery组大鼠患侧足跖痛阈明显降低(P＜0.05),sham surgery组大鼠与control组比较差异无显著性(P＞0.05);各组大鼠健侧足跖痛阈于模型制作后各时间点均无显著变化(P＞0.05).模型制作后3d、7d,surgery组大鼠L4、L5、L6 DRG水平P2X3mRNA表达均有不同程度的提高(P＜0.05);而模型制作后14d,surgery组大鼠L5、L6DRG水平P2X3mRNA表达明显减少(P＜0.05),L4 DRG水平P2X3mRNA表达仍显著多于sham surgery组(P＜0.05).模型制作后各时间点、各DRG水平,sham surgery组和surgery组大鼠P2X3mRNA表达差异均无显著性(P＞0.05).结论 外周P2X3mRNA参与SNI模型疼痛的产生和维持,且其在不同阶段发挥的作用不同.
关键词： 坐骨神经分支选择性损伤模型 背根神经节 不同时间点 P2X3 机械缩腿阈 实时定量聚合酶链反应 大鼠 -
急性坏死性胰腺炎大鼠背根神经节中P2X3的表达
目的 观察ANP大鼠痛觉敏感性的变化及脊髓背根神经节(DRG)中P2X3表达的差异.方法 牛磺胆酸钠胰腺被膜下均匀注射法制备SD大鼠ANP模型,被膜下注射等量生理盐水为假手术组,不做手术为对照组.V-fray法观察大鼠术前、术后痛阈改变,采用免疫组织化学方法检测制模后1、3、7、14 d DRG的P2X3表达.结果 ANP大鼠的缩腹频率在制模后7 d达到高峰,为65.67%,明显高于对照组(10.02%)及假手术组(0)(P＜0.01);假手术组与对照组间也有统计学差异(P＜0.05).ANP大鼠制模后1 d,DRG即出现P2X3阳性细胞,细胞数从术前的8.7±2.4增加到32.3±8.2,制模后3 d高达64.1±8.5,较假手术组的高数21.5±4.0和对照组的高值9.5±1.9均相差显著(P＜0.01);制模后3、7、14 d假手术组P2X3阳性细胞数也显著高于对照组(P＜0.01或＜0.05).结论 ANP大鼠DRG的P2X3高表达与内脏痛觉过敏的发生相关.
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高乌甲素对烧伤大鼠的镇痛作用及机制初步研究
目的 探讨腹腔注射高乌甲素(lappaconitine,LA)对烧伤大鼠热痛阈和P2X3受体在中脑导水管周围灰质表达的影响.方法 SD大鼠100只随机分为正常组、单纯烧伤组、烧伤LA1组、烧伤LA2组和正常LA组.观察大鼠Ⅱ度烧伤以及LA治疗后行为学和热痛阈变化;免疫组织化学法检测大鼠在Ⅱ度烧伤前后以及经LA治疗后,P2X3受体在中脑导水管周围灰质的表达变化.结果 大鼠Ⅱ度烧伤后,单纯烧伤组热痛阈逐渐下降,烧伤后48h达到低值(10.88±2.35)s,与正常组(25.67±1.49)s比较差异有统计学意义(P＜0.001) 伴P2X3受体在中脑导水管周围灰质的表达上调(542.50±100.44)个/mm2,与正常组(440.80±88.58)个/mm2比较差异有统计学意义(P＜0.01).在烧伤后各时间点,烧伤LA1组、烧伤LA2组与单纯烧伤组比较,热痛阈升高;免疫组化检测提示:烧伤后48 h,烧伤LA1组、烧伤LA2组P2X3受体在中脑导水管周围灰质的表达上调,与单纯烧伤组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),且LA镇痛效果和P2X3受体表达水平与LA的剂量成正相关.结论 腹腔注射高乌甲素可促进Ⅱ度烧伤大鼠热痛阈的提高以及上调P2X3受体在中脑导水管周围灰质中表达,从而增强机体内源性镇痛系统的作用,缓解大鼠Ⅱ度烧伤后疼痛反应.
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力竭运动对大鼠大脑P2X1、P2X3、P2X5和P2X7受体表达的影响
目的:探讨一次和反复力竭游泳运动后大鼠大脑ATP受体P2X之4个亚型P2X1、P2X3、P2X5和P2X7的时相性变化特点.方法:健康成年雄性SD大鼠68只,分为一次力竭游泳运动组和反复力竭游泳运动组及安静对照组.反复力竭组大鼠每日负重3％体重进行力竭游泳运动,共训练2周.运动组分别于力竭运动后即刻、4小时、12小时和24小时取材.采用实时荧光定量PCR方法测定力竭运动后大鼠P2X1、P2X3 、P2X5和P2X7受体亚型mRNA水平.结果:(1)一次力竭组中,P2X1和P2X7相对表达率在运动后12小时低,且与24小时有显著统计学差异(分别为P＜ 0.05,P＜ 0.01).P2X3和P2X5相对表达率在运动后各时点只在一定范围内波动.(2)反复力竭组运动后12小时4种受体亚型相对表达率均达到峰值,较其它各时间点及安静对照组、一次力竭12小时均有显著差异(P＜0.01).结论:4种受体亚型表达率在反复力竭运动后12小时出现峰值,提示4种P2X受体亚型参与的中枢神经活动在力竭运动后12小时可能达到一个活跃期.
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P2X3嘌呤受体在人胚胎DRG中的表达
目的:研究P2X3嘌呤受体在人胚胎发育中的表达.方法:收集10例不同月龄时期的胎儿,分别取L4～6背根神经节(DRG),应用免疫组织化学的染色方法和图像分析技术,观察在5～9个月的人胚胎DRG中P2X3嘌呤受体的表达变化.结果:在5个月的人胚胎DRG中几乎所有的神经元细胞是小神经元,全部表达P2X3受体阳性,在6～7个月的人胚胎DRG中,开始出现中型神经元细胞,8～9 个月的人胚胎DRG中开始出现少量的大型神经元细胞,而P2X3阳性产物主要见于小神经元细胞,所以5～9个月的人胚胎DRG中P2X3阳性细胞的数量呈下降趋势,各月龄之间相比有显著性差异(P<0.01).结论:P2X3嘌呤受体与胚胎时期神经系统的发育有关.
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小檗碱对DRG中PDN相关因子影响
目的 探讨小檗碱对糖尿病并发症痛性糖尿病神经病变(PDN)发生过程中背根神经节(DRG)中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS表达的影响.方法 采用高糖及加入小檗碱处理原代培养的DRG神经元,Western blot及Real-time PCR法检测DRG中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS的mRNA及蛋白表达水平.结果 高糖培养组中PPARβ、TRPV4的蛋白和mRNA表达高于对照组(P＜0.05),加入小檗碱后,mRNA水平下降;PAR-2、P2X3、nNOS mRNA表达低于对照组(P＜0.05),加入小檗碱后,mRNA水平上升;PPARβ、PAR-2、PAR-2、P2X3、nNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05),加入小檗碱后,蛋白表达水平降低.结论 小檗碱能使高糖引起的DRG的PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS的蛋白和mRNA水平的改变趋向恢复至正常,有助于维持神经元正常功能.
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大鼠坐骨神经结扎后疼痛受体P2X3在背根神经节内的表达变化
目的:研究坐骨神经结扎损伤后疼痛受体P2X3在相应背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)内的表达变化情况.方法:选取健康成年SD大鼠35只,建立右侧坐骨神经结扎损伤模型,采用免疫组织化学和图像分析技术检测相应L4-6DRG内P2X3的表达情况.结果:正常大鼠L4-6DRG内有大量P2X3免疫阳性神经元,坐骨神经结扎后3d P2X3表达即下调,3,7,14,21和28d其表达呈进行性下降趋势,各时间点与正常和假手术对照比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:坐骨神经结扎后P2X3在L4-6DRG内表达明显下调,提示其可能在神经源性疼痛中发挥一定的作用.
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胎儿脊神经节发育过程中P2X3和降钙素基因相关肽受体的表达
目的:观察人胎儿脊神经节发育过程中P2X3和降钙素基因相关肽(CGRP)受体的表达变化,探讨在神经系统发育过程中P2X3和CGRP受体的作用和意义.方法:运用尼氏染色、ABC免疫组织化学显色的方法,观察胎儿脊神经节发育过程中P2X3和CGRP受体的表达规律.结果:在人胎儿脊神经节的神经元内P2X3和CGRP受体均有不同程度的表达.在胎儿第16～32周脊神经节中P2X3受体免疫阳性细胞数逐渐减少.在胎儿第16～32周脊神经节的神经元中CGRP受体阳性细胞数逐渐增多,阳性表达逐渐增强.结论:在胎儿脊神经节的发生、发育过程中,P2X3和CGRP受体呈不同程度的表达,表明其在神经系统的发育过程中发挥着重要的作用.
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电针对IBS内脏高敏感大鼠P2X3受体调节作用的研究
目的:观察电针天枢和上巨虚穴(合募配穴)对肠易激综合征(IBS)内脏高敏感大鼠结肠与脊髓P2X3受体表达的影响,探讨电针治疗IBS的相关作用机制,为针刺治疗IBS提供科学依据.方法:采用国际公认的球囊刺激乳鼠结直肠法制备IBS大鼠模型.实验分为正常组、模型组、电针组和西药组.电针组选取双侧天枢和上巨虚穴,针刺后连接韩式经穴刺激仪进行治疗,西药组选用IBS常用药得舒特(水溶液)灌胃.观察各组大鼠组织病理学改变,腹壁撤退反射(AWR)评分,应用免疫组化方法检测大鼠结肠黏膜和脊髓P2X3受体表达的改变.结果:与正常组比较,在不同直结肠扩张刺激强度下,IBS模型大鼠AWR评分显著增高(P<0.01),结肠黏膜和脊髓P2X3受体表达增强(P<0.01).电针和西药治疗均可明显改善大鼠一般状况,降低AWR评分(P<0.01或P<0.05).电针组和西药组均可降低大鼠结肠黏膜组织和脊髓P2X3受体表达阳性目标积分光密度(P<0.01或P<0.05),且结肠和脊髓的P2X3受体表达呈正相关.结论:IBS大鼠内脏敏感性增高,电针可降低其痛阈;IBS内脏高敏感大鼠结肠和脊髓P2X3受体表达显著增加可能是参与IBS大鼠内脏高敏感形成的重要因子,电针治疗IBS大鼠内脏高敏感的作用可能与降低异常增高的P2X3受体表达相关.
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神经病理性痛模型(SNI)大鼠背根神经节P2X3的mRNA和蛋白表达变化
目的:研究大鼠背根神经节P2X3在保留坐骨神经结扎并剪断(spared nerve iniury,SNI)模型的基因和蛋白表达变化及意义.方法:45只雄性SD大鼠随机分为Ctrl、Sham和SNI组,每组各15只.于SNI术前1天、SNI术后第3、7、14天时间点测定机械痛阈后立即处死大鼠,取术侧腰4～腰5(L4～L5)的背根神经节(DRG),采用qPCR和Western Blot技术检测大鼠P2X3的mRNA和蛋白表达.结果:与Sham组相比,SNI组的术后第7和14天,大鼠术侧足底机械痛阈(PWT)明显降低(P ＜0.001);SNI组的术后第3、7和14天,大鼠术侧L4～L5节段DRGP2X3的mRNA表达明显增加(P＜0.05,P＜0.001);SNI组的术后第7和14天,大鼠术侧L4～L5节段DRGP2X3的蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论:保留坐骨神经结扎并剪断后L4～L5节段DRG的P2X3基因和蛋白表达增加与其机械痛敏的降低相一致,提示在外周神经损伤情况下,P2X3受体可能参与了SNI诱导的神经病理性痛的疼痛信息调控.
关键词： 神经病理性痛 保留坐骨神经结扎并剪断 背根神经节 P2X3 机械痛敏 -
小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠的镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响
观察腹腔注射小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响,以探讨其在神经性疼痛中的作用.方法大鼠随机分为4组:空白对照组(C组)、假手术组(S组)、腹腔注射生理盐水组(NS组)与氯胺酮组(K组),每组8只.在大鼠右后足检测冷刺激反应、热痛敏阈基础值后,腹腔注射10%水合氯醛400 mg/kg进行麻醉.NS组和K组构建大鼠右侧坐骨神经慢性结扎损伤模型,S组暴露坐骨神经但不结扎,C组不进行手术.手术后K组每天10:00腹腔注射氯胺酮10 mg/kg(用生理盐水稀释至0.5 ml),NS组则腹腔注射等量生理盐水,连续2周.14 d后测定各组大鼠右后足冷刺激反应、热痛敏阈值.然后各组取手术侧L4背根神经节,并采用免疫组化法观测P2X3受体的表达.结果手术后14 d,NS组和K组大鼠右后足热痛敏阈值均明显低于C组和S组(P<0.05),冷刺激反应则显著高于C组和S组(P<0.05);但K组大鼠右后足热痛敏阈值明显高于NS组,而冷刺激反应明显低于NS组(P<0.05);NS组和K组大鼠背根神经节P2X3受体免疫反应阳性细胞数量多于C组和S组,但K组显著少于NS组(P<0.05);NS组与S组大鼠背根神经节神经元P2X3受体免疫组化评分高于C组和S组,而K组却低于NS组,(P<0.05).结论腹腔注射小剂量氯胺酮可提高慢性神经性疼痛大鼠痛敏阈值及减弱冷刺激反应,其作用机制可能与减少背根神经节神经元P2X3受体表达有关.
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P2X3受体在灼口综合征患者舌组织神经纤维中的表达
采用免疫组织化学技术结合图像分析系统检测 P2X3受体在12例灼口综合征（BMS）患者和9例正常对照组的舌组织神经纤维中的表达水平，平均吸光度值分别为0．56±0．29和0．15±0．06（P ＜0．001）；P2X3受体表达水平与疼痛 VAS 评分无相关性（R2＝0．012）。P2X3受体参与了 BMS 患者的慢性疼痛，但与疼痛程度无相关性。
关键词： P2X3 灼口综合征(BMS) 慢性疼痛 -
人乳恒牙牙髓组织中 P2X3受体 mRNA 的表达研究
目的：探讨乳牙和恒牙牙髓组织中 P2X3受体的差异及与炎症引发的牙齿疼痛的关系。方法：选择14个正常恒牙、10个正常乳牙及疼痛乳恒牙各12个的牙髓组织为实验对象，用基质金属蛋白酶－9（MMP－9）来显示牙髓的炎症状态；采用荧光定量 PCR 方法检测并比较人正常与疼痛乳恒牙牙髓组织中 P2X3受体 mRNA 的表达水平。结果：恒牙疼痛组与正常组中 P2X3受体 mRNA 的表达水平无明显差异（P ＞0．05），乳牙疼痛组中 P2X3受体的表达较正常组增强（P ＜0．05），而乳牙正常组与疼痛组中 P2X3受体的表达水平均分别高于恒牙正常组和疼痛组（P ＜0．05）。结论：P2X3受体可能参与乳牙牙髓炎疼痛的发生。
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大鼠前列腺伤害性刺激诱导脊髓内P2X3和Fos的表达及其意义
目的:研究大鼠前列腺伤害性刺激诱导脊髓内P2X3和Fos的表达及其意义.方法:建立大鼠前列腺伤害性刺激动物模型,采用抗Fos蛋白和抗P2X3的免疫组织化学方法,对大鼠前列腺伤害性刺激诱导的脊髓内Fos、P2X3表达部位进行观察.结果:Fos阳性神经元和P2X3阳性神经元主要分布在脊髓后角胶状质.结论:交感神经通路在大鼠前列腺伤害性信息传递过程中具有重要作用;P2X3可能参与了前列腺伤害性刺激的传导.
