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人冠状病毒核酸检测方法的研究进展
冠状病毒属于套式病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae),冠状病毒属(Coronavirus,CoV)是病毒中的一个大家族,在多种生物中广泛分布,如鸟、禽、猪、狗、猫、蝙蝠和人[1]等.冠状病毒基因组为不分段的单股正链RNA,是RNA病毒中基因组大的病毒,基因组结构为:5'帽状结构-复制酶(rep)-刺突糖蛋白(S)-包膜蛋白(E)-基质膜糖蛋白(M)-核衣壳蛋白(N)-polyA尾3'.基因组中复制酶(rep)基因约占2/3,包含2个开放阅读框架:ORFla和ORFlb.2012年国际病毒分类命名委员会根据血清学特性和遗传学差异将冠状病毒分为α、β、γ(分别对应以前的1、2、3群)和δ(尚未正式命名)共4个群.
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人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响
目的 研究人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响.方法 对我中心进行的解冻胚胎数不超过3枚,解冻胚胎全部存活并全部移植的274例患者分为当日移植组(A组)和次日移植组(B组),比较组间临床妊娠率、种植率和流产率.结果 胚胎龄为第2天(D2)的共163个周期,其中A组130个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:23.08%、11.71%和6.67%,B组33个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:27.27%、11.84%和11.11%;胚胎龄为第3天(D3)的共111个周期,其中A组94个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:36.17%、19.35%和8.82%,B组17个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:35.29%、20.45%和16.67%.D2和D3胚胎当日移植组和次日移植组之间的临床妊娠率、种植率和流产率均无统计学差异.结论 延长体外培养时间不显著影响玻璃化冻融卵裂期胚胎的发育潜能,可根据需要灵活安排玻璃化冷冻胚胎的解冻时间.
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体外培养人卵母细胞不同发育阶段原癌基因c-mos的表达
成熟促进因子(MPF)和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是调节卵母细胞细胞周期的关键分子,二者的激活和失活导致了减数分裂的恢复、阻滞和完成.许多蛋白激酶通过调节MPF和MAPK活性来影响减数分裂.其中,c-mos激活脊椎动物卵母细胞的MAPK,从而启动成熟分裂并维持中期阻滞[1].
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两地区一般人群血清中PFOS和PFOA污染特征比较
目的全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate;PFOS)和全氟辛酸(Perfluorooctane Acid;PFOA)是广泛存在于全球生态系统中的难分解性、高生物蓄积性有机氟污染物.本次调查的目的是比较沈阳和重庆两地区一般人群血清中PFOS和PFOA污染水平的地区性差异和分布特征.
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沈阳和重庆人群血清中全氟辛烷磺酸和全氟辛酸的污染水平比较研究
目的 阐明沈阳和重庆两地一般人群血清中全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸(PFOA)污染水平,比较两地人群血清中PFOS和PFOA分布特征.方法 采集沈阳和重庆地区无职业性PFOS和PFOA暴露人群血清,采用高压液相色谱-质谱仪联机系统测定血清中PFOS和PFOA含量.结果 沈阳地区一般人群血清中PFOS和PFOA浓度中位数分别为22.40μg/L和4.32μg/L,重庆地区分别为7.40μg/L和1.00μg/L.沈阳地区人群血清中PFOS、PFOA浓度明显高于重庆地区(P＜0.01).两地区女性人群血清中PFOS和PFOA浓度均高于男性水平,沈阳地区人群血清中PFOS浓度男、女性别间差异显著(P＜0.05).重庆地区女性人群血清中PFOS、PFOA浓度与年龄呈正相关关系(rPFOS=0.298,rPFOA=0.271),50岁以上女性人群的相关程度大于13岁以下和13～50岁年龄组.结论 沈阳和重庆两地人群血清中PFOS和PFOA污染水平具有显著的地区性差异和分布特征,血清中PFOS和PFOA水平与年龄存在相关性.
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人眼与兔眼虹膜组织力学特性的相关性分析
把我们测得的人眼虹膜组织力学性质参量与兔眼虹膜组织的力学性质参量进行了相关性分析,结果表明:就整体而言,人眼虹膜与兔眼虹膜力学特性极为相近,没有显著差异.此结果提示人们,在研究人眼虹膜的力学特性时,采用兔眼虹膜作为标本是合适的,但需要进行必要的修正.这可以大大地降低研究成本.
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珠海禽类养殖场从业人员SARS冠状病毒IgG抗体检测分析
[目的]了解SARS冠状病毒在禽类养殖人员中的隐性感染情况,以探讨SARS冠状病毒的传播与家禽类动物的关系.[方法]采用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法测定禽类养殖场从业人员血清样本中的SARS冠状病毒IgG抗体.[结果]270份血清标本的OD值均小于临界值,表明在禽类养殖从业人员中未检出SARS冠状病毒IgG抗体阳性指标.[结论]本次研究结果显示,在禽类养殖场从业人员中不存在SARS冠状病毒的隐性感染,说明SARS病毒的传播可能与家禽动物没有直接关系.
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全球人间猴痘的流行概况与国境口岸的预防措施
[目的]防止猴痘从国外传人,保护我国人民身体健康和畜牧业生产的安全.[方法]广泛收集国外有关猴痘的疫情信息,然后进行整理、归纳和分析.结合我国国境口岸的实际情况,提出预防措施.[结果]人间猴痘流行于非洲中西部热带雨林地区国家及北美洲的美国,以非洲刚果民主共和国报告的病例为多.在非洲,猴痘病毒的主要宿主是灵长类动物和啮齿动物,而在美国则主要是啮齿动物.国境口岸的预防措施主要包括:做好疫情资料的收集、整理、分析和传递;开展广泛的卫生宣传教育;加强对来自疫区的入境人员的卫生检疫查验;禁止来自疫区的宿主动物及其产品入境;必要时接种天花疫苗.[结论]我国面临猴痘从国外传入的威胁,出入境检验检疫机构必须严格把关,认真落实各项防疫措施,防患于未然.
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丽水地区妇女感染人乳头瘤病毒基因型模式
目的:了解丽水地区妇女人乳头瘤病毒(HPV)基因型在宫颈疾病中的感染状况及其分布特点.方法:以该地区2008年9月19日到2011年3月15日期间2 638例妇科患者为研究对象,运用HybriXax医用核酸分子快速杂交系统进行21种HPV(6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304)基因型的分型检测,分析常见感染亚型和分布特点.结果:研究人群HPV总阳性率为50.87％,常见的10种高危型为HPV16、52、58、33、31、53、68、CP8304、18、39型;常见的2种低危型为HPV11、6型.多重感染的比例为32.41％,其中以二重感染多见.结论:该地区HPV感染率和多重感染比例均较高,常见感染亚型总体符合亚洲人群的分布规律,又有独特的区域分布特点,值得重视.
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赣榆地区健康人群低浓度血清乙肝病毒表面抗原测定及其意义
为了解赣榆地区公共场所从业人员健康人群中低浓度血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征,应用微粒子酶免疫发光分析技术(MEIA)测定8002例健康人群血清HBsAg阳性及其表面抗原、乙肝病毒e抗原及其e抗体、(HBeAg、抗-Hbe)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc),并结合PCR试验结果,确定浓度在5 μg/L以下的HBsAg阳性例数,并分析相关乙肝病毒(HBV)血清标志物模式.共检出HBsAg阳性369例,HBsAg浓度在5 μg/L以下的有85例,占总数的1.06%,占HBsAg阳性人群的23.04%,其中HBsAg浓度在1μg/L以下的38例 (44.70%);1～2 μg/L的有15例(17.64%);2～5μg/L的有32例(37.65%).对上述低浓度HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得8种模式,以"HBsAg、抗HBc、抗Hbe阳性"和"HBeAg和抗HBs阴性"模式为主(70.59%);累计HBsAg和抗-HBc同时阳性者占91.77%;HBsAg与抗-HBs同时阳性只出现在HBsAg 1 μg/L以下人群中(6.45%).结果显示低浓度血清HBsAg人群不容忽视,提高HBsAg检测灵敏度具有重要意义,同时检测相关HBV血清标志物,对于确定上述人群有帮助.
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健康人群食物过敏状况的初步调查
为了解我国人群食物过敏的现状,以便为转基因食品和致敏食物的监管提供科学依据,调查了中国医科大学4052名学生食物过敏的流行情况及其过敏症状.参考国际上经典的食物过敏诊断方法,以问卷、皮肤点刺试验作为初步诊断依据,对中国医科大学4052名学生(15～24岁)进行筛查,并对不同致敏食物与过敏症状进行聚类分析.调查收到有效答卷3974份,应答率为98.1%.自诉曾患食物过敏的学生有227例(约占5.7%),其中76例(约占自诉曾患食物过敏的33.5%)皮肤点刺实验阳性,男女性之间无统计学差异.自诉对鱼和海鲜过敏者过敏症状相近,多为皮疹及皮肤瘙痒.贝类、牛奶、蛋过敏者过敏症状相似,主要为消化道症状.本次调查表明,在15～24岁年龄段健康人群中,约有6%的人曾患有食物过敏.致敏食物主要为水产品、牛奶和鸡蛋.过敏症状主要为皮疹及皮肤瘙痒和消化道症状.
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广东地区病毒性肝炎流行现状与分析
目的分析广东地区病毒性肝炎流行现状并提出防治对策.方法用描述流行病学方对1991～2000年病毒性肝炎发病情况进行统计与分析.结果广东地区1991～2000年平均发病率为53.06/10万,2000年发病率为47.38/10万,比1991年的71.93/10万下降了34.13%;乙型肝炎病例占2000年肝炎总病例的74.4%.病毒性肝炎高发区位于珠江三角洲地区,发病年龄高峰为20～35岁人群,3～5月为发病高峰季节.自1991年以来甲肝病例数逐年下降而乙肝病例数逐年上升,从1991至2000年乙肝构成比上升2.33倍、发病率上升53.35%.结论新生儿乙肝疫苗免疫接种降低了儿童肝炎发病率;但青壮年乙肝发病呈上升趋势,建议在成人和青少年中尤其从事社会性和服务性职业人群中开展乙肝疫苗免疫接种.
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台州市1990～2000年病毒性肝炎控制效果分析
目的为了解病毒性肝炎发病流行规律,制定有针对性的防治措施.方法采用描述流行病学方法,对肝炎分型三间分布、疫苗效果等进行比较分析.结果病毒性肝炎年均发病率为106.2/10万,1998年起位居法定传染病的首位.甲肝疫苗应用,使0～9岁组发病率从170.8/10万下降到1.6/10万,削平了儿童发病高峰.乙肝疫苗接种后,相应年龄组的发病率从43.7/10万下降到6.3/10万;HBsAg携带率下降到2%.结论疫苗接种是防制病毒性肝炎的主要措施,乙肝成人免疫和加强免疫是控制乙肝急需解决的重要问题.
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输血后丙型肝炎病人10年前瞻性研究
目的研究26例丙肝病人的演变过程.方法采用前瞻性的研究方法,以26例已跟踪10年以上的丙肝病人作为研究对象,对所采集到的输血前及输血后血清,进行ALT和抗HCV检测及HCV RNA检测.结果对该26例输血后丙肝病人跟踪时间平均128个月,输血后抗HCV早于第15天被检测到,晚出现于第80天,平均窗口期为42d,至第11年时其抗HCV阳性率仍维持在约70%.大多数病人在输血后的30d内其ALT即出现异常,随后其ALT的变化大致可分为3种类型:短期异常后转为正常并维持至今;ALT维持较长时间异常;ALT呈波浪式反复异常.笔者所跟踪的26例输血后丙肝病人中,24例病人的ALT或只有一个异常峰,但维持时间较长(平均16个月),或呈现波浪式多次的高异常,其抗HCV在第¨年时仍绝大多数维持阳性,说明丙肝病毒在人体内引起的免疫反应较弱而持久.2例病人在ALT异常5个月后转为正常,随后其抗HCV及HCV RNA亦转为阴性,至今已超过10年未发现肝炎症状,HCV感染人体以后能引起较快、较强的免疫反应,该被感染者又能通过免疫系统将病毒清除掉.结论大多数丙型肝炎病人转为慢性化,少数丙型肝炎病人则存在自愈.
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中山市EB病毒筛查阴性人群12年追踪研究
目的探讨EB病毒在人体内的变化规律及其与鼻咽癌发病的关系.方法通过前瞻性方法对中山市1986～1987年鼻咽癌首次筛查EB病毒抗体阴性人群(38 550人)随访12年的资料以及首次筛查阳性人群(2 921人)随访7年的资料进行比较,观察上述人群EB病毒VCA/IgA的变化规律及其与鼻咽癌发病的关系.结果 EB病毒抗体VCA/IgA阴性队列每年都有一定的转阳率(22.8%),其头3年鼻咽癌发病风险仅为一般人群的11%左右,以后逐渐增加,但仍低于一般人群;与阴性队列鼻咽癌发病比较,阳性队列鼻咽癌发病风险高,相对危险度达23.22(P＜0.05).结论一定比例的VCA/IgA阴性人群可转为VCA/IgA阳性;在较长的时间内VCA/IgA阴性队列鼻咽癌发病风险较一般人群及阳性人群低;EB病毒可能是鼻咽癌发病因素,对EB病毒检测可预测鼻咽癌发生的风险,且通过抑制EB病毒活性可能达到预防鼻咽癌的目的.
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101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测
目的研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒(SARS-CoV)RNA的情况.方法采用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测101例病程为10～55 d 的SARS患者、27例非SARS患者和400名健康体检人群粪便中SARS-CoV RNA.结果 101例SARS患者的粪便标本中58例(57.4%)SARS-CoV RNA阳性;27例非SARS患者和400名健康体检人群的粪便标本均为阴性.SARS患者发病后10～19、20～29、30～39和40～55 d,粪便中SARS-CoV RNA阳性率分别为100%(8/8)、67.7%(21/31)、47.4%(27/57)和40.0% (2/5).粪便中SARS-CoV RNA载量对数值分别为6.06±2.05、4.51±1.23、 3.82±1.44和3.57±1.25.结论 SARS患者急性期粪便中SARS-CoV RNA阳性率和载量对数值高,且随病程延长而下降.
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2007-2011年青岛地区H3N2流感病毒全基因组进化特征分析
目的 了解2007-2011年青岛地区流行的H3 N2流感病毒的全基因组进化特征.方法 选取2007-2011年青岛地区流行的H3 N2流感病毒58株,提取病毒RNA,应用RT-PCR扩增各基因片段,并进行序列测定；用Sequencher软件完成序列拼接.选取GenBank收录的全球同期氨基酸数大于300的H3 N2流感病毒589株,以其血凝素重链区(HA1)序列作为参照,用Mega 5.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析.结果 2007-2011年青岛地区流行的H3 N2流感病毒血凝素(HA)基因在进化树上形成单一主干,每一流行季毒株的起源均晚于上一季；全基因组进化分析发现,2009-2010流行季存在重配病毒株,而2010-2011流行季同时存在簇Ⅰ和簇Ⅱ两系毒株流行,该季病毒呈现复杂的重配现象.病毒HA1蛋白与疫苗株比较,2007-2011年各监测季分别有8、6、6、8、11处氨基酸变异,涉及13个抗原位点.M2蛋白氨基酸序列分析表明,分离到的H3N2流感病毒31位氨基酸均发生丝氨酸→天冬酰胺(S31N)突变.2007-2011年青岛地区分离的H3N2流感病毒HA1基因在进化树上与全球同期H3 N2流感毒株处于同一主要分支.序列比对及抗原性分析显示,毒株A/Qingdao/F521/2011存在H3 N2与甲型H1N1流感病毒共感染现象.结论2007-2011年青岛地区流行的H3N2流感病毒各基因片段呈现复杂的进化特征.
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2009—2016年上海人冠状病毒OC43分子流行病学研究
目的 分析上海2009年11月至2016年4月人冠状病毒(HCoV)流行特征,以及HCoV-OC43基因型分布和变异变迁规律.方法 收集2009年11月至2016年4月期间上海7家哨点医院感染科急性呼吸道感染患者的临床资料和呼吸道样本,包括咽拭子、痰、鼻咽抽吸物和肺泡灌洗液,共6059例.采用HCoV通用引物对患者样本进行检测并测序分型.HCoV-OC43阳性样本进一步采用特异性引物对刺突蛋白、依赖RNA的RNA聚合酶(RDRP)和核衣壳蛋白全基因进行扩增和测序,并通过全基因序列构建进化树对HCoV-OC43进行基因分型和进化分析.结果 共检出HCoV 63株(1.04%),其中HCoV-OC43检出数多,为34株,其后依次是HCoV-229E和HCoV-HKU1,检出数分别为18和10株,而HCoV-NL63、重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)均未检出.29例HCoV-OC43阳性样本获得刺突蛋白、RDRP和核衣壳蛋白全基因序列,根据进化树分析显示,其中27例为D型,2例为B型,而其他基因型E、F、G均未检出,其中D型为主导基因型.进一步分析与HCoV-OC43进入宿主和中和抗体产生相关的刺突蛋白发现,刺突蛋白重要的功能结构域——N端结构域(NTD)和受体结合结构域(RBD)含有较多氨基酸变异和阳性选择位点,并伴有氨基酸插入/缺失.13个阳性选择位点均位于NTD或RBD,其中10个位于NTD,3个位于RBD.结论2009—2016年,上海流行的HCoV主要为HCoV-OC43,其中D型为优势基因型.刺突蛋白的NTD区和RBD区是HCoV-OC43进化过程中的高变区域,伴有氨基酸替换、氨基酸插入/缺失.
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化
目的将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化.方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序.重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf 9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI.通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性.结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72 h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58 000和70 000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似.动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体.SDS-PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%.纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性.结论应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础.
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乙型病毒性肝炎诊断报告标准及集中报告管理模式效果评价
目的 完善以乙型肝炎(乙肝)为主的肝炎报告标准,建立报告管理模式.方法 确立有乙肝病例资源、地域相对独立的地区为示范区;示范区距天津市区45 km,总面积1113.83 km2,总人口32万人,其中非农业人口21万人,占总人口的67%.近年,该区乙肝报告发病率居全市18区县之首,2006年、2007年报告发病率分别为113.53/10万和123.90/10万.指定辖区二级及以上综合医疗机构为网络报告的定点医院;对首次确诊报告的肝炎患者均建立登记卡.结果 2007年6月至2008年6月,定点医院接诊报告肝炎患者占辖区医院报告肝炎患者总数的97%(323/331);建卡率为97.21%(314/323);2008年1-6月定点医院报告乙肝患者(101例)较去年同期(261例)下降61.30%.结论 制定以乙肝为主的肝炎报告"标准"和管理"模式"势在必行,但必须有卫生行政部门的支持才能实施.
