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PARP-1及其相关因子在适应性反应中的表达改变
目的探讨PARP-1在适应性反应中的作用.方法低剂量甲醛预处理人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,观察细胞对高剂量甲醛攻击的适应性反应.在MTT法检测细胞存活率的基础上,荧光定量PCR技术测定不同组细胞中PARP-1及其相关因子表达的变化.结果用低剂量甲醛预刺激可提高细胞对继后大剂量甲醛攻击的抵抗力;低剂量甲醛能引起PARP-1及其相关因子表达增加,产生适应性反应时这种增加尤为突出,其中PARP-1的表达量是对照组的147倍.结论低剂量的甲醛可使PARP-1活化,进而调节其相关因子DNA-PK、P53、NF-κB的表达,促使细胞免疫功能增强,启动适应性反应的产生.
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筋脉通含药血清降低高糖培养大鼠雪旺细胞活性氧水平及PARP-1蛋白表达
目的 研究筋脉通含药血清对体外高糖培养雪旺细胞活性氧(ROS)水平及多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)蛋白表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通(JMT)、维生素C(VC)或蒸馏水制备含药血清和对照血清.取新出生大鼠的双侧坐骨神经用于制备雪旺细胞,分为高糖组、JMT组(加入筋脉通含药血清)、VC组(加入维生素C含药血清)及正常对照组.培养48 h后,采用激光扫描共聚焦显微技术检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平；采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞PARP-1(89 ku)的蛋白表达.结果 1)高糖组雪旺细胞ROS-DCF荧光值(86.59 ±8.14)显著高于正常值(P＜0.01)；筋脉通含药血清组(44.58±8.67)与维生素C含药血清组(46.12±8.80)均显著低于高糖组(P＜0.01).2)与正常组比较,高糖组雪旺细胞内PARP-1(89 ku)含量(0.712 ±0.012)明显增加(P＜0.01)；与高糖组比较,筋脉通含药血清组含量(0.307±0.025)明显降低(P＜0.01),且明显优于维生素C组(0.594±0.017) (P ＜0.01).结论 筋脉通含药血清能显著减少ROS生成,降低PARP-1的活性和酶解,减轻细胞DNA氧化损伤.
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二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡
目的 检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制.方法 通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是否被切割成两个片段.结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中easpase-3的活性上调,其下游底物PARP-1被大量切割成小片段.结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节.
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小鼠髓母细胞瘤细胞系的建立与鉴定
目的 建立表达PARP-1和P53基因双缺失的小鼠髓母细胞瘤细胞系,为研究髓母细胞瘤(MB)发生机制提供细胞模型.方法 对小鼠髓母细胞瘸细胞进行原代培养,体外传代观察,传代30次以上对培养细胞进行形态学观察及细胞标志性蛋白的免疫荧光分析,用Western blot法检测PARP-1蛋白的表达,用含有PARP-1蛋白功能区域的重组质粒pEGFP-Cl-Hparp-1和绿色荧光蛋白空质粒PEGFP-Cl转染细胞进行检测.结果 新建立的小鼠髓母细胞瘤细胞系呈多角形、短梭形,免疫荧光分析可见未成熟神经元标志性蛋白Vimentin、Dcx、βⅢ-Tubulin等表达阳性,Western blot 检测PARP-1蛋白阴性,导入外源PAPR-1基因后星阳性.结论 成功建立了DNA损伤修复蛋白功能缺陷的小脑神经源性髓母细胞瘤细胞系,有助于深入研究髓母细胞瘤的病因及发病机制.
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3-AB对脓毒症大鼠心肌细胞PARP-1、Bcl-2表达的影响
目的：探讨PARP-1抑制剂3-AB对脓毒症大鼠心肌细胞PARP-1、Bcl-2表达的影响。方法成年健康SD大鼠30只，随机分为3组：假手术对照组、模型组和3-AB治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症大鼠模型，存活至48h取材。用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测心肌PARP-1、Bcl-2的表达，ELISA法检测血清中PARP-1、Bcl-2的含量。结果模型组心肌PARP-1阳性细胞灰度值、血清中的OD值(optical density)均较假手术组升高，而治疗组较模型组下降，差异有统计学意义，P<0.05；而Bcl-2的变化趋势正好相反，模型组心肌Bcl-2阳性细胞灰度值、血清中的OD值均较假手术组降低，3-AB治疗后其水平较模型组升高，P<0.05。结论PARP-1抑制剂3-AB可上调脓毒症大鼠大心肌Bcl-2的表达，对凋亡有一定的抑制作用。
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甘草提取物（GC-3）体外诱导HeLa细胞凋亡及机制研究
目的：探讨甘草提取物（GC-3）抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法通过水提取、乙醇沉淀、大孔吸附树脂柱层析，分离提取GC-3；四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测GC-3对HeLa细胞增殖的影响；透射电镜观察GC-3诱导HeLa细胞凋亡的形态学改变；Western blot测定25μg/ml GC-3不同时间作用于HeLa细胞后，凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）表达水平的变化。结果 MTT检测结果表明，GC-3能够抑制HeLa细胞增殖且呈现出良好的时间剂量效应关系，其中GC-3作用于人HeLa细胞12 h、24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别为35.21μg/ml、17.05μg/ml、12.07μg/ml，而对照组顺铂相对应的IC50分别为20.48μg/ml、7.34μg/ml、8.66μg/ml。电镜检测可见细胞表面绒毛脱失，细胞核内染色质凝聚、散在或边集，细胞的核浆比减少，胞质内可见空泡等明显的凋亡细胞特点。Western blot检测结果显示，随着GC-3（25μg/ml）作用时间的增加，PARP-1被激活剪切，其裂解蛋白Cleaved-PARP-124 kD表达水平随之增高，且从6 h时起即与正常对照组有显著性差异（P＜0.05），呈现明显的时间效应关系。结论 GC-3在体外可明显抑制HeLa细胞的增殖和诱导HeLa细胞凋亡，PARP-1在该细胞分子凋亡机制中起重要作用。
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PARP-1:一个肿瘤治疗的新靶点
聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是存在于真核细胞中催化聚ADP核糖化的细胞核酶,他参与的聚ADP核糖化是真核细胞中蛋白质翻译后的重要修饰方式之一.PARP-1在DNA修复和细胞凋亡中发挥至关重要的作用.PARP-1的缺失使细胞对DNA损伤因子易感,可能参与肿瘤的发生.体外和体内研究表明抑制PARP-1则可降低DNA修复功能,增强放疗和化疗对肿瘤的治疗效果.目前PARP-1抑制剂已进入抗肿瘤药物Ⅰ期临床研究,PARP-1有望成为肿瘤治疗的一个新靶点.
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PARP-1 mRNA表达在急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用
急性胰腺炎肺损伤(acute pancreatitis associated-lung injury,APALI)是重症急性胰腺炎(SAP)常见胰外并发症,也是SAP患者早期病死的主要原因~([1]),其发病机制至今仍未完全阐明.研究表明,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)在众多生物学过程中发挥广泛的生理作用,与多种炎症疾病如脓毒症、胰腺炎并发的多器官功能障碍等的发生发展有关~([2-4]).本实验观察PARP-1 mRNA在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织中的表达,并探讨其在肺损伤发病机制中的作用.
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PARP-1与前列腺癌临床因素的相关性及生存分析
目的 本研究通过分析多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达差异,探讨其与其他临床指标的相关性,并分析与前列腺癌预后的相关性.方法 检测126例前列腺癌组织及83例前列腺增生组织中PARP-1的表达情况,比较分析实验组与对照组之间PARP-1表达的差异,以及实验组PARP-1表达水平与其他临床指标的相关性,并分析PARP-1与前列腺癌预后的相关性.结果 前列腺癌组PARP-1的阳性表达率(38.9％)显著高于前列腺增生组(10.8％)(P＜0.05).PARP-1表达水平与其他临床病理指标的相关性分析结果显示,PARP-1表达水平与临床分期密切相关(P＜0.05);但与年龄及Gleason评分无明显相关性(P＞0.05).生存分析显示,PARP-1蛋白表达水平高的前列腺癌患者预后较低表达水平的患者差(P＜0.05).结论 PARP-1在前列腺癌组织中的表达较前列腺增生组织中明显增高,且随着临床分期的增高而表达增强,其高表达的患者预后较差,表明其可能在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用.
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低剂量电离辐射诱导的EL-4细胞PARP-1蛋白表达及其意义的研究
目的:研究低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中PARP-1基因表达,为探讨低剂量电离辐射诱导适应性反应的DNA损伤修复机制提供实验依据.方法:将EL-4细胞分设空白对照组、较大剂量照射组(D2),其照射剂量分别为1、2和3 Gy以及诱导适应性反应照射组(D1+D2),其照射剂量分别为75 mGy+1 Gy、75 mGy+2 Gy和75 mGy+3 Gy,应用流式细胞仪和RT-PCR方法分别检测PARP-1基因蛋白及其转录水平表达.结果:单纯照射组PARP-1蛋白水平较对照组显著升高(P<0.01),预先给予75 mGy照射诱导的适应性反应组其PARP-1蛋白水平较大剂量照射组显著升高,P<0.01.PARP-1 mRNA水平表现出相同的变化.结论:PARP-1蛋白在诱导适应性反应照射组处于高表达,说明其在低剂量电离辐射诱导适应性反应中可能起重要作用.
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N-1位含取代苄基的喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮类PARP-1抑制剂的设计、合成及活性评价
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 [poly(ADP-ribose) polymerase-1,PARP-1]是一种蛋白修饰酶,通过使底物蛋白发生聚ADP核糖化,参与损伤DNA的修复过程,是研制新型抗肿瘤药物的潜在靶点.本文设计合成了一系列新结构的N-1位苄基取代的喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮类衍生物,评价了化合物7a～7e、8a～8f、9a～9c和10a～10c对PARP-1酶的抑制活性,发现了9个化合物对PARP-1酶抑制活性IC50值在4.6～39.2 μmol·L-1水平.为了阐述构效关系,并为进一步结构改造提供依据,采用分子对接方法探索了上述化合物与PARP-1的结合方式.
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氮杂吲哚类PARP-1抑制剂的合成及活性评价
PARP-1通过催化ADP-核糖单元(ADP-ribose)从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)转移至各种底物蛋白上,参与损伤DNA的修复过程,是潜在的新机制的抗肿瘤药物靶标.本文设计合成了新结构氮杂吲哚类目标化合物16个,获得了对PARP-1具有抑制活性的化合物8个,其中2-位为脂环胺取代的氮杂吲哚对PARP-1和PARP-2均有抑制活性.
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3-(2-氧代-2-取代)乙酰氨基苯甲酰胺类PARP-1抑制剂的设计、合成及活性评价
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 [poly(ADP-ribose)polymerase-l,PARP-1]能够催化ADP-核糖单元从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)转移至受体蛋白,参与单链受损DNA的修复,是一种潜在的抗癌药物靶点.本文设计并合成了3-(2-氧代-2-取代)乙酰氨基苯甲酰胺类化合物16个,评价了所有目标化合物对PARP-1酶的抑制活性.其中6个化合物对PARP-1显示出了一定的抑制活性(0.23～5.78 μmol·L-1).初步探讨了该类化合物的构效关系,利用分子对接方法探索了目标化合物与PARP-1的作用模式,为进一步结构改造提供了依据.
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PARP-1抑制剂研究进展
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)是存在于真核细胞中具有显著生物活性的核酶.在动物模型中,该酶的抑制剂为多形式的再灌注损伤、炎症和神经毒性引起的组织伤害提供了重要的保护作用.因此,用药物抑制该酶能够用于炎症、神经退行性疾病以及与该酶激活有关的其他疾病的治疗.基于该酶结构的药物设计是创新药物研究的重要策略.本文简要介绍PARP-1作为治疗靶点的基本原理,并综述基于不同结构骨架的PARP-1类抑制剂的合成研究进展.
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PARP抑制剂的作用机制和研究进展
在碱基切除修复途径中,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]是一种关键的DNA修复酶.PARP具有DNA损伤应答、调控细胞凋亡、维持基因组稳定等作用.PARP抑制剂通过影响PARP功能从而阻碍DNA修复过程,使同源重组修复缺失的细胞死亡.近年来,PARP作为抗肿瘤治疗的热门靶点得到广泛研究.目前,olaparib是首个作为PARP抑制剂成功上市的药物,rucaparib和niraparib也将相继上市.本文针对PARP-1及PARP-1抑制剂的作用机制和活性较好的几类PARP抑制剂结构进行阐述,对目前处于临床的PARP抑制剂研究进展做一介绍并展望PARP抑制剂发展前景和需要解决的问题.
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沉默PARP-1对卵巢癌上皮细胞耐药性及肿瘤相关生物学行为的影响
目的 研究探讨沉默聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)后,卵巢癌上皮细胞对顺铂药物的敏感性及相关生物学行为的变化.方法 以人卵巢癌细胞株A2780为研究对象,采用小RNA干扰技术,沉默PARP-1的表达后,采用Western blot实验、RT-PCR实验、MTT实验等观察PARP-1蛋白、mRNA的表达及细胞存活率的变化趋势,采用方差分析进行比较.结果 PARP1小RNA干扰序列(PARP1-siRNA)转染组PARP-1 mRNA表达量明显低于A2780组和阴性对照组接种转染组(NC-siRNA),3组PARP-1 mRNA表达量分别为(45.22±3.99)％、(24.13±5.24)％、(46.28±6.19)％(P＜0.05);PARP1-siRNA转染组PARP-1蛋白表达IOD值明显低于A2780组和NC-siRNA转染组(P＜0.05);与0μmol/L相比,5μmol/L和10 μmol/L组的PARP-1蛋白表达IOD值明显降低(P＜0.05);随着顺铂浓度的增高,PARP1-siRNA转染组的细胞存活率下降的速度快.结论 PARP1-siRNA转染明显下调入卵巢癌细胞株A2780的PARP-1表达后,该细胞对顺铂药物的敏感性增强,细胞的存活率明显下降.
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美金刚对沙鼠脑缺血后海马PARP-1的表达及细胞凋亡的影响分析
目的 研究美金刚对沙鼠脑缺血后海马PARP-1的表达及细胞凋亡的影响.方法 采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作沙鼠局灶性脑缺血模型;运用Western blot技术观察PARP-1、caspase-3的表达,在电镜下观察海马区细胞线粒体结构的变化.结果 PARP-1、caspase-3的表达随缺血再灌注的时间延长增强,线粒体结构损伤逐渐加重,美金刚干预组后PARP-1、caspase-3的表达明显减弱,线粒体结构损伤减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 美金刚可能通过减弱PARP-1caspase-3的表达,抑制细胞凋亡,保护神经元.
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PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响
目的 探讨PARP-1抑制剂AG014699对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及凋亡的影响.方法 ①采用MTT 法测定AG014699在不同浓度、不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖作用的影响；②用流式细胞仪测定AG014699在50μ mol/L浓度下对人卵巢癌细胞株SKOV3作用24h后对细胞周期及凋亡的影响.结果 ①MTT测定:在24、48、72h时AG014699在10μmol/L分别测得的OD值与对照组相比,P＜0.05,有统计学差异；②流式细胞仪测定:AG014699在50μmol/L浓度下对SKOV3作用24h能明显改变细胞的周期分布,诱导细胞凋亡.结论 AG014699能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖并诱导其凋亡.
关键词： PARP-1 AG014699 人卵巢癌细胞株SKOV3 细胞周期 凋亡 -
两种PARP-1抑制剂对羟基喜树碱诱导ECA-109细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究两种PARP-1 抑制剂NU1025 和AG14361 在羟基喜树碱诱导的ECA-109 细胞增殖及凋亡中的作用.方法 常规培养ECA-109 细胞,经HCPT、HCPT 和NU1025、HCPT 和AG14361 处理24 h 后,采用四甲基偶氮唑蓝比色法 观察细胞的增殖情况,通过流式细胞术Annexin V-FITC/PI 双染法分析细胞凋亡情况,通过彗星实验评价DNA 损伤程度 变化.结果 相比于对照组和HCPT 组,HCPT 和NU1025、HCPT 和AG14361 联用均显著抑制了细胞的增殖、促进了细 胞凋亡、加重了DNA 损伤,差异有统计学意义(P ＜ 0.05);且HCPT 和NU1025 联用组较HCPT 和AG14361 联用组作 用更强,两者比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 PARP-1 抑制剂NU1025 和AG1436 均可通过抑制PARP-1 活 性,进而阻碍细胞DNA 损伤修复,增强ECA-109 细胞对于抗癌药物HCPT 的药敏性,且NU1025 具有更低细胞毒性和更 强增敏作用的优势,可为食管癌的临床治疗提供一个新的靶点.
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PARP-1在甲醛诱导的支气管上皮细胞DNA损伤修复及凋亡中的作用
目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶-l(poly (ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)蛋白在不同浓度甲醛诱导的支气管上皮(HBE)细胞DNA损伤反应中的作用,探索甲醛致癌的机制.方法 用免疫印记(Western blot)法检测蛋白的表达;用免疫共沉淀法检测不同蛋白间的相互结合;采用化学抑制剂验证PARP-1蛋白与DNA损伤修复的关系.结果 细胞毒性检测结果显示,HBE细胞经不同浓度甲醛染毒4h后,各浓度组与对照组相比细胞存活率没有显著差异,染毒24 h后,80和160 μmol/L浓度组与对照组相比细胞存活率差异显著(P＜0.05).10μmol/L甲醛可诱导PARP-1和XRCC-1蛋白水平显著增高.80 μmol/L甲醛可诱导124 KD分子量的PARP-1蛋白水平显著减少,而89 KD分子量的PARP-1蛋白水平显著增加,XRCC-1蛋白水平无明显改变.免疫共沉淀结果显示10 μmol/L甲醛可引起PARP-1和XRCC-1蛋白结合增加,而80 μmol/L甲醛染毒后PARP-1和XRCC-1蛋白结合没有明显改变.彗星试验结果显示10 μmol/L甲醛染毒4h可以诱导HBE细胞尾部DNA百分含量显著增高,撤除甲醛2h后HBE细胞尾部DNA百分含量与对照组相比没有显著差异.抑制PARP-1后,与HBE组相比,甲醛诱导的尾部DNA百分含量显著增高,DNA修复能力明显减低.结论 PARP-1通过招募XRCC-1蛋白到DNA损伤点来介导低浓度甲醛诱导的DNA损伤的修复,并可能参与调控高浓度甲醛诱导的细胞凋亡.
