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联合应用PARP-1与Caspase-3抑制剂对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响
目的:探讨联合应用多聚腺嘌呤二核苷酸核糖聚合酶-1 (PARP-1)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:120只成年健康SD大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、PARP-1抑制剂组(C组)和联合用药组(D组),每组30只.以Allen's打击法制备大鼠脊髓损伤模型,每组分别于造模后1d、3d、7d取5只大鼠行BBB评分,处死后利用免疫组化方法检测损伤部位脊髓内PARP-1、凋亡诱导因子(AIF)、Caspase-3及Bcl-2的表达;各时间点各组剩余大鼠处死后利用Western blotting检测PARP-1、Caspase-3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测PARP-1、AIF、Caspase-3及Bcl-2的mRNA水平,采用原位末端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋亡情况.结果:造模后1d时B、C、D组大鼠BBB评分均为0分;3d时三组间的评分无统计学差异;7d时D组及C组明显高于B组,且D组高(P＜0.05).免疫组化及Western blotting结果显示,脊髓损伤后1～7d,B组脊髓组织中PARP-1、AIF及Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱(P＜0.05);与B组比较,D组及C组的PARP-1、AIF、Caspase-3表达均显著降低,且D组低(P＜0.05);而D组及C组的Bcl-2表达显著高于B组,且D组高(P＜0.05).实时荧光定量PCR检测各目的基因表达水平与其蛋白水平一致.TUNEL结果显示,B组脊髓损伤后3d凋亡细胞多,7d时数量减少,但仍保持在较高水平(P＜0.05);D组及C组凋亡细胞指数均显著低于B组,且D组低(P＜0.05).结论:联合应用PARP-1抑制剂3-AB和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK可有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,其机制可能与PARP-1、AIF、Caspase-3的表达抑制及Bcl-2的表达上调有关.
关键词： 脊髓损伤 PARP-1抑制剂 Caspase-3抑制剂 凋亡诱导因子 大鼠 -
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂药效团模型的建立
建立聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]抑制剂的药效团模型,探讨其与PARP-1的作用机制.利用Catalyst软件系统,选择具有较高体外抑制活性的8种结构类型的38个化合物作为训练集,经构象分析,分子叠合等过程构建出药效团模型.结合PARP-1的作用机制等因素,得到一个含有两个氢键接受体和两个芳香疏水性基团的PARP-1抑制剂药效团模型.本文建立的药效团模型的可靠性较高(RMS=0.46,Correl=0.91,Weight=2.06,Config=15.97),不但给出了作用位点的相关信息,而且具有良好的活性预测能力,有助于新型结构的PARP-1抑制剂的设计.
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基于药效团模型的乙酰胆碱酯酶、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1双靶点分子设计研究
本研究建立了乙酰胆碱酯酶(AChE)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂的药效团模型,设计、筛选了双靶点活性分子,并验证了其抑制活性,探讨了多靶点分子的设计策略.利用Catalyst计算机辅助药物设计软件系统,以叠合程度和构象能进行筛选,得到具有AChE、PARP-1抑制活性的双靶点结构.通过计算机预测目标分子的理化性质,得到5个优选的氨基噻唑类衍生物.将匹配的优选化合物合成后进行对AChE和PARP-1的抑制活性的实验验证.其中化合物3对AChE的抑制活性IC50为(0.337±0.052) tmol·L-1,而在1 μmol.L-1浓度下对PARP-1的抑制率为24.6％.证明药效团模型在多靶点药物设计和筛选中能起到减少盲目性和加快设计开发的作用.
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PARP-1抑制剂研究进展
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)是存在于真核细胞中具有显著生物活性的核酶.在动物模型中,该酶的抑制剂为多形式的再灌注损伤、炎症和神经毒性引起的组织伤害提供了重要的保护作用.因此,用药物抑制该酶能够用于炎症、神经退行性疾病以及与该酶激活有关的其他疾病的治疗.基于该酶结构的药物设计是创新药物研究的重要策略.本文简要介绍PARP-1作为治疗靶点的基本原理,并综述基于不同结构骨架的PARP-1类抑制剂的合成研究进展.
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三阴乳腺癌的新治疗进展
近年在发达国家,乳腺癌的死亡率显著降低,但几乎所有的生存受益均来自于激素受体或HER-2受体阳性的乳腺癌患者.三阴乳腺癌是指雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)、表皮生长因子受体2 (HER 2) 均为阴性的乳腺癌,约占所有乳腺癌的15%,虽对化疗敏感但较激素受体阳性及HER-2受体阴性的乳腺癌预后差.它是一种高度异质性的肿瘤且不能从内分泌或曲妥珠单抗治疗中获益,故化疗为其唯一的全身治疗手段.新的临床研究结果显示,在紫杉类/蒽环类为基础的传统化疗方案的基础上加用希罗达能显著改善三阴乳腺癌患者的无复发生存期 (RFS) 和总生存期 (OS).三阴乳腺癌与BRCA1突变之间有着一定的联系,尽管其机制未明但可以此为突破点作为治疗选择.多聚ADP核糖聚合酶抑制剂BSI-201和olaparib、抗血管生成因子及表皮生长因子抑制剂在三阴乳腺癌的治疗中均显示了较高的有效率.关注这些新的治疗进展将有助于发现新的治疗途径及寻找出标准的治疗三阴乳腺癌的化疗方案.
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PARP-1抑制剂下调SIRT1基因表达诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制
目的 观察PARP-1抑制剂Olaparib对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制.方法 常规培养A549细胞,分别给予不同剂量Olaparib(0、5、10、20、50μmol/L)和(或)SIRT1激动剂SRT1720(1μmol/L)、SIRT1抑制剂EX527(1μmol/L)处理24 h,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞SIRT1及凋亡相关基因表达.结果 Olaparib处理A549细胞24 h后,细胞存活率、SIRT1及抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达逐渐降低,凋亡率及促凋亡基因Bax、Caspase-3蛋白表达逐渐增加,呈剂量依赖性(P<0.05).单独给予EX527处理A549细胞能够模拟Olaparib的上述作用(P<0.05),但SRT1720和Olaparib联合组能够拮抗Olaparib的上述作用(P<0.05).结论 PARP-1抑制剂Olaparib通过下调SIRT1基因表达抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡.
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具有抗肿瘤作用的PARP-1抑制剂的研究进展
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP)-ribose polymerase(PARP)]是与单链DNA损伤修复密切相关的一种核酶,其中PARP-1亚型承担了90％以上的修复任务.在肿瘤细胞中DNA损伤修复通路异常活跃,因此,抑制PARP-1的活性可以抑制肿瘤的生长.近年来,已有多个PARP-1的抑制剂进入临床研究阶段,PARP-1抑制剂已成为抗肿瘤药物研发的热点之一.本文根据PARP-1抑制剂的结构特点对其相关研究进行综述.
关键词： 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 PARP-1抑制剂 DNA损伤修复 抗肿瘤 -
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂耐药性研究进展
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂可选择性杀死同源重组功能缺陷的肿瘤细胞,而对正常细胞的危害较小,这是“合成致死”理论应用于临床的典型范例.尽管PARP抑制剂作为一种新型靶向药物,极具应用潜力,但其临床应用也面临诸多问题,其中耐药性的产生被认为是限制PARP抑制剂临床应用的重要原因之一.简介PARP-1的功能及PARP-1抑制剂研究进展,着重综述PARP-1抑制剂耐药的临床表现、可能的发生机制及逆转策略,为PARP-1抑制剂的临床合理应用提供参考.
关键词： 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 PARP-1抑制剂 耐药机制 耐药逆转 -
PJ34对A549/DDP细胞耐药相关基因表达的影响
目的 探讨PJ34对肺腺癌顺铂耐药(A549/DDP)细胞多药耐药相关基因的影响.方法 将A549/DDP细胞分为对照组、顺铂单药组、PJ34单药组、PJ34联合顺铂组,RT-PCR法检测细胞内肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TOPO-Ⅱα)mRNA转录水平.结果 除了TOPO-Ⅱα外,其余四种耐药相关基因mRNA在A549/DDP细胞内的转录水平明显高于A549细胞(P＜0.05).经PJ34处理后的A549/DDP细胞内MRP、P-gp mRNA转录水平下降(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性.结论 LRP、MRP、P-gp、GST-π可能参与了A549/DDP细胞对顺铂的继发耐药,PJ34可能通过下调MRP、P-gp mRNA转录水平而间接增加顺铂对DNA的损伤.
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PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用
目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.
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PARP-1抑制剂PJ34对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响
[目的]探讨PARP-1抑制剂PJ34干预治疗对大鼠局灶脑缺血/再灌注损伤的影响. [方法]用线栓法建立局灶脑缺血/再灌注模型(Ⅰ组),分别经左侧侧脑室注射PJ34(Ⅱ组)、生理盐水(Ⅲ组)和假手术组(Ⅵ组);通过Klenow标记及TUNEL染色技术检测鼠脑中单、双链DNA断裂,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中PARP-1蛋白的表达,同时测定脑组织及血浆中TNF-α、IL-6及IL-8含量变化和细胞凋亡情况. [结果]与Ⅰ组比较,Ⅲ组鼠脑缺血侧DNA单、双链断裂,PARP-1的表达均无明显差异,Ⅱ组缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,PARP-1的表达明显减少,TNF-α、IL-6及IL-8含量和凋亡减少.[结论]PARP-1抑制剂PJ34对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用.
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抗肿瘤药物PARP-1抑制剂及其放射性核素标记的研究进展
聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶( poly(ADP-ribose) polymerase,PARP)是当今癌症治疗的一个新靶点.PARP不但能修复DNA损伤和调控转录,维持细胞内环境与基因组稳定,调节细胞存活和死亡过程,同时也是肿瘤发展和炎症发生过程中的主要转录因子.抑制PARP活性能降低肿瘤细胞的DNA修复功能,增强其对DNA损伤因子的敏感性,从而提高肿瘤放疗和化疗疗效.大量的研究表明,无论单一用药或联合化疗药物,PARP抑制剂都显示了在抗肿瘤治疗领域的潜力.本文综述了PARP-1抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展.根据PARP-1抑制剂的发展阶段进行分类,着重介绍几种有代表性的,处于临床试验阶段,且具有潜在临床应用价值的PARP-1抑制剂.正电子发射计算机断层扫描(Positron Emission Tomograph,PET)利用组成人体主要元素的短半衰期核素作示踪剂,在分子水平上,无创伤、定量、动态地观察代谢物或药物在人体内的各种变化,是当代先进的影像诊断技术,本文也将简单介绍用放射性核素标记PARP-1抑制剂的研究进展.
