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大肠癌耐药基因的表达及临床意义
目的:为研究大肠癌多药耐药基因(MDR-1)表达与临床耐药的关系.方法:应用逆转录-多聚酶链式反应技术(RT/PCR)和免疫细胞化学染色法检测了31例大肠癌患者(初治原发癌19例;复治转移癌12例)的NDR-1 mRNA水平和多药耐药蛋白(P-170)的表达,并对两种方法进行了比较.结果:初治原发性大肠癌19例中MDR-1 mRNA基因阳性表达15.79%,P-170阳性为15.7%;而复发转移癌12例中,MDR-1mRNA基因阳性表达66.67%,而P-170阳性为58.33%.结论:复发性转移癌比初治原发癌具有更普遍的抗药性,且主要是获得性抗药,MDR-1的基因和蛋白质两种检测方法具有一定的一致性,以RT-PCR方法具有更强的敏感性,MDR-1基因表达可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标.
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豆根管食通口服液对人食管癌细胞多药耐药基因糖蛋白P-170表达的影响
目的:观察豆根管食通口服液对人食管癌109细胞多药耐药基因糖蛋白P-170表达的影响.方法:通过实验分组,用MTT法(四甲基氮唑蓝法)测定药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用,用免疫组化法测定药物对肿瘤细胞P-170的作用.结果:单用豆根管食通100,150,200 mg·mL-1组A值明显低于单用氟尿嘧啶(5-Fu)组,其他组差别不大;豆根管食通口服液200mg·mL-1组及豆根管食通口服液100 mg·mL-1联合25μg·mL-15-Fu组P-170表达均较其他低浓度组低.结论:豆根管食通口服液对人食管癌109细胞增殖有明显的抑制作用,与药物浓度呈正相关;高浓度豆根管食通口服液可明显降低人食管癌细胞P-170的表达.
关键词： 豆根管食通口服液 人食管癌109细胞系 多药耐药基因 免疫组化法 -
中药柴贝止痫汤对海人酸致痫模型大鼠脑组织中P-糖蛋白和MDR1表达的影响
目的:观察柴贝止痫汤、卡马西平、柴贝止痫汤与卡马西平联用3种不同干预对海人酸致痫模型大鼠P-糖蛋白(P-gp)和MDR1表达的影响.方法:采用侧脑室注射海人酸法建立癫痫持续状态后慢性难治性癫痫大鼠模型.随机分为模型组、西药组、中药组、中西药组,另设正常组、假手术组.西药组、中药组、中西药组分别予卡马西平、柴贝止痫汤、柴贝止痫汤联合卡马西平治疗;正常组、假手术组、模型组予0.9％氯化钠溶液,持续干预2个月.干预结束后,摘取大鼠新鲜海马组织,Western blot及Real-time PCR法检测各组大鼠海马P-gp及编码基因MDR1a/1b mRNA水平.结果:与假手术组比较,模型组和西药组P-gp表达、MDR1a/1b mRNA转录水平显著升高(P＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,中药组和中西药组P-gp表达降低(P＜0.05).与西药组比较,中药组和中西药组P-gp表达显著降低(P＜0.05)、中西药组MDR1a/1b mRNA转录水平显著降低(P.＜0.05).结论:柴贝止痫汤能够抑制海人酸致病模型大鼠P-gp表达,这可能是通过对MDR1a/1b mRNA转录水平的影响实现.
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水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响及诱导凋亡机制探讨
目的:探讨液氮快速冻融法水蛭提取物(HE)对人肝癌HepG2细胞的化疗药物敏感性影响及诱导凋亡的机制.方法:以5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)为对照,MTT法检测HE与5-FU或AMD联合用药对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定细胞凋亡;采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法、Westernblot法检测HepG2细胞经HE处理后多药耐药基(MDR1)、Bax、Caspase3基因的mRNA及蛋白表达变化.结果:HE可增强5-FU、ADM对HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导细胞凋亡(P＜0.01);可显著下调HepG2细胞MDR1(P＜0.01)和上调Caspase3mRNA及蛋白表达(P＜0.01).结论:HE可体外诱导HepG2细胞凋亡,并提高HepG2细胞对化疗药物5-FU的敏感性.其分子机制与下调MDR1表达,上调Caspase3表达有关.
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食管癌中MDR基因表达及其临床意义
目的 探讨食管癌患者肿瘤组织中多药耐药(MDR)基因表达及其在临床上的应用价值.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测50例食管癌组织中的mdr-1基因表达水平,同时检测10例正常食管组织中的mdr-1表达水平.结果 mdr-1基因在食管癌高、中、低分化之间的表达水平具有极显著差异(P<0.01和P<0.001),癌与正常组织中有极显著差异(P<0.001);在不同年龄、性别及临床分期之间无显著差异(P>0.05).结论 mdr-1基因的检测可预测患者对化疗的敏感性,使化疗个体化,也可以评估患者的预后.
关键词： 食管癌 多药耐药基因 逆转录-聚合酶链反应 -
小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性
目的 研究携带多药耐药基因(MDR1)小干扰RNA(siMDR1)的真核表达质粒对L2RYC卵黄囊瘤细胞株中MDR1基因及蛋白表达的抑制效果,并观察siMDR1作用前后细胞对长春新碱(VCR)耐药性的变化.方法 设计4对特异性针对大鼠MDR1的siRNA序列,分别与pSES-HUS质粒重组获得pSES-siMDR1真核表达质粒,通过脂质体转染到L2RYC细胞中,用实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后MDR1的mRNA及蛋白表达.转染后的细胞中再加入不同浓度的VCR,用MTT法检测吸光度,并计算出各组半数抑制浓度(IC50)值.结果 4对siMDR1分别转染均能不同程度地抑制L2RYC细胞MDR1基因表达,pool组MDR1的相对表达量低(0.396±0.080)；MDR1蛋白表达也能被有效抑制；经不同siMDR1转染的细胞加入VCR后细胞增殖被抑制,ICso降低,pool组显著为(1.632±0.423)mg/L,与其余各组比较有明显差异(P＜0.05).结论 pSES-siMDR1真核表达质粒能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达,MDR1表达被抑制后L2RYC细胞对VCR的敏感性增加.
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细胞色素P4503A基因表达调控及与抗癫痫药物的关系
细胞色素P4503A酶(Cytochrome P450 3A enzymes)在外源性化合物尤其是药物代谢中起重要作用,临床中约有50%的药物经由CYP3A代谢,其中包括多种抗癫痫药物.本文概述了CYP3A的基因家系的结构、分布和调控表达的异同,CYP3A与难治性癫痫患者药物难治性的可能机制--多药耐药基因和P-糖蛋白的关系,CYP3A4基因表达上的差别与药物作用强度和持续时间、急性毒性的相关性.
关键词： 细胞色素P4503A 基因表达调控 多药耐药基因 抗癫痫药物 -
多药耐药蛋白P-gP170在胃癌中的表达
肿瘤对化疗药物的耐药性,常常影响化疗药物的效果,其耐药机理之一是由多药耐药基因(mdr-1)表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp 170)增高介导的多药耐药性(multidrugresistance,MDR)[1,2].本文应用免疫组化法检测了133例原发性胃癌P-gp170的表达,探讨其表达与组织学类型、生物学行为间的关系.
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原代骨髓基质细胞层对逆转录病毒载体介导的造血干/祖细胞基因转导的支持效应
为探讨建立原代骨髓基质细胞层的方法并观察基质接触对造血干/祖细胞(HSC/HPC)基因转移的影响,采用Ficoll-Hypaque分离成人骨髓单个核细胞(MNC),用基质细胞培养液培养,传代4次以建立原代骨髓基质细胞层.将经细胞因子预刺激的造血干/祖细胞接种到经辐照处理的基质细胞层上,进行逆转录病毒介导的多药耐药基因(mdr1)转导,以半固体集落培养和聚合酶链反应法(PCR)检测长春新碱(VCR)抗性集落数和mdr1基因扩增片段以测定转导效率.结果表明:原代骨髓基质细胞培养传代4-6周形成混合贴壁细胞层,主要由成纤维细胞组成.集落法和PCR法检测显示基质接触能提高骨髓造血干/祖细胞基因转导效率2.1-3.3倍,对逆转录病毒介导的造血干/祖细胞基因转导具有明显的支持效应.结论:基质细胞接触联合细胞因子作用可提高逆转录病毒介导的造血干/祖细胞基因转导效率.
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地西他滨对全反式维甲酸耐药细胞株NB4-R2的增殖抑制及诱导凋亡作用研究
本研究探讨地西他滨(DAC)对全反式维甲酸耐药细胞株NB4 -R2的增殖抑制及诱导凋亡作用.应用细胞增殖及毒性检测法(新型四唑单钠盐法)观察0.01 - 0.5 μmol/L DAC作用于NB4-R2细胞24、48及72 h后的细胞增殖活力变化；PI单染及AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术观察不同浓度DAC(0.05 -5 μmol/L)对NB4-R2处理48 h后的细胞凋亡率；RT-PCR法检测编码P糖蛋白(P-gp)的多药耐药基因1(MDR1)转录水平的变化.结果表明,0.01 -0.5 μmol/L DAC可抑制NB4-R2细胞增殖,并呈现明显的量-效与时-效关系；作用48及72 h后的IC50分别为0.089和0.064 μmol/L;0.05 -5 μmol/L DAC以浓度依赖的方式诱导NB4-R2细胞凋亡,下调MDR1基因表达.结论:低浓度DAC( ＜0.5 μmol/L)对NB4-R2细胞有增殖抑制作用,较高浓度DAC(1、5μmol/L)可以诱导NB4 -R2细胞凋亡,同时使MDR1表达下调.
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恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系
为了探讨多药耐药(mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系,采用甲基化敏感的Hpa Ⅱ酶切结合竞争性定量PCR检测54例急性白血病(AL)和9例多发性骨髓瘤(MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游-110和-50 bp处两个CCGG位点(Ⅰ区和Ⅱ区)的甲基化率;半定量RT-PCR检测mdr1基因的表达水平.结果显示Ⅰ区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关,Ⅰ区比Ⅱ区相关密切(r分别为0.64和0.40).低甲基化组(n=36)mdr1高表达率显著增高(P＜0.001).与化疗敏感组(n=8)相比,耐药组(n=16)Ⅰ区(P=0.05)、Ⅱ区(P＜0.05)和总甲基化率(P＜0.05)均减低.与未化疗组(n=36)相比,化疗后组(n=14)Ⅰ区和总甲基化率均减低(P＜0.05),Ⅱ区甲基化率也减低,但无统计学意义(P＞0.05).化疗后组随甲基化率减低,mdr1表达升高,但尚无统计学意义(P=0.06).结论:AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游-110和50处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关,且与-110处关系更密切.化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低.化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关.
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白血病耐药相关细胞信号转导通路研究进展
白血病是恶性血液病，化疗在治疗中占据着不可替代的地位。化疗可以使多数患者获得缓解，甚至治愈，但终仍有大部分患者因耐药所致化疗失败而死亡。白血病耐药类型大致可分为内源性和获得性，前者是白血病治疗前就存在对某种或多种化疗药物无反应性，后者则是化疗诱导的耐药性［1］。根据耐药谱不同，又可分为单药耐药（ primary drug resistance ，PDR）和多药耐药（multidrug resistance，MDR）。 PDR只对单一药物耐药而对其他化疗药物仍保持敏感；MDR又称为多向性耐药（ pleiotropic drug resistance ），即对多种结构、功能及作用机制均不同的化疗药物产生交叉耐受。 MDR发生与多种因素有关，涉及白血病细胞的多药耐药基因（ MDR1）及其编码的糖蛋白（ P-gp）、多药耐药相关蛋白（ MRP1-6）、谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH ）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）、肺耐药蛋白（LRP）、热休克蛋白（ HSP）、金属硫蛋白（ MT）、O6烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（ O6 AGT）、胸苷酸合成酶（ TS）、二氢叶酸还原酶（ DHFR）等。白血病耐药的机制非常复杂，对抗白血病耐药的方法也很多，如采用联合用药改进化疗方案、应用耐药逆转药、免疫调节、基因治疗。肿瘤细胞表达耐药相关蛋白和产生耐药，受到信号转导通路调控，主要涉及丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinase，MAPK）、蛋白激酶C（PKC）、细胞凋亡相关蛋白、NF-κB家族蛋白、磷脂酰肌醇3激酶（ phosphatidy1inositol3-ki-nase，PI3K）、热休克蛋白、Ras蛋白等。
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肾移植患者他克莫司血药浓度与多药耐药基因C3435T多态性的关系
他克莫司是广泛应用于器官移植术后抗免疫排斥反应的一种重要免疫抑制剂[1],但是其血药浓度显著的个体差异和狭窄的治疗范围是他克莫司在临床应用中的重要影响因素[2].
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多药耐药基因多态性和单倍体对环孢素A血药浓度的影响
目的探讨中国健康志愿者中多药耐药基因(MDR1) 12外显子C1236T、21外显子G2677T/A和26外显子C3435T多态性及3个位点单倍体连锁不均衡性对环孢素A(CsA)药代动力学特性的影响.方法高效液相色谱法(HPLC)测定20名健康男性单次口服CsA 500 mg后,24 h中不同时间点的血药浓度.采用聚合酶链反应(PCR)结合基因测序法测定3个位点的基因多态性和单倍体类型.结果 20名男性健康志愿者中,C1236T位点1名为CC型,8名为CT型,11名为TT型;G2677A/T位点4名为GG型,7名为GT型,4名为AT型,5名为TT型;C3435T位点5名为CC型,11名为CT型,4名为TT型;MDR1的C1236T和G2677A/T的基因多态性与峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0-inf)差异均无统计学意义(均P>0.05),C3435T的基因多态性与Cmax无相关性(P>0.05),而与AUC0-inf相关(P<0.05).CC型、CT型和TT型的Cmax分别为2 124.7±179.4 ng/ml、1 934.2±372.8 ng/ml和1 765.2±415.6 ng/ml;AUC0-inf分别为13 922.4±2 881.5 ng/h-1·ml、11 511.8±2 192.1 ng/h-1·ml和8 514.9±1 063.4 ng/h-1·ml; 至少含有1个C等位基因的基因型(CC型和CT型),二者的AUC0-inf比TT型增高49%.单倍体分析表明,26与12和21外显子间存在单核苷酸多态性的连锁不均衡性,不同单倍体类型对CsA药动力学特性无影响(P>0.05).结论 MDR1 C3435T的多态性可能是口服CsA后,生物利用度变异大的影响因素.
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限制性内切酶结合竞争聚合酶链反应定量检测在多药耐药基因甲基化状态中的应用
目的建立定量检测多药耐药基因(MDR1)甲基化状态的方法.方法在MDR1基因启动子区含甲基化位点的-102～+186 bp片段间设计1条正义引物和2条反义引物,采用不同的反义引物,经3次聚合酶链反应(PCR)获得较目的片段缺失30 bp的竞争内标DNA片段,以Pbluescriptsk+为载体构建竞争内标DNA质粒;待检基因组DNA经甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ消化后与竞争内标DNA竞争扩增MDR1基因; PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析仪扫描,目的片段量等于反应体系中竞争内标量乘以目的片段与竞争内标片段的光密度比值, HpaⅡ酶切与未经酶切标本所得目的片段量的比值为甲基化率.结果倍比稀释的基因组DNA与佳量竞争内标共扩增MDR1基因启动子区目的片段,两扩增产物量的比值与基因组DNA量呈显著正相关,相关系数r=0.992,P<0.001.结论本方法用于MDR1 基因甲基化定量检测,操作相对简单,定量准确可靠,适用于临床研究中大量样本检测.
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体外香菇多糖对顺铂抑制胃癌细胞增殖的促进作用
目的:研究体外香菇多糖(Lentinan)对多药耐药基因表达的影响和促进顺铂抑制胃癌细胞增殖的作用.方法:分别用顺铂(Cisplatin)、香菇多糖和顺铂联合香菇多糖处理SGC-7901胃癌细胞,将其分为4组:对照组(Con组),香菇多糖组(Lender),顺铂组(Cis组)和顺铂联合香菇多糖组(L+C)组.应用RT-PCR检测多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP基因mRNA表达:应用CCK-8试剂盒检测Con组和药物处理组前后的胃癌细胞增殖状态.结果:正常SGC-7901胃癌细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP均表达达mRNA,香菇多糖能显著降低多药耐药基因表达而对细胞增殖无明显影响;顺铂明显增加多药耐药基因表达,同时抑制细胞增殖(P<0.05):香菇多糖联合顺铂作用后,MDR1和MRP1基因表达完全受到抑制,LRP表达显著降低,细胞增殖速度明显低于Con组、Len组和cis组,差异具有统计学意义(10 d:0.54 vs 1.90,1.88,0.92,均P<0.05).结论:香菇多糖联合顺铂后因抑制多药耐药基因表达而显著增强顺铂的抑制细胞增殖作用.
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多药耐药基因在进展期大肠癌中检测及意义
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在消化道较高. 进展期大肠癌根治性效果差,手术切除率只有50%左右,大部分进展期大肠癌术后发生腹腔内复发转移,5a生存率只有23%～30%. 近年腹腔热灌注化疗[1-3]引起国内外学者广泛的关注,对术后腹腔内复发转移的防治具有一定的作用,但多药耐药(Multidrug resistance, MDR)是大肠癌化疗失败的主要原因之一本文对进展期大肠癌MDR检测及临床意义进行综述.
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榄香烯联合化疗治疗荷瘤小鼠
目的:观察榄香烯结合化疗药对荷瘤小鼠的治疗作用,为临床肿瘤的治疗提供理论依据.方法:构建荷瘤小鼠动物模型,肿瘤内注射给药,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测其多药耐药基因(multidrugs resistance gene,mdr1)的表达,同时观察抑瘤率、肿瘤坏死情况和小鼠死亡率.结果:荷瘤组(LT)、化疗组(C)、榄香烯组(E)、化疗药+榄香烯组(CE)的mdr1的表达分别为(100%、100%、16.67%、8.33%),其中E、CE与LT组的mdr1比较有显著性差异(P＜0.05);C、E、CE组抑瘤率(24.3%、29.7%、39.5%)和死亡率(20%、10%、10%)分别与LT组(0、40%)比较有显著性差异(P＜0.05).病理显示,CE组肿瘤坏死明显,大体见肿瘤腐肉状,色晦暗,质软,小鼠生存活跃.结论:榄香烯可降低mdr1的表达并有良好的抗肿瘤的作用,与化疗药合用抗肿瘤作用更佳.
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HIF-1α及耐药蛋白在胰腺癌中的表达及相关性分析
目的:探讨HIF-1α及耐药相关指标P糖蛋白(P-Gp),凋亡相关Bcl-2家族成员Bcl-XL及Bax在人胰腺癌组织中表达的相关性.方法:免疫组化法检测手术切除的胰腺癌组织34例apHlF-1α、P-Gp、Bcl-XL、Bax蛋白表达.结果:34例胰腺癌标本中有26例(76.5%)HIF-1α,28例(82.4%)P-Gp,30例(88.2%)Bcl-XL,26例(76.5%)Bax表达阳性.HIF-1α和P-Gp、Bcl-XL、Bax蛋白表达呈正相关(r=0.471,P=0.005;r=0.443,P=0.009;r=0.510,P=0.002).结论:在胰腺癌组织中HIF-1α、P-Gp、Bcl-XL、Bax蛋白存在高表达;HIF-1α与P-Gp、Bcl-XL、Bax的蛋白表达呈正相关,提示HIF-lα可能通过上调耐药相关蛋白P-Gp、Bcl-XL及Bax蛋白表达在胰腺癌耐药机制中起重要作用.
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多药耐药基因与胰腺癌化疗
胰腺癌是一种临床表现隐匿,发展迅速和预后极差的消化道恶性肿瘤.在西方国家,胰腺癌的死亡率位居第五位,它也是我国消化道恶性肿瘤的三大死亡原因之一.85%的患者就诊时已属晚期,术后5年生存率为1%～5%左右,确诊后平均生存时间不超过六个月.目前化疗仍然是胰腺癌辅助治疗的重要手段之一,但多药耐药现象的存在严重阻碍了化疗药物在胰腺癌治疗中的应用.
