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癌症和遗传到底有多大关系?
癌症越来越常见.有人说癌症和糖尿病一样是富贵病,是因为人均寿命提高了,很多人活到了得癌的岁数.这只是原因之一,此外还有癌症诊断技术的改进,特别是早期诊断技术的改进,使得很多人身体内的癌症被早期发现.总而言之,我们死于癌症的可能性会越来越高.癌症是一大类疾病的总称,其共同点是失去控制的细胞增殖.在正常情况下,我们体内的细胞会增长、分化和死亡,但癌症细胞只增长和分化,并不死亡,这种细胞的永生导致了失控,身体无法承受而走向死亡.
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乙型肝炎病毒表面大蛋白N-糖基化修饰对内质网应激的影响
目的 研究乙型肝炎病毒表面大蛋白(large surface protein of HBV,LHBs)N-糖基化修饰对内质网应激的影响.方法 将LHBs基因进行单点突变,检测野生型LHBs和突变型LHBs对内质网应激和EAED路径相关蛋白表达的影响.检测LHBs与多种泛素链的结合状态,确定LHBs的糖基化基序.结果 LHBs N-糖基化修饰与内质网应激有关.N15S、N123S、N177S位点突变的LHBs可以诱导L02细胞过表达EDEM.野生型LHBs和突变型LHBs均包含有P62衍生的UBA结合域.结论 LHBs N-糖基化修饰可以调节内质网应激.N320K可能是LHBs N-糖基化修饰的关键位点.
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LHBs与C53蛋白相互作用对肝癌细胞生物学功能的影响
目的 研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)与C53蛋白结合后对细胞生物学功能的影响.方法 分别构建pCDNA-LHBs、pC-MV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53的shRNA干扰质粒,转染肝癌细胞系HepG2.采用BrdU标记试验、3H掺入试验和WB实验研究对细胞生物学功能的影响.结果 成功构建pCDNA-LHBs、pCMV-5a-C53和pAdTrack-CMV-C53质粒;BrdU和H3标记试验证实,在HepG2细胞内LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.结论 肝癌细胞系HepG2中LHBs通过与C53蛋白结合促进细胞进入有丝分裂期,进而促进细胞增殖,该作用与Cdk1相关.
关键词： 乙型肝炎表面抗原大蛋白 C53 HepG2 有丝分裂 细胞增殖 -
重组溶瘤腺病毒RCAdC68-EGFP对结肠癌细胞增殖的影响
目的 本实验通过比较重组溶瘤腺病毒RCAdC68-EGFP与复制缺陷型重组腺病毒AdC68-EGFP对结肠癌细胞的杀伤作用,初步观察RCAdC68-EGFP对结肠癌细胞增殖的影响.方法 以不同病毒剂量(100、500、2500、12500vp/cell)感染结肠癌细胞HCT 116、NCI-H508、HT-29及人胚肾细胞HEK-293.感染后第3、5、7天用MTT法检测不同细胞的抑制率,结晶紫染色实验检测细胞的杀伤作用及相差显微镜观察细胞形态学变化和病变情况.结果 RCAdC68-EGFP对结肠癌细胞HCT 116、NCI-H508、HT-29的增殖抑制作用与病毒感染剂量及感染时间成正比,以500vp/cell病毒感染剂量感染细胞7天后,RCAdC68-EGFP对HCT 116、NCI-H508、HT-29、HEK293细胞的抑制率分别为86.70％、96.85％、99.70％、99.99％,AdC68-EGFP的细胞抑制率分别为6.57％、11.46％、9.11％、99.99％,RCAdC68-EGFP与AdC68-EGFP对细胞的增殖抑制作用有统计学差异(P＜0.01),而对HEK-293细胞增殖抑制作用无统计学差异(P＞0.05).结论 RCAdC68-EGFP能显著抑制HCT 116、NCI-H508、HT-29细胞的增殖,初步显示出RCAdC68-EGFP作为溶瘤病毒载体治疗肿瘤的潜能.
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人乳头瘤病毒16型对细胞增殖、分化及凋亡的影响
人乳头瘤病毒是目前已知的三大致癌DNA病毒之一,可引起上皮细胞肿瘤,其中高危16型与宫颈癌的发病密切相关,与头颈部肿瘤发病的关系也日益受到重视.细胞的生物学特性包括增殖、分化及凋亡.近年来研究发现,人乳头瘤病毒16型可改变体外细胞的增殖、分化及凋亡状态.本文对其研究现状作一综述.
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114 BRCA1基因在细胞增殖、凋亡和DNA损伤修复中的作用
人乳腺癌易感基因BRCA1是一种抑癌基因,在正常乳腺上皮细胞核内起重要的转录调控作用.BRCA1能从多个水平、多层次上通过多条信号转导途径抑制细胞增殖、细胞生长,阻滞细胞周期于G2/M期,诱导细胞凋亡,促进细胞终末分化,是一个重要的细胞周期负调控子.BRCA1也是DNA损伤修复结合蛋白,能通过多条信号转导途径激活DNA损伤修复的调控点,参与DNA损伤修复,维持基因组的完整.其突变和低表达是诱发乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌的主要原因之一.
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细胞增殖和细胞凋亡与癌的发生和预防
在正常机体内,细胞增殖和细胞凋亡处于一种动态平衡状态,一旦这一动态平衡被打破,就会导致癌的发生.本文拟对细胞增殖和细胞凋亡与癌发生和预防的关系作一综述.
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SIRT1对胃癌细胞增殖及迁移的影响
目的 研究沉默信息调节因子1 (SIRT1)在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 构建包装针对SIRT1的shRNA慢病毒载体,感染胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞;应用荧光显微镜观察并应用免疫印迹方法证实转染的可靠性;应用CCK-8法检测shRNA-SIRT1对胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞增殖的影响;APC-Annexin V标记法,流式细胞仪检测shRNA-SIRT1对胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞凋亡的影响.结果 成功进行了携带以SIRT1为靶向的shRNA的慢病毒包装,并成功转染到人胃癌细胞中.通过对比研究转染shRNA-SIRT1和空转对照组的胃癌细胞,发现shRNA可以通过沉寂胃癌细胞中的SIRT1从而抑制了胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,而对胃黏膜上皮细胞的增殖凋亡影响较小.结论 通过靶向应用于SIRT1的shRNA技术抑制了胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,进一步明确SIRT1在胃癌细胞增殖和发展的作用,而且为生物基因治疗胃癌提供了实验基础.
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环孢菌素A不同制剂在稳定性和刺激性方面的比较研究
环孢菌素A作为一种含11个氨基酸的亲脂性环状多肽结构,是一种真菌的活性代谢产物,具有抑制B淋巴细胞和T淋巴细胞增殖的作用[1].环孢菌素A是高效的免疫抑制剂,在临床上被广泛应用于自身免疫系统疾病、骨髓移植以及器官移植患者的治疗,是目前为止,国际上认可的唯一可以治疗干眼症的处方药[2].
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新生血管性青光眼患者血清及房水中血管内皮因子和色素上皮衍生因子水平的研究
新生血管性青光眼（nonvascular glaucoma ， NVG）是一种由缺血、缺氧共同作用导致的继发性青光眼，主要表现为虹膜表面及房角有新生血管［1］。NVG是糖尿病视网膜病变的主要并发症，近年发病率呈逐年增高趋势。目前NVG的发病机制尚未阐明，有学者认为多种细胞因子参与了血管生成细胞增殖的调控过程，打破了血管生成刺激因子及抑制因子的平衡，促进了新生血管的形成，终导致了N V G ［2］。色素上皮衍生因子（pig‐ment epithelium derived factor ，PEDF）是目前已经证实的血管生成抑制因子之一，可以抑制多种血管生成诱导剂［3］。血管内皮生长因子（vascular endo‐thelial growth factor ，VEGF）则是目前已知的强效血管生成促进因子，兼具增强血管通透性的作用［4］。生理状态下，PEDF 与 VEGF 保持动态平衡。本研究通过对NVG患者血清及房水中PEDF及VEGF的水平进行检测，以证实两者在NVG发生中的作用。
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光学显微镜及透射电子显微镜下观察内界膜分析
特发性黄斑裂孔发病率较低，但却是进行性恶化的病变，一旦形成黄斑裂孔自愈及保持视力稳定的可能性不大，大部分病例黄斑裂孔逐渐扩大、视力减退，手术是主要治疗方式。黄斑裂孔的内界膜表面的细胞增殖成分可能向肌纤维母细胞样分化；它们的收缩造成了黄斑裂孔扩大。病理状态下的内界膜可以成为视网膜色素上皮细胞（RPE ）、M üller细胞和星形细胞增生的支架，说明ILM 参与了黄斑裂孔的发展扩大过程。本研究用光学显微镜及透射电子显微镜观察手术中从黄斑裂孔边界剥离膜状组织的组织结构。
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甲状腺肿瘤cyclin E蛋白与PCNA免疫组化的定量研究
近年来,随着人们对细胞周期的研究深入,人们逐渐认识到细胞周期的调控异常与细胞癌变密切相关,细胞周期蛋白(cyclin)及其依赖性激酶(CDKs)形成的复合物是细胞周期的核心调控装置[1],在cyclin家族中,cyclin E是其中较重要的一种[2],其含量异常不仅将导致细胞周期的调控失常,也与肿瘤细胞的增殖、发展相关.Wang以Western Blot法研究38例结直肠癌,发现35例癌组织的cyclin E水平显著高于癌旁粘膜,并同时平行应用增殖细胞核抗原(PCNA)测定增殖指数,发现41%的病例中增殖指数也同时增高,提示cyclin E可作为结直肠癌组织的又一细胞增殖指标.我们利用免疫组化和图像定量分析研究cyclin E在甲状腺"正常"与良恶性病变中的表达情况,并同时平行检测PCNA的表达,将两者对比分析,旨在探讨cyclin E与PCNA在甲状腺肿瘤中的相关性及cyclin E的异常表达.
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人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究
目的 探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2(cyclin D2)的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性.方法 收集48例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组(12例)、中反应组(30例)及低反应组(6例).采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上cyclin D2及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素(FSH),人绒毛膜促性腺激素(hCG)日E2水平.分析颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数(PCNA-LI)的相关性.结果 (1)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素(Gn)支数呈负相关(r=-0.547,P<0.01; r=-0.456,P<0.05; r=-0.451,P<0.05);cyclin D2蛋白表达与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.592,P<0.01; r=0.626,P<0.01);高、中和低反应三组cyclin D2蛋白表达有显著统计学差异(F=4.995,P<0.05).(2)黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关(r=-0.510,P<0.05; r=-0.891,P<0.01);与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.629,P<0.01; r=0.524,P<0.05);高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异(F=8.843,P<0.01).(3)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关(r=0.696,P<0.01; r=0.498,P<0.05).结论 黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关.cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育.
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缺氧对滋养层细胞功能的影响
在早孕期,由于胎盘绒毛发育不完善,胚胎与母体血液之间的物质交换尚未完全建立,胚胎发育及滋养层细胞侵入子宫基质的过程是在一个相对缺氧的环境下进行的.缺氧对这些过程产生着广泛的影响,而其对滋养层细胞增殖和功能的调节是这些影响的核心,并与一些妊娠疾病的病理机制有关.本文就近年来有关缺氧对滋养层细胞功能影响的研究进展进行综述.
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胚泡围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡
围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡以一种时空有序和细胞特异性的方式发生是胚泡着床成功的重要条件.子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡是受雌、孕激素宏观调控,并受局部粘附分子-细胞因子-生长因子以及胚泡严格调控.了解围着床期子宫内膜细胞的增殖、分化与凋亡以及相关调节因素,对于我们深入理解胚泡着床机制具有重要意义.
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miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究
目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.
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小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达
目的 检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用. 方法 从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs).收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2 mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位.结果 GV-CCs的CCND2 mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P＜0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P＜0.01).免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV CCs减弱. 结论 卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程.
关键词： 卵丘细胞 细胞周期蛋白D2 卵丘-卵母细胞复合体 卵母细胞体外成熟 细胞增殖 -
低氧环境下子宫内膜基质细胞增殖及Prohibitin表达
目的 观察常氧和低氧环境下子宫内膜基质细胞(ESCs)的增殖,探讨抗增殖蛋白prohibitin(PHB)在子宫内膜异位症(EMs)病理机制中的作用. 方法 10例正常内膜组织(正常对照组)和10例EMs患者在位内膜组织(在位内膜组)各分为两份,分别置于常氧(21% O2)与低氧(1% O2)环境中培养.运用BrdU方法检测细胞增殖,并以光密度值(OD)代表细胞的增殖能力;通过流式细胞技术检测细胞凋亡;细胞免疫荧光技术和蛋白质印记法(Western blot)检测细胞中PHB表达. 结果 在常氧环境,在位内膜组的OD值略高于正常对照组但无统计学差异(P＞0.05);而在低氧环境,在位内膜组的OD值[(1.400±0.659)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.001),且显著高于常氧环境的在位内膜OD值[(1.156±0.044)](P＜0.05).无论是常氧还是低氧环境,在位内膜组的细胞凋亡率均显著低于对照组[分别为(4.117±0.450)% vs.(7.247±0.707)%及(4.983±0.393)% vs.(9.867±0.675)%],差异均有统计学意义(P＜0.05).在常氧环境,在位内膜组ESCs的PHB表达[(0.747±0.026)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.05);在低氧环境,正常对照组和在位内膜组ESCs的PHB表达水平均较常氧环境的PHB表达水平降低[分别为(0.358±0.071)vs.(0.590±0.021)和(0.458±0.054) vs.(0.747±0.026)],且差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 正常子宫内膜组织表达PHB,EMs患者的在位内膜组织PHB表达升高;低氧环境下ESCs的PHB表达水平显著降低,可能与促进ESCs增殖、抑制ESCs凋亡相关,因此PHB在EMs病理机制中起重要作用.
关键词： 子宫内膜异位症 低氧 Prohibitin 细胞增殖 细胞凋亡 -
SET蛋白对精原细胞株GC-1spg增殖和凋亡的影响
目的 探讨SET蛋白对精原细胞株GC-1 spg增殖和凋亡的影响.方法 使用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃、5％ CO2条件下培养GC-1 spg细胞,分对照组(转染无关序列腺病毒)和实验组[转染SET干涉腺病毒(AdH1-siRNA/SET)];GC-1 spg接种于96孔板或者6孔板,转染腺病毒48 h、72 h后收集细胞,免疫荧光和共聚焦激光扫描显微镜检测SET蛋白在GC-1 spg细胞中的表达与定位;提取细胞总蛋白,Western Blot检测转染前后SET蛋白的表达;细胞计数试剂盒-8 (CCK8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞的数目和增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果 SET蛋白表达于GC-1 spg细胞的胞核和胞浆中,且胞浆分布多于胞核;转染SET干涉腺病毒后,干涉组GC-1 spg细胞中的SET蛋白相对表达量为(0.217±0.044)显著低于对照组的(0.629±0.170) (P＜0.05),同时GC-1 spg细胞的数目减少,增殖减慢,且细胞凋亡率显著增加[干涉组(21.663±1.287)％,对照组(8.813±0.671)％](P均＜0.01).结论 SET蛋白在精原细胞GC-1 spg胞核和胞浆中均有表达,且胞浆分布多于胞核;GC-1 spg细胞中SET蛋白表达降低,能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,提示SET蛋白可能参与调节精子发生的过程.
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睾丸组织高表达基因PRKACG对细胞增殖的影响
目的 研究睾丸组织高表达cAMP依赖蛋白激酶催化亚基γ(protein kinase,cAMP-dependent,catalytic,gamma,PRKACG)基因的功能,观察其对NF-κB信号通路的激活作用和促细胞增殖作用. 方法 采用双荧光素酶报告基因系统,利用体外培养的293T细胞,分析PRKACG对NF-κB信号通路的激活作用,并观察293T细胞的形态学,通过细胞计数和CCK8观察其对细胞生长和细胞增殖的影响. 结果 转染PRKACG的293T细胞相对于对照组转染PCMV-Sport 6的细胞体积变大、饱满、触角伸长；CCK8和细胞计数的结果显示,过表达PRKACG的293T的生长速度明显高于对照组Sport 6.结论 PRKACG能够激活293T细胞的NF-κB信号通路,并可促进细胞增殖,提示PRKACG可能是睾丸发育和精子发生过程中的一个功能基因.
关键词： cAMP依赖蛋白激酶催化亚基γ 男性不育 睾丸发育 精子发生 细胞增殖
