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SIRT1对胃癌细胞增殖及迁移的影响
目的 研究沉默信息调节因子1 (SIRT1)在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 构建包装针对SIRT1的shRNA慢病毒载体,感染胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞;应用荧光显微镜观察并应用免疫印迹方法证实转染的可靠性;应用CCK-8法检测shRNA-SIRT1对胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞增殖的影响;APC-Annexin V标记法,流式细胞仪检测shRNA-SIRT1对胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞凋亡的影响.结果 成功进行了携带以SIRT1为靶向的shRNA的慢病毒包装,并成功转染到人胃癌细胞中.通过对比研究转染shRNA-SIRT1和空转对照组的胃癌细胞,发现shRNA可以通过沉寂胃癌细胞中的SIRT1从而抑制了胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,而对胃黏膜上皮细胞的增殖凋亡影响较小.结论 通过靶向应用于SIRT1的shRNA技术抑制了胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,进一步明确SIRT1在胃癌细胞增殖和发展的作用,而且为生物基因治疗胃癌提供了实验基础.
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亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的机制研究
目的 探究亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的分子机制. 方法 利用5μmol/L亚砷酸钠处理HEK293ET细胞,收集细胞样品,利用实时定量PCR(Q-PCR)检测p66Shc转录水平,Western Blot检测Sirt1的蛋白表达;利用Sirt1 siRNA和对照siRNA分别转染细胞,随后5μmol/L亚砷酸钠处理细胞,收集细胞样品,Western Blot检测亚砷酸钠对Sirt1和p66Shc蛋白表达的影响. 结果 与对照组相比,5μmol/L亚砷酸钠处理组p66Shc转录水平显著升高(P＜0.001),Sirt1蛋白水平显著降低(P＜0.001).Sirt1 siRNA转染能够抑制细胞Sirt1的表达.亚砷酸钠处理后,Sirt1 siRNA转染组Sirt1的表达与对照siRNA转染组相比显著降低(P＜0.001),p66Shc的表达显著升高(P＜0.001). 结论 亚砷酸钠可能通过抑制Sirt1的表达上调p66Shc的表达.
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能量限制下SIRT1高表达对大鼠卵巢生殖寿命的影响
目的 观察能量限制后成年大鼠卵巢SIRT1高表达对卵巢功能和寿命的影响. 方法 24只10周龄雌性SD大鼠,随机分为35％能量限制组和对照组.对照组不给予特殊处理自由取食,能量限制组予对照组食量的65％,每日调整饲料量,每周称体重.HE染色卵巢组织形态学观察及卵泡分类计数,免疫组织化学法观察SIRT1蛋白定位,Western blot检测SIRT1蛋白表达. 结果 能量限制组大鼠摄入能量少,体重的增长速度要低于对照组(P＜0.05),腹部脂肪明显少于对照组(P＜0.01);卵巢外观形态与对照组无异,原始卵泡数明显多于对照组(P＜0.01),窦状卵泡少于对照组(P＜0.01);SIRT1蛋白表达定位于卵母细胞的胞核,弱表达于胞浆,免疫印迹检测显示能量限制诱导大鼠卵巢组织SIRT1高表达,灰度值扫描与对照组有显著性差异(P＜0.05). 结论 内源性SIRT1高表达可能是抑制原始卵泡的转化和发育,能量限制诱导SIRT1高表达可能对于延长卵巢的生殖寿命及提高卵巢的储备有积极作用.
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miR-92a调节MMP-2/9的表达对胃癌细胞增殖和迁移的影响及机制研究
目的 探讨miR-92a调节MMP-2/9的表达对胃癌细胞(BGC-823)增殖和迁移的影响,并研究其可能的分子机制.方法 收集IIIB期胃癌患者血液及胃癌组织样本,检测miR-17~92基因簇在胃癌IIIB期患者血液及病变胃癌组织中的表达情况,检测重组腺病毒介导SIRT1及MMP-2/9在BGC-823细胞的表达.结果 IIIB期胃癌患者血液及胃癌组织样本中的miR-92a表达显著增高;BGC-823细胞中miR-92a表达高于miR-17~92基因簇的其他成员;过表达反义miR-92a抑制BGC-823细胞的增殖和迁移能力;反义miR-92a的过表达增加SIRT1的蛋白表达,抑制MMP-2/9的蛋白表达;miR-92a通过SIRT1调节MMP-2/9的表达从而影响胃癌细胞的增殖和迁移.结论 miR-92a可通过SIRT1调节MMP-2/9的表达来影响BGC-823细胞的增殖和迁移.
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血府逐瘀口服液对缺血心肌细胞凋亡及SIRT1和FoxOs表达的影响
目的 观察血府逐瘀口服液给药对大鼠缺血心肌细胞凋亡及沉默信息调控因子1(SIRT1)和FoxOs表达的影响.方法 用不同的方式对H9c2大鼠心肌细胞进行处理,分为正常组(A组)、氧糖剥夺组(B组)、SIRT1转染组(C组)、氧糖剥夺+SIRT1转染组(D组)、氧糖剥夺+血府逐瘀口服液给药组(E组)、氧糖剥夺+SIRT1转染+血府逐瘀口服液给药组(F组).通过荧光定量PCR、Western-bolt法分别检测SIRT1、FoxOs的浓度与蛋白质表达情况.结果 RT-PCR测得SIRT1在给药组的表达差异程度分别较氧糖剥夺组、氧糖剥夺+SIRT1转染组显著降低,FoxO1、FoxO3、FoxO4在给药组的表达差异程度分别较氧糖剥夺组、氧糖剥夺+SIRT1转染组显著升高.Western-bolt测得SIRT1在氧糖剥夺组、SIRT1转染组和氧糖剥夺+SIRT1转染组表达明显降低,在用药干预后表达上升;FoxO1、FoxO3和FoxO4在氧糖剥夺组、SIRT1转染组和氧糖剥夺+SIRT1转染组表达升高;SIRT1、FoxO1、FoxO3和FoxO4在各组表达具有统计学差异(P<0.05).结论 血府逐瘀口服液可能是通过增加SIRT1的表达,抑制FoxOs的表达从而发挥其抑制缺血心肌细胞凋亡的作用.
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益肺胶囊对 COPD 稳定期疗效及对 SIRT1表达的影响
目的：观察益肺胶囊对 COPD 稳定期疗效及其对外周血 SIRT1蛋白的影响。方法：将本院70例 COPD 稳定期患者纳入研究，随机分为对照组和治疗组，各35例，对照组接受 COPD 常规治疗，治疗组在此基础上口服益肺胶囊，均接受为期3个月的治疗，疗程结束后比较肺功能变化、生活质量以及 SIRT1蛋白的变化。结果：1）治疗后2组肺功能及生活质量有明显提高（P ＜0.05），其中治疗组提高的更为明显（P ＜0.05）。2）治疗后2组患者外周血单核细胞的 SIRT1蛋白均有所增加（P ＜0.05），其中治疗组增加的幅度更明显（P ＜0.05）。结论：益肺胶囊可以减缓 COPD 病情进展，提高患者生活质量，其可能与增加外周血 SIRT1含量有关。
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“标本配穴”电针对糖尿病肾病的改善作用及肾脏SIRT1蛋白表达水平的影响
目的:观察“标本配穴”电针干预方法对糖尿病肾病大鼠模型肾功能、超微结构的改善作用及肾脏SIRT1蛋白表达的影响.方法:Zucker fa/fa大鼠12只按随机数字表法分为模型对照组及非电针刺激组、电针治疗组,另选其同窝瘦鼠(Zucker+/？)4只作为空白对照组.非电针刺激组和电针治疗组分别治疗3周,于治疗后第21天测其4组大鼠的饮水量、进食量、体质量和空腹血糖、餐后血糖;治疗3周后大鼠处死,观察血清白蛋白、血肌酐、血尿素、血尿氮、肾脏超微结构及SIRT1蛋白表达水平.结果:与模型对照组比较,“标本配穴”电针治疗组大鼠进食量减少,体质量降低,空腹血糖、餐后血糖降低,血肌酐、血尿素、血尿氮水平降低,肾脏超微结构得到明显改善,SIRT1蛋白表达增多.结论:“标本配穴”电针能够改善糖尿痛肾病肾功能和超微结构,可能与其上调肾脏SIRT1蛋白表达水平有关.
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血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞衰老及p53、SIRT1蛋白表达的影响
目的 观察血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)衰老及对p53、SIRT1蛋白表达的影响,探讨其抗衰老的作用机制.方法体外培养EPCs,加入100 nmol/L AngⅡ诱导细胞衰老,建立EPCs衰老模型,随机分为正常组、模型组、miR-34a抑制剂组、血府逐瘀汤5％药物血清组、血府逐瘀汤10％药物血清组、血府逐瘀汤15％药物血清组.β-半乳糖苷酶染色法检测内皮祖细胞衰老,Western blot检测EPCs中p53蛋白、SIRT1蛋白的表达.结果与正常组比较,模型组EPCs衰老数量明显增多(P<0.01),p53蛋白表达量明显升高(P<0.01),SIRT1蛋白表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和5％、10％、15％药物血清组EPCs衰老数量显著减少(P<0.01),miR-34a抑制剂组和10％、15％药物血清组p53蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),miR-34a抑制剂组和10％、15％药物血清组SIRT1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与miR-34a抑制剂组比较,5％、10％、15％药物血清组EPCs衰老数量显著增多(P<0.05,P<0.01),p53蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),SIRT1蛋白表达明显下降(P<0.01);与5％药物血清组比较,10％、15％药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P<0.01),p53蛋白表达显著降低(P<0.01),SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.01);与10％药物血清组比较,15％药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P<0.01),p53蛋白表达差异不明显,SIRT1蛋白表达明显升高(P<0.01).结论血府逐瘀汤能延缓EPCs的衰老,可明显降低衰老EPCs中p53蛋白的表达,显著增加衰老EPCs中SIRT1蛋白的表达,其中以15％药物血清组效果佳.
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基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R1对血管内皮细胞衰老的影响
该研究旨在探讨三七皂苷R1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H2O2诱导的血管内皮细胞衰老的作用.以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H2O2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H2O2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组.药物组提前加入三七皂苷R1(30 μmoL·L-1)或白藜芦醇(10 μmoL· L-1)干预24 h,然后用H2O2(100 μmoL·L-1)造模4h,后换成完全培养基培养24h.采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达.结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P＜0.05).该研究表明,H2O2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRTl/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程.
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SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导软骨细胞内质网应激
目的 探究SIRT1对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激的影响.方法 分离人正常软骨细胞和骨关节炎(0A)软骨细胞,观察细胞形态,免疫细胞化学染色检测Ⅱ型胶原表达,Western blot检测SIRT1表达.将培养的软骨细胞分为对照组(OA软骨细胞、正常软骨细胞)、正常软骨细胞组(衣霉素组、SIRT1过表达组和衣霉素+SIRT1过表达组).24 h后,Western blot检测ERS相关蛋白(CHOP、p-eIF2α和ATF4等)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和caspase-3等)以及p-P38的表达.ELISA检测NF-κB活性.结果 与人正常软骨细胞相比,OA软骨细胞增殖缓慢,Ⅱ型胶原和SIRT1表达均显著降低(P＜0.05).与正常软骨细胞对照组相比,OA对照组和0.5 mg/L衣霉素组CHOP、p-eIF2α、ATF4和p-P38表达上调,NF-κB活性增加,Bcl-2表达明显下调,Bax和caspase-3表达明显增加(P＜0.05).SIRT1过表达处理则显著逆转上述蛋白表达.结论 SIRT1过表达可抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激和细胞凋亡,并下调P38/NF-κB活化.
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SIRT1增强人慢性粒系白血病K562细胞耐药性
目的 研究Ⅲ类去乙酰化酶SIRT1对人慢性粒系白血病K562细胞耐药性的影响及其机制.方法 分别将酶活性缺失突变型SIRT1-H363Y和SIRT1 shRNA表达质粒转染K562细胞,G418筛选稳定克隆后用H2O2和依托泊甙(etoposide)处理细胞,Western blot检测caspase3剪切,BAX表达及DNA损伤标志物H2A.X磷酸化；在MCF-7和293A中过表达野生型SIRT1,检测H2O2和etoposide处理后的H2A.X磷酸化.结果 K562细胞中SIRT1-H363Y表达和SIRT1干扰均能促进H2O2和etoposide诱导的caspase3剪切及BAX表达,并显著抑制H2O2诱导的H2A.X磷酸化(对照vs SIRT1-H363Y:0.54 +0.03vs0.23±0.01)(P＜0.01)和etoposide(对照vs SIRT1 H363Y:1.36±0.20vs0.68±0.14)(P ＜0.05)；(对照vs SIRT1 RNAi:0.68±0.06vs0.44±0.04)(P＜0.01)；在MCF-7和293A细胞中,野生型SIRT1过表达能明显增加etoposide诱导的H2A.X磷酸化(MCF-7:0.26±0.04 vs0.46±0.02)(P＜0.01)；(293A:0vs 0.42±0.09)(P ＜0.05).结论 SIRT1能保护K562细胞对抗DNA损伤药物诱导的凋亡,增强DNA损伤修复信号.
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肌肉衰减综合征小鼠腓肠肌Sirt1和mTOR活性的变化
目的 观察肌肉衰减综合征小鼠腓肠肌Sirt1和mTOR活性的变化.方法 将雄性C57BL/6J老年(26月龄)和中年(6月龄)小鼠各16只分别随机分为2组,每组8只(n=8):即中年对照(MC)组、中年后肢悬提(MS)组、老年对照(AC)组及老年后肢悬提(AS)组.老年小鼠后肢悬提( HLS) 2周以建立肌肉衰减综合征小鼠模型,分别用不同的试剂盒和蛋白免疫印迹测定Sirt1和mTOR信号传导通路相关因子及蛋白的表达.结果 1) NAD+含量和NAD+/NADH比率:AC组明显低于MC组(P＜0.01,P＜0.05),HLS组显著少于对照组( P＜0.01,P＜0.05). 2) Sirt1表达:AC组明显高于MC组(P＜0.05),HLS组显著高于对照组(P＜0.05). 3)Sirt1下游底物表达( PGC-1α、FOXO1和P53)、与衰老相关的NAMPT蛋白表达和Sirt1活性:AC组明显低于MC组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),HLS组显著少于对照组(均P＜0.05). 4)磷酸化的mTOR、p70S6K和4E-BP1:AC组明显高于MC组( P＜0.05),HLS组显著少于对照组(P＜0.05).结论 Sirt1和mTOR参与了肌肉衰减综合征小鼠的发病.
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SIRT1在糖尿病肾病进展中的作用
SIRT1是一种高度保守的NAD+依赖的Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,广泛存在于胚胎以及人类组织中,通过染色质的修饰促进染色质沉默,通过去乙酰化非组蛋白调节糖和脂代谢、应激反应、凋亡、炎性反应和自噬等.糖尿病肾病的发生发展与炎性反应、氧化应激、缺血缺氧和衰老密切相关,SIRT1可能是该病进展中的上游调控因子.
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慢性阻塞性肺疾病中Sirtuins的研究进展
Sirtuins是第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,主要成员SIRT1、SIRT6与慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制有密切关系.SIRT1、SIRT6在COPD患者肺部中表达下调,并通过多种机制调节炎性反应、肺部自噬与衰老.Sirtuins可能是COPD发生过程中的一个调控分子家族.
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SIRT1影响间充质干细胞骨修复的研究进展
激活沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)可延长细胞寿命,延缓衰老的发生.SIRT1在调节炎性反应过程中也发挥着重要作用.基于在间充质干细胞的组织修复过程中,细胞衰老及炎性反应严重影响其修复能力.因此,有望通过调节SIRT1活性改变间充质干细胞组织修复能力.
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Sirt1在肾脏疾病中的作用
沉默信息调节因子1 (silent information regulator1,Sirt1),是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的去乙酰化酶,为哺乳动物Sirtuins家族成员之一.大量研究表明Sirt1可通过将受体蛋白(组蛋白/非组蛋白)去乙酰化从而调节基因沉默、细胞增殖、分化、衰老、凋亡以及能量代谢,在抗衰老、肿瘤、糖脂代谢稳态调节和心血管系统中发挥重要作用.近些年,Sirt1在肾脏疾病发生发展中的作用及其调控机制日益受到人们的关注.研究表明Sirt1能够改善糖尿病肾病,保护肾脏免受急性损伤的危害,延缓肾脏衰老进程,改善慢性肾脏疾病的预后.本文就Sirt1在肾脏疾病中的新研究进展作一综述.
关键词： SIRT1 NAD+-依赖型去乙酰化酶 肾脏 -
翻译后修饰调节 SIRT1生物学功能
SIRT1（silent mating type information regulation 2 homolog）是哺乳动物中与酵母菌沉默信息调节因子2（silent information regulator 2，Sir2）同源性高的同系物。它通过去乙酰化作用调节基因转录、染色体稳定性及靶蛋白活性，参与调节 DNA 损伤修复、糖脂代谢、抑制炎症及氧化应激等病理生理过程。SIRT1作为重要的蛋白去乙酰化酶，深入了解其翻译后化学修饰及生物学功能具有重要意义。
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间充质干细胞成脂分化过程中SREBP-1对SIRT1的调控
目的:研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)成脂分化过程中转录因子SREBP-1对SIRT1的调控作用.方法:通过油红O染色鉴定BMMSC成脂分化;RT-PCR检测AP2、LPL、SREBF-1和SIRT1的mRNA转录水平;Western-blot检测SREBP-1表达水平;染色质免疫沉淀技术验证SREBP-1与SIRT1启动子之间的结合情况.结果:成脂诱导培养液中的BMMSC 14 d后被诱导成为成熟的脂肪细胞;RT-PCR显示AP2、LPL和SREBF-1、SIRT1在BMMSC成脂分化过程中表达上调;SREBP-1的蛋白水平也明显高表达;SREBP-1抗体免疫沉淀的基因组DNA成功扩增出SIRT1基因条带.结论:在BMMSC成脂分化过程中,SREBP-1能与SIRT1启动子区域特异性结合,可能参与SIRT1表达的调控.
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MiR-486通过调控Sirt1调节TF-1细胞的糖代谢
目的:探索低氧条件下造血细胞miR-486表达变化及miR-486对造血细胞糖代谢的调控作用及机制.方法:利用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测低氧条件下TF-1细胞miR-486及Sirt1的表达水平.用慢病毒技术将miR-486过表达或沉默后检测Sirt1、葡萄糖转运因子1(glucose transporter 1,Glut1)和葡萄糖转运因子4 (glucose transporter 4,Glut4)的表达水平.另外,将Sirt1沉默后分别用qRT-PCR及Western blot检测Sirt1的表达,并用qRT-PCR检测Glut1和Glut4的表达水平.结果:低氧促进miR-486的表达并抑制Sirt1的表达;过表达miR-486导致Sirt1的表达下调,而沉默miR-486可以促进Sirt1的表达;过表达miR-486上调Glut1和Glut4的表达,而沉默miR-486则抑制Glut1和Glut4的表达;沉默Sirt1可以促进Glut1和Glut4的表达.结论:MiR-486可以通过影响Sirt1调节TF-1细胞的糖代谢.
关键词： microRNA-486 SIRT1 造血细胞 糖代谢 -
脂多糖调控 miR-211／Sirt1在加重缺氧诱导心肌细胞凋亡中的作用价值
目的：研究显示 Sirtuin1（ Sirt1）可通过去乙酰化酶活性调控 L 脂多糖（ lipopolysaccharide， LPS）病理过程，进而改善临床急诊脓毒血症患者的预后。通过数据库检索显示microRNA-211（miR-211）与Sirt1具有靶向匹配，然而其生物学关联意义尚无数据。本研究旨在探讨miR-211与Sirt1间的关联，以及它们是否参与LPS加重缺氧对心肌细胞损伤作用。方法原代培养大鼠（ SD）乳鼠心肌细胞，应用 qRT-PCR 法检测 LPS 处理4 h后对大鼠乳鼠心肌细胞（ neonatal nat cardiomyocytes， NRC）与H9c2心肌细胞中miR-211表达的变化，用Western blot法检测LPS处理后对NRC与H9c2心肌细胞中Sirt1蛋白表达的影响；同时应用CCK8法评价LPS对心肌细胞H9c2的细胞增殖情况；以及TUNEL法定量检测NRC与H9c2心肌细胞凋亡活性的影响。结果与对照组相比，20μg／mL、40μg／mL浓度的LPS处理4 h后， H9 c2心肌细胞在24～72 h时间段的增殖能力没有发生改变。然而， LPS预处理后NRC与H9c2在缺氧条件下细胞凋亡明显增加（较LPS未处理NRC与H9 c2组凋亡率增加均超过了100％， P＜0.05）；同时LPS处理后NRC与H9c2细胞中miR-211表达显著上调，且伴随其靶蛋白Sirt1表达明显下降（P分别＜0.05）。结论LPS可以增加缺氧诱导的心肌细胞凋亡，这与LPS通过上调miR-211水平进而抑制Sirt1表达这一作用机制密切相关。
关键词： microRNA-211 SIRT1 心肌细胞 脂多糖 细胞凋亡
