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解毒祛瘀方对乳腺癌细胞MCF-7/ADM的耐药逆转作用
目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药逆转的作用及机制.方法:以MCF-7/ADM细胞为研究对象,利用噻唑蓝(MTT)比色法检测解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM生长的影响;应用流式细胞术检测肿瘤细胞内罗丹明123(Rh-123)的含量;分别利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测肿瘤细胞内多药耐药蛋白1(MDR1),乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP) mRNA及蛋白表达变化.结果:与空白组比较,经1.25,2.5 g·L-1解毒祛瘀方作用后,阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的逆转倍数(RF)分别提升1.7倍和3.0倍(P＜0.05);人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中Rh-123含量分别提高了1.8倍和2.5倍(P＜0.05),MDRI和BCRP蛋白和mRNA表达水平明显下降(P＜0.05),1.25,2.5 g·L-1解毒祛瘀方MDR1 mRNA表达分别降低35.5％和56.0％(P ＜0.05),BCRP mRNA表达分别降低41.6％和49.5％ (P ＜0.05).结论:解毒祛瘀方可提高人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM对阿霉素的敏感性,逆转该细胞对阿霉素的耐药性,其机制可能与降低MDR1和BCRP蛋白和mRNA的表达,抑制细胞药物外排作用相关.
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β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响
目的探讨β-榄香烯(β-elemene)对多药耐药细胞株K562/阿霉素(ADM)的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS(10.0 production pacilty)软件包对实验结果进行统计学处理.结果1.非细胞毒性浓度的β-elemene(4.O mg/L)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转倍数为2.18倍;2.P-gp在耐药细胞株K562/ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3.非细胞毒性浓度的β-elemene(4.O mg/L)能够显著降低耐药细胞P-gp的表达.结论β-elemene能够明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一.
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17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制
目的 探讨17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的非典型多药耐药的机制.方法 分别通过药物诱导和转基因的方法建立由BCRP和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的两种耐药细胞系MCF-7/MX20和MCF-7/BCRP,将耐药细胞培养在含有17β-雌二醇的培养基中,通过细胞毒性实验,外排实验以及定量PCR观察对不同耐药细胞系的逆转作用.结果 培养基中加入17β-雌二醇48 h后,MCF-7/BCRP细胞中的米托蒽醌的强度明显低于MCF-7/MX20,MCF-7/BCRP细胞中BCRP mRNA的含量明显高于MCF-7/MX20.17β-雌二醇可以抑制细胞中BCRP的表达和功能,但是不能抑制MCF-7/BCRP细胞中BCRP的表达和功能.结论 17β-雌二醇不是作为BCRP的底物而抑制BCRP功能的,而可能是通过调控BCRP基因的启动子发挥作用.
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结直肠癌奥沙利铂化疗耐药机制的研究进展
结直肠癌是临床常见的肿瘤之一.目前国内外对中晚期结直肠癌的患者仍以手术为主,化疗为辅的综合治疗方案.2017年NCCN指南推荐含有奥沙利铂的FOLFOX、CapeOX方案是一线化疗方案,但近一半患者因化疗耐药而致生存率降低.因此,寻找肿瘤细胞对化疗的耐药靶点进而提高化疗疗效,成为结直肠癌化疗亟待解决的关键性问题.同时在精准医学时代,寻找特异性的分子标志物也将成为研究热点.本文将对有关奥沙利铂化疗耐药机制、逆转及精准医学应用的新进展进行综述.
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超声空化逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性研究
本研究观察低频低功率超声联合阿霉素(adriamycin,A02)对白血病耐药细胞株K562/A02的影响,寻找合适的干预参数,探讨耐药细胞耐药逆转的可能机制.取对数生长期的白血病K562/A02细胞株,将研究对象分为空白组、单纯阿霉素组(A02)、单纯超声组(US)、阿霉素加超声组(A02+US)共4组.细胞在24孔培养板上受低频低功率超声作用,用台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性,应用瑞氏染色法和流式细胞术分别检测细胞凋亡和药物浓度,扫描电子显微镜观察细胞表面变化.结果显示,频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、作用时间60秒的超声,可显著降低阿霉素的LC50;当声强0.50 W/cm2、作用时间大于30秒的超声,对细胞有急性杀伤作用.细胞经低频超声作用后细胞膜表面出现直径大约1-2μm的小孔,细胞内阿霉素的药物浓度增加,细胞凋亡增强.结论:适当参数的超声辐射通过超声空化导致肿瘤细胞产生声孔效应,使阿霉素对耐药细胞株的抑制作用增强,从而逆转耐药细胞株的耐药性.
关键词： 超声空化 阿霉素 耐药逆转 K562/A02细胞株 -
应重视肿瘤耐药机制和耐药基因检测研究及应用
近年来,我国肿瘤发病率及死亡率一直呈上升趋势.化疗虽然是当前治疗恶性肿瘤的主要手段,但肿瘤耐药却是限制化疗的重要因素,并已成为导致临床肿瘤化疗失败常见和难克服的问题.近期大量临床治疗统计资料表明:肿瘤细胞耐药与绝大多数肿瘤患者死因有着直接或间接的关系.目前,国内外在肿瘤临床治疗方面已涌现出许多新的化疗方案(包括一些耐药逆转方案)和抗肿瘤新药,但在治疗时,仍然发现一些患者在化疗过程中对其中一些药物(包括一些新药[1])产生耐药性,这可能与肿瘤耐药发生机制的复杂性有关.因此,全面了解肿瘤细胞耐药发生机制,并开展和普及肿瘤患者的耐药基因常规检测、监测和综合分析,已成为当前肿瘤临床制定合理的"个体化"治疗方案的关键.
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汉防己甲素逆转血液系统肿瘤细胞多药耐药的临床研究
一些学者使用钙通道阻滞剂如异搏定(VPL)、尼群地平等药物,逆转肿瘤细胞的耐药性.体外试验中,VPL等药确能增强化疗药物对白血病细胞的杀伤作用,但当应用于人体内时,达到逆转剂量的上述药物皆引起严重的心脏毒副反应[1] .体外试验证实,汉防己甲素(TTD)能显著提高细胞内化疗药物浓度,达到耐药逆转的作用,这一作用在耐药细胞中尤为明显[2,3].所以,我们对多种化疗方案治疗无效多药耐药(MDR)的22例急性白血病(AL)和多发性骨髓瘤(MM)患者,采用自身对照的方法,运用TTD(购于浙江康恩贝集团)逆转其MDR,取得较好疗效.
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3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究
目的 探究3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制.方法 ①细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;②采用CCK8及Western blot法观察3-BrPA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-BrPA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况.结果 顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-BrPA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714 μg/ml、38.99μg/ml及12.86 μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81％.3-BrPA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调.3-BrPA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性.结论 3-BrPA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关.
关键词： 支气管肺癌 3-BrPA A549/DDP细胞 耐药逆转 -
26例非小细胞肺癌MDR-型化疗耐药逆转的临床观察
应用CAP(CTX+ADM+DDP)治疗非小细胞肺癌的同时,治疗组加用三苯氧胺(TAM)、异博定(VPL)及川芎嗪(TMP)观察TAM+VPL+TMP对MDR的逆转效果,结果化疗加逆转剂组近期有效率比单纯化疗组提高了30.7%(57.6%vs26.9%),且逆转剂的毒副反应可耐受.
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siRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响研究
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2 (ribonucleotide reductase M2,RRM2)沉默对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP敏感性的影响.方法:采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3/DDP;将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOV3/DDP细胞,另设空白组和SKOV3/DDP-RRM2-neg(阴性组)做为对照;荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后备组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测RNAi对SK-OV3/DDP细胞药物敏感性的影响.结果:成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3/DDP细胞,其耐药系数达到3.6,属低度耐药,但对吉西他滨(Gem)仍敏感.DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48 h的IC50分别为(3.09±0.11)、(9.88±0.37)和(10.35±0.03) μg/mL,3者间差异有统计学意义,P＜0.001.干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍,其RF为3.3.SKOV3/DDP-RRM2-RNAi 667(Ⅰ)组RRM2 mRNA水平下调为74.1％,P=0.010;SKOV3/DDP-RRM2-RNAi480(Ⅱ)组RRM2 mRNA水平下调为55.9％,P=0.016; SKOV3/DDP-RRM2-RNAi1179(Ⅲ)组RRM2mRNA水平下调为43.1％,P=0.001.其中,以转染Ⅰ组基因沉默率(82.33％)高,P＜0.001;阴性组(0.008 6％)与空白组(0.008 2％)比较,差异无统计学意义,P=0.133.转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量低,Ⅰ组为0.062±0.006,Ⅱ组为0.314±0.002,Ⅲ组为0.123±0.002,与阴性组(0.715±0.034)和空白组(0.516±0.040)比较均明显降低,但以转染Ⅰ组细胞的蛋白相对表达量下降明显,F=658.6,P=0.003 3.Gem和DDP联合作用72 h时,转染组细胞凋亡率为(96±3.0)％,与其各组比较,差异均有统计学意义,P值均＜0.001.结论:通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平,增加DDP耐药细胞的药物敏感性,并促进DDP诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡,在一定程度上逆转DDP耐药性;RNAi技术联合Gem及DDP作用可有效提高卵巢癌DDP耐药细胞的凋亡率,有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期患者一线治疗方案.
关键词： 卵巢肿瘤 基因沉默 RNA干扰 耐药逆转 核糖核苷酸小亚基M2 -
热疗逆转乳腺癌细胞系耐药的实验研究
目的 探讨热疗对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用.方法 对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR给予42.5 ℃ 0.5 h的加温处理.MTT法检测热疗前后细胞对阿霉素(ADM)、5-FU、环磷酰胺(CTX)的耐药性的变化,计算半抑制浓度(IC50)、耐药倍数;定量PCR测定热疗前后细胞多药耐药基因mdr1的表达;流式细胞术检测细胞表面P-gP的表达.结果 热疗后细胞的生长及细胞周期没有明显的变化,但是热疗后MCF-7/ADR细胞对多种临床一线化疗药(ADM、5-FU及CTX)的耐药性均产生下调效应,IC50分别下降21.2%、14.9%、16.6%(P《0.01).定量PCR未检测到mdr1表达的明显变化,但是流式细胞仪检测却显示P-gP的表达显著降低.结论 热疗能够对体外培养的乳腺癌细胞系的耐药性产生逆转作用,增强化疗药的敏感性,其机制可能是热疗在翻译水平下调P-gP的表达.热疗的耐药逆转作用可能为临床化疗开辟新的途径.
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新型紫杉烷化合物NPB304及其协同维拉帕米逆转耐药的研究
研究新型紫杉烷类化合物NPB304逆转肿瘤多药耐药的作用.MTT法测定化疗药物的IC50,Westernblotting方法分析P-糖蛋白(P-gp)的表达,分别通过罗丹明123 (Rh123)蓄积实验和分析试剂盒测定化合物对P-gp功能及P-gp ATPase活性的影响,采用分子对接预测化合物与P-gp结合能力的强弱,用MDCK Ⅱ和MDRl-MDCKⅡ细胞模型分析NPB304的跨膜转运.在KBV细胞中,NPB304具有多药耐药逆转作用;在MCF-7/paclitaxel细胞中,NPB304协同P-gp抑制剂维拉帕米增强逆转耐药的活性,10μmol·L-1维拉帕米与paclitaxel合用时逆转倍数为56.5倍,合用NPB304增加耐药逆转倍数;NPB304与维拉帕米合用时协同增加Rh123在耐药细胞中的蓄积,NPB304 (0～1 μmol·L-1)增强维拉帕米激活P-gp ATPase活性的作用;NPB304与P-gp的TM区存在疏水相互作用,与TM区A链的结合力较强;NPB304在较低浓度(0～1.5 μmol·L-1)时激活P-gp ATPase,发挥抑制P-gp功能的作用,但不具有明显的P-gp底物特征.NPB304通过抑制P-gp的功能活性发挥自身及协同维拉帕米逆转耐药的作用.
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应用shRNA慢病毒技术抑制MCF7/MX100细胞中乳腺癌耐药蛋白的表达和功能
乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在肿瘤细胞中的过表达可能导致肿瘤耐药性.RNA干扰是一种选择性抑制目的基因表达的实用技术.本研究旨在应用RNA干扰技术调控BCRP的表达和功能.首先在过表达BCRP的耐药细胞MCF-7/MX100中,评价了三种靶向于BCRP的siRNAs (si-BCRP1,si-BCRP2和si-BCRP3).研究发现si-BCRP2和si-BCRP3对BCRP的mRNA和蛋白的抑制率分别超过90％和70％,进而导致MCF-7/MX100细胞中米托蒽醌的积聚显著上升.进一步的研究将生成si-BCRP2和si-BCRP3的shRNA序列克隆至慢病毒表达载体pTRIPZ中,并采用慢病毒介导的转基因体系建立了稳定表达siRNA的MCF-7/MX100细胞.在该细胞系中,si-BCRP2和si-BCRP3对BCRP的mRNA的抑制率分别达到72％和56％,对其蛋白的抑制率分别为70％和53％.在进一步的研究中,该细胞系被用于中药活性成分的筛选,以评价BCRP的底物和抑制剂.结果显示,BCRP低表达的MCF-7/MX 100细胞可能作为良好的细胞模型被用于临床前研究.
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蛇床子素逆转人膀胱肿瘤T24/ADM细胞耐药作用及其机制
目的 研究蛇床子素(osthole,OST)对T24/ADM 细胞多药耐药的逆转及对P-gp表达、功能的影响.方法采用MTT法筛选OST对T24/ADM 细胞无毒或低毒浓度,以筛选出的浓度作为耐药逆转的实验浓度.分别利用MTT法分别检测阿霉素(adriamycin,ADM)、氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)及顺铂(cisplatin,DDP)对细胞株T24和T24/ADM以及OST处理后的T24/ADM细胞的半数抑制浓度IC50.用流式细胞仪测定OST对T24/ADM 细胞上P-gp 表达的影响.结果浓度17 μmol/L OST对T24/ADM无明显细胞毒性,T24/ADM对ADM、FU和DDP均有不同程度的.耐药,耐药倍数分别为18.86、5.09、3.28,使用17 μmol/L OST处理后T24/ADM对上述ADM、FU和DDP的敏感性均有不同程度的提高,ADM对耐药细胞株的IC50由(0.962±0.017) μg/mL 降至(0.364±0.031) μg/mL,逆转指数为2.64;FU对耐药细胞株的IC50由(0.723±0.003) μg/mL降至(0.463±0.021) μg/mL,逆转指数为1.56;DDP对耐药细胞株的IC50由(0.664±0.007) μg/mL降至(0.587±0.016) μg/mL,逆转指数为1.13,使T24/ADM细胞内P-gp 蛋白表达明显下降,下降了16.32%(P ＜ 0.05).结论蛇床子素在体外能部分逆转T24/ADM的耐药性,逆转机制可能是通过抑制P-gp蛋白表达实现的.
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补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究
目的 从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择佳含药血清的浓度.方法 采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5％和10％的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出佳含药血清浓度,计算出佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数.结果 补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系.5％高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5％中剂量组和5％低剂量组,并与5％空白血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).10％各剂量组对A549/DDP的抑制率与10％空白血清组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).经筛选,10％中剂量含药血清作用48 h为佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降(P＜0.05),对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46.结论 10％中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用.
关键词： MTT法 A549/DDP细胞株 A549细胞株 补中益气汤含药血清 耐药逆转 -
阿霉素耐药逆转研究
抗肿瘤药物产生多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗达不到预期效果的主要原因之一.在众多抗癌药中,阿霉素是具有代表性的药物,如何克服阿霉素的耐药行为是解决抗癌药MDR的首要难题.目前有关抗癌药耐药逆转的报道甚多,笔者仅对阿霉素的耐药逆转情况作如下综述.
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氯霉素通过线粒体途径诱导白血病多药耐药细胞凋亡
多药耐药(MDR)是影响白血病治疗效果的主要障碍,因耐药机制的复杂性或耐药逆转药物临床应用的不良反应,致使目前尚未解决这一难题.
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川芎嗪与β-榄香烯联合应用诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的实验研究
目的:探讨不同作用机制的川芎嗪(Tetrainethylpyrazine,TMP)与β-榄香烯(β-elemene)联合应用,从多环节逆转耐药细胞K562/ADM的多药耐药(multidrug resistance,MDR),以期进一步提高逆转效果.方法:采用MTT法检测细胞的药敏性及抗药性逆转,流式细胞术及透射电镜检测细胞凋亡,应用SPSS(10.0 Production Pacility)软件包对实验结果进行统计学处理.结果:1)非细胞毒性浓度的TMP(350μg/ml)及β-榄香烯(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转耐药倍数分别为2.03倍及2.18倍.β-榄香烯(4.0μg/ml)具有诱导该细胞凋亡的作用.2)上述两种药物以非细胞毒性浓度联合应用,对ADM的逆转倍数为4.65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和.其主要逆转机制是两药的联合应用通过升高细胞内ADM的浓度,诱导该细胞凋亡的途径,实现提高逆转效果的目的.结论:TMP和β-e榄香烯联合应用能明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性和诱导该细胞的凋亡.
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褪黑素逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM对阿霉素耐药的作用机制
目的:探讨生理浓度(10-9 mol/L)和药理浓度(≥10-5 mol/L)褪黑素对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7/ADM 耐药的逆转作用及其机制.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经不同浓度的褪黑素孵育后,阿霉素对MCF-7/ADM 细胞系半数抑制浓度IC50的改变.在电镜下观察单用阿霉素(20ug/ml)以及药理浓度的褪黑素(10-5mol/l)孵育后再应用阿霉素(20ug/ml)后MCF-7/ADM 细胞超微结构的变化.应用分光光度法测定MCF-7/ADM 和MCF-7/s细胞内GSH水平及褪黑素孵育后MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平变化.结果:褪黑素孵育前阿霉素作用于MCF-7/ADM的IC50值为24.41ug/ml.经生理浓度(10-9mol/l)的褪黑素孵育后阿霉素IC50值为20.92ug/ml,两者经比较未见显著性差异(P=0.356).经浓度为10-5mol/L 和10-3mol/L的褪黑素孵育后阿霉素作用于MCF-7/ADMIC50值分别成为12.25ug/ml和10.46ug/ml,与孵育前阿霉素作用于MCF-7/ADM的IC50(24.41ug/ml)相比差异均具有显著性(P＜0.01).在电镜下均可观察到,经药理浓度(10-5mol/l)的褪黑素孵育后,阿霉素(20ug/ml)对细胞的损伤更为严重.经分光光度法测得MCF-7/ADM细胞内GSH水平明显高于MCF-7/s,生理浓度褪黑素并不能使MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平明显降低(P=0.965),而药理浓度的褪黑素可以显著降低MCF-7/ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平且具有一定的浓度依赖性(P＜0.01).结论:生理浓度的褪黑素对MCF-7/ADM的耐药未见明显影响,药理浓度的褪黑素对MCF-7/的ADM耐药性具有较明显逆转作用,其逆转机制可能与褪黑素对细胞内CSH水平调控有关.
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力尔凡对MDR-1基因高表达的大肠癌耐药逆转的观察
大肠癌是目前死亡率较高的恶性肿瘤.肿瘤耐药直接影响其化疗效果及复发率,多药耐药基因(MDR-1)在肿瘤多药耐药中的作用已由基因转染实验所证明[1].本研究应用力尔凡对MDR-1基因高表达的大肠癌患者联合化疗,使耐药逆转,现报告如下.
