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不要滥用褪黑素保健品
近年来,褪黑素保健品充斥市场,广告做得红火,宣传它能使人年轻化、抗衰老,还可降血脂、降血压,提高免疫功能,抗肿瘤及促进记忆,改善睡眠等等,已被人们广泛用来馈赠亲友,探视病人及孝敬老人,成为时尚礼品.
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褪黑素治疗功能性消化不良临床观察
功能性消化不良(FD)是临床常见的消化道疾病,发病率高,病因复杂,临床治疗尚无统一方案.新的研究显示,褪黑素在FD的发病机制上可能扮演重要角色[1],临床亦有应用褪黑素治疗FD实例[2].就此我们采用褪黑素治疗FD并进行了临床观察,报告如下.
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外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞体外成熟中的应用研究
目的 通过在体外成熟(IVM)培养基中加入褪黑素,探索外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞IVM中的作用,以期优化人类未成熟卵母细胞IVM的培养体系. 方法 在人类未成熟卵母细胞IVM培养体系中添加不同浓度的褪黑素,以排出第一极体作为判断其核成熟的标准,比较不同浓度下的核成熟率. 结果 与对照组(褪黑素0 mol/L)相比,外源性褪黑素在10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率有提高,但只有褪黑素在10-9 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率呈显著性提高(63.6％ vs.40.9％,87.7 vs.54.2％,68.2％ vs.45.5％,90.4 vs.69.4％) (P＜0.05);当外源性褪黑素浓度增加到10-5mol/L和10-3 mol/L时,人类未成熟卵母细胞的核成熟率显示稍低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),但与10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L组相比则呈显著性降低(P＜0.05). 结论 外源性褪黑素在适当浓度时可以促进人类未成熟卵母细胞的核成熟,而在浓度超出一定范围时,则可能对卵母细胞的核成熟造成负面影响.
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褪黑素对老化卵母细胞体外发育能力的改善效果评价
目的 探讨体外培养阶段(IVC)添加褪黑素(MT)对卵母细胞老化引起发育受损的改善效果. 方法 采用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理小鼠MII期卵母细胞诱导老化,浓度分别为0(对照组)、10、50、100、150 μmol/L,体外受精(IVF)后统计各组二细胞率、囊胚形成率,检测老化卵母细胞的线粒体活性及丰度(Mitotracker Red、JC-1)、活性氧(ROS)水平、线粒体拷贝数等指标;在100 μmol/L H2O2处理条件下,老化卵母细胞在IVF后的培养阶段分别添加不同浓度褪黑素(10-5、10-7、10-9 mol/L),统计二细胞率、囊胚率,并且分别检测各组获得囊胚的细胞数及凋亡率. 结果 不同浓度H2O2诱导卵母细胞老化后,囊胚发育率随H2O2浓度的升高而降低,50 μmol/L和100 μmol/L H2O2组囊胚形成率分别为(26.27±0.06)%和(28.46±3.45)%,相比对照组的(34.90±1.77)%显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);在H2O2诱导老化卵母细胞中,100 μmol/L、150 μmol/L H2O2浓度时,ROS水平相比对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而活性线粒体的丰度及拷贝数呈现下降趋势,膜电位呈上升趋势,但相比对照组无显著性差异(P>0.05);100 μmol/L H2O2处理诱导卵母细胞老化后,在培养液中添加10-9 mol/L褪黑素组与老化对照组相比,囊胚率[(29.42±2.39)% vs. (20.87±4.12)%]、囊胚细胞数(39.36±9.78 vs. 37.91±4.25)均显著升高,凋亡率显著下降(2.57% vs. 3.18%),差异均有统计学意义(P<0.05);并且这些指标均达到与未经老化处理组的相似发育水平. 结论 老化卵母细胞体外受精后发育率和发育质量偏低的现象,可以通过在受精后体外培养阶段添加褪黑素得到改善.
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褪黑素对人卵裂期胚胎发育的影响及机制研究
目的 探讨褪黑素对人第3天(D3)卵裂期胚胎发育成囊胚的影响及其作用机制. 方法 收集2012年10月至2014年10月在本中心行IVF-ET助孕治疗患者捐赠的D3玻璃化冷冻胚胎,复苏后存活率100％且未发生卵裂球溶解的胚胎纳入研究(n=143),随机分为褪黑素组(培养液中加入1×10-7 mol/L褪黑素,n=71)和对照组(不添加褪黑素,n=72).两组胚胎均放于37℃、5％ CO2培养箱中培养72 h,统计囊胚及优质囊胚形成率;采用鲁米诺化学发光法检测培养液中总活性氧(ROS)水平;实时荧光定量PCR法分析抗氧化酶类基因CAT、GPx、SOD1、SOD2及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达.结果 褪黑素组的囊胚形成率(42.25％)显著高于对照组(26.38％)(P＜0.05),优质囊胚形成率(30.00％)略高于对照组(26.32％),但无显著性差异(P＞0.05).培养72h后两组胚胎培养液中的ROS水平比较(513.33 vs.556.67 RLUs)无显著性差异(P＞0.05).褪黑素处理后,胚胎内过氧化氢酶基因CAT的相对表达量(1.68±0.43)较对照组(1.00±0.03)显著上调(P＜0.05),其他基因包括Bax、Bcl-2、SOD1、SOD2、GPx的表达则没有显著性差异(P＞0.05). 结论 褪黑素能够促进人卵裂期胚胎继续发育形成囊胚,其机制可能与上调胚胎中过氧化氢酶基因CAT的表达有关.
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褪黑素对子宫内膜异位症大鼠细胞凋亡相关蛋白的影响
目的 观察褪黑素(MT)对大鼠子宫内膜异位症(EM)模型细胞凋亡调控相关蛋白的影响. 方法 采用手术移植法制备大鼠EM模型,大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和MT高、低剂量组,免疫组织化学法检测异位内膜Bcl-2、Fas、细胞间粘附分子(ICAM)-1的表达,同时检测脾脏自然杀伤(NK)细胞活性. 结果 MT治疗组与模型组比较异位内膜Bcl-2、ICAM-1表达明显下降,Fas表达明显升高,脾脏NK细胞活性显著增加. 结论 MT具有抑制异位内膜 Bcl-2、ICAM-1表达以及增强Fas表达和脾脏NK细胞活性的作用.
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褪黑素激活Nrf2和HO-1对锰诱导纹状体氧化应激的影响
目的 探讨Nrf2和HO-1在锰所致纹状体氧化应激中的作用及褪黑素(MT)对其的影响.方法 小鼠82只,均分为6组,分别为对照组、低MnC12组、中MnCl2组、高MnC12组、MT对照组和MT+高MnCl2组.第5、6组提前皮下注射(sc)给予5 mg/kg MT,2h后,第2、3、4和6组分别腹腔注射给予12.5、25、50和50 mg/kg MnC12,连续2周.用流式细胞仪测定细胞内ROS,比色法检测GSH和MDA含量,免疫组化法检测Nrf2和HO-1表达,Western blotting检测Nrf2和HO-1的蛋白水平.结果 与对照组相比,在各MnC12组中ROS含量、MDA含量、Nrf2和HO-1的阳性表达及其蛋白水平均增加,GSH含量下降.而MT对照组中仅Nrf2和HO-1表达及蛋白水平均明显增加.与高MnCl2组相比,在MT+高MnCl2组ROS和MDA含量均明显下降,GSH含量、Nrf2和HO-1阳性表达及蛋白水平明显增加.结论 褪黑素可拮抗锰所致的小鼠纹状体氧化应激,其机制可能与Nrf2和HO-1有关.
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褪黑素对丙烯酰胺毒性保护作用的研究
目的 探讨褪黑素(MT)对丙烯酰胺(ACR)毒性的保护作用.方法 40只SD雄性大鼠按体重随机分为4组,即对照组、ACR组、MT组和联合组(MT+ACR组),每组10只,均单笼饲养.采用自由饮水染毒的方式,对照组饮用灭菌自来水;ACR组饮用浓度为2.3 mmol/L的ACR溶液;MT组饮用灭菌自来水,腹腔注射2.5 mg/kg MT,1次/d;联合组饮用浓度为2.3 mmol/L的ACR溶液,同时腹腔注射2.5 mg/kg MT,1次/d.连续9周.每周记录大鼠进食量、饮水量、体重增长,并进行步态评分.染毒结束后,各组大鼠均断头处死,称量重要脏器,并计算其脏器系数,测定大鼠血清生化指标.结果 与对照组比较,ACR组大鼠从第3周开始步态出现明显改变,平均体重和食物利用率自第2周始明显降低,大脑和小腩脏器系数增高,ALB、Cr显著下降,上述差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,MT组大鼠第7和8周平均体重明显降低,ALB、TP显著降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,联合组大鼠从第3周开始步念出现明显异常,第2周始平均体重明显降低,食物利用率自第3周明显降低,大脑、小脑、睾丸脏器系数增高,ALB、TP、ALP、Cr明显降低,GLU明显增高,上述述差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与ACR组相比,联合组大鼠第4和5周时步态分值明显降低,第8周平均体重明显下降,大脑脏器系数有所增高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ACR对大鼠毒性作用主要表现为体重降低,以步态改变为体征的神经系统毒性;MT对ACR毒性保护作用不明显.
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褪黑素对化学诱变剂诱发微核形成的保护作用
目的通过体内和体外实验观察褪黑素(MT)对化学诱变剂诱发的人双核淋巴细胞微核和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成的影响.方法 (1)以丝裂霉素(MMC)为阳性对照,观察用3种浓度MT预处理人淋巴细胞的双核细胞微核率;(2)以环磷酰胺(CP)为阳性对照,分别用3种剂量MT给小鼠灌胃,观察小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率.结果 (1)0.01、0.10和1.00 mmol/L MT+MMC 处理组的双核淋巴细胞微核率与MT浓度呈负相关;(2)0.1、1.0和10.0 mg/kg MT+CP处理组的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率均呈剂量依赖性降低.结论 MT呈现明显的抗诱变作用.
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褪黑素对溴氰菊酯致大鼠血清氧化损伤的保护作用
目的 探讨褪黑素(Melatonin,MT)对溴氰菊酯(Deltamethrin,DM)诱发大鼠血清氧化性损伤的保护作用.方法 35只Wistar雄性大鼠按体重随机分为5组(每组7只),分别为橄榄油对照组、DM、MT1、MT2、MT3组.每组连续10d,腹腔注射相应剂量药物.并在第1、4、7和10天给药后4 h,对各组大鼠尾间采血.酶标仪比色测定大鼠血清上清中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果给药10 d后,与对照组相比,DM组血清中MDA含量从第4天到第10天,随给药时间的延长MDA明显升高(P<0.05).与DM组相比,MT1、MT2组和MT3组血清MDA含量在第7天和第10天明显降低(P<0.05),与对照组比较,DM组血清中GSH和GSH-Px活力第4天到第10天明显降低(P<0.05),CAT和SOD活力在第7天和第10天明显降低(P<0.05).与DM组相比,MT1组血清CAT、GSH和GSH-Px活力从第4天到第10天逐渐升高(P<0.05),SOD活力在第7天和第10天明显升高(P<0.05).与DM组相比,MT2组和MT3组血清CAT、GSH、SOD GSH-Px活力在第7天和第10天明显升高(P<0.05).结论 DM能诱发大鼠血清氧化损伤,MT对DM引起的大鼠血清的氧化损伤有抑制作用.
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褪黑素减轻丙烯酰胺导致PC12细胞的氧化损伤
目的 探讨褪黑素(melatonin,MT)能否减轻丙烯酰胺(ACR)对PC12细胞的氧化损伤作用.方法 研究ACR对PC12细胞存活率和氧化损伤的时间剂量-效应关系.MT干预试验分为对照组、ACR组、ACR+ MT组(50 μmoL/LMT)、ACR+ MT+褪黑素受体拮抗剂Luzindole组(50μ mol/L MT和0.2μmol/L Luzindole).干预方式有提前24 h,同时以及推后3h干预3种.检测细胞内的活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量.结果 2.5和5 mmo1/L ACR处理24 h能显著降低细胞存活率,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).1.25 mmol/L ACR在6和12 h ROS水平较对照组明显升高(P ＜0.05)；2.5 mmol/L ACR在1和6 h ROS水平明显高于对照组(P＜0.05)；5 mmol/L ACR在1 h ROS水平明显升高(P＜0.05),在6和12 h MDA含量显著高于对照组(P＜0.01).干预试验显示,MT提前24 h干预,ACR+ MT组细胞内ROS水平和MDA含量均显著低于ACR组(P＜0.01),ACR+ MT+ Luzindole组细胞内ROS水平较ACR+ MT组显著升高(P＜0.01)；MT同时干预,ACR+ MT组细胞内ROS水平显著低于ACR组(P＜0.01),ACR+ MT+ Luzindole 组ROS水平较ACR+ MT组显著升高(P＜0.01),但对MDA含量未见明显影响；MT推后干预,细胞内ROS水平和MDA含量均未见显著影响.结论 3种不同干预方式中,提前24 h MT干预能显著减轻ACR导致的PC12细胞的氧化损伤作用.褪黑素的作用机制可能与MT受体有关.
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钟基因Bmal1对褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌的作用研究
目的 研究褪黑素对TM3细胞睾酮分泌节律的影响,探讨钟基因Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌的作用.方法 运用地塞米松诱导小鼠皋丸间质细胞(TM3细胞)内源性节律的产生,通过ELISA试剂盒和实时定量RT-qPCR检测TM3细胞睾酮及类固醇急性调节基因StAR水平,研究褪黑索对睾酮节律性分泌的作用.运用siRNA干扰技术,下调钟基因Bmal1的表达,研究Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌过程中的作用.结果 10-6mol/褪黑素处理后,TM3细胞的睾酮浓度在ZT0、ZT4、ZT8、ZT12、ZT16、ZT20和ZT24各授时时点(zeitgeber time,ZT,光照开始的时间为ZT0)与对照组相比均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),StAR水平在ZT0、ZT4、ZT8和ZT12时点较对照组显著降低(P＜0.05).余玄分析结果显示,地塞米松作用后TM3细胞的睾酮分泌及StAR基因表达具有一定的节律性,峰值时间分别为ZT11:40和ZT8:06.褪黑素处理后,褪黑素组睾酮及StAR的节律均发生变化,表现为中值分别下降36.53％和32.09％,振幅分别减弱18.54％和44.44％.Bmal1干扰后,与对照组相比,褪黑素作用于Bmal1低表达的细胞,睾酮浓度、StAR水平及睾酮分泌节律改变差异均无统计学意义(P＞0.05);对StAR节律性表达的影响减小.结论 适当剂量的褪黑素不仅可抑制TM3细胞中睾酮水平及StAR的转录水平,而且能改变两者的节律性表达.钟基因Bmal1在褪黑素抑制TM3细胞睾酮节律性分泌过程中发挥了一定的调控作用.
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褪黑素对大鼠视交叉上核中c-fos表达的影响
目的了解外源性褪黑素(MT)对大鼠视交叉上核中c-fos表达的影响及其可能的调节机制.方法在正常光照(LD=12:12)和完全黑暗(DD)条件下,在1 d中的不同时点给大鼠皮下注射外源性褪黑素,检测视交叉上核(SCN)中c-fos表达的昼夜变化.
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褪黑素对香烟烟雾溶液作用下大鼠淋巴细胞氧化应激的影响
目的 通过体外实验了解香烟烟雾作用下细胞的氧化应激状况，并了解褪黑素对这种状况的影响。
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香烟烟雾的氧化应激效应及褪黑素的干预作用
目的通过体外实验了解香烟烟雾作用下细胞的氧化应激状况,并了解褪黑素对这种状况的影响.方法选择(200±20)g雄性Wistar大鼠,无菌采血并分离淋巴细胞.用pH值7.2的磷酸盐缓冲液(PBS)作为吸收液制备0.2支/毫升的水溶性香烟烟雾溶液(CSS),并以终浓度8×10-3支/毫升的香烟烟雾溶液作用于细胞.前期试验中用0.05和0.1mmol/L褪黑素预处理香烟烟雾作用的细胞,发现0.1mmol/L的褪黑素增加细胞活力的作用比0.05mmol/L强,因此作为后续试验的干预浓度.实验中以RPMI 1640为培养液,在37℃、体积分数5%CO2的条件下孵育细胞.实验设对照组、褪黑素作用组(MLT组)、香烟作用组(CSS组)、褪黑素与香烟共同作用组(MLT+CSS组).用0.1mmol/L MLT对MLT和MLT+CSS组细胞预处理2h后,在CSS和MLT+CSS组细胞中加入香烟烟雾溶液,再孵育2h.用Alamar Blue摄入法检测细胞活力,彗星试验检测DNA损伤,Nitrite法测定SOD活性,TBA荧光法测定脂质过氧化水平(LPO),考马斯亮蓝G250测定蛋白质水平以校正SOD及LPO值.结果CSS组彗星尾长以及LPO水平均高于对照组,SOD活性低于对照组,差异显著.与CSS组相比,MLT+CSS组细胞活力增加,DNA损伤减轻,SOD活性增强,LPO水平降低,差异显著.结论体外实验中,8×10-3支/毫升的香烟烟雾溶液处理细胞出现氧化应激反应.0.1mmol/L MLT能增强细胞活力,增加SOD活性,减轻脂质过氧化和DNA损伤,有效拮抗CSS的氧化损伤作用.
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尤登双样图在褪黑素检测质量控制中的应用
开展分析质量控制研究，制定分析质量控制措施是保障分析数据准确的重要手段。卫生部食品卫生监督检验所作为全国保健食品检测中心实验室，组织全国保健食品功效成分检测实验室参加了功效成分测定质量控制。因为褪黑素类保健食品在全国各省市都有，绝大多数的保健食品功效成分检验单位都开展了这个项目的检验工作，而且褪黑素的标准检验方法还通过了1998年全国食品卫生标准化委员会的评审，具有一定的科学性和可行性，所以本次质量控制选择褪黑素的测定作为质量控制的项目，尤登双样图是美国国家标准局(NBS)的分析、统计学家尤登(W.J.Youden)提出的，实验时同时测定两个试样，将结果绘制成图，所以称为双样图。它具有简便、直观、实用的特点，是一种很好的实验室间的质量控制评价手段。
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薄层色谱-表面增强拉曼光谱法快速检测改善睡眠类保健食品的主要成分及其光谱表征
目的 建立薄层色谱(TLC)与表面增强拉曼光谱(SERS)联用技术对改善睡眠类保健食品的主要成分(褪黑素、维生素B6)的快速检测新方法.方法 以环己烷-乙酸乙酯,乙醇(5∶3.5∶2,V/V)为展开剂,利用TLC将改善睡眠类保健食品中主要成分与保健食品基质初步分离,在UV254nm下检测定位;以780 nm激光为激发波长,水相银胶溶液为表面增强剂,采用SERS法对TLC上的微量成分进行原位定性检测.通过模拟阳性样品试验,考察保健食品基质对褪黑素、维生素B6的TLC-SERS的影响,并考察褪黑素及维生素B6的检出限,并随机对市售4种改善睡眠类保健食品进行检测.结果 褪黑素、维生素B6的TLC-SERS与相应对照品的拉曼光谱特征峰存在明显相关性;保健食品的基质对褪黑素和维生素B6的检测不存在干扰;褪黑素和维生素B6的检出限为10、5 μg.市售改善睡眠类保健食品主要成分的TLC-SERS与褪黑素或维生素B6基本相同.结论 本法准确、灵敏、快速、简单,为检测混合样品等复杂体系主要成分的定性鉴别检测提供一种有效方法.
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高效液相色谱-串联质谱测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中的褪黑素含量
目的 建立测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中褪黑素含量的高效液相色谱-串联质谱方法.方法 样品中褪黑素以甲醇为提取溶剂,以超声波为提取方式进行提取.采用色谱柱Thermo Beta Basic-18 (150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸水(60∶40),流速0.6 ml/min,柱温40℃.用串联离子阱质谱在电喷雾电离正离子(ESI+)-二级质谱(MS/MS)模式进行质谱测定.结果 方法的线性范围为10～200μg/kg,基质加标工作曲线线性方程为y=10204.8x-8575.85,相关系数r=0.999 2.方法的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg,平均回收率为81.92％,相对标准偏差＜10％.结论 本方法选择性高、快速,可以应用于蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末中褪黑素检测,也可为其他复杂体系中褪黑素的测定提供依据.
关键词： 蝙蝠蛾被毛孢菌丝体 褪黑素 高效液相色谱-串联质谱法 保健食品 -
褪黑素对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响及抗炎作用
目的:研究褪黑素对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响及抗炎作用.方法:32只SPF级SD大鼠随机分成4组造模,哮喘组、MT组、地塞米松组、正常组,每组8只.各组于后一次雾化激发后取外周血涂片染色,计数外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)百分比;收集肺泡灌洗液(BALF),计数炎症细胞总数;制作肺组织石蜡切片,HE染色计数气道周围EOS数目;用免疫增强浊度法检测血清中IgE水平;用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+ Tr数目变化.结果:①哮喘组外周血中CD4+CD25+Tr/CD4+T细胞比值与气道周围EOS细胞数呈现高度负相关(r=-0.73,P<0.05),与BALF细胞总数亦高度负相关(r=-0.78,P<0.05),与血清IgE水平未见显著相关;②CD4+CD25+ Tr/ CD4+T细胞比值哮喘组显著高于其他各组(均为P<0.01),其他三组差异无统计学意义;③MT组气道周围EOS计数、外周血EOS比例、BALF细胞总数及IgE水平明显低于哮喘组(均为P<0.01).结论:CD4+CD25+Tr参与了哮喘的发病.褪黑素能显著降低哮喘大鼠CD4+CD25+ Tr的数目,有效减轻哮喘大鼠气道炎症和血清IgE上升水平.
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血清褪黑素水平与儿童哮喘关系的临床研究
目的:研究支气管哮喘患儿在不同病情时的血清褪黑素水平变化,探讨影响哮喘患儿血清褪黑素水平变化的因素.方法:收集哮喘急性发作期患儿血清样品45例,其中轻度15例、中度15例、重度15例、临床缓解期患儿15例、健康对照组15例,应用ELISA法测定血清样品的褪黑素水平.结果:血清褪黑素水平轻度发作组为(22.76± 5.16 pg/ml),中度发作组(16.79±3.35 pg/ml),重度发作组(11.54±1.45 pg/ml),缓解期组(22.06±3.36 pg/ml),对照组(28.72±4.32 pg/ml).五组间进行多重比较,除缓解组与轻度发作组无显著差别外,其余各组间差别显著(P＜0.05),且随着病情的加重,褪黑素的水平逐渐降低.结论:哮喘患儿血清褪黑素水平明显降低,它的降低可能与患儿睡眠紊乱,机体处于应激状态有关.
