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清开灵注射液对登革病毒Ⅱ型的抗病毒作用研究
目的 检测清开灵注射液在细胞模型上抗登革病毒Ⅱ型(DENV-Ⅱ型)作用.方法 本实验以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞,阿昔洛韦(ACV)为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT法检测细胞存活率来测定药物的细胞毒性、药物对DENV-Ⅱ的直接灭活作用、以及药物抗DENV-Ⅱ对细胞的吸附和对DENV-Ⅱ在细胞内复制的抑制作用.结果 该药在体外对DENV-Ⅱ无直接灭活作用,也不能阻止其对细胞的吸附,但对病毒在细胞内的增殖有明显的抑制作用,且呈一定的剂量效应依赖性.结论 该药在体外有一定的抗DENV-Ⅱ感染作用.
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纳米氧化石墨烯对小鼠体内外急性毒性作用
目的 通过体内和体外实验观察氧化石墨烯纳米颗粒的急性毒性作用.方法 选择60只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成6组,每组10只,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,分别以剂量0 mg/(kg·bw)、3.125 mg/(kg·bw)、6.25 mg/(kg·bw)、12.5 mg/(kg·bw)、25.0 mg/(kg·bw)和50.0 mg/(kg·bw)进行纳米氧化石墨烯灌胃,观察动物一般状态及死亡情况;另取60只ICR小鼠,分为6组,在无菌条件下,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,以剂量0 mg/(kg·bw)、1.0 rg/(kg·bw)、2.0 mg/(kg·bw)、4.0 mg/(kg·bw)、8.0 mg/(kg·bw)和16.0 mg/(kg·bw)进行尾静脉注射,观察动物一般状态及死亡情况.采用MTT法,以剂量为9.875 mg/(kg.bw)、18.75 mg/(kg.bw)、37.5 mg/(kg.bw)、75 mg/(kg· bw)、150 rg/(kg.bw)、300 mg/(kg·bw)和600 mg/(kg·bw)的氧化石墨烯与A549细胞进行共培养,观察细胞的生长状况并计算细胞的LC50.结果 纳米氧化石墨烯经口染毒途径未引起小鼠器官病理改变,无动物死亡;通过尾静脉注射对小鼠的LD50为5.657 mg/(kg·bw),肺、肝、心组织血管内可见褐色纳米颗粒,但组织未见病理学变化;对A549细胞的LC50为56.885 μg/mL.结论 未经修饰的纳米氧化石墨烯经尾静脉注射可导致动物死亡,并对A549细胞生长具有抑制作用.
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北虫草水提物对肺腺癌细胞A549的影响
本文采用MTT法进行北虫草水提取物对肺腺癌细胞A549体外抑制的研究。结果表明：北虫草水提取物可抑制肺腺癌细胞A549的生长，细胞形态发生明显变化。随着北虫草水提物浓度的增加，抑制率显著增大，呈明显的剂量依赖。当北虫草水提物浓度为3mg/mL时，抑制率大为74.14%±4.49（P<0.05），为北虫草临床治疗肺癌提供理论依据。.
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四甲氧基棉酚对小鼠精母细胞的毒性作用
目的 采用小鼠精母细胞的毒性实验初步研究棉籽油中游离棉酚降解产物四甲氧基棉酚的毒性.方法 (1)采用半制备型高效液相色谱仪制备四甲氧基棉酚;(2)采用浓度为2.5、5.0、7.5、10和15 μg/ml的四甲氧基棉酚处理小鼠GC-2精母细胞,通过MTT法与显微镜观察四甲基棉酚对小鼠GC-2细胞的毒性作用.结果 (1)根据面积归一化法,四甲氧基棉酚的面积比为87.5％,得四甲氧基棉酚16 mg;(2) MTT法:四甲氧基棉酚组均出现不同程度的增殖抑制,四甲氧基棉酚对小鼠GC-2精母细胞的半数抑制浓度IC50为6.554 ag/ml;显微镜观察法:四甲氧基棉酚随浓度增加,对细胞的毒性越大.结论 四甲氧基棉酚在浓度2.5～15 μg/ml对小鼠GC-2精母细胞均有增殖抑制作用,且细胞形态均有不同程度改变,实验结果表明四甲氧基棉酚对小鼠GC-2精母细胞具有毒性作用.
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MTT法检测卵蛋白刺激哮喘小鼠脾淋巴细胞增殖佳实验条件的研究
目的 探讨MTT法检测卵蛋白(OVA)刺激哮喘小鼠脾淋巴细胞增殖的佳实验条件.方法 制备OVA诱导哮喘小鼠模型,分离脾淋巴细胞.接种不同浓度的脾淋巴细胞,在不同培养时间点测定吸光度(A)值,确定佳细胞浓度和检测时间.观察不同浓度OVA对脾淋巴细胞增殖的影响.结果 佳脾淋巴细胞接种浓度为2×106 ～4×106 cells/ml,佳检测时间为48 h.培养24和48 h时,细胞浓度为1×106 ～4×106 cells/ml,A值与细胞浓度呈线性关系(r＞0.99).10μg/ml OVA可诱导脾淋巴细胞显著增殖,100μg/ml OVA反而抑制脾淋巴细胞增殖.结论 MTT法可用于检测哮喘小鼠的脾淋巴细胞增殖,细胞浓度与A值呈线性关系.OVA浓度是影响脾淋巴细胞增殖的重要因素.
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三氯乙烯对L-02肝细胞活力及SET蛋白表达的影响
三氯乙烯( Trichloroethylene,TCE)是工业上广泛应用的一种有机溶剂,主要通过呼吸道和皮肤进入人体产生职业性危害,吸收后主要蓄积于肝脏、脑、心脏等器官.SET蛋白,又称I2PP2A或TAF-1β,1992年因首次鉴于伴有SET基因染色体易位的未分化型白血病患者SE而命名[1],该蛋白在细胞中广泛存在.SET是肿瘤抑制因子蛋白磷酸酶2A( protein phosphatase 2A,PP2A)的胞内抑制蛋白,有文献报道SET抑制组蛋白乙酰化参与转录[2].但目前尚不清楚SET蛋白在TCE致肝细胞毒性中的作用.本文以人正常肝细胞L-02为受试细胞,建立了TCE致L-02肝细胞的剂量-效应关系,同时研究了TCE对SET蛋白表达变化的影响,为探讨TCE致肝损害发病机理及其治疗提供科学依据.
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改良MTT法检测HePG-2细胞增殖的研究
MTT比色法广泛用于检测培养细胞的生长和增殖、评价化学物的细胞毒性以及抗肿瘤药物的敏感试验.由于MTT的代谢产物甲瓒(formazan)为水不溶性的,必须采用合适的有机溶剂溶解后,才能通过酶标仪或分光光度计进行检测.通常的方法是在加入噻唑蓝(MTT)培养4 h后,吸出培养基,加入DMSO溶解甲瓒后比色测定.去除培养基的操作较为繁琐,且引起一定的实验误差,同时对悬浮生长的细胞,其应用也受到一定的限制.我们在应用MTT比色法检测化学物和药物的细胞毒性的实际工作中,根据MTT比色法存在的主要问题,采用二甲基甲酰胺(DMF)作为甲瓒的溶剂,以HePG-2肝肿瘤细胞株为研究对象,对现行的MTT比色法作了一定的改进.
关键词： MTT法 二甲基甲酰胺 检测 HEPG-2细胞增殖 -
壳聚糖抗菌喷膜体外细胞毒性检测的探讨
壳聚糖是近十年来生物医药领域中发展迅速的一种天然生物材料，其生物安全性也备受关注。本研究采用浸提法中的MTT比色法和间接接触中的琼脂扩散法检测壳聚糖抗菌喷膜的体外细胞毒性。MTT比色法检测时，不同浸提比例的受试物，细胞毒性差异明显。琼脂扩散法检测时，不同琼脂浓度，结果也有差异。鉴于不同检测方法之间结果的差异，因此，在检测中，要根据不同的产品类型选择适宜的方法。
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BALB/c 鼠脾脏T 淋巴细胞体外转化试验条件的优化研究
为了探索BALB/c鼠脾脏T淋巴细胞转化试验的佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对脾细胞浓度和刀豆蛋白A(ConA)的浓度两个参数进行研究.结果表明,在本次实验条件下,采用5×105个/ml细胞、2.5μg/ml的ConA可获得大的吸光度(A)值,两个因素间存在明显的交互效应.
关键词： T淋巴细胞体外转化试验 MTT法 BALB/c鼠 -
两种不同细胞毒性检测方法的比较
目的:通过比较GB/T 14233.2-2005和GB/T 16886.5-2017中涉及的细胞毒性检测方法-MTT法的差异,为试验的选择提供参考.方法:分别采用GB/T 14233.2-2005和GB/T 16886.5-2017中的MTT法检测8种医疗器械的细胞毒性,比较两种方法对同一样品的结果判定是否存在差异.结果:由于两个标准在细胞浓度、培养时间、结果判定方面都有所不同,对同一种样品,可能会出现不同的判定结果.
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抗瘤丸对神经胶质瘤细胞抑制作用的实验研究
目的 考察中药抗瘤丸对神经胶质瘤细胞的抑制作用.方法 采用MTT法在不同时间(24、48、72 h)检测系列浓度(0.5、1.O、1.5、2.0、2.5 mg·mL-1)抗瘤丸对人神经胶质瘤细胞U87-MG和大鼠神经胶质瘤细胞C6的抑制作用,同时分别进行空白对照比较.结果 抗瘤丸与空白相比能降低两种胶质瘤细胞的增殖率,且对细胞增值的影响与给药浓度及时间成正相关.在72h药物浓度2.5 mg·mL-1时,人胶质瘤细胞U87-MG和大鼠胶质瘤细胞C6的细胞增值率均低,分别为66%、60%.结论 中药抗瘤丸对大鼠胶质瘤细胞C6和人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增值有关.
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MTT法测定中药益气活血方KLW_1对神经胶质瘤细胞U87-MG细胞增殖的抑制作用
目的 观察中药KLW_1对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用.方法 采用MTT法在不同时间(24、48、72h)检测系列浓度的KLW_1(2.5、5.0、10.0及20.0 mg/mL)及TMZ(50.0、100.0、200.0及400.0μmol/L)对人神经胶质瘤细胞Ug7-MC的抑制作用,同时进行空白对照比较.结果 KLW_1及TMZ与空白相比均能抑制人胶质瘤细胞U87-MG的增殖,且KLW_1对U87-MG增殖的抑制作用与给药浓度及时间成正相关.在72h药物浓度20.0 mg· mL-1时,抑制率高,为64％.结论 中药KLW_1对人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增殖有关,且作用强度与作用时间、浓度相关.
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中药复方益气消征方对体外小鼠脾细胞增殖作用的影响
目的 观察中药复方益气消征方(YQXZF)对体外小鼠脾细胞增殖作用的影响.方法 取不同浓度益气消征方体外作用于小鼠脾细胞,采用MTT比色法测定小鼠脾细胞的光密度值.结果 益气消征方对小鼠脾细胞有促进增殖的作用,在益气消征方浓度为3 μg/ml时促进增殖作用明显.结论 中药复方益气消征方具有体外促进小鼠脾细胞增殖的作用.
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不同部位鹿茸水提液对NRK-49F细胞促增殖作用的研究
目的：研究鹿茸不同部位水提液体外对细胞促增殖作用的差异。方法：以大鼠肾成纤维细胞NRK-49F作为模型，以MTT法检测鲜鹿茸上、中、下三部分水提液的促细胞增殖率，以BCA法检测样品蛋白浓度，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法分析样品蛋白组成的差异。结果：上、中、下部鹿茸样品可溶性蛋白含量分别为17.89、16.04和6.89 mg·mL-1，从顶端到基部，鹿茸可溶性蛋白的含量依次降低。加样24 h时，鹿茸上部和中部样品分别在蛋白浓度800μg·mL-1和600μg·mL-1时达到大促增殖率，分别为66.76%和64.36%，下部样品在1000μg·mL-1时达到大促增殖率，为58.87%。作用48 h后，鹿茸上部和中部样品均在蛋白浓度800μg·mL-1时达到大促增殖率，分别为219.56%和215.86%，下部样品在蛋白浓度1000μg·mL-1时达到大促增殖率，为169.20%。鹿茸样品对细胞的增殖促进作用远大于10%胎牛血清。3个部位样品蛋白组成的SDS-PAGE图谱差异不大。结论：所有样品对细胞增殖均有促进作用，且呈现浓度依赖效应。不同部位样品主要蛋白组成差异不大。
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MTT法检测蒲黄提取物对脐静脉内皮细胞增殖的影响
目的 观察蒲黄提取物对体外培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对HUVEC的影响.结果 各浓度蒲黄提取物(100mg/L、75mg/L、50mg/L、25mg/L、10mg/L)均具有显著的促进血管内皮细胞增殖的作用,各浓度之间无明显差异.结论 蒲黄提取物可通过促进脐静脉内皮细胞增殖起到抗动脉粥样硬化的作用.
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万寿菊茎叶中2种黄酮类化合物的体外抗肿瘤活性
目的:研究万寿菊茎叶中两种黄酮类化合物4'-甲氧基-泽兰素-3-O-β-D-葡萄糖苷(化合物Ⅰ)和山柰酚-3,7-O-α-L-双鼠李糖苷(化合物Ⅱ)的抗肿瘤活性.方法:人胃癌细胞SGC7901与人肝癌细胞SMMC7721经20,40,80,120,160μmol·L-1的两种化合物作用24,48,72 h后,使用MTT法测定抑制率,并以5-氟脲嘧啶作为阳性对照.使用吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色法观察浓度为160 μmol·L-1的两种化合物作用于细胞密度为1×106个/mL的2种肿瘤细胞48 h细胞形态学变化及细胞凋亡情况.结果:不同浓度的两种黄酮类化合物均可抑制人胃癌细胞SGC7901和人肝癌细胞SMMC7721的增殖,且呈现浓度与时间依赖性.化合物Ⅰ作用这2种癌细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为111.7,330.4 mg·L-1.化合物Ⅱ作用这两种癌细胞48 h的IC50分别为683.8,464.7 mg·L-1.2种化合物作用肿瘤细胞后细胞形态发生改变,并有部分细胞发生凋亡.结论:万寿菊茎叶中分离的2种黄酮类化合物具有体外抗肝癌和胃癌活性.
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细胞浓度和作用时间对细胞毒性检查法影响的探讨
目的:摸索浸提液法中能灵敏反映细胞毒性的适宜培养时间；探讨细胞接种浓度对判断细胞毒性结果灵敏度的影响.方法:采用MTT法测定7批不同受试样品浸提液与L-929细胞(细胞接种浓度分别为1×104个/mL和1×105个/mL)作用(1～7)d细胞毒性分级,从中寻找适宜的培养天数.结果:在样品浸提液与1×104个/mL L-929细胞相互作用(1～7)d中,随着作用时间的延长,细胞毒性作用越来越显著,从d3起,细胞毒性分级已经稳定；在样品浸提液与1×105个/mL L-929细胞相互作用的(1～7)d中,随着作用时间的延长,细胞毒性作用越来越显著,从d2起,细胞毒性分级已经稳定,从d5起细胞的吸光度值出现下降.结论:细胞毒性作用具有时效性.在细胞接种浓度1×104个/mL条件下,能灵敏反映细胞毒性的短的培养时间为72 h.在细胞接种浓度1×105个/mL条件下,能灵敏反映细胞毒性的短的培养时间为48 h.增大细胞接种浓度能缩短细胞毒性出现的时间,增大判断细胞毒性敏感度.
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不同外邪对正常及免疫功能低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响
目的:通过检测在风寒、寒湿和湿热环境下小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,探讨不同外邪因素对小鼠免疫功能的影响.方法:选择刀豆蛋白(ConA)诱导脾淋巴细胞增殖,采用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖能力.结果:①各外邪因素处理组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力皆明显低于正常组(P＜0.01).②各外邪低免组与低免组相比,风寒低免组、寒湿低免组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01)；湿热低免组小鼠脾淋巴细胞增殖能力也有降低,但无统计学差异.③风寒低免组与风寒组相比、寒湿低免组与寒湿组相比、湿热低免组与湿热组相比,小鼠脾淋巴细胞的增殖能力均明显降低(P＜0.01).结论:与正常组相比,各外邪因素处理组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力都发生降低,低免模型组小鼠的淋巴细胞增殖能力下降程度尤其显著.实验表明风寒、寒湿、湿热3种外邪因素可使小鼠免疫功能降低,易导致疾病的发生.
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用两种细胞评价中药白薇寒热药性
目的:通过本实验室前期建立的中药寒热药性细胞学评价方法评价中药白薇的寒热药性.方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察白薇对Hela细胞和SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察白薇对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析白薇的细胞毒作用.结果:白薇在所选浓度范围(5-800μg/mL)内对细胞增殖的影响皆表现为抑制.形态学观察表明白薇能使细胞密度减小,细胞固缩变圆,颗粒感增加.台盼蓝染色表明白薇对这两种细胞没有细胞毒作用.结论:研究结果表明白薇药性寒凉,且对所用细胞没有细胞毒作用.
关键词： 白薇 MTT法 Hela细胞 SGC-7901细胞 寒热药性 -
基于细胞学方法评价5种中药复方的寒热药性
目的:用细胞学方法评价左金丸、反左金丸、茱萸丸、甘露散、交泰丸等中药复方的寒热药性.方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察5种中药复方对HeLa细胞和SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察其对细胞形态特征的影响.结果:反左金丸、茱萸丸在所选质量浓度5-800μg/mL范围内对HeLa细胞和SGC-7901细胞的生长增殖表现出促进作用,表现为热性;左金丸、甘露散、交泰丸在所选质量浓度5-800μg/mL范围内对HeLa细胞和SGC-7901细胞的生长增殖表现出抑制作用,随着浓度的增大,抑制率逐渐增大,表现为寒性.形态学观察表明,左金丸、甘露散与交泰丸能使细胞密度减小,固缩变圆;反左金丸、茱萸丸可使细胞密度增加,结构致密,生长旺盛.台盼蓝染色表明,5种中药复方对这两种细胞没有细胞毒作用.结论:5种中药复方的寒热药性细胞学方法评价结果与文献记载一致,说明细胞学方法能够用于中药复方寒热药性的评价,为研究中药复方寒热药性提供了实验依据和方法学参考.
