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荧光定量RT-PCR检测柯萨奇病毒A组6和10型的方法建立及应用
目的 建立柯萨奇病毒A组6(Coxsackievirus A6,CVA6)和10型(CVA10)的SYBRGreen Ⅰ荧光定量RT-PCR方法并进行评价及初步应用.方法 根据GenBank上的CVA6和CVA10序列,分别设计特异性引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法体系,并分别进行灵敏度,重复性和特异性检测,然后利用该方法对649份2014年天津市未明确分型的肠道病毒阳性标本进行检测.结果 成功建立CVA6和CVA10的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法及定量标准曲线,其检出限均为101 copies/μL,重复性实验的变异系数均小于2％.该方法特异性强,与柯萨奇病毒(A组2、4、5、16型)、肠道病毒EV71型、诺如病毒、轮状病毒、麻疹病毒和乙型流感病毒均无交叉反应.利用该方法检测649份未分型标本,发现136份为CVA6阳性和174份为CVA10阳性,分别占未分型阳性标本的20.96％和26.81％.结论 本研究建立的检测CVA6和CVA10荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性好、特异性强,应用于2014年天津市手足口病监测,发现C VA6和CVA10已成为优势型病原体.
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柯萨奇病毒A组6型与肠道病毒71型感染所致手足口病临床特征比较
目的 了解柯萨奇病毒A组6型、肠道病毒71型手足口病临床特点,为指导临床诊断,调整手足口病防控策略提供科学依据.方法 采用前瞻性调查的方法,收集2013至2014年在北京市西城区手足口病临床确诊病例信息,将手足口病原核酸检测阳性的病例分为CA6、EV71组,分析比较2组的临床特点、流行特征、预后等.结果 CA6组130例,EV71组121例.2组的年龄、性别分布差异无统计学意义.CA6组发热比例高达82.3％,明显高于EV71组(34.7％,P＜0.05),其中大于等于38℃占85.0％.CA6组出现大疱疹(7.4％)、恢复期脱皮(16.9％)、脱甲(10.0％)的比例高于EV71组(P＜0.05).不同年份流行主要毒株不同.结论 与EV71感染相比,CA6感染引起的高热比例较高,部分病例可表现为大疱疹、脱皮、脱甲,整体预后较好.CA6和EV71感染所致的HFMD发病高峰季节不一致.
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湖北省十堰市59例柯萨奇病毒A组6型手足口病流行病学特征与临床特点分析
目的 探讨柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,Cox A6)手足口病的流行病学特征与临床特点,为该病的诊治与防控提供参考.方法 2012年10月至2013年9月,收集十堰市570例手足口病临床诊断病例标本,以实时荧光定量聚合酶链反应(real time RT-PCR)法进行手足口病病毒核酸检测并分型,对判定为Cox A6的手足口病确诊病例,采用描述流行病学方法进行流行病学特征与临床特点分析.结果 Cox A6在手足口病确诊病例的病原构成中居第3位(占13.41％,59/440);5岁以下儿童占100.00％,3岁以下占86.44％,散居、幼托儿童构成比为83.05％和16.95％,全市各县(市、区)全年均有发病,高峰期出现在10-11月,有1起聚集性疫情发生;所有病例在手、足、口或臀部出现皮疹,34.53％的病例出现发热,87.72％的病例出现口腔炎,26.32％的病例出现呼吸系统症状,3例白细胞计数偏高.结论 Cox A6肠道病毒可引起典型的手足口病及聚集性疫情,是手足口病的重要病原体之一,应加强监测与研究.
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2016年湖北省部分地区手足口病肠道病毒病原谱及柯萨奇病毒A6型和A10型基因特征分析
目的 了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)和A组10型(Cox A10)基因特征进行分析.方法 采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型.对其中Cox A6和Cox A10的VP1全长序列进行同源性和系统进化分析.结果 病原学监测结果显示,肠道病毒71型(EV71)阳性率为29.4％ (599/2 035),柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)阳性率为25.7％ (522/2 035),其他肠道病毒阳性率为44.9％ (914/2 035).对该地区收集的83份肠道通用阳性的非EV71和非Cox A16进行病毒分型分析,Cox A6阳性检出率为56.6％ (47/83),Cox A10阳性检出率为22.9％ (19/83),还检测出其他肠道病毒如Cox A2(2株)、Cox A4(7株)、CB4(2株)、CB5(2株)、CB6(1株)、Echo5(1株)、Echo9(1株)和Echo25(1株).对Cox A6和Cox A10的VP1基因同源性比对及系统进化分析显示,2016年湖北省22株Cox A6的VP1基因核苷酸同源性为95.1％ ～ 100.0％,11株Cox A10的VP1基因核苷酸同源性为95.2％ ～ 100.0％.我国与其他国家Cox A6和Cox A10可分别划分为8个(A～H)和7个基因谱系(A ～G).湖北省Cox A6与我国其他Cox A6位于H基因谱系上;湖北省Cox A10与我国其他Cox A10位于G基因谱系上.结论 2016年湖北省部分地区手足口病病原体除了EV71和Cox A16两种主要病毒外,还检测出Cox A6和Cox A10等手足口病的病原.其他肠道病毒中以Cox A6和Cox A10为主,仍需进一步加强对其他肠道病毒的监测和分子流行病学特征的分析.
关键词： 手足口病 柯萨奇病毒A组6型 柯萨奇病毒A组10型 VP1基因 基因特征 -
2008-2013年湖北省十堰地区手足口病病原谱动态分析
目的 分析十堰地区手足口病病原谱构成及其动态变化,为该病的预防控制提供参考.方法 2008年5月至2013年12月,从十堰市各县(市、区)收集2076例手足口病临床诊断病例标本,用一步法反转录聚合酶链反应(one-step RT-PCR)和实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法进行手足口病毒核酸检测并分型,结合病例基本信息,对判定为手足口病的确诊病例,采用描述流行病学方法进行病原谱动态分析.结果 2008-2013年,肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组(Cox A16、Cox A6、Cox A10)及其他型人肠道病毒(EV)在手足口病确诊病例中的病原构成比依次为46.35％ (24.19％～62.23％)、38.12％(13.06％ ～ 70.97％)、5.99％ (0 ～ 13.06％)、3.75％(0～8.28％)和5.79％(1.37％ ～ 15.12％).Cox A10与Cox A10致病对象为≤5岁婴幼儿;4-6月出现夏季流行高峰,10-11月出现冬季流行小高峰;各县(市、区)流行的手足口病毒均在4种以上,Cox A6所占比例持续上升,2013年达到13.06％.结论 2008-2013年十堰地区手足口病流行较为严重,病原体包括EV71、Cox A16、CoxA6、Cox A10等多种型别肠道病毒,EV71与Cox A16逐年交替维持着优势地位,Cox A6近2年有持续上升的趋势值得关注.国家在今后的疫情防控、疫苗策略和临床管理中,应高度重视手足口病持续流行过程中病原谱的变化.
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河北省手足口病伴脱甲症的流行特征分析
目的 了解河北省手足口病伴脱甲症的流行及病原学特征,为手足口病伴脱甲症的监测和预防控制提供科学依据.方法 随机抽取河北省5个监测点的实验室诊断病例进行脱甲症回顾性调查.采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)对手足口病伴脱甲症病例标本进行复核,同时将标本接种RD细胞进行病毒分离,对其他肠道病毒阳性的标本进行柯萨奇病毒A组6型(Coxsachievirus A6,Cox A6)和柯萨奇病毒A组10型(Coxsachievirus A10,CoxA10)型别鉴定.结果 1741例手足口病患者中45例出现指(趾)甲脱落症状,脱甲率为2.6％,男女比例为1.4:1,平均年龄(1.8±1.3)岁,1 ～岁病例数占51.1％.脱甲发生在发病前10天到发病后86天不等,平均(29.6±16.4)d.指(趾)甲脱落程度不等,指甲与趾甲的脱落率分别为82.2％和42.2％,指甲脱落率高于趾甲脱落率(,=15.3,P＜0.01).45例手足口病伴脱甲症患者中其他肠道病毒感染43例,其中41例为Cox A6,2例为埃可病毒30(Echovirus 30,ECHO30).结论 河北省引起手足口病伴脱甲症的主要病原是Cox A6;脱甲症主要发生于手足口病后20～ 40天,指甲脱落率高于趾甲脱落率.
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2017年广东省秋季手足口病疫情高发流行特征及因素分析
目的 探索广东省2017年秋季手足口病疫情异常升高的原因,为疫情防控提供参考依据.方法 通过“中国疾病预防控制信息系统”收集广东省手足口病个案信息、暴发疫情信息和人口学信息.收集广东省手足口病监测哨点每周送检的病例粪便或肛拭子标本,采用实时反转录聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应技术对监测样本进行肠道病毒核酸检测.选取2016-2017年柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)核酸阳性标本进行VP1全长序列测序并进行基因进化分析.采用Excel软件进行数据录入,使用SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果 2017年9月1日至10月31日,广东省报告手足口病152 791例,较2011-2016年同期平均水平增加133.25％,较2017年夏季流行高峰期增加23.16％.秋季发病峰值(24 822例/周)较2017年夏季高峰峰值升高34.72％,较2011-2016年同期平均水平升高167.71％.发病强度(以周均发病率计算)除湛江市外,20个地市均有不同程度增加,云浮、茂名等9个地市增幅超过100.00％.各年龄组发病率分布均高于2013-2016年同期平均水平,病例职业构成均以散居儿童为主.9-10月哨点监测Cox A6阳性率超过80％.2017年,Cox A6病毒核苷酸同源性为97.3％,而与2015年和2016年毒株同源性逐年降低.结论 2017年秋季广东省手足口病出现异常大幅增加,疫情高发由全省整体发病水平增长引起,与优势毒株转为Cox A6有关.
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宿州市295例手足口病病原学监测结果分析
目的:了解宿州市2013年手足口病的病原型别和分布特征,为制订手足口病的防治策略提供依据.方法:采集295例临床诊断手足口病例的生物标本,采用Real-time RT-PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)及柯萨奇病毒A组6型CoxA6)的特异性核酸.结果:295例手足口病患者标本,肠道病毒核酸总阳性数94例,总阳性率31.9％,EV71阳性67份,阳性率22.7％,CoxA16阳性数0份,阳性率0％,CoxA6阳性数13份,阳性率4.4％,其他肠道病毒13份,阳性率4.4％.男女比为1.5:1,男女阳性率分别为32.4％和31.1％,差异无统计学意义(x2 =0.055,P＞0.05).结论:2013年宿州市手足口病流行的病原体优势株为EV71,同时伴有CoxA6和其他肠道病毒感染.发病以5岁以下婴幼儿为主(97.9％),无性别差异,分布无地域差别.全年均可发病.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 柯萨奇病毒A组6型 -
甘肃省2013～2016年手足口病病原学监测分析
本研究对甘肃省2013～2016年手足口病病原监测结果进行分析,以了解甘肃省这几年病原谱的构成,主要病原的流行特点,为进一步做好手足口病防控工作提供依据.2013～2016年,甘肃省监测网络实验室对7 171份标本进行了核酸检测,对其中3373份阳性标本开展了病毒分离培养,对得到的阳性分离株进行全长VP1区核苷酸序列测定及其分子特征分析.检测到核酸阳性标本4 314份,EV71为1 153份,占病原构成的27.73％,CVA16为1 452份,占33.66％,其他肠道病毒为1 709份,占39.62％.重症病例124例,阳性97例,其中EV71为23例,占病原构成的23.71％,CVA16为9例,占9.28％,其他肠道病毒为64例,占65.98％,EV71+CA16混合型为1例,占1.03％;死亡病例2例,均为EV71.2013年以其他肠道病毒为主要病原,占36.76％(347/944);2014年以CVA16为主,占52.83％(625/1 183);2015年和2016年均以其他肠道病毒为主,分别占57.04％(531/931)和48.25％(606/1 256).分离到的病毒株除了EV71和CVA16,其他肠道病毒以CVA6、CVA10和CVA4为主.2013～2016年中,不同年份流行的病原不尽相同,不同地区流行的主要病原也存在地区差异.对流行的几种主要病原的VP1区分析结果表明:C4a基因亚型EV71在甘肃省仍然持续流行;CVA16的流行则是B1b基因亚型占据优势,B1a基因亚型逐渐消失;甘肃省流行的CVA6和CVA10与国内流行的毒株亲缘关系相近,且存在不同的传播链.
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河北省手足口病伴脱甲症病原分子特征分析
目的 了解河北省手足口病伴脱甲症病原的分子流行病学特征,为手足口病伴脱甲症的监测和预防控制提供科学依据.方法 采用随机抽样方法选取张家口、承德、保定、石家庄和邢台市5个监测点,对监测点2014年1-9月发生的手足口病实验室诊断病例进行脱甲症回顾性调查.进行病毒分离,对分离株VP1区进行PCR扩增及序列测定,比较核苷酸同源性;构建系统进化树,进行基因变异分析.结果 1 741名手足口病患者中45例出现指(趾)甲脱落症状,脱甲率为2.58％.其他肠道病毒感染者脱甲罹患率为7.80％,HEV71和CoxA16感染者脱甲罹患率分别为0.12％和0.26％,差异有统计学意义(x2=87.33,P＜0.05).45例脱甲手足口病患者中,其他肠道病毒感染病例43例,占95.56％,HEV71感染率占2.22％,CoxA16感染率占2.22％,差异有统计学意义(x2值分别为78.44和78.44,均P＜0.05).CoxA6脱甲毒株与未脱甲分离株同源性为94.5％～98.8％,与近年来我国各地的分离株同源性高达94.6％～98.7％,与芬兰等地手足口病伴脱甲症分离株同源性为92.7％～98.6％.系统进化树显示,CoxA6分离株与国际标准株Gdula及山东1996年之前的分离株亲缘关系较远,而与近年来的分离株亲缘关系较近.2株ECHO30核苷酸同源性为99.1％,与G亚型分离株同源性高于其他亚型,为G亚型.ECHO30分离株HBTJS010、HBTJS055在同一分支,均属于G亚型,与我国各地2008年之前的分离株亲缘关系较远,而与2008年后的分离株亲缘关系较近.结论 河北省引起手足口病伴脱甲症的主要病原是CoxA6.
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2013-2016年河北省保定市Cox A6型手足口病流行病学特征分析
目的 了解2013-2016年保定市柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,Cox A6)型手足口病流行病学特征,为制定防控策略提供科学依据.方法 用实时荧光RT-PCR对手足口病临床诊断病例咽拭子标本进行肠道病毒和CoxA6检测,采用描述性流行病学方法进行分析.结果 2013-2016年保定市手足口病肠道病毒阳性病例2 847例,CoxA6型阳性病例429例,占15.07％.其中2015年Cox A6所占比例高,为36.25％,2016年所占比例低,为1.68％.Cox A6型手足口病发病高峰在5～7月,北部为高发地段且农村多于城镇,男女性别比1.75:1,5岁以下儿童占90.44％.结论 Cox A6型手足口病多在5～7月发生,防控重点应放在5岁以下农村儿童.
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柯萨奇病毒A6型VP1蛋白的生物信息学分析
目的：预测柯萨奇病毒A组6型（ Coxsackievirus A6，CVA6）的衣壳蛋白VP1的基本理化性质、结构功能及线性B细胞表位。方法：应用Bioedit软件、SubLoc、TargetP和生物信息学资源门户ExPASy中的多种在线工具对CVA6 VP1的氨基酸序列进行分析。结果：CVA6 VP1为一亲水性蛋白，其相对分子量为33.6 kD，等电点为7.92，含有24个可能的磷酸化位点，没有信号肽、跨膜区和可能的脂酰化位点；其二级结构中以无规则卷曲居多，有48.52％的氨基酸残基暴露于溶液界面；该分子内存在多个潜在的线性B细胞表位，其中的155～165位氨基酸残基区域的抗原指数高。结论：成功预测到CVA6 VP1的基本理化性质、结构功能特征及可能的线性B细胞表位，为该蛋白的进一步研究及疫苗和免疫诊断试剂的研制打下基础。
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柯萨奇病毒A组6型衣壳蛋白VP1的原核表达及其抗血清的制备
目的 原核表达柯萨奇病毒A组6型(Coxsackie virus group A 6 strain,CVA6)衣壳蛋白VP1,并制备其抗血清.方法 合成经密码子优化的CVA6-VP1全长基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-VP1,转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,同时优化IPTG终浓度(0.1、0.2、0.3、0.5 mmol/L)、诱导温度(15、20、25、30℃)及诱导时间(6、8、12、16 h).表达产物采用Ni-NTA柱亲和层析纯化,将纯化重组蛋白免疫新西兰兔,制备VP1抗血清,微量细胞病变法检测血清抗体效价.结果 重组质粒pET-28a-VP1经双酶切及测序鉴定,构建正确.重组蛋白适诱导条件为:IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为12h.重组蛋白相对分子质量约34 000,于上清和包涵体中均有表达,纯化后纯度可达95％以上.兔血清效价均＞1∶8,呈阳性.结论 成功于原核表达系统中高效表达了可溶性CVA6-VP1蛋白,且获得效价较高的抗血清.
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上海地区2011—2014年手足口病的病原谱变化及流行规律分析
[目的]了解2011—2014年间上海地区手足口病病原谱的构成变化,掌握手足口病主要致病原的流行规律,为做好上海地区手足口病的防控工作提供参考.[方法]采集2011年1月至2014年12月期间两家哨点医院临床诊断为手足口病患儿的咽拭子、 粪便、 疱疹液和脑脊液,进行肠道病毒通用和分型PCR检测.绘制上海地区2011至2014年的手足口病病原谱,分析手足口病主要致病原阳性检出的分布规律.[结果]共采集上海地区2764例手足口病患儿的4088份标本.肠道病毒通用检测阳性率为76.88％,主要致病原为肠道病毒71型(EV71)、 柯萨奇病毒A组16型(CA16)、 柯萨奇病毒A组6型(CA6)和柯萨奇病毒A组10型(CA10),其阳性检出率分别为35.78％,16.53％,17.55％和2.28％.2011年上海地区手足口病主要以EV71和CA16流行为主;2012年EV71的构成比下降,CA6的构成比上升;2012年10月至2013年9月期间CA6出现高位流行,2013和2014年主要以EV71和CA6流行为主.2014—2015年上海地区流行的CA6属于D7亚型.[结论]上海地区手足口病病原谱的构成逐年发生变化,不同型别的肠道病毒呈现交替流行,其中CA6的构成比增加较快,已成为上海地区手足口病的主要致病原.对引起手足口病的肠道病毒进行持续分型监测,对上海地区手足口病的防控工作具有重要意义.
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2011—2016年上海地区手足口病病原谱及柯萨奇病毒A组6型不同基因型感染细胞的差异研究
本文旨在分析2011—2016年上海地区手足口病病原谱的构成和主要病原体流行规律,为手足口病的疫情防控和重症预警提供参考.采集2011—2016年哨点医院临床诊断为手足口病的患儿标本,首先进行肠道病毒通用型核酸和分型检测,其次对2012—2016年核酸检测为柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6, CA6)阳性样本进行基因型重组检测,分离重组型和非重组型 CA6株,比较两者生物学特性.结果显示, 2011—2012年秋季上海地区手足口病主要致病原为肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)和 CA16;2012年秋季起CA6成为主要病原体;2013—2014年重组型 CA6(recombinant CA6,R CA6)占一定比例;2015—2016年非重组型CA6(non-recombinant CA6,NR CA6)成为优势流行株.R CA6和NR CA6代表株在RD细胞中增殖良好,在KB、MRC-5和HEp-2细胞中未见明显增殖.比较 R CA6与NR CA6代表株接种于RD细胞后细胞活性下降的动态变化,未见显著差异.本研究证实,CA6为近年来上海地区手足口病的主要病原体,R CA6和NR CA6的构成比逐年变化,提示持续监测手足口病主要病原体并了解其生物学特性,对上海地区手足口病的防控预警及疫苗研发具有重要意义.
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2010年上海部分地区440例手足口病病例的病原谱及分子流行病学分析
本文旨在对上海部分地区2010年440例临床手足口病病例进行病原谱及分子流行病学特征分析,为上海地区手足口病防治工作提供依据.采集4所哨点医院440例手足口病病例的咽拭子、粪便和脑脊液标本,进行肠道病毒核酸检测、反转录-聚合酶链反应扩增、DNA测序和序列分子系统发生树分析.结果显示,引起手足口病的肠道病毒主要为肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16),其次为CA6和CA10.夏季(5～8月)为EV71和CA16感染的高发期.CA6和CA10阳性病例构成比随季节而变化,冬季达高峰.病毒的VP1基因序列分析显示,病例标本中的EV71均属CAa亚型,与国内近年各地流行株高度同源；而本研究中10例上海病例的CA6序列与2008年导致芬兰手足口病疫情的毒株有高度的核苷酸同源性(＞96％),CA10序列与2009年山东和2010年云南代表株为接近,在系统发生树中分布于亚洲毒株基因簇.本研究提示,应重视对上海地区导致手足口病的非EV71非CA16肠道病毒的监测,深入分析CA6和CA10的流行趋势,以防范其快速传播.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组6型 柯萨奇病毒A组10型 -
柯萨奇病毒A组6型研究进展
柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)是引起非典型手足口病、疱疹性咽峡炎的主要病原体,重症可出现神经及心、肺系统症状等.自2012年后,CVA6因在我国多个省市呈现替代肠道病毒71型或CVA16成为引起手足口病主要病原体的趋势,而引起关注.此文就CVA6的流行病学、实验室诊断、动物模型及疫苗研发进展进行综述.
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2016年杭州市儿童常见肠道病毒型别感染流行病学调查
目的 了解2016年杭州市儿童各种肠道病毒感染的流行情况.方法 采集2016年杭州市儿童医院收治的疑似肠道病毒感染患儿的咽拭子或粪便标本共2977份,采用实时荧光定量PCR检测肠道病毒通用型核酸、肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirusA16,CoxA16)、CoxA6、CoxA4和CoxA10.比较不同性别、年龄患儿肠道病毒阳性率.统计学处理采用卡方检验.结果 2977份标本中,肠道病毒阳性1480份(49.7％),其中CoxA6、EV71、CoxA16、CoxA4、CoxA10和其他肠道病毒分别为447份(30.2％)、281份(19.0％)、151份(10.2％)、101份(6.8％)、51份(3.4％)和449份(30.3％).男性患儿肠道病毒阳性882份、女性598份,差异无统计学意义(χ2=4.564,P=0.471).手足口病、疱疹性咽颊炎和其他类疾病患儿肠道病毒阳性率分别为64.4％(1051/1632)、52.4％(323/616)和14.5％(106/729),阳性率比较差异有统计学意义(χ2=503.387,P<0.01).手足口病患儿肠道病毒阳性标本中CoxA6为386份(36.7％),EV71为266份(25.3％),CoxA16为130份(12.4％);疱疹性咽颊炎患儿肠道病毒阳性标本中CoxA4为65份(20.1％),CoxA6为48份(14.9％),CoxA10为28份(8.7％);其他类疾病患儿肠道病毒阳性标本中其他肠道病毒为63份(59.4％),CoxA4为15份(14.2％),CoxA6为13份(12.3％).手足口病、疱疹性咽颊炎和其他类疾病患儿各种肠道病毒构成比差异有统计学意义(χ2=399.758,P<0.01).不同年龄段患儿肠道病毒检出率差异有统计学意义(χ2=142.899,P<0.01);不同年龄段患儿肠道病毒亚型构成比差异有统计学意义(χ2=106.160,P<0.01).结论 2016年杭州市儿童肠道病毒检出率高的为CoxA6,其次为EV71和CoxA16.
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柯萨奇病毒A组6型与肠道病毒71型感染所致的手足口病临床特点比较
目的 探讨柯萨奇病毒A组6型(CA6)和肠道病毒71型(EV71)感染所致手足口病(HFMD)的临床特点.方法 回顾性分析2013年9月至2014年8月在重庆医科大学附属儿童医院住院的HFMD患儿的临床资料,纳入病原学确诊为EV71和CA6感染的病例,分为EV71组和CA6组,分析两组的临床特点、流行特征和预后.结果 共确诊HFMD住院患儿887例,其中EV71组438例(49.4％),CA6组43例(4.8％).①EV71组和CA6组平均年龄分别为(17.6±8.7)和(27.2±18.2)月龄,差异有统计学意义(P＜0.001).②两组流行时间不同,CA6组以1～3月所占比例大,EV71组主要集中于4～7月.③发热、神经系统受累症状(呕吐、惊跳及肢体抖动)在CA6组发生率明显低于EV71组(P均＜0.05),且意识障碍仅见于EV71组.④CA6和EV71组主要表现为手足疱疹、口腔疱疹和臀部皮疹,CA6组还更表现为躯干、四肢和口周皮疹.CA6组疱疹比例(23/43,53.5％)明显高于EV71组(49/438,11.2％) (P＜0.001).⑤CA6组均痊愈,并完成随访;EV71组428例(97.7％)痊愈,1例(0.2％)死亡,347/437例(79.4％)完成随访.CA6组后期脱甲和脱屑的发生率均较EV71组明显增高(P均＜0.001).CA6组均无后遗症;EV71组肢体瘫痪8/437例(1.8％),癫(痫)1/437例(0.2％).结论 EV71和CA6感染所致的HFMD好发于不同季节,与EV71感染相比,CA6感染患儿年龄偏小,皮疹广泛,形态多样,脱甲及脱屑发生率高,神经系统受累较轻,预后较好.
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检测柯萨奇病毒A组6、10、16型的多重荧光RT-PCR建立及应用
目的 建立检测手足口病(HFMD)肠道病毒的多重荧光RT-PCR方法.方法 用多重荧光RT-PCR技术对引起HFMD的3种常见人肠道病毒[柯萨奇病毒A组(CVA)6、10、16型]进行检测,用基因测序法进行验证,并以灭活的CVA6、CVA10、CVA16病毒标准株以及引起临床相似症状的病原体样本进行特异性和灵敏度分析.结果 322例临床疑似HFMD标本,经本多重荧光RT-PCR法检测出CVA16、CVA10和CVA6型阳性样本分别为81、16和9份(总阳性率32.9％),且与基因测序法结果完全符合.将多重PCR体系中c-MMLV逆转录酶的量增至5U,Hot-Taq酶的量增至8.5U,可使其扩增效率提升至单重PCR扩增水平.优化后的体系可扩增出CVA6、CVA10和CVA16型阳性病毒标准RNA的检测下限分别是10,5和1 TCID50/mL.结论 建立了一种灵敏、特异、高效和高通量的检测HFMD肠道病毒的多重荧光RT-PCR法,为其快速诊断提供了新的实验方法.
