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甘肃省2013～2016年手足口病病原学监测分析
本研究对甘肃省2013～2016年手足口病病原监测结果进行分析,以了解甘肃省这几年病原谱的构成,主要病原的流行特点,为进一步做好手足口病防控工作提供依据.2013～2016年,甘肃省监测网络实验室对7 171份标本进行了核酸检测,对其中3373份阳性标本开展了病毒分离培养,对得到的阳性分离株进行全长VP1区核苷酸序列测定及其分子特征分析.检测到核酸阳性标本4 314份,EV71为1 153份,占病原构成的27.73％,CVA16为1 452份,占33.66％,其他肠道病毒为1 709份,占39.62％.重症病例124例,阳性97例,其中EV71为23例,占病原构成的23.71％,CVA16为9例,占9.28％,其他肠道病毒为64例,占65.98％,EV71+CA16混合型为1例,占1.03％;死亡病例2例,均为EV71.2013年以其他肠道病毒为主要病原,占36.76％(347/944);2014年以CVA16为主,占52.83％(625/1 183);2015年和2016年均以其他肠道病毒为主,分别占57.04％(531/931)和48.25％(606/1 256).分离到的病毒株除了EV71和CVA16,其他肠道病毒以CVA6、CVA10和CVA4为主.2013～2016年中,不同年份流行的病原不尽相同,不同地区流行的主要病原也存在地区差异.对流行的几种主要病原的VP1区分析结果表明:C4a基因亚型EV71在甘肃省仍然持续流行;CVA16的流行则是B1b基因亚型占据优势,B1a基因亚型逐渐消失;甘肃省流行的CVA6和CVA10与国内流行的毒株亲缘关系相近,且存在不同的传播链.
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北京市丰台区手足口病患者肠道病毒A组71型基因特征分析
目的 研究北京市丰台区手足口病(Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD)患者肠道病毒A组71型(Enterovirus Group A Type 71,EVA71)分离株的基因特征.方法 使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,rRT-PCR)方法对北京市丰台区2013年3～9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.结果 在81份咽拭子标本中,有26份经rRT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点(43、58、164、184、240、249)存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸(Alanine,Ala)-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸.核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3％～100.0％,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性高(90.0％～ 97.6％).进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中.结论 北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支.
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宁波市手足口病优势毒株肠道病毒A组71型VP1编码区基因进化分析
目的 研究浙江省宁波市手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD)优势毒株肠道病毒A组71型(Enterovirus Group A Type 71,EVA71)VP1编码区基因分子进化特征.方法 收集宁波市2003 ～ 2010年HFMD患者标本,2003～2007年标本经过病毒分离后利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对EV、EVA71和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus Group A Type 16,CVA16)进行检测;2008年标本利用RT-PCR直接进行检测;2009 ～2010年标本利用实时荧光(Real-time) RT-PCR直接进行检测,选择32例EVA71阳性标本进行VP1编码区基因扩增,扩增产物经过测序后利用序列分析软件(Lasergene)进行分析.结果 宁波市2003 ～2010年共检测HFMD标本1335份,其中EV阳性1159份,总检出率为86.82％;EVA71阳性645份,占确证病例数的55.65％;CVA16阳性205份,占确证病例数的17.69％;未分型标本309份,占确证病例数的26.66％;未发现EVA71和CVA16同时阳性标本.32株代表株VP1编码区核苷酸序列的长度均为891碱基对(base pair,bp),编码297个氨基酸,核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.2％ ～ 100％和99.3％ ～100％,与C4a基因亚型代表株的核苷酸和氨基酸的同源性高,分别为95.4％～99.2％和98％～100％.氨基酸进化位点分析表明,来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异.在基因进化树上,32株流行株全部处于C4a基因亚型分支上,但位于不同的进化簇中.结论 EVA71是引起宁波市2008～2010年HFMD的优势毒株,也是导致HFMD重症病例和死亡病例的主要病原.来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异.32株代表株均属于C4a基因亚型,与同期我国其他地区流行株共同进化.
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手足口病流行病学、病原学及重症化机制的研究进展
手足口病(HFMD)是由小RNA病毒科肠道病毒属引起的急性肠道传染病,肠道病毒A组71型(EV-A71)引起的普通HFMD在临床症状等方面与柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)及其他肠道病毒引起的HFMD难以区别,且多种肠道病毒均有重症病例出现.随着人口流动性的加大,疾病传播速度的加快,传统的流行病学危险因素分析已难以实现对该病的完全防控,对其临床流行病学、分子遗传进化及重症化机制的探讨对该病的防控显得尤为重要.本文参考了国内外相关文献,对HFMD流行特征、病原学及重症化机制等进行了综述.
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肠道病毒A组71型在人脐静脉血管内皮细胞中的增殖及对细胞骨架的影响
目的：研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清；同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。
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我国手足口病病原学研究和关键防控技术的建立及推广应用
目的 开展手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原学和流行病学系统研究,以满足我国对HFMD防控的迫切需求.方法 建立并完善覆盖全国范围的HFMD三级实验室监测网络体系,将研制的针对我国HFMD防控所急需的系列组合检测和监测技术推广应用到各省、市级实验室,开展全国范围内的HFMD病原学检测和流行病学监测工作.结果 通过连续多年、系统的HFMD病原学和流行病学研究,结果显示,肠道病毒71型(EV-A71)在HFMD病原的构成比例与当地出现重症和死亡病例的多少呈高度正相关;证实C4基因亚型是我国EV-A71引起的HFMD流行的绝对优势本土基因亚型,同时依据C4基因亚型的变异变迁规律,将其进一步划分为C4a和C4b两个进化分支,EV-A71 C4a和C4b的更替与2008年之后我国HFMD重症和死亡病例增多密切相关;在此基础上,完成了EV A71灭活疫苗种子毒株的筛选;同时,阐明了我国HFMD流行特征及规律,揭示了健康人群中EV-A71和CV-A16抗体水平及变化趋势;解析了我国HFMD病原谱构成,发现多种肠道病毒可引起HFMD疫情暴发,且不同年代和地区HFMD病原谱构成存在动态变化.结论 本研究是国内外唯一连续多年针对HFMD开展系统病原学监测和研究的项目.对我国HFMD防控,保护我国儿童生命健康有非常重要的科学意义.
