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法舒地尔对冠状动脉搭桥术患者心肌保护的临床研究
心脏外科体外循环心内直视手术是治疗心血管疾病的重要方法之一。减少心肌缺血、缺氧所造成的心肌损害是体外循环心内直视手术成功与否的关键。近年来研究发现法舒地尔对心肌肌动蛋白细胞骨架和基本细胞功能起重要作用［1］，可减少心肌梗死面积，减少缺血心肌细胞凋亡［2］，本文就法舒地尔对冠状动脉搭桥术患者心肌保护作用进行临床研究。
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不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响
目的 比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求佳的卵母细胞冷冻方法. 方法 分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞.解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标. 结果 玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P＜0.05).慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4% vs 57.1%,P＜0.01).但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P＞0.05).两组的GV卵成熟率无显著差异.玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异. 结论论 玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟.
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酒精孕期暴露对C57BL/6J小鼠子代中枢神经细胞骨架蛋白的影响
目的 探讨胎儿酒精综合征(fetal alcohol syndrome,FAS)中第21天子代动物中枢神经细胞骨架蛋白的变化.方法 用C57 BL/6J小鼠建立FAS动物模型,利用免疫组化方法测定高分子量神经丝(high molecular weight neurofilament,NF-H)、中分子量神经丝(medium molecular weight neurofilament,NF-M)、低分子量神经丝(low molecular weight neurofilament,NF-L)、微丝蛋白β-actin、微管蛋白β-tubulin在第21天仔鼠大脑皮质、海马区和小脑中含量的变化.结果 酒精暴露组第21天仔鼠,NF-H在大脑皮质和海马区含量均明显降低(P＜0.01),而在小脑组织中含量未见明显下降；NF-M在大脑皮质、海马区和小脑中含量均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；NF-L在大脑皮质、海马区和小脑中含量均明显降低(P ＜0.05或P＜0.01)；β-actin在大脑皮质、海马区和小脑中含量均未见明显降低(P＞0.05)；β-tubulin在大脑皮质、海马区和小脑中含量均明显降低(P ＜0.05或P＜0.01).结论 中枢神经细胞骨架蛋白在FAS中发生了明显变化,由此推断,其可能是FAS发病的早期靶点.
关键词： 胎儿酒精综合征(FAS) 中枢神经 细胞骨架 -
模拟微重力对K562细胞增殖和分化的影响
目的 在航天飞行条件下航天员会出现"航天飞行性贫血",其分子机制尚不明确,实验观察了美国国家航空航天局(NASA)旋转式细胞培养系统模拟的微重力环境对重组人红细胞生成素(Epo)诱导K562细胞增殖分化的影响.方法 利用NASA旋转式细胞培养系统模拟的微重力环境,细胞计数分析细胞增殖情况,联苯胺染色法检测血红蛋白合成情况,应用免疫荧光和流式细胞术检测血型糖蛋白A(GPA)和转铁蛋白受体CD71在细胞表面的表达情况,应用荧光染料标记的鬼笔环肽和紫杉醇分别显示纤维型肌动蛋白和微管.结果 旋转培养的K562细胞的细胞增殖速度显著低于地面对照组;旋转培养还显著抑制Epo诱导的血红蛋白合成,联苯胺阳性细胞从Epo处理常规培养组的(15.0±1.2)%降为旋转培养组的(9.0±0.9)%;旋转培养还抑制GPA和CD71在细胞表面的表达.此外,旋转培养还促进微管解聚.结论 结果表明,旋转培养模拟微重力环境能抑制Epo诱导的K562细胞的增殖和分化;而模拟微重力环境使细胞骨架解聚可能使定位于细胞表面的蛋白(如GPA、CD71以及Epo受体等)在运输到细胞表面的过程发生障碍,从而降低对Epo的反应能力.
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利用蛋白质组学技术研究氢醌刺激后人胚肺成纤维细胞蛋白质表达改变
目的 研究氢醌(HQ)对人胚肺成纤维细胞(HLF)蛋白质表达的影响,以阐明氢醌引起细胞应答反应的分子机制.方法细胞受HQ刺激后,加入裂解液,取上清丙酮沉淀,蛋白定量.双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,胶体考马斯亮兰显色,Imagemaster2.0进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF进行肽指纹图谱鉴定.结果图像分析结果显示,对照组HLF细胞检测到490±28个蛋白点,HQ染毒组为438±23个.氢醌刺激后15个蛋白斑点发生变化,初步鉴定了其中8个蛋白斑点,包括一些氧化应激和细胞骨架相关蛋白.结论氢醌可引起HLF细胞蛋白表达改变.
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Rho GTP酶及其在口腔领域的研究
Rho GTP酶小鸟苷酸三磷酸酶,是一种单体G蛋白,它在肌动蛋白细胞骨架的组装、细胞粘附、细胞运动、胞质分裂和基因表达等方面与临床上多种口腔疾病的发生有关.如空腔溃疡,正畸,牙周疾病的发生有密切关系.动物实验和临床研究均证实Rho激酶抑制剂对多种空腔疾病有较好的疗效.因此,对Rho GTP酶的研究可能为当前空腔病药物治疗提供一个新的思路.
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通阳活血方含药血清对兔缺血再灌注窦房结细胞凋亡和细胞骨架蛋白 Vinculin 的影响
目的：探讨治疗病态窦房结综合征的通阳活血方含药血清对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡和细胞骨架蛋白Vinculin的影响。方法取新生乳兔窦房结细胞，以缺氧缺糖模拟缺血，以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型。设正常对照组、模型组、空白血清组、含药血清高、中、低剂量组，运用酶标仪、流式细胞分析仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞活性、凋亡及细胞骨架蛋白Vinculin形态的变化。结果模型组活细胞量较正常组明显减少(P<0.01)；凋亡明显增多(P<0.01)；空白血清组与模型组无明显差异。细胞骨架蛋白Vinculin裂解明显。含药血清高、中、低剂量组活细胞量明显高于模型组(P<0.05)，凋亡明显减少(P<0.01)， Vinculin结构较模型组完整，荧光强度明显高于模型组。结论通阳活血方含药血清能抑制模拟缺血再灌注引起的窦房结细胞损伤；通阳活血方治疗病态窦房结综合征的机制可能与保护窦房结细胞活性、对抗细胞凋亡、保护细胞骨架蛋白Vinculin形态结构有关。
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脂多糖诱导血管内皮细胞骨架重构中RhoA/ROCK通路的作用及中药干预
脂多糖(Lipopolysaceharide,LPS)可直接或间接的作用于内皮细胞,引起内皮屏障功能和血管通透性的变化,其诱导的内皮细胞纤维形肌动蛋白(F-actin)骨架重构是重要病理基础.大量研究证实RhoA/Rho激酶(RhoA/ROCK)信号通路是调控F-actin骨架重构的重要信号通路.RhoA/ROCK通路通过影响氧化应激及各种血管活性因子,调控内皮细胞黏着斑(focal contact; focal adhesion plaques)、应力纤维的形成等,引起细胞形态及细胞与基质之间的张力变化,导致细胞骨架重构.很多中药可以通过抑制RhoA/ROCK通路,降低相关信号分子的表达来调控细胞骨架,从而发挥保护内皮细胞的作用.
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阿魏酸对兔受损窦房结细胞骨架F-actin、Vinculin的影响
目的 观察阿魏酸对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞骨架蛋白F-actin和Vinculin 的影响,探讨其保护窦房结细胞的机制.方法 取新生乳兔窦房结细胞,以缺氧缺糖模拟缺血,以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型.正常对照组与模型组给予等体积培养基,阿魏酸高、中、低剂量组分别给予相应浓度药物(终浓度分别为100 μmol/ml、20 μmol/ml、10 μmol/ml),运用酶标仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞活性、细胞骨架蛋白F-actin和Vinculin形态的变化.结果 模型组活细胞量较正常对照组明显减少(P＜0.01);细胞骨架蛋白F-actin和Vinculin裂解明显.阿魏酸高、中、低剂量组活细胞量明显高于模型组(P＜0.01),F-actin和Vinculin结构较模型组明显完整,平均荧光强度明显高于模型组(P＜0.01).结论 阿魏酸可抑制模拟缺血再灌注引起的窦房结细胞损伤;阿魏酸保护窦房结细胞的机制可能与保护细胞骨架蛋白F-actin和Vinculin 从而维持细胞电生理稳定有关.
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骨组织工程研究进展
组织工程学是应用生命科学和工程学的原理及技术,构建、培育活组织,研制生物替代物,以修复或重建组织器官的结构,维持或改善功能的一门新兴学科.目前组织工程学研究的主要问题是:①种子细胞的体内、体外培养;②支架材料的研究与开发;③种子细胞与基质材料相互作用的调控等.骨创伤、肿瘤和炎症等导致的骨缺损是目前骨科临床的常见病和难治病,惟一的方法是通过骨移植进行修复.利用骨组织工程培养的人工骨不仅可修复大面积的骨缺损,而且可按需塑形及大量制备,是一种理想的创伤修复及功能重建的材料.
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人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞SM22α蛋白的影响
目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞及其骨架蛋白相关蛋白平滑肌22α(SM22α)的影响.方法:以人主动脉平滑肌细胞作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞),模型组(9代细胞),人参三七川芎提取物低、中、高(100,200,400 mg·L-1)剂量组及白藜芦醇组(10μmol·L-1),药物干预时间为48 h.采用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞SM22α形态的改变,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测SM22α的mRNA及蛋白表达情况.结果:与青年组比较,模型组细胞体积增大,形态不规则,G0/G1期数量增多,S期数量减少,且β-半乳糖苷酶染色蓝染数量减少(P＜0.01),符合衰老模型特点,且SM22α染色模糊暗淡,边缘不显,荧光强度明显减弱,SM22α mRNA及蛋白表达均下降(P＜0.01).与模型组比较,药物干预后,可以有效的增加β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,增强SM22α荧光染色强度,使得SM22α mRNA及蛋白表达均增加,并具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论:复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型;骨架蛋白相关蛋白SM22α的形态、基因表达和蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,其可能与骨架蛋白一同参与了平滑肌细胞衰老的进程;人参三七川芎提取物一定程度上延缓了血管平滑肌细胞的老化,且对于SM22α有明显干预作用,并可能通过此作用及对骨架蛋白的作用一同延缓血管老化的进程.
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心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞骨架的影响
目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞骨架的影响.方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24h后断头取脑,HE染色观察大鼠皮层区病理形态学改变;免疫组织化学法测定大脑皮层中微管结合蛋白-2(MAP-2)、微管蛋白亚型(β-tublin)的表达.结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内皮层区明显水肿,组织结构疏松;MAP-2、β-tublin表达明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P＜0.01).心脑舒通胶囊能明显减轻皮层区神经细胞水肿;增加缺血侧大脑皮层内MAP-2、β-tublin表达,与模型组比较有统计学意义(P＜0.01).结论:心脑舒通胶囊能够减轻缺血再灌注脑组织损伤程度,保护受损的脑组织,其机制可能与增加脑组织MAP-2、β-tublin表达有关.
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通阳活血方对兔缺血再灌注窦房结细胞凋亡及细胞骨架蛋白Desmin的影响
目的:观察通阳活血方对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡及骨架蛋白Desmin的影响,探讨其治疗病态窦房结综合征的机制.方法:取新生乳兔窦房结细胞,以缺氧缺糖模拟缺血,以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型.正常对照组与模型组给予等体积培养基,通阳活血方高、中、低剂量组分别给予相应浓度药物(终浓度分别为100、20、10μg/mL),运用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞凋亡率、细胞骨架蛋白Desmin形态的变化.结果:模型组细胞凋亡率较正常组明显升高(P＜0.01);细胞骨架蛋白Desmin裂解明显.通阳活血方高、中、低剂量组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.01),Desmin平均荧光强度明显高于模型组(P＜0.01).结论:通阳活血方治疗病态窦房结综合征的机制可能与对抗缺血再灌注所致的窦房结细胞凋亡及保护细胞骨架蛋白Desmin形态结构有关.
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针刺作用及机械力刺激对成纤维细胞的影响
成纤维细胞作为穴区主要的感受性细胞和效应性细胞,在接受钎刺的机械刺激后其细胞形态结构、周长和横截面积等均会发生规律性改变.同时机械力刺激还能促进成纤维细胞增殖、相关生长因子的合成与释放及细胞骨架重构等,这一系列变化的发生可能与力学效应激活成纤维细胞膜上的整合素和MAPK信号传导通路有关,从而导致机械力作用向生物化学信号的转换,由此推断成纤维细胞的改变在针刺的力传导途径中具有重要的研究意义.
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通阳活血方对兔缺血再灌注窦房结细胞骨架微管蛋白β-tubulin的影响
目的：观察通阳活血方对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞骨架微管蛋白β-tubulin的影响，探讨其治疗病态窦房结综合征的机制。方法取新生乳兔窦房结细胞，以缺氧缺糖模拟缺血，以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型，将细胞分为空白组、模型组和通阳活血方高、中、低剂量组。治疗组给予通阳活血方相应浓度药物，空白组与模型组给予等容积培养基，采用酶标仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞活力、细胞骨架微管蛋白β-tubulin 形态变化。结果模型组存活细胞量较空白组明显减少(P＜0.01)；β-tubulin裂解明显。通阳活血方高、中、低剂量组存活细胞量明显高于模型组(P＜0.05)，β-tubulin结构较模型组明显完整。结论通阳活血方可抑制模拟缺血再灌注引起的兔窦房结细胞损伤，其治疗病态窦房结综合征的机制可能与保护窦房结细胞活力及细胞骨架微管蛋白β-tubulin形态结构有关。
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人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝的影响
观察人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝F-actin和G-actin的影响.以人主动脉平滑肌细胞(HASMC)作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞)、模型组(9代细胞)、中药低剂量组(l00mg· L-1)、中药中剂量组(200 mg·L-1)、中药高剂量组(400 mg·L-1)及白藜芦醇组(10 μmol·L-1),药物干预时间为48 h.应用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞F-actin和G-actin形态的改变,Western blot检测F-actin蛋白的表达情况.与模型组相比,中药各给药组及白藜芦醇组可以有效的降低β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,提高细胞的增殖能力,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,减少F-actin蛋白的表达量及应力纤维的形成,且药物干预效果明显,具有统计学意义.复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型,细胞骨架微丝蛋白G-actin和F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,人参二七川芎提取物对细胞G-actin和F-actin有明显干预作用,其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程.
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细胞骨架与神经退行性疾病相关性研究进展
阿尔兹海默症主要的细胞病理变化,是细胞外淀粉样蛋白沉积形成的老年斑以及细胞内细胞骨架异常交联形成的神经纤维缠结.其他常见神经退行性疾病,如杭廷顿症、帕金森症中,也出现与细胞骨架结构相关的特征性病理变化.提示细胞骨架结构是神经退行性疾病共同的发病关键环节.从细胞骨架结构的角度认识神经退行性疾病发病的分子机制,对全面认识这类疾病的生物学机制很有帮助.综述近年细胞骨架相关的神经退行性疾病的分子机制研究进展,从细胞骨架结构以及相关细胞信号通路进行分析,总结以细胞骨架为靶点治疗神经退行性疾病的新发现.
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"醒脑开窍"针刺法对缺血再灌注大鼠脑皮质细胞骨架的影响
目的 探讨"醒脑开窍"针刺法对缺血再灌注后大鼠脑组织神经细胞骨架的影响.方法 健康雄性SD大鼠120只,随机分为正常组、假手术组、模型组、非穴位针刺组及醒脑开窍针刺组,采用改进的线栓法建立缺血再灌注模型.运用透射电镜观察神经细胞微管、微丝等细胞骨架在不同时间点的形态学变化.结果 模型组和非穴位针刺组大鼠大部分神经元细胞器结构溶解,核膜胞膜不清,随时间段的延长而渐趋加重,而醒脑开窍针刺组大部分神经元结构显著改善,随时间段延长而更明显,其中12 h时重新出现微管、微丝,到24 h时神经细胞已恢复正常.结论 "醒脑开窍"针刺法可通过恢复微丝、微管等细胞骨架来修复病变的神经元结构.
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自然衰老大鼠血管老化中细胞骨架的改变及人参三七川芎提取物的干预作用
目的 观察人参三七川芎提取物对自然衰老大鼠胸主动脉及骨架蛋白的影响.方法 50只SD雄性大鼠(8～9月龄)按体重随机分为模型组、中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组,每组各10只,模型组大鼠正常饲养至21月龄;各给药组大鼠分别从18月龄开始药物干预,中药低、中、高剂量组给药剂量分别为576、1152、2305 mg/kg,白藜芦醇组给药剂量为50 mg/kg,模型组按体重给予等体积的纯净水,每日1次,连续灌胃3个月;同时以10只SD雄性大鼠(3月龄)作为青年对照组(青年组).应用HE染色观察胸主动脉血管形态的改变,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)特异染色法计算蓝染组织比率,免疫荧光染色观察骨架蛋白F-actin形态的改变,Western blot法检测骨架蛋白F-actin和SM22α表达情况.结果 与青年组比较,模型组血管内膜损伤且不光滑,中膜明显增生且排列紊乱,弹力板扭曲、断裂、结构不完整,外膜增生明显,SA-β-gal染色组织蓝染比率明显增加(P＜0.01),F-actin荧光强度及蛋白表达明显增多(P＜0.01),而SM22α蛋白表达明显减少(P＜0.01).药物干预后,各给药组血管壁内皮轻度受损,弹力膜结构较完整,中膜及外膜厚度明显降低(P＜0.01);SA-β-gal染色中药中剂量及白藜芦醇组蓝染比率减少(P＜0.05),而中药低、高剂量蓝染比率改变无统计学意义(P＞0.05);各给药组F-actin荧光强度明显降低(P＜0.01);蛋白表达方面,中药中、高剂量组及白藜芦醇组F-actin蛋白表达减少(P＜0.01),而中药低剂量组改变则无统计学意义(P＞0.05),各给药组SM22α蛋白表达增加(P＜0.01).结论 细胞骨架微丝蛋白F-actin形态及蛋白表达在衰老过程中改变明显,其相关蛋白SM22α蛋白表达亦改变明显,可能共同参与了血管老化的进程;人参三七川芎提取物可以一定程度上延缓血管老化,且对于血管F-actin和SM22α蛋白有明显干预作用,可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程.
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红花苷对模拟微重力下细胞迁移的作用
目的 观察红花苷修复模拟微重力下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞迁移抑制的作用并探讨其机制.方法 MTT比色法选出红花苷干预HUVECs的佳浓度；模拟失重-2D回转仪模拟失重培养HUVECs,分为正常重力对照组、模拟微重力组、红花苷微重力组.采用透膜侵袭小室模型检测细胞迁移；激光共聚焦显微镜观察红花苷干预后细胞骨架纤维状肌动蛋白(F-actin)的形态及对黏着斑(FAs)的影响.结果 与正常重力对照组比较,模拟微重力组细胞迁移数下降(P＜0.01)；红花苷微重力组较模拟微重力组细胞迁移数增加(P＜0.05).正常重力对照组的F-actin呈现明显极化、微丝集结成束,模拟微重力可导致F-actin骨架重构,极化下降并呈现弥散特点；而红花苷微重力组的F-actin排列有序,伪足较模拟微重力组增多,方向性显著增强.模拟微重力组较正常重力对照组FAs数量(VN)、面积(VA)及FAs到细胞边缘距离(DS)显著降低(P＜0.05)；红花苷微重力组较模拟微重力组VN、VA、DS显著升高(P＜0.05).结论 红花苷可改善模拟微重力作用导致的HUVECs迁移抑制,修复模拟微重力作用导致的HUVECs骨架F-actin的重构,改善FAs的生成及定位.
