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封闭式载杆玻璃化冷冻和程序化冷冻的临床效果比较
目的 回顾性分析封闭式玻璃化冷冻技术与程序化冷冻技术在胚胎冷冻解冻及移植临床效果的差异. 方法 首先比较2010年11～12月采用三种开放式载杆和一种封闭式载杆对卵裂期胚胎进行的玻璃化冷冻.然后对2010年11月至2011年11月采用封闭式载杆行玻璃化冷冻和2009年1月至2010年12月采用程序化冷冻的数据进行对比,比较两组的复苏率、着床率和临床妊娠率等. 结果 三种开放式载杆与封闭式载杆的复苏率及着床率、临床妊娠率无显著性差异(P＞0.05).封闭式玻璃化冷冻和程序化冷冻两种冷冻方法比较显示:卵裂期胚胎采用玻璃化冷冻共2,619周期,解冻6,627枚胚胎,复苏6,276枚,复苏率为94.7％(6,276/6,627),1,522枚胚胎着床,着床率为24.3％(1,522/6,276),共1,135周期获得临床妊娠,移植妊娠率为43.3％(1,135/2,619),均显著高于程序冷冻组(P＜0.05),后者的复苏率、着床率和移植妊娠率分别为59.9％(7,797/13,016),20.6％(1,603/7,797)和39.3％(1,224/3,117).玻璃化冷冻囊胚共331周期,解冻677枚胚胎,复苏589枚,复苏率为87.0％(589/677),214枚胚胎着床,着床率为36.3％(214/589),168周期获得临床妊娠,移植妊娠率为50.8％(168/331),均显著高于程序冷冻组(P＜0.05),后者共114周期,解冻217枚胚胎,140枚复苏,复苏率为64.5％(140/217),着床率为22.1％(31/140),妊娠率23.7％(27/114). 结论 采用封闭式载杆玻璃化冷冻胚胎是一种较程序化冷冻更有效、更安全的胚胎冷冻方法.
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慢速冷冻卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局分析
目的 分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局. 方法 选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期.根据移植胚胎策略不同分为:(1)卵裂期移植组,即慢速冷冻复苏后直接行卵裂期胚胎移植,共55个复苏周期.(2)囊胚移植组,即复苏后继续培养至囊胚移植,共57个复苏周期.分析囊胚移植组胚胎复苏后继续培养的囊胚形成率,两组患者移植后的种植率、临床妊娠率、异位妊娠率、多胎妊娠率、早期流产率及抱婴率等临床结局. 结果 早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏存活率为72.57％,继续培养后的囊胚形成率为29.50％.移植时卵裂期移植组平均移植胚胎数显著高于囊胚移植组[(2.64±0.53) vs.(1.39±0.54)枚,P＜0.05],移植胚胎中优质胚胎占比无显著性差异(58.82％ vs.47.37％,P＞0.05).移植后的临床结局显示,两组临床妊娠率(44.44％ vs.39.02％)、异位妊娠率(5.00％vs.0％)、多胎妊娠率(20.00％vs.25.00％)、早期流产率(20.00％ vs.18.75％)、抱婴率(26.19％ vs.28.21％)比较均无显著性差异(P＞0.05).卵裂期移植组的种植率略低于囊胚移植组(22.69％ vs.33.33％),但无显著性差异(P＞0.05). 结论 两组临床结局差异不大,培养至囊胚移植显著减少平均移植胚胎数,但是增加无可移植胚胎的风险,各中心需要综合考虑患者意愿及具体情况,选择合适的慢速冷冻胚胎复苏后移植策略.
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人类胚胎冷冻:真的到了由慢速向玻璃化方法过渡的时代?
自第一例冻融人类胚胎获得妊娠以来,胚胎冷冻已经成为辅助生殖技术中的一项常规操作.近年来,玻璃化冷冻技术成功用于冻存人类卵母细胞及胚胎.那么,玻璃化冷冻方法已经安全到可以广泛应用,甚至可以取代慢速冷冻方法了吗？实际上仍有许多问题有待解决,包括冷冻保护剂毒性、开放式载体的交叉污染、复苏胚胎发育潜能及损伤鉴定等.
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不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响
目的 比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求佳的卵母细胞冷冻方法. 方法 分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞.解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标. 结果 玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P＜0.05).慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4% vs 57.1%,P＜0.01).但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P＞0.05).两组的GV卵成熟率无显著差异.玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异. 结论论 玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟.
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小鼠卵巢组织冷冻保存方法对组织内分泌功能的影响
目的 比较不同的冷冻方法对小鼠卵巢组织的保存效果及对组织内分泌功能的影响. 方法 25只6周龄ICR雌鼠,取卵巢皮质切块后,根据不同冷冻方法随机分成5组:新鲜对照组、二甲亚砜慢速冷冻组(A组)、丙二醇慢速冷冻组(B组)、冷冻管玻璃化冷冻5min组(C组)及冷冻管玻璃化冷冻8min组(D组).分别进行卵巢组织冷冻复苏,复苏后体外培养2周以及复苏后同种移植饲养2周实验.比较各组体外培养液中以及复苏移植后小鼠静脉血中雌二醇(E2)水平. 结果 体外培养过程中,各组培养液中E2水平均随培养时间不断增加(F=14.146,P＜0.001);同一天的E2水平比较,A、B组显著高于对照组及C,D组(P＜0.05),C、D组与对照组无统计学差异(P＞0.05).移植饲养2周后,DMSO慢速冷冻复苏移植组、PROH慢速冷冻复苏移植组的平均E2水平显著高于两组玻璃化复苏移植组、新鲜组织移植对照组、未处理自然对照组及去势未移植对照组(P＜0.05),新鲜移植对照组、两组玻璃化复苏移植组及去势未移植对照组的平均E2水平显著低于未处理的自然对照组(P＜0.05). 结论 慢速冷冻及玻璃化冷冻的小鼠卵巢组织复苏后,经过体外培养及同种移植均能保持一定的内分泌功能;慢速冷冻效果可能优于冷冻管玻璃化冷冻.
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兔卵巢组织慢速冷冻和玻璃化冷冻保存方法的研究
目的 比较不同冷冻方法对兔卵巢组织的保存效果.方法 15只新西兰雌兔,取卵巢皮质切块后,随机分成5组:新鲜组(A组)、二甲亚砜慢速冷冻组(B组)、丙二醇慢速冷冻组(C组)、冷冻管玻璃化冷冻组(D组)及固相表面玻璃化冷冻组(E组).比较各组卵巢组织的原始和初级卵泡形态正常率；通过体外培养测定培养液中雌二醇(E2)水平；比较冻融后卵巢组织的内分泌功能；通过TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,检测细胞凋亡情况.结果 原始卵泡正常形态率与A组相比,B、D组显著降低(P＜0.05),C、E组无显著性差异；初级卵泡正常形态率5组间无显著性差异.培养14d后,各实验组原始卵泡形态正常率均低于A组(P＜0.001),各实验组间无显著性差异；组间初级卵泡形态正常率无明显差异.体外培养过程中,培养液E2水平不断增加(P＜0.001),慢速冷冻和玻璃化冷冻的E2平均浓度有显著性差异(P＜0.05).细胞凋亡检测显示,无论是原始卵泡还是初级卵泡,与A组相比,各实验组的卵泡凋亡率均无显著性差异.结论 本实验中,慢速冷冻和固相表面玻璃化冷冻均能很好地保存兔卵巢组织,经过体外培养,能保持一定的内分泌功能.
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以细胞筛为载体的玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻保存人卵巢组织的效果比较
目的 比较以细胞筛为载体的玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻用于人卵巢组织冷冻的效果. 方法 人卵巢组织取皮质切块后,随机分为3组:新鲜组织对照组(F组)、慢速程序化冷冻组(S组)及以细胞筛为载体玻璃化冷冻组(V组).卵巢组织冷冻复苏后,固定切片后行苏木素-伊红染色,观察卵泡形态;使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术,观察卵泡凋亡情况;部分卵巢组织体外培养,隔日采集培养液后检测雌二醇(E2)浓度.比较三组卵泡正常形态率、卵泡凋亡率及E2浓度. 结果 与F组原始卵泡正常形态率(91.1％)相比,V组原始卵泡正常形态率(88.1％)无显著差异(P＞0.05),而S组原始卵泡正常形态率(79.6％)显著下降(P＜0.001);V组初级卵泡正常形态率(74.2％)与S组(73.6％)相似,但两组均低于F组(89.0％)(P＜0.05);凋亡检测中,3组凋亡率无显著差异(P＞0.05);体外培养2周,各组E2浓度持续上升,F组B浓度显著高于S组、V组(P＜0.001),而S组与V组E2浓度无显著差异(P＞0.05). 结论 以细胞筛为载体的玻璃化冷冻能较好地保存人卵巢组织,复苏后组织体外培养后,还可持续分泌E2.
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囊胚期胚胎玻璃化冷冻技术的临床应用研究(附一例成功分娩报道)
总结本中心囊胚期胚胎玻璃化冷冻方法在临床应用结果,探讨该冷冻方法临床应用的意义.一、资料与方法1.对象:对本中心2003年10月3日至11月28日17周期进行53 个囊胚期行玻璃化冷冻,其中6周期16个囊胚解冻,目前还有37个囊胚继续冻存中.2.囊胚期胚胎的培养和玻璃化冷冻保存:在行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)或卵母细胞体外成熟(IVM)周期中,如患者在取卵后3 d,优质胚胎数＞5个时,分两种情况进行囊胚期胚胎培养:(1)于取卵后3 d,胚胎移植,然后对剩余胚胎继续培养,再对形成的囊胚进行玻璃化冷冻;(2)对所有的胚胎继续培养到囊胚,再将移植后剩余的囊胚进行玻璃化冷冻.如果本周期移植失败,待以后的自然周期或激素替代周期进行囊胚期胚胎解冻移植.
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冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响
目的 探讨慢速冷冻和玻璃化冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响.方法 回顾性分析2011年1月～2015年12月在北京大学第一医院进行卵裂期冷冻胚胎移植的1331个周期,包括慢速冷冻周期431个和玻璃化冷冻周期900个,比较两种不同冷冻方法的胚胎复苏率、完整胚胎率、临床妊娠率、种植率、流产率等各项指标,并分析卵裂球损伤对胚胎发育潜能的影响.结果 玻璃化冷冻的胚胎复苏率(92.53％)、完整胚胎率(75.43％)、临床妊娠率(45.72％)、种植率(27.41％)高于慢速冷冻(76.93％、48.46％、39.52％、19.88％,P＜0.05);而流产率分别为12.20％、12.56％ (P ＞0.05);周期取消率分别为3.71％、1.33％ (P ＜0.05).慢速冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:36.2％、37.7％、42.0％、44.3％(P＞0.05);玻璃化冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:20.5％、42.3％、48.8％、54.1％(P ＜0.05).结论 玻璃化冷冻法更适合于人卵裂期胚胎冷冻保存,其冷冻胚胎移植周期的妊娠结局要优于慢速冷冻法;卵裂球损伤对玻璃化冷冻复苏胚胎的发育潜能影响较大.
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不同冷冻法对小鼠未成熟与成熟卵母细胞的成熟及胚胎发育的影响
本研究观察应用慢速冷冻-快速复温(常规冷冻法)与玻璃化冷冻法,对小鼠生殖泡期未成熟及第二次减数分裂中期(metaphage Ⅱ,MⅡ)成熟卵母细胞冷冻后的解冻、体外成熟、受精及早期胚胎发育的影响.
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人类卵母细胞冷冻技术研究进展
卵母细胞冷冻作为现代辅助生殖技术的一项重要组成部分,是女性生育力保存及卵子馈赠的重要手段.玻璃化冷冻方法的不断改进使卵母细胞冷冻的解冻复苏率和临床妊娠率显著提高.如何更好地降低冷冻保护剂毒性、减少冷冻损伤及提高冷冻安全性成为现阶段研究的关注点.本文将对卵母细胞冷冻技术的应用范围、冻存方法、现阶段的难点及问题进行综述.
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冷冻保存对卵母细胞影响的研究进展
随着辅助生殖技术的发展,人卵母细胞的冷冻技术受到了广泛关注并被广泛应用.但与早期胚胎的冷冻保存相比,卵母细胞的冷冻保存具有复苏后成活率低、受精率低、胚胎发育潜力差、妊娠率低、流产率高等特点.冷冻和解冻过程以及冷冻保护剂等均会对卵母细胞造成一系列形态学、细胞学以及生理、生化方面的影响.如:冷冻保护剂、冻融过程等可对卵母细胞的纺锤体、细胞骨架、细胞内钙离子、蛋白质组、细胞代谢以及卵母细胞的活性和发育潜力造成不同程度的影响.研究卵母细胞特殊的生物学特性以及冷冻对其造成的影响,有助于改进卵母细胞的冷冻方法,提高成功率.
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卵子冷冻在女性生育力保存中的作用研究进展
自1986年世界首例冷冻卵子冻融复苏后行体外受精一胚胎移植(IVF-ET)获得妊娠成功后,卵子冷冻在辅助生殖技术领域掀起热潮.卵子冷冻为女性的生育力保存开辟了新前景,但由于技术及条件的制约,卵子冷冻及其应用一直在摸索中发展.随着冻融技术、胞浆内单精子注射及未成熟卵体外培养技术的发展,卵子冷冻近年取得一定进展.已在临床应用,为女性生育力保存奠定了基础.但冻融后的卵子存活率、受精率、胚胎着床率及临床妊娠率仍明显低于常规体外受精-胚胎移植,有待进一步研究.就近年来卵子冷冻的进展及其应用综述.
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人类卵母细胞冷冻现状的研究进展
20世纪后半段,人类辅助生殖技术已经显著进步.卵母细胞冷冻是辅助生殖技术领域的一项重要成就.这项技术对于生育期妇女生育力的保存提供了更有效的解决办法.卵母细胞冷冻技术主要有慢速冷冻(slow cooling)和玻璃化冷冻(vitrification).卵母细胞冷冻前后的细胞质量是评价冷冻方法效果的基本指标.MⅡ期卵母细胞一般以细胞形态、极体的位置和大小,是否存在细胞质空泡和其他异常情况来评价其细胞的质量.卵母细胞冷冻复苏后的质量关系到胚胎或囊胚的发育,因此在冷冻卵母细胞之前选择合适的方法至关重要.
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人胚胎干细胞的保存方法
目的:胚胎干细胞经传代长期培养后会导致核型出现异常、未分化细胞的克降数减少,因此经低温保存后复苏的胚胎干细胞必须要保持其未分化状态及生物学特性.实验拟比较程序降温法、改良慢速冻存法及传统慢速冻存法对人胚胎干细胞冷冻保存的效率,以及解冻后细胞生长与分化的状态.方法:实验于2006-07/2007-04在解放军军事医学科学院野战输血研究所完成.①材料:清洁级孕13.5 d的ICR小鼠由军事医学科学院动物中心提供,用于制备鼠成纤维细胞饲养层,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.人胚胎干细胞系PKU由北京大学第三医院生殖中心建立并提供:kryo-550.16程序降温仪为英国planner公司产品,由液氮压力泵、液氮罐、层流冷冻箱、温度传感器组成.②实验方法:将人胚胎干细胞系PKU接种在胚胎鼠成纤维细胞饲养层上,胶原酶Ⅳ消化传代,分3组冷冻保存人胚胎干细胞.程序降温法:用吸管将消化后人胚胎干细胞吹成若干团块,取65个团块移入配制的冻存液中,装入麦管进行三段式降温,即22℃～-7℃,每分钟降温2.5℃→-7℃置核后停留5min→-7℃～-30℃,每分钟降温0.3℃ 30℃～-150℃,每分钟降温10℃.降至-150℃时置液氮中保存.改良慢速冻存法:A管含人胚胎干细胞培养基和血清替代品,B管含人胚胎千细胞培养基和二甲亚砜,将60个团块置入A管,再将B管液体移入A管,混匀后-70℃过夜,第2天移入液氮中保存.传统慢速冻存法:将60个团块直接放入添加二甲亚砜的人胚胎干细胞培养基中混匀,分装入冻存管,-4℃放置1 h,-70℃过夜,第2天移入液氮长期保存.③实验评估:解冻后,将保持完整形态且细胞未散离的人胚胎干细胞团块回收,比较3组细胞复苏率、复制生长状态、克隆分化程度.鉴定程序降温组人胚胎干细胞的生物学特性.结果:①复苏率:程序降温组、改良慢速冻存组、传统慢速冻存组的细胞复苏率分别为78.5%、56.7%和23.3%,组间比较差异有显著性意义(x2=6.81～13.89,P＜0.01).②复制生长与克隆分化程度:解冻后第7天与传统慢速冻存组比较,程序降温组及改良慢速冻存组细胞克隆均明显增大(t=7.36,P＜0.05:t=6.89,P＜0.05),且解冻后克隆不易分化(x2=20.47,P＜0.01:x2=9.69,P＜0.01).③生物学特性鉴定:程序降温组解冻后第10代人胚胎干细胞染色体核型正常,人胚胎干细胞特异性表面抗原SSEA-4及TRI-1.81表达呈阳性,RT-PCR可检测到nanog基因表达,SSEA-4及OCT-4阳性表达率分别为83.44%、89.38%.结论:①程序降温法是冷冻保存人胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和生物学特性.②在不具备程序降温仪的条件下,采用改良慢速冻存法保存胚胎干细胞也是可行的.
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不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响
背景:人卵巢组织冷冻已成为一种保存生育能力的手段,卵巢组织移植后必须经过血管重建过程才能恢复血供,冷冻保存和复苏技术是影响移植后卵巢组织血管重建的关键.目的:比较新型玻璃化冷冻和慢速冷冻后人卵巢组织血管内皮生长因子表达情况及微血管密度,探讨不同冷冻方法对人卵巢组织血管重建的影响.方法:8份卵巢组织标本取自子宫内膜癌患者手术切除的正常卵巢组织,将每份卵巢皮质切成1.5 mm×1.5 mm×1.0 mm大小的组织块共12块后,随机数字表法分为3组:对照组(新鲜组)、新型玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.将新型玻璃化冷冻组卵巢组织块依次在含体积分数7.5%乙二醇+体积分数7.5%二甲基亚砜+体积分数20%胎牛血清的TCM-199培养液和含体积分数15%乙二醇+体积分数15%二甲基亚砜+0.5 mol/L蔗糖的TCM-199培养液中平衡脱水,然后直接浸入液氮并装入冷冻管保存,解冻时按浓度梯度1.0,0.5,0.25 mol/L蔗糖和含体积分数20%牛血清的TCM-199培养液依次洗脱冷冻保护剂.将慢速冷冻组人卵巢组织块放入盛有1 mL冷冻液(含1.5 mol/L二甲基亚砜+体积分数20%牛血清+0.1mol/L蔗糖的TCM-199培养液)的1.8 mL冷冻管内平衡,然后放入程序冷冻仪中按设定程序进行冷冻.解冻时按浓度梯度1.0 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.5 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.25 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖和0.1 mol/L蔗糖依次洗脱冷冻保护剂.冻融组及对照组均进行体外培养.免疫组织化学观察培养0,2,4,6 d各组人卵巢组织血管内皮生长因子和CD34表达情况,并进行微血管计数.结果与结论:3组人卵巢组织培养前后间质细胞中均见血管内皮生长因子成斑片状弱表达,培养2 d血管内皮生长因子表达均增加并达到峰值,培养4 d均开始减弱,6 d时进一步减弱;与慢速冷冻组相比,新型玻璃化冷冻组血管内皮生长因子表达更接近对照组.3组人卵巢组织培养2 d微血管密度均增加并达到峰值,对照组和新型玻璃化冷冻组明显高于慢速冷冻组(P<0.05):慢速冷冻组培养4 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05);3组培养6 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05).与慢速冷冻法相比,新型玻璃化冷冻法能更好地保存人卵巢组织间质细胞和细胞外基质,对卵巢组织血管内皮生长因子表达及微血管生成的影响更少.
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不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响
目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性.方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率.结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%).结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法.
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PCOS患者体外成熟卵母细胞胚胎慢速冷冻复苏移植的临产结局研究
目的:通过对案例的对比研究评价未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)后形成的卵裂期胚胎经慢速冷冻复苏后的发育能力.方法:以该院2009年1月～2013年12月因多囊卵巢综合征(PCOS)合并不孕症行卵裂期胚胎复苏移植的462例患者为研究对象,分为两组,复苏胚胎来源于体外成熟的卵母细胞组为IVM组,共55例,复苏胚胎来源于常规体内成熟的卵母细胞组为IVF组,共407例.采用慢冻速溶法解冻移植后比较两组患者的临床结局.结果:IVM组复苏胚胎292枚,复苏后存活194枚,复苏率为66.44％;IVF组复苏胚胎1 926枚,复苏后存活1 298枚,复苏率为67.39％,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).IVM组患者的临床妊娠率和着床率分别为19.12％ (13/68)和10.90％ (17/130),明显低于IVF组临床妊娠率(45.45％,210/462)和着床率(26.50％,288/1 087,P均＜0.05).结论:体外成熟卵母细胞发育形成的卵裂期胚胎慢速冷冻后临床结局欠佳,可能与冻融前胚胎自身的发育潜力有关.
关键词： 多囊卵巢综合征 未成熟卵母细胞体外成熟 胚胎冻融移植 慢速冷冻 -
人类未成熟卵子冷冻的研究
目的 评估不同冷冻方法对人类未成熟卵子复苏和发育潜能的影响.方法 选取2009年6月～2013年12月在该院生殖中心就诊的297例卵胞浆内单精子注射(ICSI)患者捐赠的不成熟卵子438枚,其中30枚卵子冷冻前发育至MⅡ期,设为对照组;其余408枚随机分为慢速冷冻组及玻璃化冷冻组.复苏的卵子经体外成熟培养(IVM)后采用ICSI方式授精.比较各组解冻复苏率、体外培养成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 GⅤ期卵子解冻复苏率(89.4％)高于MⅠ期卵子(74.0％),而复苏后GⅤ期卵子体外培养成熟率(21.4％)低于MⅠ期卵子(55.4％);慢速冷冻组MⅠ期卵子解冻复苏率(67.9％)低于玻璃化冷冻组(79.1％);慢速冷冻组GⅤ期卵子复苏率及复苏卵子体外成熟率与玻璃化冷冻组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);慢速冷冻组解冻复苏的MⅠ期卵子体外成熟后,受精率(51.7％)、卵裂率(80.6％)、囊胚形成率E(20.0％)及囊胚形成率o(3.0％)与玻璃化冷冻组(64.8％、70.2％、15.0％、3.1％)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),均低于对照组(86.7％、96.2％、52.0％、43.3％).结论 未成熟卵子去颗粒细胞3h内如能发育至MⅡ期,受精后胚胎具有正常的发育潜能.慢速冷冻和玻璃化冷冻均适用于保存未成熟卵子,而前者胚胎贮存在封闭的麦管内,因此会更安全一些.在冷冻过程中,GⅤ期卵子对低温及冷冻保护剂的耐受能力高于MⅠ期卵子.
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慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果对比观察
目的 对比分析慢速冷冻法、玻璃化冷冻法保存小鼠卵巢组织的效果.方法 将BALB/C雌性小鼠随机均分为慢速冷冻组、玻璃化冷冻组,取卵巢组织后分别迸行慢速冷冻、玻璃化冷冻.冷冻21天结束时,取卵巢组织迸行病理学观察,比较两组各级卵泡正常率;采用免疫组化法检测卵巢组织中血管生成素2 (Ang-2)及其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达.结果 慢速冷冻组始基卵泡正常率高于玻璃化冷冻组(P<0.05),初级卵泡、次级卵泡正常率比较差异均无统计学意义(P 均 >0.05).两组颗粒细胞冷冻前Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后颗粒细胞 Ang-2(+++)、Tie-2(+++)阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;两组卵泡膜细胞冷冻前Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于冷冻后,慢速冷冻组解冻后卵泡膜细胞 Ang-2、Tie-2阳性表达率均高于玻璃化冷冻组;组间及组内比较 P均 <0.05.结论 慢速冷冻法、玻璃化冷冻法均会损伤卵巢组织内各级卵泡,并导致Ang-2、Tie-2表达变化,但慢速冷冻法对卵巢组织的损伤更小.
