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外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞体外成熟中的应用研究
目的 通过在体外成熟(IVM)培养基中加入褪黑素,探索外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞IVM中的作用,以期优化人类未成熟卵母细胞IVM的培养体系. 方法 在人类未成熟卵母细胞IVM培养体系中添加不同浓度的褪黑素,以排出第一极体作为判断其核成熟的标准,比较不同浓度下的核成熟率. 结果 与对照组(褪黑素0 mol/L)相比,外源性褪黑素在10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率有提高,但只有褪黑素在10-9 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率呈显著性提高(63.6％ vs.40.9％,87.7 vs.54.2％,68.2％ vs.45.5％,90.4 vs.69.4％) (P＜0.05);当外源性褪黑素浓度增加到10-5mol/L和10-3 mol/L时,人类未成熟卵母细胞的核成熟率显示稍低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),但与10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L组相比则呈显著性降低(P＜0.05). 结论 外源性褪黑素在适当浓度时可以促进人类未成熟卵母细胞的核成熟,而在浓度超出一定范围时,则可能对卵母细胞的核成熟造成负面影响.
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人体外与体内成熟卵母细胞发育潜能及妊娠结局的观察
目的 观察体外成熟(IVM)与体内成熟人卵母细胞的发育潜能和妊娠结局. 方法 69例多囊卵巢或多囊卵巢综合征不育患者,分别行IVM治疗49个周期(IVM组)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗29个周期(IVF组). 结果 IVM组卵母细胞成熟率为65.4%.IVM组和IVF组受精率和卵裂率分别为62.1%和77.2%,60.2%和91.2%,两组受精率无显著性差异(P＞0.05),IVM组较IVF组卵裂率降低非常显著(P＜0.01).IVM组和IVF组临床妊娠率和种植率分别为26.5%和12.6%,41.4%和22.9%,IVM组临床妊娠率和种植率较低,但两组无显著性差异(P＞0.05).IVM组和IVF组卵母细胞受精后D2≥4细胞和D3≥6细胞胚胎数占受精卵数(2PN)的比例分别为24.5%和19.4%,67.0%和66.4%,IVM组较IVF组胚胎发育速度慢,两者有非常显著性差异(P＜0.01).IVM组D3优质胚胎形成率(23.7%)较IVF组(58.2%)为低,亦有非常显著性差异(P＜0.01). 结论 人卵母细胞IVM将成为一种选择性的辅助生殖技术.人卵IVM较体内成熟卵母细胞受精后2PN至卵裂期发育阻滞发生率高,胚胎发育速度慢和优质胚胎形成率低.
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卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究
目的探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系.方法将卵母细胞在体外培养28～30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照. 结果经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高.结论卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.
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自然周期体外受精联合未成熟卵母细胞体外成熟技术在卵巢低反应患者中的临床应用价值初探
目的 对自然周期体外受精/体外成熟(IVF/IVM)技术治疗卵巢低反应引起的不育症的临床效果进行初步探讨.方法 31例适应证患者接受34个自然周期IVF/IVM治疗.取卵前36 h注射人绒毛膜促性腺激素(hCG) 10,000 IU.抽吸优势卵泡和小卵泡的卵母细胞,成熟卵母细胞于2～3 h后进行卵胞浆内单精子注射(ICSI)；未成熟卵母细胞体外培养24或48 h后,成熟卵母细胞ICSI受精.得到的胚胎于取卵后第3天进行移植.结果 取消周期4个,共27例患者取卵成功30个周期.11例获得临床妊娠,9例已分娩,全部为单胎；1例妊娠中；1例宫外孕.结论 自然周期IVF/IVM对于治疗卵巢低反应不育症是一种简便有效的方法.
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卵母细胞体外成熟在IVF-ET周期中降低OHSS风险中的应用
目的 探讨卵母细胞体外成熟培养(IVM)在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中降低卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险的应用价值. 方法 51例IVF长方案超排卵过程中出现OHSS早期征象时,充分知情后按患者意愿分成两组,实验组为即刻停药并于当天注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)36 h后取卵,改行卵母细胞IVM治疗的21个周期;对照组为继续按常规治疗的30个周期.比较两组促性腺激素(Gn)用药天数、用药量、受精率、周期取消率、临床妊娠率及OHSS发生率. 结果 两组年龄、不育年限、基础内分泌、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率均无统计学差异(P＞0.05),但实验组的卵泡刺激素(FSH)总用量、FSH用药天数、获卵数、OHSS(中、重度)发生率均低于对照组(P＜0.05),并且实验组周期ET取消率也显著低于对照组(P＜0.05). 结论 在常规IVF周期超排卵中,当出现OHSS早期征象时改行卵母细胞IVM可显著减少促排卵药物的使用量,降低OHSS的发生风险及周期移植取消率,同时获得较好的临床妊娠率.
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体外受精-胚胎移植周期未成熟卵体外成熟培养的临床价值
目的 探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期未成熟卵体外成熟培养(IVM)的临床价值. 方法 对106例不孕患者IVF/ICSI-ET治疗周期中357枚未成熟卵(MⅠ期,21 7枚;GV期,140枚)进行24 h和48 h体外培养,比较不同发育阶段未成熟卵的体外成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率. 结果 MⅠ期卵24 h和48 h总成熟率均显著高于GV期卵(分别为59.91％ vs.24.29％和72.35％ vs.42.86％)(P＜0.05);体外成熟MⅡ卵平均每取卵周期可利用胚胎数只有(0.50±0.84)枚,且受精率、卵裂率和优胚率、可利用胚胎数均显著低于同一促排卵周期体内成熟MⅡ卵(P＜0.05).结论 IVF-ET周期中所获未成熟卵经IVM能发育成熟,并具备一定的受精和胚胎发育潜能,但相关指标明显低于体内成熟卵,临床应用价值有限.
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时差监测培养系统在人未成熟卵母细胞体外成熟及其授精时机中的应用
目的 观察时差监测培养系统在人未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)中的应用,并探讨核成熟后佳的授精时机. 方法 收集我生殖中心促排卵周期中捐赠用于科研的240枚GV期卵母细胞,应用时差监测培养系统联合IVM技术,观察卵母细胞核成熟的动力学参数,包括GV破裂时间、第一极体排出时间、MⅠ持续和MⅡ静止的时间段.经过培养,对其中160枚卵母细胞根据第一极体排出后不同ICSI授精时间分为3组:＜3 h组、3～6h组和＞6 h组,比较各组的受精情况及胚胎发育情况. 结果 240枚GV期卵母细胞体外成熟率为73.3％,平均GV破裂时间为实施IVM后的(7.0±0.3)h,MI持续平均时间为(14.9±0.2)h,第一极体排出平均时间为(22.7±0.5)h.不同授精时间3组的正常受精率、卵裂率和可利用胚胎率比较均无显著性差异(P＞0.05). 结论 时差监测培养系统为未成熟卵母细胞IVM培养系统优化提供了新思路;第一极体排出后的3～6 h实时ICSI可用胚胎率有增高的趋势,但其具体影响及佳授精时间仍有待进一步研究探讨.
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卵母细胞的细胞质体外成熟的观察指标
卵母细胞体外成熟(IVM)培养过程中还存在很多问题,胞核和胞质成熟的不同步直接影响了卵母细胞的发育能力,从而影响了IVM的成功率.在探讨人未成熟卵母细胞IVM的各种影响因素时,对细胞质成熟一直缺乏有效的观察、评价指标,从而影响了研究进程.本文就IVM中卵母细胞成熟胞质的一般形态、超微结构以及可能影响胞质成熟的特异性表达基因做简要综述.
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卵母细胞体外成熟治疗多囊卵巢综合征不孕妇女
多囊卵巢综合征是常见的无排卵性不孕的原因.如果在常规诱导排卵的方法失败后,可采用辅助生育技术.而卵母细胞体外成熟是一种有效、经济、简便而且没有卵巢过度刺激综合征的好方法.
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卵母细胞的成熟抑制与发育潜力
体外成熟的卵母细胞发育潜力下降与其胞质及核成熟的不同步有关,因此,抑制卵母细胞核成熟的物质引起了人们的关注.本文综述了各种卵母细胞成熟抑制剂的作用机制及应用,重点讨论选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂丁内酯I(BL-Ⅰ)对卵母细胞的超微结构和发育潜力的影响.BL-Ⅰ能可逆性抑制卵母细胞减数分裂恢复,有望改善卵母细胞发育至囊胚的能力.
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体外成熟的卵母细胞胞质成熟的评价指标
卵母细胞的体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)是辅助生殖技术的重要过程之一.优质的IVM的卵母细胞必须是细胞核和细胞质同步成熟,以保证成功受精、胚胎正常发育乃至健康子代的出生.目前,细胞核成熟的评价标准已得到共识,而细胞质的成熟却表现复杂,尚缺乏有效的观察评价指标.近年来研究发现,卵母细胞成熟时其超微结构、一些信号分子和细胞因子均发生某些变化,这为评价细胞质成熟提供了依据.
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猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性
目的探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系. 方法取猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在体外进行成熟、受精和培养,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡(<2, 2～5和>5 mm)的不同浓度(15%、5%)卵泡液. 结果在含卵泡液的成熟培养液中培养48 h,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散(P<0.05),但不影响第一极体的排出;COCs成熟培养24 h后,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养24 h,卵丘扩散显著高于对应的48 h培养组(P＜0.05),但第一极体的排出率无显著差异;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到2～4细胞、>4细胞和桑葚胚/囊胚的百分率)呈显著正相关(P=0.005 8, 0.000 1和0.034 8). 结论卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数.
关键词： 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 卵丘扩散 胚胎发育 猪 -
丁内酯-I对小鼠卵母细胞体外成熟、染色质构型和超微结构的影响
目的观察 100 μmol/L丁内酯-I(BL-I)对小鼠卵母细胞的体外成熟、染色质构型及超微结构的影响. 方法实验组小鼠未成熟卵用"两步法"培养,先用BL-I培养液培养6 h,然后再用成熟培养液培养;对照组直接用成熟培养液培养,观察其生发泡破裂(GVBD)和第一极体形成的过程.将BL-I培养液培养6 h前后的卵母细胞分别固定行Hochest33342染色及制作电子显微镜标本,比较染色质构型及超微结构的变化. 结果 BL-I培养液培养小鼠未成熟卵6 h,实验组卵母细胞GVBD的发生率(21.5%)明显低于对照组(82.3%)(P=0.001).BL-I的抑制作用消除后,实验组卵母细胞GVBD发生率(96.9%)和成熟率(86.1%)与对照组(分别为97.3%和83.3%)无差异,但GVBD和成熟过程明显加速.BL-I抑制卵母细胞核成熟6 h,部分卵母细胞(32.8%)的染色质凝集,染色质围绕核仁型(SN)和非围绕核仁型(NSN)卵母细胞的比例(50.8%和16.4%)较培养前(69.2%和30.8%)明显下降;卵丘颗粒细胞的伸展未受影响,卵母细胞胞质的超微结构未出现明显异常,皮质颗粒和线粒体的形态及分布与对照组相似. 结论 BL-I能可逆性抑制体外培养的小鼠卵母细胞的核成熟,抑制作用消除后,卵母细胞成熟能力不受影响,但GVBD和第一极体的形成过程明显加速;在BL-I抑制卵母细胞核成熟的过程中,染色质构型发生变化,部分NSN型转化为发育能力更高的SN型,而胞质的超微结构未出现明显异常,有待进一步研究.
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不同方法冻融山羊卵巢组织的研究
目的 探讨山羊卵巢组织不同玻璃化冷冻方法对其卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的影响.方法 采用三种不同的冷冻保护液(I、II、III)保存的卵巢组织吸入0.25 ml麦管中直接投入液氮中冷冻保存.采用慢速解冻法解冻后对卵巢组织进行形态学观察;收集卵母细胞进行体外培养.结果 三种不同冷冻方法冷冻卵巢组织解冻后收集的卵母细胞存活率分别为55.2%、48.9%和46.7%,组间比较无显著性差异(P＞0.05);成熟率分别为58.5%(I组)、28.9%(II组)、33.3%(III组),I组显著高于II、III组(P＜0.01);三组的受精率、卵裂率、8细胞胚胎的形成率均无显著性差异(P＞0.05);卵巢组织解冻后形态学分析表明,I组效果好于II、III组.结论 采用玻璃化方法冷冻卵巢组织,在冷冻保护液中加入卵黄可提高冷冻保护效果.
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人成熟卵泡液在人未成熟卵母细胞体外培养中的应用
卵母细胞体外成熟(IVM)培养主要用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)[1]及诱导排卵中卵巢反应不良等症.虽然IVM在临床已实践了10多年,但IVM卵母细胞的妊娠率远低于常规卵母细胞的妊娠率[2].本研究旨在实验一种可用于临床的IVM培养液,改善临床妊娠率.
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多囊卵巢综合征患者小卵泡穿刺获得核成熟卵母细胞行卵胞浆内单精子注射成功妊娠一例
患者27岁,月经稀发,体重48 kg, 结婚3年未避孕未育,排除男方因素.阴道B超检查每侧卵巢直径2～8 mm的卵泡>10个,持续无排卵,临床诊断为多囊卵巢综合征(PCOS).
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比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果
目的 探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响.方法 以体外成熟培养18 h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25 ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标.结果 A组卵母细胞冷冻保存效果差(成熟率:A vs B、C、D为43.9%vs 51.7%、51.9%、55.9%,2～4细胞率:A VS B、C、D为34.1%vs 40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(D vs A、B、C为69.2%VS 87.0%、94.1%、91.9%).B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P<0.05).结论 综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体.
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未成熟卵体外成熟技术在卵巢高反应患者IVF-ET中的应用
目的:探讨未成熟卵体外成熟(IVM)技术在卵巢高反应患者体外受精-胚胎移植(IVF - ET)中的应用价值.方法:在IVF - ET促排治疗中,对双卵巢卵泡数过多,有可能发生卵巢过度刺激综合征(OHSS)或继续治疗可能发生重度OHSS的患者,根据其意愿即刻停药,全部取卵改行IVM治疗12个周期(A组)或取部分小卵泡改行IVM治疗,同时保留部分卵泡继续行IVF - ET常规治疗18个周期(B组).小卵泡体外培养成熟后,通过卵胞浆内单精子注射(ICSI)获得受精卵并行胚胎移植或冷冻.统计分析未成熟卵的成熟率、卵母细胞的受精率、胚胎的发育情况及临床结局.结果:两组30个取卵周期,共获未成熟卵240个,经IVM、ICSI和体外培养后,成熟率、受精率、正常卵裂率及优质胚胎率分别为61.25％ (147/240),77.55％ (114/147),92.98％ (106/114)和29.25％(31/106).A组8例行IVM新鲜胚胎移植(8周期)4例临床妊娠,A、B两组有8例行IVM解冻胚胎移植(9周期)3例临床妊娠,已有3例分娩.A组12例无OHSS发生,促性腺激素用量少于B组,B组18例中3例有OHSS风险而取消胚胎移植.结论:对常规IVF促排周期中卵巢高反应患者及时改行IVM,可以避免周期取消及OHSS的发生,减少促排卵药物的使用量,同时获得较好的临床妊娠率.
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自然周期IVF／IVM技术治疗不明原因性不孕症的临床初探
目的：探讨自然周期体外受精联合未成熟卵母细胞体外成熟（IVF/IVM）技术治疗不明原因性不孕症（UEI）的临床效果。方法23例UEI患者接受27个治疗周期。采集到的优势卵泡和小卵泡中的成熟卵母细胞当天受精，未成熟卵母细胞经IVM培养24 h或48 h后受精，得到的胚胎于第3天移植，观察妊娠情况。结果27个周期均完成移植，共获得卵母细胞279个，平均（10.3±4.4）个，优势卵泡中共获得卵母细胞23个，平均（0.9±0.4）个。正常受精率为86.5％（148/171），卵裂率为90.5％（134/148），周期妊娠率为33.3％，胚胎着床率为15.2％。成功分娩77.8％，流产率为22.2％。结论自然周期IVF/IVM可作为治疗UEI的一种尝试和选择，是一种简便有效的方法。
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C-ERBB2促小鼠卵母细胞成熟及在表皮生长因子调控小鼠卵母细胞体外成熟中的作用
目的 探讨C-ERBB2对小鼠卵母细胞成熟的影响及对表皮生长因子在卵母细胞成熟调控中的作用.方法 采用卵母细胞体外培养法,研究反义C-ERBB2寡脱氧核苷酸(C-ERBB2 ASODN)对卵母细胞体外自发成熟及对表皮生长因子(EGF)促卵母细胞成熟的影响;利用RT-PCR检测卵母细胞中C-ERBB2 mRNA的表达及在不同处理因素作用下卵母细胞成熟过程中C-ERBB2 mRNA表达的变化.结果 C-ERBB2 ASODN能呈剂量依赖方式抑制卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PBⅠ)排出率,并且能抑制EGF对卵母细胞的促成熟作用.卵母细胞中存在C-ERBB2 mRNA,EGF可以增强其表达,C-ERBB2 ASODN可减弱EGF促表达的作用.结论 C-ERBB2与卵母细胞的成熟密切相关.EGF可直接促进裸卵的成熟分裂,其机制可能与上调卵母细胞C-ERBB2的表达有关.
