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异种移植领域猪内源性逆转录病毒的研究进展
供体器官来源不足严重阻碍和困扰着器官移植手术的推广和应用,随着免疫学、基因工程与克隆技术的迅速发展,转基因猪的出现,异种移植有望解决器官短缺的问题,但猪内源性逆转录病毒种间传播的可能性必须进一步深入研究,本文就近期相关研究作一综述.
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定海区职业重点人群布鲁氏菌病调查情况分析
目的了解畜牧业重点人群布鲁氏病感染情况和其危险因素,探索定海区布病防治对策.方法对1989年203名、2003年34名、2004年136名职业重点人群采用皮试变态反应、皮试阳性者血清作试管凝集试验进行检查.结果职业重点人群感染率介于0.49%～0.74%之间,试管凝集试验均为阴性.感染者职业均与猪饲养有关.结论(1)畜牧业重点人群存在布病感染的概率,猪应视为我区人间布病感染不可忽视的传染源;(2)建议加强布病防治知识宣传教育,抓好畜牧流通环节的监管和信息交流,落实病畜扑杀补助机制;扩大布病监测范围,把从事畜牧业职业人群作为我区今后人间布病监测的重点.
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北京地区猪相关职业暴露人群病毒性肝炎知信行调查
目的 了解目前北京地区猪相关职业暴露人群病毒性肝炎知信行情况.方法 在北京市顺义、昌平、通州、大兴、平谷5个区采用横断面调查的方法,调查屠宰场、养殖场和散养户家庭猪相关职业暴露人群,进行问卷调查.结果 猪相关职业暴露人群对病毒性肝炎基本知识的知晓情况普遍较高,达到了50%以上.其中乙肝病原体的知晓率均在52.65%,调查对象的乙肝症状知晓率达到了72.0%,其中养殖场职工知晓率为59.42%,屠宰厂职工为80.00%,散养户为70.67%,差异有统计学意义(χ2=9.29,P<0.05).猪相关职业暴露人群对乙肝传播途径的知晓率达到60%以上,95.08%的人群希望了解病毒性肝炎防治知识.未接种乙肝疫苗者中有34.88%认为自己注意卫生就不会感染,有32.56%的未接种者不知道有疫苗或接种地方.结论 猪养殖、屠宰等相关职业暴露人群是病毒性肝炎防治的重点人群.
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猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性
目的探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系. 方法取猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在体外进行成熟、受精和培养,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡(<2, 2～5和>5 mm)的不同浓度(15%、5%)卵泡液. 结果在含卵泡液的成熟培养液中培养48 h,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散(P<0.05),但不影响第一极体的排出;COCs成熟培养24 h后,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养24 h,卵丘扩散显著高于对应的48 h培养组(P＜0.05),但第一极体的排出率无显著差异;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到2～4细胞、>4细胞和桑葚胚/囊胚的百分率)呈显著正相关(P=0.005 8, 0.000 1和0.034 8). 结论卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数.
关键词： 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 卵丘扩散 胚胎发育 猪 -
媒介动物(蚊、猪)体内黄病毒分子流行病学调查研究
[目的]通过对珠海注册养猪场及珠海口岸地区的蚊虫体内黄病毒的带毒率、宿主动物(猪群)及其人群进行血清黄病毒类(日本脑炎、登革热等)抗体水平的调查研究,为控制黄病毒在人群中的流行提供科学依据.[方法]采集养猪场猪血清、养猪场和口岸蚊标本、养猪场从业人员、入境的东南亚船员和城区部分发热病人血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测猪群和人群血清中的日本脑炎、登革热抗体;使用紫外灯诱蚊法在养猪场和口岸捕捉蚊类,经鉴定种类后,按20只蚊一组制成蚊悬液后,采用细胞培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及荧光定量PCR技术检测蚊体内日本脑炎病毒、登革和西尼罗病毒等黄病毒的携带情况.[结果]1.猪血清日本脑炎病毒IgG抗体:结果已发表于《中国国境卫生检疫杂志》2007年第3期《珠海市部分注册猪场日本脑炎调查研究》.2.蚊媒带毒情况检测:2005年1月～2006年12月共捕获的2763只成蚊,经鉴定隶属4属8种,其中白纹伊蚊所占比例高(32.75%),其次为致倦库蚊(26.06%)、三带喙库蚊(25.30%)、海滨库蚊(7.75%)、中华按蚊(3.84%)、骚扰阿蚊(3.18%),其他(常型曼蚊和巨型阿蚊等)(1.12%);在132组蚊研磨液的病毒细胞培养中,有7份标本出现CPE病变,使用黄病毒通用引物,RT-PCR反应能扩增出相应的阳性条带,其中白纹伊蚊组阳性3份,致倦库蚊组阳性3份,三带喙库蚊组阳性1份,但用日本脑炎病毒、登革病毒Ⅰ-Ⅳ型和西尼罗病毒等特异性引物,未能扩增出相应的阳性条带,说明可能存在着其它黄病毒类的病毒感染;采用荧光定量PCR法,对蚊悬液和细胞培养液日本脑炎、登革和西尼罗病毒进行检测,从1组海滨库蚊标本中检出日本脑炎病毒核酸阳性,但强度较弱,这与珠海地区是乙脑低发地区相一致.3.人群登革热和日本脑炎血清抗体检测:从东南亚的入境船员、本地发热病人和养猪场从业人员等血清标本511份中,登革病毒抗体IgG总阳性率为7.24%,其中以东南亚的入境船员的阳性率高,为12.76%,没有检出登革病毒抗体IgM和日本脑炎IgM抗体.[结论]珠海地区存在日本脑炎的主要传播媒介,并且在蚊媒中携带有日本脑炎病毒;蚊标本细胞培养出现细胞病变和RT-PCR扩增出黄病毒基因的特异性片段,提示在捕获蚊标本中可能存在着其他病毒感染的可能;虽然养猪场猪群日本脑炎感染率不高,但存在着日本脑炎病毒的隐性感染或曾经感染过,提示不能够放松对乙型脑炎的预防控制工作,应采取积极的预防措施,防止人群和猪场日本脑炎的发生与流行.此外,研究结果表明东南亚船员有较高的登革热感染率,因此,在登革热流行期间,我国口岸应加强对来自东南亚国家交通工具员工和旅客的登革热的监测,以及有可能藏带、孳生蚊虫的废旧物品、集装箱等的检验检疫工作,以防止登革热的传入与流行.
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猪肉中有机氯农药多组分的顶空固相微萃取-气相色谱-质谱检测技术初探
目的 探讨建立顶空固相微萃取快速测定有机氯农药残留方法.方法 以稳定性同位素13C6-六氯苯和13C10-灭蚁灵为内标,以顶空固相微萃取作为猪肉样品的前处理手段,采用气相色谱-质谱的选择离子模式(SIM)测定猪肉样品中18种有机氯农药组分.通过对萃取头类型、萃取时间、萃取温度、解析温度和时间、盐溶液的浓度等影响萃取效率的因素的研究,获得了优化的试验参数.结果 在给定条件下,方法线性范围在1～100 ng/kg范围内,混和标准溶液的加标回收率在90%～120%之间,相对标准偏差在3%～15%之间.结论 本方法适合于猪肉样品中的有机氯农药多残留的快速检测,为农药残留的筛选提供了有效的监测手段.
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插入失活法构建2型猪链球菌突变株
目的 构建2型猪链球菌突变株05ZYΔ0913,05ZYΔ0936.方法 以05ZY为模版,分别扩增0913、0936基因内部504bp,549bp片段为同源臂,与pSET4S质粒进行连接,将连接产物转入DH5a感受态细胞中,构建栽体0913-pSET4S,0936-pSET4S.然后利用插入失活法,将构建的0913-pSET4S、0936-pSET4S裁体通过电转化导入2型猪链球菌的感受态细胞中,利用壮观霉素抗性筛选得到阳性转化子,并用PCR进行鉴定.结果 筛选到的菌株均能抵抗100μg/ml壮观霉素,经PER鉴定,为失活了目的片(0913和0936片段)的2型猪链球茵突变株.结论 本研究成功构建了2个突变株,为进一步研究目的片段的基因功能奠定了基础.
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转SCK基因大米对小型猪生长发育的影响
为观察和比较转SCK基因大米和亲本大米对机体生长发育的影响,从而评价转SCK基因大米的营养价值,选用15头雄性断乳中国实验用小型猪为试验对象,随机分成3组,分别是正常对照组(NG)、亲本大米对照组(CG)、转基因大米组(GG),饲料根据实验目的配制,共饲养62 d.观察3组动物体格发育(体重、体长、体高、胸围)和脏器发育(脏器重、大体病理和组织病理)等方面的差异.结果表明,亲本大米对照组和转基因大米组动物的体格发育均优于正常对照组;3组动物脏器发育差异不明显,大体病理和组织病理均未观察到转SCK基因大米具有明显的非期望效应.说明外源性基因的插入未改变大米的营养价值或产生对动物的不良影响,转SCK基因大米和亲本大米在动物喂养方面基本满足"实质等同性"的要求.
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某口服液促进泌乳作用的人体试食试验研究
为了解我国传统配方口服液促进乳汁分泌的保健作用,对70例缺乳志愿者进行了人体试食观察.每日服用以白毛乌骨鸡、猪蹄为主要原料的口服液,日服3次,每次1支,每支10 mL,连续15 d.结果表明试食者乳房胀度增加,其有效率为73.5%;泌乳量的增长值为39.8±28.0 mL;有16人从混合喂养转变为全母乳喂养,转变率为48.5%;对照组和试食组比较,差异有极显著性 (P<0.01).对乳汁蛋白的含量无影响,对试食者健康无损害.本试验结果显示,该保健食品有促进泌乳作用.
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高效液相色谱法测定猪肉中安定残留量
为有效地监测肉类产品中的药物残留,建立了测定猪肉中安定残留量的反相高效液相色谱法.利用Al2O3层析柱对安定提取液进行净化,高效液相色谱仪测定参数:C18柱(2 mm×150 mm,3 μm);流动相:甲醇+水+25 mmol/l乙酸铵溶液(64.8+35.0+0.2);流速0.2 ml/min;光电二极管阵列检测器,波长254 nm.实验结果表明,提取液中各组分分离良好,安定浓度在100 ng/ml～40 μg/ml范围内与峰面积呈线性相关,r=0.997 19;平均回收率80.8%; RSD<5%.该方法快速、简单、准确,适用于肉类产品中安定残留量的检测.
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单扫描极谱法测定猪肉中克伦特罗残留量
为研制一个适用于基层实验室测定猪肉中克伦特罗的极谱分析方法,将试样用75%乙醇和正己烷二种不同极性溶剂提取和纯化,用拟定的极谱分析方法进行定性和定量测定.在盐酸-高锰酸钾-草酸介质中,克伦特罗峰电位为-840 mV(vs.SCE).克伦特罗浓度在 0.5～4.0 μg/mL之间线性关系良好,相关系数r=0.9994,回归方程y＝9.563x-32.15.低检出量为1.2 μg.平均相对标准偏差(RSD)为7.7%(n＝7),加标平均回收率为85.2%.该法准确、快速、简便、仪器价廉,适于基层实验室检测猪肉中克伦特罗残留量.
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对一起"瘦肉精"食品中毒案的查处及体会
为及时查明一起食物中毒的原因,防止事态的进一步扩大,采用流行病学和卫生学调查的方法,对该起事故进行调查,并对可疑食品及病人的尿样进行实验室检测.结果确认是因食用了市售的含"瘦肉精"(克伦特罗)的猪肝所引起.加强源头管理和及时掌握新的卫生信息、知识是预防、控制和查处此类食物中毒事故的关键.
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戊型肝炎与兽医公共卫生
戊型肝炎为人畜共患病,戊肝病毒(Hepatitis E Virus,HEV)为其病原.戊肝病毒分4个基因型,在中国流行或存在的为1、3、4型.基因1型目前在我国只感染人,3型目前刚刚在我国大陆猪场发现,尚未发现感染人.而4型为人畜共同感染.动物中以猪的感染率和带毒率高,常通过污染的肉制品造成人员感染和发病.猪与鹿、鸡、鼠等动物共同组成HEV的巨大病毒储库,为HEV的变异进化提供了充分的遗传资源.应加强对猪肉制品和农村地区猪场附近河流湖泊饮用水源的卫生安全管理.同时应加强动物HEV相关信息的收集和分析,将动物HEV的流行情况纳入兽医公共卫生的预警体系,实现动物HEV的常态跟踪和防控.
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北京地区牛、羊肉片中鸭、鸡、猪源性成分调查
目的 建立生肉制品中鸭、鸡、猪源性成分的荧光PCR检测方法,对北京地区出售的牛、羊肉片进行成分调查.方法合成检测鸭、鸡、猪源性成分的特异性引物和探针,建立实时荧光PCR检测方法,测定方法的特异性、灵敏度,在北京部分超市、农贸市场、餐馆采集牛、羊肉片进行成分调查.结果 所建立的实时荧光PCR方法对鸭、鸡、猪源性成分具有较好特异性,与常见食用肉类DNA在Ct 30以内无交叉反应;对混合肉中鸭、鸡、猪成分DNA的检出限是0.1％.北京市场上采集的86份牛、羊肉片中,30份检出上述成分,占34.9％;羊肉片的掺假率高于牛肉片;农贸市场采集样品掺假率明显高于超市和餐馆.结论 所建生肉制品中鸭、鸡、猪源性成分的检测方法简单、特异,对样品的检测结果显示,北京市售牛、羊肉中存在掺入鸭、鸡、猪肉的现象.
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信号通路抑制剂和饲养层对猪胚胎生殖细胞建系的影响
胚胎生殖细胞(EGCs)是原始生殖细胞(PGCs)在体外特定条件下,经重编程而形成的、具有和胚胎干细胞(ESCs)相似特性的多能性干细胞.猪EGCs的研究在利用EGCs进行核移植、生产转基因动物以及建立生物反应器方面具有广阔的应用前景.然而到目前为止真正意义上的猪EG细胞系还没有建立,体外培养条件不确定是影响猪EGCs建系的重要因素之一.本研究探讨了猪PGCs体外培养过程中不同信号通路抑制剂以及不同饲养层对其重编程形成EGCs的影响,确定了CHIR99021、SB431542和小鼠成纤维细胞制作的饲养层组合,能够较大程度维持PGCs的增殖及存活能力,实现向EGCs的重编程.
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开江县2002-2006年猪流行性乙型脑炎病毒感染监测
目的 探讨开江县猪流行性乙型脑炎(乙脑)病毒感染强度和感染时间分布,为乙脑防制提供科学依据.方法 2002-2006 年 6～7 月上、中、下旬在开江县新宁镇肉联厂采集本地 8 月龄的屠宰猪血清,采用酶联免疫法(ELISA)进行乙脑抗体IgG检测,阳性计为感染猪.结果 5 年共采集猪血清 592 份,乙脑抗体阳性 194 份,阳性率为 32.77%.2002-2006 年抗体阳性率分别为 43.41%、24.17%、26.89%、4.62%及 75.53%,之间差异有统计学意义(χ2=137.32,P＜0.01),感染高峰时间 2002-2005 年在 7 月中、下旬,2006 年在 6 月中旬,比前 4 年早 30～40 d.结论 根据 2002-2006 年猪乙脑病毒感染率和感染高峰时间,可以预测人间乙脑流行强度和发病高峰时间.由此,可早期做好乙脑防制措施,控制其发病和流行.
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组合型双循环生物人工肝支持系统的构建
报道组合型双循环生物人工肝支持系统的构建及其治疗急性肝功能衰竭犬和患者的临床疗效.治疗后,试验对象生命体征稳定,代谢支持作用明显.结果表明:构建的生物人工肝支持系统安全、稳定、有效.
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华东和华南地区商品猪戊型肝炎病毒携带率和基因分型分析
目的 了解华东和华南地区商品猪戊型肝炎病毒(HEV)的携带率和基因分型.方法 2007-2009年收集华东和华南地区5家屠宰场商品猪胆汁600份,应用巢式RT-PCR方法检测HEVRNA,测序后做系统进化分析.结果 600份猪胆汁中有47份(7.83%)分离出HEVRNA.基于HEV ORF2区域内150-nt序列的系统进化分析结果,分离的47份HEV病毒株均属于Ⅳ型,与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型参考病毒株的核苷酸同源性分别为75.0%～83.4%、75.0%～84.6%、71.9%～80.7%和88.1%～91.5%,且大部分病毒株按采样地区来源表现出地区聚集性.结论 HEV在华东和华南地区的商品猪中广泛存在,应加强对商品猪食用安全问题的关注.
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广西地区无症状猪中猪链球菌2型分子流行病学研究
目的 了解广西地区无症状猪中猪链球菌2型的带菌情况以及主要毒力因子的分布和抗药性.方法 从广西地区10个县区屠宰场采集无症状猪的扁桃体标本进行细菌分离、多重PCR鉴定和药物敏感性分析.结果 从采集到的1179份扁桃体标本中分离出1105株链球菌,其中猪链球菌667株,猪链球菌2型33株;对33株2型菌进行主要毒力因子检测,强毒型sly+mrp+epf+22株,占66.7%,sly+mrp+epf-1株,sly-mrp+epf-7株,sly-mrp+epf+2株,sly-mrp-epf-1株;33株2型菌对青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素、壮观霉素、恩诺沙星、环丙沙星、先锋霉素Ⅵ、磺胺嘧啶钠、呋喃妥因、新霉素、丁胺卡那和四环素都存在不同程度的耐药性,其中先锋霉素Ⅵ、青霉素、恩诺沙星相对敏感,分别有93.9%(31/33)、87.9%(29/33)和81.8%(27/33)的菌株在中度敏感以上,而耐药性强的是丁胺卡那和四环素,耐药菌株分别有84.8%(28/33)和81.8%(27/33).结论 广西地区无症状猪中猪链球菌2型带菌率较低,疫点与非疫点的带菌率没有明显差异;分离的菌株多以强毒型sly+mrp+epf+存在,对先锋霉素Ⅵ敏感.
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单电极金属异物探测器取出猪体内异物的实验研究
目的:通过取出猪体内异物测试单电极金属异物探测器的实用性.方法:根据互补振荡器原理,研制单电极金属异物探测器.取3只明尼苏达-荷曼系7月龄成年雄性猪,处死后取肢体共12具,根据打入金属异物不同,分为3组,A组为块状金属异物,B组为针状金属异物,C组为沙粒样金属异物.应用自制探测器探测异物位置,取出并计时,术后即刻复查X线片检测异物取出情况.结果:3组异物均完整取出,平均用时分别为38 s、3 min 12 s和3 min 59 s.术后X线片显示异物无存留,此探测器均成功取出异物.结论:此探测器在动物实验中效果满意,可在术中无须X线机辅助的条件下快速准确定位,取出金属异物,可进一步应用于临床.
