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c-ras与大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮的关系
应用离体细胞培养,研究了反义c-ras寡脱氧核苷酸(反义c-ras ODN)对人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮(P)的影响及其与外源性cAMP和Ca2+的关系.结果发现,20 μmol/L反义c-rasODN能显著抑制hCG诱导颗粒细胞的P生成量(P<0.05),而对黄体细胞的P生成无明显影响;反义c-ras ODN对hCG诱导的颗粒细胞生成P的抑制作用能被加入10-4 mol/L二丁酰cAMP所逆转,钙通道阻断剂维拉帕米对抑制作用具有协同效应.结果提示,c-ras癌基因参与hCG诱导的颗粒细胞生成P的调控,而对hCG诱导的黄体细胞P生成关系不大.
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人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究
目的 探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2(cyclin D2)的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性.方法 收集48例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组(12例)、中反应组(30例)及低反应组(6例).采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上cyclin D2及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素(FSH),人绒毛膜促性腺激素(hCG)日E2水平.分析颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数(PCNA-LI)的相关性.结果 (1)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素(Gn)支数呈负相关(r=-0.547,P<0.01; r=-0.456,P<0.05; r=-0.451,P<0.05);cyclin D2蛋白表达与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.592,P<0.01; r=0.626,P<0.01);高、中和低反应三组cyclin D2蛋白表达有显著统计学差异(F=4.995,P<0.05).(2)黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关(r=-0.510,P<0.05; r=-0.891,P<0.01);与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.629,P<0.01; r=0.524,P<0.05);高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异(F=8.843,P<0.01).(3)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关(r=0.696,P<0.01; r=0.498,P<0.05).结论 黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关.cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育.
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胰岛素样生长因子I及其受体对卵母细胞成熟的影响
目的 探讨行促排卵治疗患者血清和卵泡液中胰岛素样生长因子I(insulin like growth factor I,IGF-I)及卵丘颗粒细胞中胰岛素样生长因子I受体(IGF-IR) mRNA的水平与卵母细胞成熟的关系. 方法 选择32例行卵胞浆内单精子注射(ICSI)的患者,收集取卵日静脉血、卵泡液及卵丘颗粒细胞,并记录卵母细胞成熟度.检测血清及卵泡液中IGF-I的水平及卵丘颗粒细胞IGF-IR mRNA的表达量. 结果 血清IGF-I水平/获卵数与卵泡液IGF-I水平呈正相关；MII期卵母细胞的卵泡液IGF-I水平高于MI期,MII期卵母细胞卵丘颗粒细胞IGF-IR mRNA相对表达量约为MI期的3倍,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 卵泡液中IGF-I可促进颗粒细胞IGF-IR mRNA的表达,二者可能协同促进卵母细胞成熟.血清IGF-I水平/获卵数可能对卵母细胞成熟有预测作用.
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卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究
目的探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系.方法将卵母细胞在体外培养28～30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照. 结果经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高.结论卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.
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胰岛素对卵巢颗粒细胞黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体表达的影响
目的:研究胰岛素(INS)对猪卵巢颗粒细胞黄体生成素/绒毛膜促性腺激素(LH/CG)受体表达的影响,探讨高胰岛素血症可能在多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡发育停滞中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及其蛋白免疫印迹(Western blot)法分别对加药处理的4组猪卵巢颗粒细胞检测LH/CG受体的mRNA及其蛋白表达.结果:RT-PCR结果表明卵泡刺激素(FSH)+INS组(0.247±0.044)与FSH组(0.161±0.023)相比LH/CG受体mRNA表达明显增强(P<0.05);FSH+LH+INS组(0.240±0.030)与FSH+LH组(0.121±0.013)相比,LH/CG受体mRNA表达明显增强(P<0.01).Western blot结果表明FSH+INS组(5 702.3±815.9)、与FSH组(3 813.0±348.5)相比LH/CG受体蛋白表达明显增强(P<0.05);FSH+LH+INS组(5 898.8±933.8)与FSH+LH组(2 421.0±341.5)相比LH/CG受体蛋白表达明显增强(P<0.01).结论:INS可以协同FSH及LH增强卵巢颗粒细胞LH/CG受体的表达,推测高胰岛素可能通过增强LH+CG受体表达使PCOS患者发育至窦状卵泡阶段的卵泡颗粒细胞过早黄素化,导致卵泡发育停滞.
关键词： 多囊卵巢综合征 黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体 颗粒细胞 -
妊娠相关血浆蛋白-A与人绒毛膜促性腺激素在卵泡发育中的关系
目的探讨妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)是否参与卵泡发育中黄体生成素(LH)作用系统. 方法将来自体外受精-胚胎移植的卵巢黄素化颗粒细胞纯化后,在不同剂量人绒毛膜促性腺激素(hCG,0、5、10、50、75、100 IU/ml)作用下进行体外培养,收集培养液,采用时间荧光免疫分析法测定培养液中PAPP-A的量. 结果一定浓度范围(5～100 IU/ml)的hCG可刺激体外培养的黄素化颗粒细胞分泌PAPP-A,而卵泡刺激素(FSH)和hCG共同刺激下,颗粒细胞产生PAPP-A量的增加较单一因素作用下更明显. 结论 PAPP-A与LH/hCG在卵泡内的作用机制有关,参与了卵泡生长发育过程的调控.
关键词： 妊娠相关血浆蛋白-A 绒毛膜促性腺激素 颗粒细胞 卵泡 -
大鼠多囊卵巢颗粒细胞凋亡的实验观察
目的:观察多囊卵巢颗粒细胞凋亡的情况.方法:以大鼠多囊卵巢为动物模型,采用电子显微镜及3'-末端原位标记法观察了大鼠多囊卵巢颗粒细胞凋亡的情况.结果:(1)电子显微镜显示,多囊卵巢大鼠颗粒细胞存在凋亡所特有的形态学变化.(2)用3'-末端原位标记法在大鼠多囊卵巢检测到棕褐色深染的凋亡颗粒细胞.结论:在大鼠多囊卵巢颗粒细胞发生了凋亡.
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多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导分子STAT3磷酸化表达的研究
目的 检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞瘦素信号转导子和活化子STAT3磷酸化(p-STAT3)水平,并观察瘦素体外对培养卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平的影响,探讨瘦素在PCOS发病机制中的作用.方法 选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的肥胖型PCOS患者(肥胖PCOS组)、非肥胖型PCOS患者(非肥胖PCOS组)、排卵功能正常和单纯输卵管因素不育的肥胖(肥胖对照组)及正常体重妇女(正常对照组)各15例.采用免疫印迹技术检测卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平.同时将正常人卵巢黄素化颗粒细胞行体外培养,分别加入不同浓度的瘦素(0、10、100、1,000 ng/ml)培养48 h,观察瘦素体外对人卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平的影响.结果 (1)肥胖型PCOS组、肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平分别为(24.28±0.51)、(21.31±1.32)、(11.69±0.67)、(9.03±0.20),实验组间比较有显著性差异(P＜0.05),其中肥胖型PCOS组p-STAT3表达水平高,其次依次为肥胖对照组、非肥胖PCOS组和正常对照组.各组之间两两比较,均有显著性差异(P＜0.05).(2)加入瘦素培养48 h后,卵巢黄素化颗粒细胞p-STAT3水平随瘦素浓度升高而增高,呈浓度依赖性,至瘦素浓度达到100 ng/ml时,p-STAT3水平达到高峰,随后呈下降趋势.结论 瘦素通过介导JAK2/STAT3信号途径可能参与了肥胖型PCOS的发病机制.
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氧化应激标记物与体外受精结局和卵泡液环境的相关性研究
卵泡液作为一个生物学“窗口”反映了卵母细胞代谢及成熟变化过程,同时也是卵母细胞成熟度、受精率、卵裂率及妊娠率各参数的非侵入性预测物.卵泡液环境中存在活性氧(ROS),若机体抗氧化酶减少,会诱导产生氧化应激.其中各种抗氧化分子和酶的总水平即体现了卵泡液总抗氧化能力(TAC).TAC及ROS水平从正反两方面影响着体外受精结局.本文综述了卵泡液中ROS及TAC对体外受精胚胎发育的影响,以及颗粒细胞和卵母细胞老化与氧化应激间的关系,为提高胚胎利用率,优化移植胚胎的方法提供参考.
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中期因子与卵泡发育的研究进展
中期因子(midkine)属于肝素结合生长因子家族中的新成员,是一种强有力的刺激细胞增殖的调节因子,表达于卵泡颗粒细胞等组织,具有抑制卵丘颗粒细胞凋亡等广泛的生物学作用.在卵泡发育过程中midkine能促进卵母细胞的发育成熟,特别是对细胞质的成熟有着重要的作用,能够提高其受精率、胚胎卵裂率和囊胚率.
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卵丘细胞在卵母细胞发育过程中的作用
卵母细胞能否正常发育成熟是影响女性生育能力的重要因素,目前人们普遍认为,人类卵母细胞和卵丘细胞之间的相互交流,对于卵母细胞发育是不可或缺的.在卵泡窦腔形成过程中,颗粒细胞分化为壁颗粒细胞和卵丘细胞,卵丘细胞与其他卵泡细胞不同,具有本身独特的功能、促进排卵前卵母细胞的生长和成熟及支持排卵后卵母细胞功能的作用.本文主要对卵丘细胞的功能及在卵母细胞发育过程中的作用进行论述.
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促排卵对小鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α的影响
目的 观察自然周期排卵与促排卵状态下小鼠卵巢缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达水平的变化. 方法 成年雌性小鼠随机分为2组,每组15只,分别为自然排卵组(对照组)、普丽康促排卵组(实验组),取两组小鼠排卵期卵巢组织,采用免疫组织化学方法检测HIF-1α的表达与定位,并分析表达丰度. 结果 两组小鼠卵母细胞与颗粒细胞中均检测到HIF1α的表达,实验组HIF-1α蛋白的平均光密度值(0.149 5±0.034 7)高于对照组(0.192 4±0.026 8),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 促排卵可增加小鼠卵巢组织中HIF-1α的表达.
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不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对卵泡刺激素/缺氧诱导因子-1信号通路的影响
目的 研究不同日龄小鼠颗粒细胞对卵泡刺激素(FSH)诱导的缺氧诱导因子-1/血管内皮细胞生长因子(HIF-1/VEGF)信号通路的影响.方法 超排卵方法取出卵母细胞和颗粒细胞,进行体外受精;荧光素酶报告基因实验检测常氧和低氧培养条件下,不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/ VEGF信号通路的应答;蛋白质免疫印迹技术检测FSH受体的表达水平.结果 雌性小鼠超排卵数和卵母细胞体外受精能力与小鼠日龄数呈负相关;FSH上调小鼠卵丘颗粒细胞HIF-1α的转录活性;免疫印迹结果显示小鼠颗粒细胞中FSH受体的表达水平随着日龄数的增加呈下降趋势.结论 小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答反应随小鼠天日龄数增加而下降,与颗粒细胞表面FSH受体的表达下降相一致.雌性小鼠随着年龄增加引起的生殖能力下降可能与颗粒细胞表面FSH受体表达减少有关.
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间充质干细胞来源微囊泡对卵巢颗粒细胞的作用
目的 探讨间充质干细胞来源微囊泡(MVs)对卵巢颗粒细胞的作用. 方法 取传代第8代(P8)前的人脐带间充质干细胞进行无血清培养,超速离心结合蔗糖密度梯度离心法从培养液上清中分离纯化MVs,透射电镜形态学观察,Bradford法蛋白定量.将PKH26标记的不同浓度MVs(0、10、15、20、25μg/ml)与3周龄雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞共培养,3h后荧光显微镜观察颗粒细胞对MVs的内化作用;48 h检测培养细胞周期各时相的变化及培养液上清中E2浓度. 结果 随培养时间的延长,MVs释放量显著增加,8×105个细胞大约释放10 μg左右的MVs,电镜下MVs呈圆形或椭圆形,直径介于30～1 000 nm之间,中间为低电子密度区.与MVs共培养3h后,颗粒细胞胞浆中可见呈红色荧光信号的MVs;不同浓度的MVs均可显著增加颗粒细胞的增殖指数(PI)、S期细胞比率(SPF)及E2水平,且呈先上升后下降趋势(P＜0.05). 结论 MVs能够被颗粒细胞摄取;人脐带间充质干细胞来源的MVs能够促进颗粒细胞增殖及分泌E2功能.
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颗粒蛋白前体在高脂饮食诱导的肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达
目的 研究颗粒蛋白前体(PGRN)在肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达情况,初步探讨PGRN在PCOS发病中的作用. 方法 选择SPF级23日龄SD雌性大鼠38只,使用随机数字表随机分为3组:正常对照组(n=8)、PCOS组(DHEA组,n=15)及肥胖PCOS组(DHEA+HFD组,n=15).采用脱氢表雄酮联合高脂饲料(DHEA+ HFD)诱导肥胖PCOS大鼠.HE染色光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构改变.酶联免疫吸附法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量等,比较各组间的水平差异.采用免疫组织化学法检测各组卵巢PGRN的表达水平及分布情况. 结果 造模结束时,DHEA+ HFD组体重显著高于对照组(P＜0.01)及DHEA组(P＜0.05).DHEA组及DHEA+ HFD组的FINS、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA IR)均显著高于对照组(P＜0.05).DHEA组及DHEA+ HFD组的睾酮(T)、FSH水平均显著升高(P＜0.01).DHEA组及DHEA+ HFD组卵巢组织光镜下均表现出典型的多囊样改变.免疫组化结果显示各组大鼠卵巢中均可见PGRN蛋白表达,主要分布于卵泡的颗粒细胞层及黄体;DHEA组PGRN表达水平显著高于对照组(P＜0.01),DHEA+ HFD组PGRN表达水平显著高于DHEA组及对照组(P＜0.01). 结论 PGRN在卵巢颗粒细胞层有表达.其在PCOS大鼠和肥胖PCOS大鼠卵巢组织中的差异性表达,提示PGRN可能通过作用于局部卵泡微环境,参与PCOS肥胖及慢性代谢性炎症的发生.
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不同年龄妇女卵巢解偶联蛋白2的表达
解偶联蛋白2(uncoupling proteins 2,UCP2)是UCPs家族的一个成员,在人体各种组织广泛表达[1],其生理作用还不甚清楚.动物研究表明,在控制活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生、调节组织巨噬细胞功能中起重要作用[2].而且UCP2(-/-)小鼠产仔数量和频率下降[3].根据衰老的自由基学说,ROS是引起细胞功能下降的主要原因.生殖功能下降是早出现的年龄相关改变.Rousset等[3]在小鼠卵泡颗粒细胞检测到UCP2基因的表达,推测UCP2可能通过调节卵巢组织ROS水平参与卵巢的年龄相关改变.本研究观察UCP2在人卵巢组织的表达及其与年龄的关系,探讨UCP2在生殖和卵巢衰老中的作用.
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缩短受精前卵母细胞培养和精卵共孵育时间对妊娠结局的影响
目前,常规体外受精(IVF)一般是在取卵后4～6 h进行,精卵共孵育时间16～20 h.文献[1]报道受精前卵母细胞培养时间多少对结果无明显影响,缩短精卵共孵育时间也就是短时受精可提高胚胎质量和种植潜能[2].本研究对缩短卵母细胞的培养及精卵共孵育时间,卵母细胞受精后脱去及保留颗粒细胞的结局与常规IVF结局比较.
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2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英诱导原代培养大鼠卵巢颗粒细胞的氧化应激和凋亡
目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-dioxin,TCDD)对体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞的氧化损伤和促进凋亡作用,探究氧化膻激介导TCDD诱导卵巢颗粒细胞凋亡的机制,为临床防治提供基础应用性依据.方法 体外原代培养末成熟大鼠卵巢颗粒细胞,0.1、1、10和100 nmol/L TCDD染毒24 h后采用AnnexinV-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡率;检测10nmol/L TCDD染毒0.5、1、5和24 h后细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平;并添加超氧化岐化酶(Superoxidedismutase,SOD)联合处理,检测10 nmoVLTCDD联合不同剂量SOD处理后的ROS水平和100 IU/ml SOD联合处理1、3、6、18和24 h的细胞凋亡率.结果 大鼠卵巢颗粒细胞暴露于1 nmol/L TCDD 24h早期凋亡发生显著增加,10、100 nmol/L染毒24h诱导晚期凋亡和细胞死亡增加明显,与对照组差异有统计学意义(P<0.05).10 nmol/L TCDD处理不同时间均诱导颗粒细胞ROS生成、MDA增加和CSH损耗,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),具有剂量依赖关系.SOD联合处理明显抑制TCDD诱导卵巢颗粒细胞的氧化应激作用和凋亡的发生.结论 TCDD诱导大鼠卵巢颗粒细胞的氧化损伤和细胞凋亡作用明显,氧化应激途径足TCDD诱导卵巢颗粒细胞凋亡的早期机制,是TCDD介导的生殖毒性机制之一.
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全自动血液分析仪对形态异常细胞提示功能的评价
Symex SF-3000血液分析仪(SF-3000)是通过分类(DIFF)和白细胞/嗜硷性颗粒细胞(WBC/BASO)2个检测通道,采用流式细胞仪的工作原理和半导体激光技术测定5种白细胞,可提示"未成熟粒细胞"、"有核红细胞"、"原始细胞/异常淋巴细胞"等信息.
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凋亡对女性生殖细胞的调节作用
卵泡被一层颗粒细胞包绕阻滞于减数分裂Ⅰ期,这种生殖细胞体细胞单位叫做卵泡,以后经过一系列成熟过程,包括卵母细胞生长、颗粒细胞增生以及卵母细胞的后成熟阶段,完全成熟的卵泡释放出卵母细胞,进入生殖管道受精、形成胚胎并进一步发育成胎儿.成年女性在生殖年龄持续存在这个过程,直到卵泡耗竭终止,这时卵巢发生衰老,在人类形成绝经[1].在女性一生中仅有很少的一部分卵母细胞生长、排卵、受精,大部分卵母细胞走向闭锁退化,如在中孕期女性胎儿大约有7×106的生殖细胞,但在出生时或出生后不久卵巢内生殖细胞仅保留大约1×106,在青春期及成年阶段卵母细胞数目持续减少,到绝经过渡期卵巢内仅发现大约几百个退化的卵母细胞.妇女在她的成年期大约可以排400个卵母细胞,显然99.9%的卵母细胞发生了退化[2,3].
