首页 > 文献资料
-
两种精子优选方法效果比较
目的探讨精子经王氏管和密度梯度离心法处理后精子参数的变化,比较两者在宫内人工授精(IUI)的临床效果.方法选择不育男性精液157份,采用两种方法进行配对处理,比较两种分离方法前后精子活力、正常形态率、精子顶体形态和精子染色质等变化;分离后的精子用于IUI的临床妊娠率.结果两种方法处理后的精子活力(a+b级)、正常精子形态率、精子顶体完整率、正常染色质率与处理前比较有显著差异(P<0.01);但两种方法分离的精子用于IUI的临床妊娠率无显著差异(P>0.05).结论王氏管法和密度梯度离心法处理精子后均获得质量较好的精子,但用于IUI后临床妊娠率无明显差异.
-
2-02 镉接触的易感性标志物的研究
目的建立测定外周血淋巴细胞(PBL)中MT基因表达的方法,在职业和环境接触镉的人群中检测其变化,初步探讨作为镉接触的生物标志物的可行性.方法与结果用密度梯度离心法分离淋巴细胞,抽提核酸后进行差示逆转录多聚酶链反应(dRT-PCR),优化反应条件.本法可检测低至1×10-6μg总RNA中的MT基因表达.RT-PCR操作内和操作间的结果差异无显著性,具应有的稳定性.体外接触镉可迅速诱导PBL的MT基因表达,具有良好的剂量反应关系.表明PBL是分析MT基因表达的合适组织,并初步提示PBL中MT基因表达作为镉接触的生物标志物的可能性.职业接触人群的研究发现,电解车间工人的基础和诱导的MT表达水平显著高于其他两组(P<0.05),但MT诱导能力在接触组和对照之间差异无显著性.随尿镉、血镉和镉摄入量水平上升,MT基础表达和诱导表达都增高.MT诱导能力在各种分组法中组间差异均未见显著性.MT基础表达水平反映血镉水平的敏感度和特异度都较反映尿镉要好.MT基础和诱导表达与血镉水平显著相关,同时与尿镉也显著相关.环境接触镉的人群研究发现,血镉水平升高,MT基础和诱导表达水平均显著增高.尿镉升高,MT基础表达和诱导表达水平虽有增高,但差异无显著性.高摄入量组MT基础表达和诱导表达水平高于低摄入量组,其中高摄入量组的诱导MT表达水平显著高于低摄入组.MT诱导能力水平差异均未见显著.相关分析可见MT基础表达与血镉、尿镉的对数显著相关,MT诱导表达与血镉、尿镉和镉摄入量的对数显著相关.结论提示外周血淋巴细胞金属硫蛋白基因表达作为镉接触的易感性标志物的可能性.
-
人工授精治疗男性无精子症的临床应用
人工授精技术(artificial insemination,AI)作为辅助生殖技术的重要组成部分,近年米得到了迅速发展.宫腔内人工授精(intrauterine insemination,IUI)广泛应用于治疗男性因素引起的不育,其中无精子症(azoospermia)约占男性不育患者的7%~14%[1],通过对人类精子库(humansperm bank,HSB)提供的精子,经亲水性硅烷包裹的胶体硅溶液(Silane coated silica particles puresperm)密度梯度离心法进行洗涤优选,后为女方施行IUI,是无精子症有效的临床治疗方法.人类精子库的合法启用,辅助生殖技术的广泛应用,为无精子症的临床治疗提供了方法和途径.我们对在本生殖中心行供精IUI治疗的2l对夫妇33个周期治疗的结果进行总结如下.
-
宫腔内人工授精助孕患者精子制备方法的选择策略
目的 为丈夫精液正常行自然周期宫腔内人工授精(IUI)第一周期患者选择佳的精子制备方法.方法 采用区组随机分组的方法将研究对象分为4组(标准上游组,直接上游组,密度梯度离心组和密度梯度离心和直接上游组).精子计数应用Makler计数板,形态学分析采用伊红-苏木精染色法,妊娠结果 的判定为IUI28d后行超声监测到胎囊及胎心.结果 四组患者的妊娠率、活产率及流产率无差异.密度梯度离心组的精子处理时间少(13.5分).密度梯度离组的a+b级精子回收率(42.5±15.7)%及a+b级精子总回收数高(55.3±25.7)百万.密度梯度离心组(26.5±11.6)%和密度梯度离心加上游组的回收精子畸型率低(24.7±12.8)%.结论 丈夫精液正常行第一周期IUI自然周期助孕的患者,精子制备方法首选直接上游法.
-
密度梯度离心法纯化Vero细胞狂犬病疫苗的研究
笔者应用超滤浓缩和密度梯度区带离心技术,对Vero细胞制备的人用狂犬病疫苗进行了以蔗糖为介质的密度梯度区带离心纯化研究.
-
肠上皮内淋巴细胞分离鉴定
肠上皮内淋巴细胞(intestine intraepithelial lymphocytes,iIEL),是机体内数量多的淋巴细胞群体之一.在黏膜免疫防御和口服免疫耐受形成等方面发挥重要的作用.本文参考国内外多种方法,选用机械和消化法分离细胞、密度梯度离心法纯化iIEL,摸索快速、高效、稳定的iIEL提取方法,并对其增殖和表型进行了初步分析.
-
人外周血NK细胞3种纯化方法的比较
NK细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞.近年来,关于NK细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一.但国内NK细胞的研究大多是检测NK细胞毒活性和NK细胞数量,很少直接观察NK细胞的特征及其功能特点,NK细胞分离纯化,是进行NK细胞基础与临床研究的基础和基本手段.我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血NK细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下.
-
健康人外周血树突状细胞体外培养及表型鉴定
目的 分离人外周血单个核细胞,经体外诱导培养获取成熟树突状细胞(DC),并对树突状细胞表型表达鉴定,为进一步研究DC功能提供基础.方法 取健康成人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞,2 h贴壁后加入粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素(IL)-4,第6天加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激DC成熟,倒置显微镜观察每日细胞形态;分别于第1天、第6天、第8天用流式细胞仪对其进行表型鉴定;同种异体混合淋巴细胞反应观察对T细胞的抗原提呈能力 倒置显微镜下DC细胞形态不规则,表面有毛刺状突起,呈DC典型形态学特征;成熟DC细胞表面CD1a、CD80、CD83、人类白细胞抗原(HLA)-DR表达明显增加,混合淋巴细胞反应OD值增加.结论 用GM-CSF、IL-4和TNF-α可以诱导健康成人外周血单个核细胞,培养出成熟的DC细胞,为进一步研究DC功能提供基础.
-
三种常用的密度梯度离心方法富集有核红细胞的比较
目的 探讨富集母血中胎儿有核红细胞的适宜密度梯度离心方法.方法 对10例脐血分别用Percoll 1090单密度梯度离法、Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法、Ficoll 1077单密度梯度离心法3种方法进行有核红细胞的分离,然后用适宜的密度梯度离心法分离12例10 mL母血中的胎儿有核红细胞.结果 ①Percoll 1090单密度梯度离法每mL脐血富集(70.58±5.67)×104个有核红细胞;Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法每mL脐血富集(23.62±1.90) ×104个有核红细胞;Ficoll1077单密度梯度离心法每mL脐血富集(4.53±0.26)×104个有核红细胞.②采用Percoll 1090单密度梯度离法从12例10 mL母血中富集到的平均有核红细胞数为12.9±5.4个.结论 Percoll 1090单密度梯度分离法可有效增加脐血中有核红细胞的分离数量,并从孕妇外周血中成功富集到胎儿有核红细胞.
-
密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞的形态学观察
目的 探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养、鉴定和扩增的方法,同时观察BMSCs的生长特性,为组织工程中种子细胞的选择提供实验基础.方法 应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合分离纯化BMSCs并进行体外扩增,倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况,计数细胞数目,绘制细胞生长曲线.HE染色光镜观察细胞形态,免疫细胞化学方法检测细胞表面标志抗原CD29、CD34和CD44的表达,进行表型鉴定.结果 成功地完成了兔BMSCs体外分离培养及扩增.生长特性观察发现,第1~3代细胞增殖能力强,生长旺盛,随着传代次数的增加传代细胞增殖能力逐渐下降.分离培养的BMSCs阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD34.结论 体外应用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,可获得高纯度的BMSCs,培养的BMSCs呈纤维状、克隆样生长,第1~3代细胞活性较强,可作为组织工程的种子细胞用于进一步的实验研究.
-
直接沉降法同时检测外周血粒细胞与单核细胞及淋巴细胞凋亡
外周血有核细胞主要是白细胞,在人体免疫功能中发挥巨大作用,很多疾病的发病和治疗机制的研究均需要检测这些细胞的凋亡[1-4].然而,由于外周血红细胞的数目远远超过白细胞,因此,分离出各种白细胞成为检测外周血白细胞凋亡的首要步骤.目前常用的为各种密度梯度离心法[1-3,5],需要配以相应的分离液,且步骤繁多,操作过程中也易损伤细胞.本研究尝试建立一种简便、细胞损伤小,且可以同时检测外周血各种白细胞凋亡的方法.
-
激活素A对肝星状细胞细胞外基质合成的影响
目的:探讨激活A(activin A,ACT A)对肝星状细胞(hepaficstellate cell,HSC)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成的影响.方法:采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC.初次传代后,HSC随机分为8组:空白对照组(A组)、ACTA1μg/L组(B组)、ACTA10 μg/L组(C组)、ACTA 100 μg/L组(D组)、TGF β110 μg/L组(E组)、ACTA 1 μg/L+TGFβ110μg/L组(F组)、ACTA 10μg/L+TGF β110 μg/L组(G组)、ACTA100μg/L+TGF β110μg/L组(H组).加药后24 h,采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原含量及半定量RT-PCR方法测定细胞Ⅲ型胶原mRNA表达.结果:ACT A能刺激体外培养HSC分泌ECM,在一定浓度范围内(1-100μg/L)呈剂量依赖关系;100μg/LACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1相当,而且ACT A能协同TGF-β1发挥这一生物学效应.结论:激活素A参与肝纤维化形成.
-
成年猪胰岛分离纯化方法的改良
目的:改良成年猪胰岛分离纯化技术,以优化胰岛制备方法.方法:采用体、尾部区段猪胰腺胰管内灌注复合胶原酶震荡消化(胶原酶V+DNA酶)和改进的Dextran不连续密度梯度离心法分离纯化猪胰岛,并进行生物学活性测定和形态学观察.结果:胰腺被消化组织平均15±3.4 g,消化后胰岛获得量4 130±976 IE/g胰腺组织.纯化后胰岛获得量为2 320±669 IE/g胰腺组织,胰岛纯度80%左右.胰岛素释放试验结果显示分离纯化后胰岛功能良好.病理切片,HE染色显示细胞团结构完整,细胞核清晰可见,胞质丰富.结论:经本方法分离纯化获得的猪胰岛具有较高的产量和纯度、结构完整、功能良好,可满足大动物移植实验和临床移植的需要.
-
慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞IFNAR2 mRNA的表达
目的:探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)干扰素-α/β受体(IFNAR2)mRNA的表达,及其与干扰素(IFN)抗病毒疗效的关系.方法:密度梯度离心法分离26例慢性丙型肝炎患者PBMCs,RT-PCR法扩增IFNAR2 mRNA,计算其表达水平.结果:慢性丙型肝炎患者PBMCs IFNAR2 mRNA表达显著高于健康对照者;其表达与血清病毒载量、病毒基因型及PBMCs HCV-RNA无关;干扰素治疗完全应答组PBMCsIFNAR2 mRNA表达显著高于部分应答及无应答组.结论:PBMCs IFNAR2 mRNA表达与干扰素疗效相关,可作为一个独立因素,用于预测慢性丙型肝炎患者干扰素疗效.
-
辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞p27蛋白表达的不同影响
目的:观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)p27蛋白表达的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。
方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0.01~10μmol/L)培养24 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定FITC结合的植物凝集素(FITC-UEA-Ⅰ)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(Di I-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC, Western blot检测p27蛋白的表达。 -
oxLDL对正常人外周血单个核细胞LOX-1及uPAR表达的影响
目的:探讨不同时间点不同浓度oxLDL对正常人外周血单个核细胞uPAR、LOX-1蛋白的表达情况的影响。
方法:选取正常人外周血经Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),用含20%自体血清的RPMI1640完全培养基培养。Western Blot方法检测不同浓度oxLDL对正常人单个核巨噬细胞干预24 h,72 h的uPAR、LOX-1的蛋白表达。统计分析:western blot以TotalLab Quant软件进行积分光密度值分析。统计分析,计量资料以Mean±SE表示,组间比较以one-way ANOVA进行分析,两组比较采用t检验,P<0.05则有统计学意义。 -
密度梯度离心法在癌性胸腔积液细胞病理学检测中的应用
通过淋巴细胞分离液的密度梯度离心法浓缩胸液中的肿瘤细胞,从而提高恶性胸液中病理细胞检出的阳性率,并与传统方法进行比较.对象与方法 1.对象:患者37例来源于我院呼吸科和肿瘤科,均确诊为癌性胸腔积液的患者.男18例,女19例,平均年龄(63±8)岁,其中腺癌18例、鳞癌14例、未分化细胞癌1例、乳腺腺癌转移4例.所有患者均未作局部和(或)全身化疗.以第一次检测胸液的结果作为判别标准.
-
骨髓间充质干细胞移植修复心肌梗死的可行性研究
目的初步观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在大鼠心肌梗死周边区的定位、存活及分化情况.方法采用密度梯度离心法及贴壁分离法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面抗原,体外定向诱导分化为具有心肌特异性结构蛋白的心肌样细胞,同时进行形态学及免疫组化鉴定.
-
人胰腺星状细胞的新型分离方法
目的 探讨人胰腺星状细胞(PSCs)的新型分离方法.方法 通过gentle MACSTM组织处理器-恒温震荡消化制备正常胰腺组织、胰腺癌组织的单细胞悬液.通过密度梯度离心法分离获得静息态和活化态的PSCs.结果 通过新型的分离法,1 g人正常胰腺组织能够获得约(2.6±0.7)×106个静息态PSCs,平均活率约为90.0%,细胞形态符合典型的静息态特征,328 nm激发波长下可观察到短暂蓝绿色自发荧光;1g人胰腺癌组织能够获得约(4.1±1.1)×106个活化状态的PSCs,平均活率约为92.0%,活化态的细胞均表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)等特征性标记.结论 本研究所用新型分离方法,适用于静息态与活化态两种表型的PSCs,不但分离纯度较高,分离时间亦极大缩短,值得推广借鉴.
-
胰腺星状细胞研究进展
1982年Watari等给予小鼠负载维生素A,第一次用免疫荧光和电子显微镜描述小鼠胰腺的维生素A储存细胞,在328nm紫外光下,胞浆内的维生素A发出特征的迅速减弱的蓝绿色荧光.1990年Ikejiri用电子显微镜在正常人和大鼠胰腺识别这种细胞.1998年Apte和Bachem等用密度梯度离心法分别从大鼠和人类胰腺组织中分离、培养出星状细胞[1,2].