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外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞体外成熟中的应用研究
目的 通过在体外成熟(IVM)培养基中加入褪黑素,探索外源性褪黑素在人类未成熟卵母细胞IVM中的作用,以期优化人类未成熟卵母细胞IVM的培养体系. 方法 在人类未成熟卵母细胞IVM培养体系中添加不同浓度的褪黑素,以排出第一极体作为判断其核成熟的标准,比较不同浓度下的核成熟率. 结果 与对照组(褪黑素0 mol/L)相比,外源性褪黑素在10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率有提高,但只有褪黑素在10-9 mol/L时人类未成熟卵母细胞的核成熟率呈显著性提高(63.6％ vs.40.9％,87.7 vs.54.2％,68.2％ vs.45.5％,90.4 vs.69.4％) (P＜0.05);当外源性褪黑素浓度增加到10-5mol/L和10-3 mol/L时,人类未成熟卵母细胞的核成熟率显示稍低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05),但与10-11 mol/L、10-9 mol/L和10-7 mol/L组相比则呈显著性降低(P＜0.05). 结论 外源性褪黑素在适当浓度时可以促进人类未成熟卵母细胞的核成熟,而在浓度超出一定范围时,则可能对卵母细胞的核成熟造成负面影响.
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人类卵母细胞及植入前胚胎中印迹基因Snrpn mRNA的表达
基因印迹是指亲源依赖性单等位基因表达, 即只有一个父源性或母源性等位基因表达,印迹基因的表达不符合经典的孟德尔遗传.基因印迹正常发生于配子形成过程中,可影响胚胎形成、发育、胎儿生长及胎盘分化, 若印迹异常则导致畸型和智力障碍.在卵泡成熟和早期胚胎发育过程中,印迹基因Snrpn起着重要作用,Snrpn基因异常可导致帕德维利综合征(Prader-Willi syndrome,PWS)[1]和安吉尔曼综合征(Angelman syndrome,AS)[2]等先天性遗传病发生.本实验用单细胞巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测Snrpn在人类卵母细胞生发泡(GV)、MI、MII和植入前胚胎2、4、6、8细胞的表达情况,探讨Snrpn对人类胚胎发育的影响和印迹基因的调控机制.
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卵母细胞玻璃化冷冻的临床结局分析
目的 探讨卵母细胞玻璃化冷冻后解冻行体外受精-胚胎移植的临床结局.方法 回顾性分析2010年1月至2014年10月北京大学第三医院生殖医学中心68例不孕症患者卵母细胞玻璃化冷冻后解冻行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的复苏率、2PN受精率、胚胎着床率、流产率和分娩率等临床结局.结果 解冻玻璃化冻存的卵母细胞756枚,复苏率80.69％ (610/756),其中MII卵母细胞519枚,2PN受精率53.56％ (278/519).68例患者中,12例无胚胎形成,占17.65％.56例患者共移植66个周期,其中新鲜胚胎移植51个周期,解冻胚胎移植15个周期.新鲜胚胎移植51个周期的临床妊娠率为54.90％(28/51),活胎分娩率为45.10％ (23/51).解冻胚胎移植15个周期的临床妊娠率为60.00％ (9/15),活胎分娩率为46.67％ (7/15).累积妊娠率为55.88％ (38/68).每解冻一枚卵母细胞获得活胎分娩率为5.03％ (38/756).结论 卵母细胞玻璃化冷冻技术在取卵日不能获得精子的患者中应用,可以获得良好的妊娠结局.
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玻璃化冷冻和程序化冷冻方法对人类卵母细胞骨架及其发育潜能的影响
目的 探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对人卵母细胞纺锤体定位、细胞骨架及其发育潜能的影响.方法 将第2日发育为MI卵母细胞随机分为对照组、程序化冻融组、玻璃化冻融组(解冻0 h、1 h、3 h).应用液晶偏振光显微镜(Polscope)成像系统观察卵母细胞纺锤体与第一极体(Pb)的夹角、表面积、卵透明带内层光阻值和外层光阻值.采用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察卵母细胞的表面和内部超微结构.统计2种冻融方法对卵母细胞发育潜能的影响.结果 对照组、程序化冷冻解冻培养3 h组和玻璃化冷冻解冻后培养0 h、1 h、3 h组中的纺锤体可见率分别为92.4％、56.4％、11.2％、24.8％、61.1％.与程序化冻融组相比,玻璃化冷冻解冻培养3 h后卵母细胞中纺锤体与Pb的夹角更小(37.3° 与68°,P=0.023).对照组、程序化冻融组和玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞的纺锤体面积、卵透明带内层光阻值和透明带外层光阻值差异无统计学意义(P>0.05).与程序化冻融组相比,玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞表面突起丰富,微绒毛形态较为正常,倒伏在细胞表面,卵透明带边界较为清晰,与对照组较为接近.程序化冻融组的正常受精率(65.7％)明显低于对照组(79.2％,P=0.041),而卵裂率和囊胚形成率与对照组和玻璃化冻融组差异无统计学意义(P>0.05).玻璃化冻融后培养3 h组中正常受精率、卵裂率、囊胚形成率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 相比程序化冷冻,玻璃化冷冻对卵母细胞纺锤体和卵透明带的损伤及对卵母细胞的发育潜能的影响都较小,可以作为卵母细胞冷冻的一种有效方法.
