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两种精子优选方法效果比较
目的探讨精子经王氏管和密度梯度离心法处理后精子参数的变化,比较两者在宫内人工授精(IUI)的临床效果.方法选择不育男性精液157份,采用两种方法进行配对处理,比较两种分离方法前后精子活力、正常形态率、精子顶体形态和精子染色质等变化;分离后的精子用于IUI的临床妊娠率.结果两种方法处理后的精子活力(a+b级)、正常精子形态率、精子顶体完整率、正常染色质率与处理前比较有显著差异(P＜0.01);但两种方法分离的精子用于IUI的临床妊娠率无显著差异(P＞0.05).结论王氏管法和密度梯度离心法处理精子后均获得质量较好的精子,但用于IUI后临床妊娠率无明显差异.
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流式细胞仪在辅助生殖技术中的应用
流式细胞术是20世纪70年代发展起来的单细胞检测和分离技术,因其效果确切可靠,已广泛应用于医学、生物学的各个领域.辅助生殖技术中X、Y精子的分离技术可以用于预防性连锁遗传疾病,而精子的检测则可以明确不孕症的诊断,预测精子的受精能力,为选择正确的助孕方法提供依据.因而使用流式细胞仪(FCM)分离和检测人精子有重要的意义.现对FCM在生殖医学中X、Y精子分离和检测的应用作如下综述.
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人类精子分离技术的研究进展
随着人工辅助生殖技术的迅速发展,宫腔内人工授精成为当前医治不孕不育的重要方法,在实际的操作过程中,如何分离出活力高,形态、核成熟度以及染色质完整性好的精子已经是医学界的一项至关重要的研究.
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非梗阻性无精子症患者不同部位睾丸组织鱼精蛋白-2 mRNA的测定
目的:探讨非梗阻性无精子症睾丸组织鱼精蛋白-2(P-2)mRNA的表达量与相应睾丸组织取精结果的关系.方法:无精子症38例,平均年龄32.4(24～42)岁,依据病理诊断结果分为非梗阻性无精子症组和梗阻性无精子症组.活检时每侧睾丸取上下两个不同部位的组织,并将其分为3部分,分别用作普通病理活检、精子检测和mRNA提取.用RT-PCR和图像分析系统测定P-2 mRNA的表达量.结果:38例患者中27例为非梗阻性无精子症,11例为梗阻性无精子症.非梗阻性无精子症组检出和未检出精子的部位在睾丸的分布无一定规律可循.检出精子和未检出精子的组织P-2 mRNA的表达量分别为1.40±0.21和0.51±0.23(P＜0.05).结论:非梗阻性无精子症患者取少量的睾丸组织测定P-2 mRNA的表达量可提示该部位睾丸组织精子分离的结果.
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密度梯度离心法分离精子在宫腔内人工授精中的应用
目的:探讨密度梯度离心法应用于宫腔内人工授精的精子分离时精子指标的变化及精子形态对回收率的影响.方法:选择2008年9-10月间所有进行宫腔内夫精人工授精的51份精液,采用密度梯度离心法分离精子,记录精子分离前后的各项指标,计算回收率并作统计分析.结果:(1)精子存活率由(53.63±15.94)%提高至(88.75±9.69)%(P＜0.05),平均回收率为(25.84±16.57)%.(2)正常形态精子比例由9%提高至18%(P＜0.05),各类畸形精子均显著减少,尤其颈部和尾部畸形的精子减少为明显.(3)根据处理前精子正常形态的比例分为≤4%、5%～14%、≥15%3组,分离后精子存活率分别为(80.45±14.05)%、(91.32±7.30)%、(90.00±4.33)%(P=0.004),回收率分别为(19.67±10.49)%、(28.51±16.87)%、(41.14±15.02)%(P=0.013).精子正常形态比例与回收率呈正相关(r=0.456,P=0.001).结论:密度梯度离心法可以有效回收活力好、形态正常的精子,对于去除颈部和尾部畸形的精子效果更好,精子正常形态与回收率呈正相关.
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常规体外授精中正常受精率患者的精液参数分析
目的 了解常规体外授精(in.vitro fertilization,IVF)中正常受精率患者处理前后精液的参数范围及其对受精结果 的影响.方法 回顾性分析在本生殖医学中心接受常规IVF治疗且获得正常受精及移植胚胎的408个周期的精液参数及其与受精结果 的关系.结果 精子密度正常者399人次(97.79%),而活力正常者仅21人次(5.15%).处理前精液量0.2～8 ml,精子密度(3～400)×10~6个/ml,活率10%～85%,前向运动精子比率(progressive motile sperm,PMS%)2%～40%,前向运动精子总数(total progressive motile sperm count,TPMSC)2～597×10~6.处理后的精子活率、PMS%及精子总数与处理前精子密度、活率、PMS%以及A+B级精子总数均呈显著的正相关(P<0.05).处理后的精子活率与受精率明显相关(r=0.132,P=0.008).结论 常规IVF正常受精者精液参数波动范围大,轻、中度的弱精或少精可能不影响正常受精,但处理后的精子活率可影响受精率.
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固相透明质酸法优选精子的效果观察
目的:对比研究高通量的固相透明质酸(HA)分离新技术较传统密度梯度法在精子优化分离效果方面的优势性.方法:收集新鲜精液标本31份,每份标本液化后被均分成2部分,一部分精液以固相HA法分离精子,即将精液加入到底部表面包被有HA的培养皿中,洗脱掉未结合的精子,分离、收集与HA结合的精子;另外一部分精液以传统的密度梯度法优化分离精子,观察2种方法提取后精子各项研究指标的差异性,以及相对变化幅度.结果:与密度梯度法组相比,固相HA法组处理后精子的正常形态率、获能2h酪氨酸磷酸化(TP)、△TP(精子获能2 hTP率-未获能精子TP率)、诱发顶体反应(AR)和△AR(诱发AR率-自发AR率)等指标明显增高(P＜0.001),增长幅度依次为:1.55倍(95％CI=1.04～2.81)、1.81倍(95％CI=0.89～6.11)、3.35倍(95％CI=1.04～10.32)、1.37倍(95％CI=0.96～2.71)和1.88倍(95％CI=1.09～4.71);而固相HA法组自发AR、核蛋白不成熟度和DNA碎片率显著降低(P＜0.001),分别是密度梯度法组的68％(95％CI=19％～102％)、47％(95％CI=2％～103％)和21％(95％CI=0％～70％);2种方法处理后精子的前向运动率和活动率无统计学差异(P＞0.05).结论:基于成熟精子头部具有HA受体可与外源性HA特异性结合原理的精子-固相HA分离技术,与传统的密度梯度法相比,分离后的精子具有更优的受精潜能和成熟度,可显著提高分离精子的整体质量,有望进一步改善辅助生殖结局.
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己酮可可碱和水溶性维生素E在精子优选过程中对精子质量的影响
目的:探索在精子优化分离过程中,己酮可可碱(pentoxifylline,PF)和水溶性维生素E(watersoluble vitamin E,WsVitE)对改善精子质量的价值.方法:分别以密度梯度法、上泳法常用精子分离液作为对照组,在同批号对照组分离液中添加PF和/或WsVitE后作为试验组；将32份新鲜精液标本每份分为4份,分别以密度梯度法、上泳法2种方式优化分离,每种分离方式均设对照组和试验组；比较分离后精子的质量差异.结果:2种分离方法处理后的新鲜精子,其前向运动率、获能后酪氨酸磷酸化水平、Ca2+载体诱发精子顶体反应率,试验组均优于对照组(P＜0.01); 25℃孵育24 h后,试验组较对照组的精子前向运动率、活动指数、正常形态率更高,而DNA碎片、脂质过氧化水平更低(P＜0.01)；上泳法试验组分离率精子各项指标总体优于密度梯度法试验组(P＜0.05).结论:在精子分离液中加入抗氧化剂VitE和磷酸二酯酶抑制剂PF可明显改善分离后精子的质量;上泳法分离后的精子质量更高、损伤更轻.
关键词： 精子分离 己酮可可碱(PF) 水溶性维生素E(WsVitE) 精子质量 -
精子富集柱分离技术的研究
目的 在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术.方法 根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱.取混合斑检材经第一步淌化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中.采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测.结果 混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型.结论 本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取.
