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利用废弃胚胎进行体外受精实验室质控的可行性探讨
目的 探讨废弃胚胎作为体外受精(IVF)实验室质控的可行性. 方法 通过囊胚序贯培养将无原核(0PN)、单原核(1PN)、3原核(3PN)和发育迟缓或停滞的2原核(2PN)的废弃胚胎进行囊胚培养,比较不同来源胚胎的囊胚形成情况. 结果 共收集396个废弃胚胎,经序贯培养形成98个囊胚(24.75％),0PN、2PN、1PN、3PN的囊胚形成率分别为50.50％(51/101)、24.59％(30/122)、17.07％(7/41)、7.58％(10/132),其中0PN、停滞的2PN的胚胎有孵出,孵出率分别为47.06 ％(24/51)和33.33％(10/30)；有囊胚形成与无囊胚形成患者的临床妊娠率分别为30.28％(43/142)、19.72％％(28/142),两者相比有统计学差异(P＜0.05)；特别是0PN+2PN患者的临床妊娠率为23.24％(33/142),显著高于无囊胚形成者的9.15％(13/142)(P＜0.01). 结论 废弃胚胎有不同程度的发育潜能,可部分发育成囊胚,特别是0PN+2PN囊胚形成率超过35％,可以作为IVF实验室质控的一种辅助方法,并可作为临床妊娠结局预测的参考指标.
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促性腺激素释放激素拮抗剂方案中废弃胚胎发育潜能及其与妊娠结局的关系
目的 探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案中废弃胚胎的发育潜能,及其与妊娠结局之间的关系.方法 体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)患者共76例:促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案47例,为A组,拮抗剂方案29例,为B组.收集D3胚胎移植、冷冻后剩余低质量废弃胚胎共274枚(包括异常受精胚胎),序贯法囊胚培养(A组有囊胚形成者为A1组,无囊胚形成者为A2组;B组有囊胚形成为B1组,无囊胚形成为B2组),观察囊胚形成情况及妊娠结局,探讨两者之间的关系.结果 两组患者基本情况及周期特点无明显差异;促排卵天数及取卵日内膜厚度A组明显大于B组(P<0.01).囊胚形成率A组与B组无明显差异(P>0.05);总生化妊娠率A组高于B组(P<0.05);总临床妊娠率A组显著高于B组(P<0.01);生化及临床妊娠率A1组均高于B1组.A1组生化及临床妊娠率均高于A2组(P<0.05),B1、B2组妊娠率无显著差异(P>0.05).结论 部分废弃胚胎具有一定的发育潜能,小部分能发育至囊胚阶段,与GnRH-a相比,拮抗剂不影响其发育潜能;常规GnRH-a长方案废弃胚胎发育潜能与妊娠结局显著相关;与GnRH-a长方案相比拮抗剂方案妊娠率有下降,可能与胚胎发育潜能关系不大,其原因需进一步研究.
关键词： 废弃胚胎 囊胚 促性腺激素释放激素激动剂 促性腺激素释放激素拮抗剂 -
辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的影响因素分析
目的 探讨辅助生殖技术中废弃胚胎继续培养的潜能,为今后利用废弃胚胎建立胚胎干细胞系提供参考.方法 将D1观察为无原核(0PN)、单原核(1PN)、多原核(≥3PN)和受精正常(2PN),D3评分为Ⅳ级的胚胎继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率.比较年龄、受精方式、不同来源、D3卵裂球细胞数、D3胚胎碎片与囊胚形成率的关系.结果 共收集143个取卵周期499个废弃胚胎进行继续培养,形成囊胚105个(21.04％),优质囊胚为24个(22.86％).年龄、不同来源、D3卵裂球的奇偶性、D2卵裂球的数目各组之间差异不显著(P＞0.05)；受精方式、D3卵裂球数目、胚胎碎片各组之间差异显著(P＜0.05).结论 部分废弃胚胎有继续发育成囊胚的潜能,受精方式、D3卵裂球的数目和胚胎碎片情况可能为囊胚形成的主要影响因素.
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废弃胚胎继续囊胚培养和移植的临床结局分析
目的 探讨体外受精治疗周期中第3天移植、冷冻后剩余不符合冷冻标准的“废弃”胚胎形成囊胚的潜力以及与妊娠结局的关系.方法 收集2013年4月至2014年8月100例患者在体外受精(IVF)/精子显微授精术(ICSI)胚胎移植106个周期中的318枚“废弃”胚胎,采用序贯培养法将“废弃”胚胎进行囊胚培养.分别比较第3天2～4个细胞和4～5个细胞、碎片率＜5％和碎片率5％ ～ 10％的胚胎形成囊胚的情况,并观察这些囊胚冷冻复苏后的存活情况及移植后的临床结局.结果 318枚“废弃”胚胎,经序贯培养后获得了117枚囊胚,囊胚形成率为36.79％,其中优质囊胚10.38％(33/318).4～5个细胞者的囊胚形成率38.16％(116/304)高于2～3个细胞者的7.14％(1/14),差异有统计学意义(P＜0.05);碎片率＜5％的囊胚形成率38.06％(110/289)和优质胚胎率75.45％(83/110)均高于碎片率5％ ～ 10％的囊胚形成率24.14％(7/29)和优质胚胎率57.14％ (4/7),但无统计学差异(P均＞0.05).其中形态优良囊胚用玻璃化冷冻技术保存,共冻胚43枚,36枚囊胚复苏后存活24枚,存活率66.67％(24/36),9例获得剩余胚胎来源囊胚的复苏解冻移植周期,临床妊娠3例,1例健康新生儿出生,未发生流产.结论 一些形态学上认为无冷冻价值的第3天“废弃”胚胎可以有不同程度的发育潜能,延长体外培养的时间部分可以继续发育成囊胚,尤其是4～5个细胞者,碎片率＜5％者发育成囊胚的潜力较大.所以在废弃胚胎前,宜先考虑将胚胎培养至囊胚期,如未形成囊胚再行废弃.来自“废弃”胚胎的囊胚能够耐受玻璃化冷冻并获得活产婴儿,从而减轻患者经济负担,大限度地利用胚胎,提高累积妊娠率.
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对废弃胚胎行囊胚培养在体外受精-胚胎移植中的意义
目的：探讨对不可移植的废弃胚胎行囊胚培养在体外受精-胚胎移植（IVF- ET）中的意义。方法通过囊胚序贯培养法将d3废弃胚胎培养至囊胚期。比较不同来源胚胎及d3胚胎的卵裂球数与囊胚形成的关系；利用废弃胚胎囊胚形成情况对体外受精妊娠结局进行预测；并将获得的可移植囊胚行胚胎移植及冷冻。结果共收集782例患者的1962个废弃胚胎，经序贯培养，形成囊胚376枚（19.2%）；1PN胚胎、0PN胚胎、d 3卵裂球数＞6的胚胎囊胚形成率较高（均P＜0.05）；废弃胚胎中有囊胚形成者的临床妊娠率明显高于无囊胚形成者（P＜0.05）；由2PN胚胎形成囊胚共64枚，其中10枚囊胚行移植，剩余囊胚行玻璃化冷冻保存，囊胚移植后临床妊娠率66.7%。解冻移植囊胚24个周期，妊娠周期13个，妊娠率54.2%。囊胚移植共获得健康婴儿18名。结论IVF- ET中废弃胚胎部分可发育为囊胚，选择合适的胚胎行囊胚培养，能获得部分可用胚胎，提高胚胎利用率。
关键词： 体外受精- 胚胎移植 废弃胚胎 囊胚 序贯培养 -
废弃胚胎来源的单个卵裂球的发育规律
目的 通过对单个卵裂球的体外培养发育的观察,评估其细胞增殖、囊胚形成以及细胞发育分化.方法 收集临床体外受精周期中第3天新鲜废弃胚胎,分离单个卵裂球后即移至囊胚培养液中培养.观察卵裂球的生长情况,分析体外发育单个卵裂球的增殖情况、囊胚的形成时间以及效率,并对形成的囊胚进行细胞染色计数,总结单个卵裂球体外培养的发育规律;并且通过免疫荧光检测囊胚的多能性标记物Oct3/4的表达,初步探讨单个卵裂球的发育极性.结果 收集第3天新鲜废弃胚胎,共分离并进入研究的单个卵裂球596个,卵裂球形成细胞融合在分离后的48 h,囊胚形成则在分离后的72 h,而且生成的囊胚体积较小,大部分内细胞团结构不明显,卵裂球增殖率分别34.1％;囊胚形成率为8.6％,而同期收集的废弃胚胎的囊胚形成率为28.7％,组间差异有统计学意义(P ＜0.001);对分离卵裂球培养第4天形成的囊胚进行细胞计数,中位细胞数为24.6;对所形成的囊胚分析Oct3/4的表达发现,只有25.0％囊胚可表达多能性标志物(Oct3/4),而且囊胚表达多能性标记物的细胞数很少(2～5个).结论 普通胚胎发育规律比较,单个卵裂球的囊胚形成时间延迟1d,囊胚形成率较未分离的废弃胚胎低下;而且单个卵裂球的分离培养可能对细胞的全能性或者极性发育存在负面的影响.
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应用全基因组扩增结合二代测序技术对废弃胚胎进行植入前遗传学筛查
目的 应用全基因组扩增结合二代测序技术对废弃胚胎进行植入前遗传学筛查.方法 收集476个废弃胚胎,经继续培养后获得23个优质囊胚.根据Gardner囊胚分级法,对4BC级及以上的囊胚进行活检,在有部分滋养外胚层细胞孵出时用活检针吸取5～10个细胞,于全基因组扩增后进行二代测序,检测胚胎中有无染色体片段的缺失/重复以及染色体数目变异.结果 23个囊胚共吸取滋养外胚层细胞148个.进行单细胞全基因组扩增后,选取其中60个扩增产物进行高通量测序,结果显示有39个细胞染色体存在异常,来源于14个囊胚,即囊胚异常比率为60.87％(14/23).结论 应用全基因组扩增结合二代测序技术对废弃胚胎进行植入前遗传学筛查分析,可筛除染色体非整倍体及染色体结构异常的胚胎,对于改善高危人群试管助孕的效果和减少出生缺陷具有重要的意义.
关键词： 胚胎植入前遗传学诊断/筛查 废弃胚胎 囊胚 全基因组扩增 二代测序 -
人废弃胚胎单卵裂球体外发育潜能研究
目的:探讨体外受精治疗周期废弃胚胎来源的单卵裂球体外发育潜能.方法:收集21例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的废弃胚胎共60枚,其中2.细胞期胚胎10枚.3-细胞期胚胎8枚,4-细胞期胚胎26枚,5-细胞期胚胎12枚,6-细胞期胚胎4枚.采用化学法去除透明带并分割胚胎获得单卵裂球,继续体外培养,每24 h观察卵裂球发育情况.结果:60枚胚胎共获得229枚单卵裂球.以分割取得单卵裂球日作为第1日(d 1),继续培养,其发育似乎遵循d 2分裂、d 3紧密化、d 4出现囊胚腔、d 5扩张,延续分割前的程序,但提前进入紧密化期,致使囊胚细胞数少,囊胚期体积亦比正常胚胎小.其中,4-细胞期废弃胚胎来源的卵裂球分裂率、紧密化率、囊胚形成率显著高于来自其它细胞数的单卵裂球(P＜0,05),且其大部分内细胞团(ICM)细胞的碱性磷酸酶(AKP)表达呈阳性.结论:废弃胚胎来源的单卵裂球能在体外继续发育至囊胚,发育潜能与供体胚胎发育质量密切相关,其发育似乎延续原有供体卵裂球的节律,而形成囊胚所需时间明显缩短,细胞数亦明显减少,但囊胚ICM细胞显示AKP阳性,深信其利用价值会得到进一步证实.
