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猪体外成熟卵母细胞的卵丘扩散与胚胎发育能力的相关性
目的探讨卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩散与其体外受精后胚胎发育能力的关系. 方法取猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在体外进行成熟、受精和培养,在体外成熟培养液中添加不同直径卵泡(<2, 2～5和>5 mm)的不同浓度(15%、5%)卵泡液. 结果在含卵泡液的成熟培养液中培养48 h,卵泡液明显抑制了COCs的卵丘扩散(P<0.05),但不影响第一极体的排出;COCs成熟培养24 h后,移入不含卵泡液的成熟培养液中继续培养24 h,卵丘扩散显著高于对应的48 h培养组(P＜0.05),但第一极体的排出率无显著差异;体外成熟过程中COCs扩散的卵丘面积与其受精后的胚胎发育能力 (发育到2～4细胞、>4细胞和桑葚胚/囊胚的百分率)呈显著正相关(P=0.005 8, 0.000 1和0.034 8). 结论卵泡液对COCs的卵丘扩散有抑制作用,这种抑制作用与卵泡液的作用时间相关;在体外成熟过程中扩散的卵丘团面积可以作为预测卵母细胞受精后胚胎发育能力的参数.
关键词： 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟 卵丘扩散 胚胎发育 猪 -
小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达
目的 检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用. 方法 从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs).收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2 mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位.结果 GV-CCs的CCND2 mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P＜0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P＜0.01).免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV CCs减弱. 结论 卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程.
关键词： 卵丘细胞 细胞周期蛋白D2 卵丘-卵母细胞复合体 卵母细胞体外成熟 细胞增殖 -
卵丘细胞上AIFM2和FDX1的表达及其与小鼠卵母细胞成熟的关系
目的 检测小鼠卵母细胞体外、体内成熟过程中卵丘细胞(CCs)上线粒体相关凋亡因子2(AIFM2)和铁氧化还原蛋白1(FDX1)的表达,探讨其在卵母细胞成熟中的作用. 方法 从3周龄ICR雌性小鼠获取体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(IVV-COCs)以及GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),并将GV期体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(IVM-COCs).收集对应的CCs,分成GV-CCs、IVM-CCs和IVV-CCs 3组.实时定量逆转录聚合酶链反应检测AIFM2和FDX1 mRNA水平的表达,以GAPDH为参照;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs的AIFM2和FDX1的亚细胞定位. 结果 IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2 mRNA相对表达量[分别为(0.72±0.01)和(0.67±0.02)]显著高于GV-CCs组[(0.10±0.06)](P<0.01);同样,IVM-CCs和IVV-CCs的FDX1 mRNA相对表达量[分别为(1.58±0.35)和(1.82±0.34)]也显著高于GV-CCs组[(0.10±0.03)](P<0.01);而IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2和FDX1表达水平均无显著性差异(P>0.05).免疫荧光显示,AIFM2和FDX1主要定位于CCs胞质中,在GV-COCs中各层均有表达,且GV期卵母细胞中也有表达;IVM-COCs和IVV-COCs中表达阳性的细胞数目较GV期增加. 结论 卵母细胞成熟后,其CCs上AIFM2和FDX1的表达升高,表明AIFM2和FDX1参与了卵母细胞成熟过程,有望作为预测卵母细胞成熟的生物标记物.
关键词： 卵丘细胞 AIFM2 FDX1 卵丘-卵母细胞复合体 线粒体代谢 -
小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体蛋白质谱图的建立
目的通过聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,全面展示小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体(COC)的蛋白质表达谱.方法采用13 cm pH3～10的非线性胶条进行双向凝胶电泳,分离成熟雌鼠COC总蛋白,并作质谱鉴定. 结果获得了较高分辨率的小鼠成熟COC蛋白质表达谱图,并对胶上的3个蛋白点进行了质谱鉴定. 结论蛋白质组学是全面分析COC蛋白表达的有效手段.成熟COC蛋白质表达谱的建立为研究卵泡发育机理提供了依据.
关键词： 双向凝胶电泳 质谱技术 卵丘-卵母细胞复合体 蛋白质谱图 -
TSG-6和连接蛋白在小鼠卵丘-卵母细胞复合体的共位性分析
目的:探讨小鼠卵丘-卵母细胞复合体(COC)中TSG-6和连接蛋白(LP)与透明质酸(HA)的相关性.方法:应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重染色技术观察小鼠COC中TSG-6和LP的表达和分布.结果:TSG-6和LP在COC中呈阳性表达.结论:TSG-6和LP的阳性表达可能和HA在COC成熟中起重要作用.
关键词： 卵丘-卵母细胞复合体 TSG-6 连接蛋白 小鼠 -
经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢COCs及CCs中GDF9与Bim表达的影响
目的 观察经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)及卵丘细胞(CCs)中生长分化因子9(GDF9)及Bim表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制.方法 制备大鼠超排卵卵巢模型,收集COCs和CCs,分别与雌性SD超排卵大鼠空白血清和经后增殖方药物血清在体外共同培养,各分3组:空白血清组(空白组)、含药血清组(对照组)、含药血清+ GDF9受体阻断剂组(实验组),共6组.24 h后收集COCs和CCs,实时荧光定量PCR检测GDF9和Bim mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测GDF9蛋白表达水平.结果 (1)对照组COCs中GDF9 mRNA表达水平明显高于空白组和实验组(P＜0.05);对照组和实验组COCs中Bim mRNA表达水平均明显低于空白组(P＜0.05);对照组COCs中GDF9蛋白表达水平明显高于空白组(P＜0.05),亦高于实验组,但差异无统计学意义(P＞0.05).(2)CCs中GDF9 mRNA表达水平在3组间的差异性比较结果与COCs中一致;对照组和实验组CCs中Bim mRNA表达水平均明显低于空白组(P＜0.05);对照组CCs中Bim mRNA表达水平明显低于实验组(P＜0.05);对照组CCs中GDF9蛋白表达水平明显高于空白组和实验组(P＜0.05).(3)对照组COCs中GDF9 mRNA表达水平明显高于CCs中(P＜0.05),其余组内COSs和CCs比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经后增殖方舍药血清能提高COCs和CCs中GDF9的表达水平,维持COCs和CCs中Bim的低水平表达,抑制细胞凋亡,促进卵泡发育;COCs较剔除卵母细胞的CCs更有利于GDF9 mRNA的表达.
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多柔比星对体外培养小鼠腔前卵泡发育的影响
目的:利用雌性ICR小鼠腔前卵泡体外培养方法观察多柔比星对卵泡发育的影响,对多柔比星卵巢毒性机制进行初步探讨.方法:取12～14日龄的雌性ICR小鼠卵巢的腔前卵泡进行原代培养,在培养的第2、6和11天,分别用不同浓度的多柔比星(0.4、0.8、1.6和3.2 μ g/mL)染毒24 h后继续培养.通过测量卵泡的大小、存活率和卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte cell complexes,COCs)的排出率来判定多柔比星对腔前卵泡发育的影响.结果:在实验所设置的剂量范围内,与对照组比较,多柔比星在1.6和3.2μg/mL浓度下能明显抑制雌性ICR小鼠卵巢腔前卵泡的发育(P＜0.05),降低卵泡的存活率(P＜0.05),并抑制COCs的排出(P＜0.05),且呈一定的剂量效应关系.结论:多柔比星可抑制腔前卵泡的发育,降低卵泡的存活率,抑制COCs的排出,从而引起卵巢毒性,产生卵巢功能障碍.
关键词： 多柔比星 腔前卵泡 生殖毒性 卵丘-卵母细胞复合体
