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一氧化氮抑制剂对金黄地鼠体外囊胚培养中囊胚孵出的影响
目的 观察一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对金黄地鼠的囊胚孵出的影响. 方法 将金黄地鼠受精卵分为两组,对照组将受精卵置入M199培养液中,实验组在M199培养液中添加L-NAME,培养96 h后比较对照组和实验组囊胚的孵化率及囊胚总细胞数、NO产生量、组织蛋白酶cathepsin L和cathepsin P mRNA的表达量. 结果 与对照组相比,实验组中囊胚孵化率[(23.5±4.7％) vs.(78.2±2.6％)]、NO的产生量[(4.5±0.5)μmol/L vs.(7.2±0.7) μmol/L]以及囊胚的总细胞数[(31.0±4.1) vs.(47±3.5)]均显著降低(P＜0.05).实验组中cathepsin L[(0.25±0.07) vs.(0.70±0.08)]和cathepsin P mRNA[(0.35±0.05) vs.(0.86±0.12)]的表达量明显低于对照组(P＜0.05). 结论 L-NAME抑制NO的产生,降低cathepsin L和cathepsin P mRNA的表达水平,终导致囊胚孵化率的降低.
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基于Lable-free蛋白质组学技术研究大黄素致大鼠肝损伤作用机制
目的:探索连续4周服用大黄素对大鼠肝组织蛋白表达的影响.方法:选取以大黄折算临床剂量100倍的大黄素灌胃SD大鼠4周(HG1,HG2,HG3,HG4)为模型,采用Lable-free蛋白质组学方法检测肝组织蛋白表达,并对所得结果进行分析.结果:通过筛选,HG1、HG2、HG3、HG4组中分别有158个、650个、219个、378个差异蛋白,这些差异蛋白经GO分析发现主要与细胞和代谢过程相关.其中,4组中共有差异蛋白25个,GO分类表明25个蛋白中有10个为与催化活性相关的蛋白.大黄素的存在使 α-2-HS-糖蛋白(热稳定性糖蛋白)表达上调,该蛋白的浓度与肝病的严重程度正相关;并且组织蛋白酶家族蛋—富含半胱氨酸的蛋白酶表达下调.结论:长期服用大黄素会增加肝损伤的概率,其可能是由于含半胱氨酸蛋白酶的表达下调,使组织功能出现紊乱,导致肝损伤的出现,并且这一结果在低剂量组中也得到了印证.
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组织蛋白酶与细胞外基质重塑
细胞外基质重塑是多种疾病的病理学基础,与之相关的细胞外蛋白酶中,组织蛋白酶起非常重要的作用,本文就组织蛋白酶在细胞外基质重塑相关疾病中的作用以及调节等作一综述.
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高脂饮食对GK大鼠动脉组织蛋白酶S表达的影响
糖尿病患者的心血管事件发生率及病死率是非糖尿病患者的2～4倍,而动脉粥样硬化是大血管病变的主要病理基础.我们早期采用基因芯片技术发现,糖尿病大鼠动脉壁组织蛋白酶S(Cat S)的基因表达显著上调[1],提示Cat S在糖尿病促进动脉粥样硬化进程中可能发挥着重要作用.
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乳腺癌中CD44 、Cath-D的表达及其与淋巴结转移的关系
乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤,其中乳腺浸润性导管癌约占乳腺癌的80%,它是我国近年来发病率增长较快的恶性肿瘤之一,因而判断其预后非常重要.目前认为与乳腺癌预后有关的主要指标有:淋巴结是否受侵犯,肿瘤大小,组织学分级等,其中淋巴结转移是乳腺癌预后不良的重要指标;因此早期预测乳腺癌淋巴结转移的趋势,制定合理的手术和药物治疗方案,对获得较好的预后具有重要的临床意义.目前能反映乳腺癌预后,并与淋巴结转移有密切关系的指标较多,本文探讨细胞黏附因子(CD44v6)、组织蛋白酶D(Cath-D)与乳腺癌淋巴结转移的关系,以期为临床合理的治疗提供依据.
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靶向破骨细胞的骨质疏松治疗药物研究进展
骨质疏松是由多种因素造成的以骨量减少、骨小梁显微结构退化导致骨强度降低为特征的全身性骨骼退行变化，患者常有腰背部或者全身无特征性疼痛，脆性骨折及呼吸系统受影响等症状。骨质疏松是全球性的慢性病。2014年美国休斯敦美国骨矿盐研究会年会报道，美国将会有1/2的老年女性以及1/3的老年男性将会发生骨质疏松性骨折。据调查，巴西绝经后骨质疏松患病率为15%-33%，我国人群40岁以上骨质疏松患病率约20%。骨质疏松患病率高，骨折率高，严重影响了中老年人的生活质量。目前骨质疏松的治疗主要有抗骨吸收与促骨形成治疗。抗骨吸收药物主要有双膦酸盐，雷洛昔芬，奥达卡替，狄诺塞麦等。其中双膦酸盐类药物是现在常用的药物，干扰破骨前体细胞附着；同时诱导破骨细胞凋亡，从而抑制骨吸收。但其长期使用有颚骨坏死，非典型性股骨坏死，损伤心血管系统，肾衰等风险。雷洛昔芬是选择性雌激素受体调节剂，可与不同雌激素受体结合，可以促使破骨细胞凋亡，抑制RANKL诱导的破骨分化，从而抑制骨吸收，但存在潮热与静脉血栓等副作用。狄诺塞麦是RANKL单克隆抗体，特异性阻断RANKL/RANK通路，促进破骨细胞凋亡，减少破骨细胞分化，抑制骨吸收。但是狄诺塞麦的长期疗效仍需进一步探究。奥达卡提是组织蛋白酶K抑制剂，可抑制破骨细胞功能，从而抑制骨吸收；其特异性高，可逃避溶酶体，体内半寿期较长，使用前景乐观。但仍需进一步实验数据评估其是否其对人体的不良效果。促骨形成的药物主要有甲状旁腺素类药物，其虽可重建骨微环境、增加骨密度，但价格昂贵且有肿瘤风险。随着对骨分子生物学的深入认识，靶定治疗骨质疏松的药物正在逐渐增多。不同药物具有不同的适应症，单一抑制骨吸收或促进骨形成都有其局限性。 Salubrinal是一种小分子量合成药物，可通过抑制真核翻译起始因子 eIF2α的去磷酸化，同时抑制破骨细胞发育。研究证明，此药是内质网应激的抑制剂，且对神经细胞、软骨细胞、肝细胞等均有积极作用。因此该药对骨质疏松的治疗前景十分乐观。至今，我们已证实Salubrinal对卵巢去势动物所致的骨质疏松具有增加骨密度和提高骨容积的疗效。但Salubrinal对骨质疏松治疗具体的分子机制至今未明。因此，下一步我们将继续研究Salubrinal治疗中的分子机制。
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血清基质金属蛋白酶9和乙酰肝素酶及组织蛋白酶诊断卵巢癌浸润转移程度
目的 探讨检测血清组织蛋白酶L(CL)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、乙酰肝素酶(Hpa)对卵巢癌浸润转移判断的临床应用价值.方法 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和电化学发光免疫分析法(ECLIA)分别检测广西医科大学附属肿瘤医院2003年9月至2009年10月217例术前未治疗卵巢癌[国际妇产科联盟( FIGO)分期Ⅰ～Ⅱ期83例、Ⅲ～Ⅳ期134例]、100例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)和101名健康妇女(健康对照组)外周血MMP-9、Hpa、CL含量；同时,对卵巢癌患者进行临床病理关联因素分析,并以卵巢上皮癌临床病理诊断为金标准,绘制受试者工作特征( ROC)曲线,以评价3项指标诊断术前卵巢癌患者浸润转移的敏感度和特异度.结果 血清中CL、MMP-9和Hpa含量在卵巢癌组分别为(21.23±8.17)、(193.95±42.49)、(7.68±2.32) μg/L,良性卵巢肿瘤组分别为(10.97±3.84)、( 143.66±28.47)、(4.86±1.37) μg/L,健康对照组分别为(5.59±1.75)、(57.99±11.42)、(2.77±0.80)μg/L,卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组和健康对照组比较,差异有统计学意义(t值CL分别为- 13.242和- 13.498,MMP-9分别为- 14.521和-21.290,Hpa分别为-10.896和- 18.280,P均＜0.001);卵巢上皮癌组血清CL含量[(21.59±8.24) μg/L]高于非卵巢上皮癌组[( 19.57±7.69) μg/L,F=11.209,P=0.048]；Ⅰ～Ⅱ期组血清中CL、MMP-9和Hpa含量分别为(19.66±7.83)、(182.63±42.30)、(7.21±2.05) μg,/L,低于Ⅲ～Ⅳ期组[分别为(22.64±8.31)、(202.81±39.74)、(8.51±1.92) μg/L,F值分别为12.452、70.565、195.122,P值分别为0.030、0.002和0.000]；卵巢上皮癌低分化组血清CL、MMP-9和Hpa含量分别为(23.04±7.67)、(200.12±40.82)、(8.22±1.92) μg/L,也高于高-中分化组[分别为(18.54±7.30)、(173.43±39.37)、(7.20±2.51)μg/L,F值分别为24.545、60.286、9.077,P值分别为0.004、0.035和0.001]；腹腔有肿瘤浸润转移组血清CL及MMP-9含量分别为(22.96±8.41)、(200.44±43.82) μg/L,高于无腹腔浸润转移组[分别为(19.07±7.36)、(181.04±36.10) μg/L,F值分别为12.210、18.084,P值分别为0.030、0.010]；有肿瘤远处转移组血清Hpa含量[(8.63±1.69) μg/L]高于无远处转移组[(7.93±2.11) μg/L,F=9.430,P =0.042].经ROC曲线分析,术前血清CL、Hpa、MMP-9含量测定诊断卵巢癌转移的敏感度分别为60.9％ (70/115)、69.6％ (80/115)和72.2％(83/115),特异度分别为57.4％(26/62)、67.2％ (20/62)和68.9％( 19/62).结论 卵巢癌患者血清CL、MMP-9和Hpa含量增高可能与肿瘤发生进展相关,血清3项指标检测对术前判断卵巢癌浸润转移程度有一定的临床参考价值.
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组织蛋白酶S、K和胱抑素C在压力负荷性心肌肥厚大鼠左心室重构中的表达
目的 探讨组织蛋白酶S(Cat S)、组织蛋白酶K(Cat K)和胱抑素C在压力负荷性心肌肥厚左心室重构过程中的表达及其相互关系.方法 雄性Wistar大鼠60只被随机分配到4周假手术组(F4)、8周假手术组(F8)、4周手术组(T4)以及8周手术组(T8).采用腹主动脉缩窄法构建心肌肥厚模型和心力衰竭模型.用实时荧光定量PCR和免疫组化法分别检测Cat S、Cat K和胱抑素C mRNA及蛋白表达,用Masson染色法分析左心室肌间质和血管周围纤维化程度,心脏超声和血流动力学测定心功能和心室重构.结果 实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)结果显示T4组大鼠心肌中的Cat S、Cat K及胱抑素C mRNA的表达均明显高于F4组大鼠(均P<0.05).T8组大鼠心肌中的Cat S、Cat K mRNA的表达进一步升高,显著高于Fs组(P<0.01),而T8组大鼠心肌中的胱抑素C mRNA的表达则降至正常水平.增高的Cat S、Cat K及胱抑素C蛋白主要表达于心肌细胞.结论 Cat S、Cat K和胱抑素C参与了压力负荷性心肌肥厚左心室的重构.
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丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29组织蛋白酶D表达水平的影响
目的:观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的组织蛋白酶D(Cath-D)表达水平的影响.方法:运用细胞增生抑制实验(MTT法),光镜观察,免疫细胞化学技术观察丁酸钠对HT-29细胞株的生长,凋亡和对Cath-D表达水平的影响.结果:丁酸钠能抑制HT-29细胞株增生,诱导凋亡,并促进Cath-D表达.结论:丁酸钠能够影响Cath-D的表达水平,这暗示了Cath-D在丁酸钠诱导的凋亡中可能伴有重要角色.
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组织蛋白酶B与结肠腺瘤和结肠癌的关系
组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)是一种溶酶体蛋白水解酶,参与肿瘤的浸润和转移.现公认结肠腺瘤是结肠癌的癌前病变.CB在结肠癌演变过程中,尤其在浸润和转移中发挥重要作用.现介绍CB的活化作用,表达特点,抑制剂及其分子生物学特征等,重点对CB与结肠腺瘤和结肠癌发生关系的研究进展做一综述.
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酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV NS3蛋白结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS3基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出NS3基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落18个,其中4个真核细胞翻译延伸因子2;2个免疫球蛋白λ轻链;1个肌动蛋白β;1个铁蛋白轻多肽;1个(丝裂原)活化蛋白激酶3;2个肌球蛋白因子1;1个白介素2受体β;1个富含精氨酸/丝氨酸剪切因子6;1个组织蛋白酶S;1个2'-5'寡腺甘酸合成酶类似物;1个缺失精子缺乏相关蛋白2;1个CNN2;1个新基因.结论:成功克隆出HCV NS3的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究
目的:筛选并克隆人肝细胞中与HBcAg肝细胞结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨HBcAg结合蛋白C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增C-12基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶B基因1个、载脂蛋白M基因1个、细胞色素C氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
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腹主动脉瘤发病机制的研究进展
腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是临床定义为肾下腹主动脉直径≥3 cm,主动脉直径＞正常直径50％以上的主动脉致死性疾病[1].数据显示,该病在美国65岁以上人群患病率为8％,尽管随着腔内修复术( endovascular aneurysm repair,EVAR)的开展,美国每年AAA的死亡人数依然能达到15000,占疾病死因的第13位[2].AAA的发病与老年、男性、吸烟、动脉粥样硬化、高血压和基因背景有关.AAA的分子机制仍然不清[3],目前认为该病是由遗传、炎症、氧化应激等因素共同作用的结果.细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)过度降解和重塑,是AAA的基本病理改变.
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腹主动脉瘤发病的新祸首——溶酶体组织蛋白酶
腹主动脉瘤(Abdominal aortic aneurysm,AAA)是肾下腹主动脉直径≥3 cm,主动脉直径>正常直径50%以上的血管致死性疾病.腹主动脉瘤的组织病理学改变主要为腹主动脉壁细胞外基质(extracellular matrix,ECM)重塑,迄今缺乏特异针对腹主动脉瘤的药物治疗.近年研究证实定位于溶酶体的组织蛋白酶(Cathepsins)通过促进血管炎症、诱导中膜平滑肌细胞凋亡、增加血管新生和激活其它蛋白水解酶的活性,导致血管壁重塑而促进腹主动脉瘤的形成.Cathepsins有望成为腹主动脉瘤治疗的新靶点.
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组织蛋白酶K与骨质疏松的研究进展
骨质疏松是以骨量减少,骨组织显微结构退化(松质骨骨小梁变细、断裂、数量减少,皮质骨多孔、变薄)为特征,以致骨的脆性增高及骨折危险性明显增加的一种全身性疾病[1].骨量的丢失是由于骨吸收对骨的破坏作用超过了骨形成,由此造成骨破坏活动绝对或相对增加,从而破坏了骨重建的动态平衡过程.组织蛋白酶K是一种半胱氨酸蛋白酶,当破骨细胞施行骨吸收时会大量表达,该酶具有分解多种骨基质的作用:如对Ⅰ型胶原,Ⅱ型胶原,骨桥蛋白及骨连接素等.组织蛋白酶K在骨重建中具有重要作用.笔者对组织蛋白酶K与骨质疏松相关研究的进展作一综述.
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组织蛋白酶B的生物学特性和病理学意义
蛋白水解酶(protase)是维持机体内环境平衡的重要酶系,包括基质金属蛋白酶(MMPs)、丝氨酸蛋白酶(serine proteinases,SP)、半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinases,CP)和天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinases,AP)四大类.
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乌司他丁对肝切除病人围手术期免疫功能的影响
乌司他丁(urinary trypsin inhibitor, UTI)是由143个氨基酸组成的糖蛋白,分子量约67000 kD.乌司他丁对胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶,粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶(木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、H 等)、纤溶酶等多种酶有抑制作用.肝切除作为特殊的重大手术创伤,可引起机体免疫力下降,严重影响病人预后.本文通过临床随机化对照研究,初步评估在肝切除围手术期应用乌司他丁对病人免疫功能的影响.
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组织蛋白酶D和层粘连蛋白在膀胱癌中的表达及意义
我们采用免疫组化方法观察膀胱移行细胞癌(BTCC)中组织蛋白酶D(CD)和层粘连蛋白(LN)的表达,探讨其在BTCC进展中的作用及判断预后的价值.报告如下.
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日本血吸虫组织蛋白酶L家族1个新基因的克隆与序列分析
目的 克隆与分析日本血吸虫组织蛋白酶L样(SjCLs)基因全长cDNA序列,为进一步研究其功能奠定基础.方法 提取日本血吸虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增获得cDNA序列;将目的 片段连接至pMDl8-T Simple载体上,连接产物转化大肠埃希菌,通过酶切和测序鉴定重组质粒;利用生物信息学软件分析序列的开放阅读框、蛋白序列的同源率和功能区.结果 以成虫总RNA为模板进行RT-PCR,得到一段长为996 bp的cDNA片段,该片段含有完整读码框,该阅读框编码的蛋白含有331个氨基酸残基,分子量为38.3 kDa,命名为SjCLs;序列比对分析发现该蛋白氨基酸序列与SjCL2同源率高,达到89.1%;进化树分析发现SjCLs与SjCL2亲缘关系也近;SjCLs具有类似于SjCL2的N端信号肽,可能经加工后分泌到细胞外;两者所预测的功能基序及三维构象也基本相同.结论 SjCLs具有组织蛋白酶L的基本特征,从而证明研究获得组织蛋白酶L基因家族的一个新成员.
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脑膜瘤相关蛋白的表达及其意义
随着免疫组化技术在肿瘤中的应用,许多学者对脑膜瘤进行了大量的免疫组化研究,但目前尚未发现特异的免疫组化标记蛋白.本文对41例脑膜瘤标本应用免疫组化方法检测细胞周期蛋白A(Cyclin A)、组织蛋白酶D(Cathepsin D)和Ki-67的表达情况及分析他们与肿瘤组织学分级的关系.
