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人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2的表达与卵巢功能及反应性的相关性研究
目的 探讨人卵巢黄素化颗粒细胞细胞周期蛋白D2(cyclin D2)的表达与卵巢功能及超排卵过程中卵巢反应性的相关性.方法 收集48例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢黄素化颗粒细胞,根据取卵时卵泡发育数不同将卵巢反应性分为高反应组(12例)、中反应组(30例)及低反应组(6例).采用免疫细胞化学方法检测颗粒细胞膜上cyclin D2及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测颗粒细胞cyclin D2 mRNA的表达水平;化学发光法测定基础血清卵泡刺激素(FSH),人绒毛膜促性腺激素(hCG)日E2水平.分析颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达与IVF临床各项参数、卵巢反应性的关系以及和颗粒细胞增殖活性PCNA标记指数(PCNA-LI)的相关性.结果 (1)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白表达与年龄、基础FSH水平及促性腺激素(Gn)支数呈负相关(r=-0.547,P<0.01; r=-0.456,P<0.05; r=-0.451,P<0.05);cyclin D2蛋白表达与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.592,P<0.01; r=0.626,P<0.01);高、中和低反应三组cyclin D2蛋白表达有显著统计学差异(F=4.995,P<0.05).(2)黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA表达与年龄、基础FSH水平呈负相关(r=-0.510,P<0.05; r=-0.891,P<0.01);与获卵数和hCG日E2水平呈正相关(r=0.629,P<0.01; r=0.524,P<0.05);高、中和低反应三组cyclin D2 mRNA的表达有显著统计学差异(F=8.843,P<0.01).(3)黄素化颗粒细胞cyclin D2蛋白及mRNA表达与PCNA-LI均呈显著正相关(r=0.696,P<0.01; r=0.498,P<0.05).结论 黄素化颗粒细胞cyclin D2 mRNA及蛋白的表达可反映卵巢储备功能并与卵巢反应性正相关.cyclin D2可能通过调节颗粒细胞的增殖分化参与卵泡的发育.
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小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上细胞周期蛋白D2的表达
目的 检测在小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞(CCs)上细胞周期蛋白D2(CCND2)表达水平的变化,探讨其在卵母细胞成熟中的作用. 方法 从3周龄雌性ICR小鼠获取GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(MⅡ-COCs).收集对应的CCs,分成GV-CCs和MⅡ-CCs二组,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹方法检测CCND2 mRNA和蛋白水平的表达;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs成熟前后CCND2的亚细胞定位.结果 GV-CCs的CCND2 mRNA相对表达量(7.03±1.11),显著高于MⅡ-CCs组(1.40±0.11)(P＜0.01);同样,GVCCs组CCND2蛋白相对表达水平(1.98±0.16)也显著高于MⅡ-CCs组(1.16±0.14)(P＜0.01).免疫荧光显示,COCs中CCND2定位于CCs,卵母细胞亦有表达;CCs中CCND2主要定位于胞核,胞质中少量表达,且GV-CCs主要表达在内层CCs,而MⅡ-CCs则失去这种表达极性,同时MⅡ-CCs的表达强度较GV CCs减弱. 结论 卵母细胞体外成熟培养过程中,其周围的CCs上CCND2表达水平下降,且伴随细胞定位的改变,提示CCs上CCND2与卵母细胞成熟密切相关,可能参与了卵母细胞成熟过程.
关键词： 卵丘细胞 细胞周期蛋白D2 卵丘-卵母细胞复合体 卵母细胞体外成熟 细胞增殖 -
肺癌组织中细胞周期蛋白依赖激酶、细胞周期蛋白D2和P16表达及其意义
目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4)、细胞周期蛋白D2(CyclinD2)和P16在人类肺癌组织中的表达及意义.方法采用免疫组化SP法检测69例肺癌组织中CDK4、CyclinD2和P16的表达并行统计学分析.结果69例肺癌组织中CDK4、CyclinD2和P16的阳性率分别为49.3%,39.1%和50.7%,与正常支气管粘膜比较有显著性差异(P＜0.01).CDK4、P16的表达与肺癌淋巴结转移有关(P＜0.01,P＜0.05).P16的表达与CDK4、CyclinD2的表达呈显著负相关(P＜0.01).结论CyclinD2高表达与肺癌的发生有关,CDK4和P16的异常表达与肺癌的侵袭和转移有关,可作为判断肺癌淋巴结转移和估计预后的重要指标.
关键词： 肺肿瘤 细胞周期蛋白依赖激酶 细胞周期蛋白D2 p16 免疫组织化学 -
细胞周期蛋白D2的RNA干扰质粒转染对骨髓瘤细胞系LP-1细胞增殖和凋亡的影响
目的 构建细胞周期蛋白D2(CCND2)的短发夹RNA表达质粒,并观察对骨髓瘤细胞系LP-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成CCND2短发夹RNA双链DNA模板,构建表达质粒pGenesil-2/CCND2,转染LP-1细胞,以RT-PCR检测对CCND2表达的抑制作用,以锥虫蓝染色计数和MTT检测细胞增殖,以Annexin Ⅴ检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期.结果质粒pGenesil-2/CCND2转染LP-1细胞,转染率为34.2%,可以明显抑制CCMD2的表达,细胞增殖明显受抑制,72 h后细胞凋亡率为(25.7±4.8)%.结论 抑制CCND2的表达可以抑制骨髓瘤细胞生长,并诱发骨髓瘤细胞的凋亡,可能是潜在的治疗靶点.
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细胞周期因子在肺癌组织中的表达及意义
目的 研究肺癌组织中细胞周期蛋白D2(CyclinD2)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)和P16的表达及意义.方法 应用免疫组织化SP法,检测69例肺癌组织、20例癌旁正常支气管黏膜石蜡切片中CyclinD2、CDK4和P16的表达并进行统计学分析.结果 (1)69例肺癌组织中CyclinD2、CDK4和P16的阳性率分别为39.1%、49.3%和50.7%,与正常支气管黏膜比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).(2)CDK4和P16的表达与肺癌淋巴结转移有关(P＜0.01或＜0.05).(3)P16的表达与CyclinD2、CDK4的表达呈显著负相关(P＜0.01).结论 CyclinD2高表达与肺癌的发生有关,CDK4和P16的异常表达与肺癌的侵袭和转移有关,可作为判断肺癌淋巴结转移和估计预后的重要指标.
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细胞周期因子对乳腺癌生物学行为和预后判定的影响
目的:研究乳腺癌组织中细胞周期蛋白D2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4),探讨它们与p27 kip1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义.方法:对1996-01/2000-12在河北工程学院医学院病理教研室进行病理检查的乳腺癌标本用免疫组化S-P法,检测96例乳腺癌,18例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中CyclinD2和CDK4的表达,比较它们与P27kip1蛋白表达,与临床病理学指标之间的关系.结果:①96例乳腺癌组织中CyclinD2,CDK4和P27 kikip1的表达率分别为42%,54%和38%,与正常乳腺组织相比差异有显著性意义(P＜0.001).②CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的组织学分级,核分裂数有关(P＜0.001),和局部复发有关(P＜0.05),而与患者年龄,肿瘤大小、组织类型无关(P＞0.05),CDK4的表达与乳腺癌的淋巴结转移,雌激素受体状态也有密切关系(P＜0.01).③P27kipl的表达缺失,与肿瘤大小、组织学分级,核分裂数,有无淋巴结转移以及局部复发均有关系(P＜0.05),而且P27kip1的表达与CyclinD2和CDK4的表达呈显著负相关(P＜0.01).结论:CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的发生、发展有关,而P27 kip1的表达缺失和CDK4的异常表达与乳腺癌的侵袭、转移及复发有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标.
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miRNA-206靶向细胞周期蛋白D2调控神经胶质瘤细胞增殖
目的：探讨miRNA-206在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用荧光定量 PCR方法检测神经胶质瘤组织和细胞系中miRNA-206的表达情况；通过四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）增殖实验检测miRNA-206对神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响；生物信息学方法预测miRNA-206可能的靶基因，并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的细胞周期蛋白D2（CCND2）是miRNA-206的靶基因；蛋白质印迹方法检测miRNA-206对CCND2表达的影响。结果 miRNA-206在神经胶质瘤组织中的表达显著降低（ P＜0.01），且神经胶质瘤恶性度越高， miRNA-206的表达越低（P＜0.01）；同时，神经胶质瘤细胞系中miRNA-206的表达亦显著降低（P＜0.01）；转染miRNA-206 mimics上调神经胶质瘤细胞T98G中miRNA-206表达后可显著抑制神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力（P＜0.01），而转染anti-miRNA-206可增加神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力（P＜0.01）。通过TargetScan软件进行生物信息学预测显示CCND2为miRNA-206的功能性靶基因，且得到荧光素报告实验结果证实。蛋白质印迹结果显示转染miRNA-206可显著抑制神经胶质瘤细胞T98G中CCND2的表达。结论 miRNA-206可通过调节CCND2的表达，进而抑制神经胶质瘤细胞T98G的增殖能力，神经胶质瘤组织中miRNA-206的低表达与神经胶质瘤的发生发展密切相关。
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真核翻译延伸因子1A1通过调控cyclin D2表达促进肝癌细胞增殖
目的:研究真核翻译延伸因子1A1 (eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)表达对原发性肝癌细胞周期和增殖的影响,并探讨其分子机制.方法:免疫组织化学法检测101例肝癌及癌旁组织中eEF1A1的表达水平,并进一步分析肝癌组织中eEF1A1表达与肝癌患者临床病理参数的相关性.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞Huh7、SMMC7721、MHCC97H、Hep3B和正常肝细胞HL-7702中eEF1A1mRNA和蛋白的表达水平.在肝癌Huh7和SMMC7721细胞中分别转染特异性针对eEF1A1基因的shRNA-1/2(即eEF1A1-shRNA-1/2)和过表达质粒pcDNA3.1-eEF1A1,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证eEF1A1表达的变化,然后采用EdU法和FCM法分别检测肝癌细胞增殖和细胞周期的变化.另外,蛋白质印迹法检测转染eEF1A1 shRNA-1/2的肝癌Huh7细胞和转染pcDNA3.1-eEF1A1的SMMC7721细胞中cyclin D2以及信号转导与转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)通路蛋白的表达变化.结果:肝癌组织中eEF1A1表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001),肝癌细胞中eEF1A1表达水平明显高于正常肝细胞(P＜0.001),并且eEF1A1高表达与肝癌大小及TNM分期密切相关(P＜0.01,P＜0.05).eEF1A1-shRNA-1/2转染后,肝癌Huh7细胞中eEF1A1 mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P值均＜0.01),G1期细胞所占比例明显升高(P＜0.01),肝癌细胞的增殖活性明显降低(P＜0.01);pcDNA3.1-eEF1A1转染后肝癌SMMC7721细胞中eEF1A1 mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P值均＜0.01),G1期细胞所占比例明显降低(P＜0.05),肝癌细胞的增殖活性明显增高(P＜0.05).随着eEF1A1基因表达下调,Huh7细胞中cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均明显下降(P值均＜0.05);而过表达eEF1A1后,SMMC7721细胞中cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均明显升高(P值均＜ 0.05);过表达eEF1A1基因的同时加入STAT1抑制剂作用后,cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均无明显变化(P值均＞0.05).结论:eEF1A1通过STAT1通路调控cyclin D2表达,从而促进肝癌细胞周期进展和细胞增殖.
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微RNA-29b通过调控cyclin D2表达参与宫颈癌发生的机制研究
目的:分析微RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)在宫颈癌组织中的表达情况,并探讨miR-29b在宫颈癌发生过程中的作用及其可能的机制.方法:利用实时荧光定量PCR法检测miR-29b在50例宫颈癌组织标本中的表达情况,分析miR-29b表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系.在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-29b模拟物,然后采用CCK-8法、FCM法、细胞划痕实验及Transwell法检测miR-29b过表达对宫颈癌细胞增殖、周期分布和迁移的影响.通过Targetscan软件预测miR-29b的靶基因,然后采用双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法明确miR-29b在SiHa细胞中与该靶基因的相互作用.实时荧光定量PCR法检测miR-29b的靶基因在宫颈癌组织中的表达情况.结果:miR-29b在宫颈癌组织中的表达水平与相应癌旁正常组织相比明显下降(P＜0.05).模拟物转染后miR-29b过表达,能明显抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,且提高G1期细胞所占百分率(均P＜0.05).miR-29b与其靶基因细胞周期蛋白D2 (cyclin D2,CCND2)相互作用,在宫颈癌细胞中二者表达呈负相关性(r2=0.225,P＜0.05).宫颈癌组织中CCND2表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05).结论:miR-29b水平在宫颈癌组织中显著下调.初步的体外实验结果提示,它可能作为一种抑癌基因,通过下调CCND2表达,参与宫颈癌的发生与发展.因此,预测miR-29b可能将作为宫颈癌诊断和治疗的新的作用靶点.
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长链非编码RNA H19通过抑制CCND2促进膀胱癌细胞增殖的分子机制
目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)H19促进膀胱癌细胞增殖的分子机制. 方法 ①应用实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)分别检测膀胱癌组织中 lncRNA H19和 miRNA-29 c-3p的表达并分析其相关性.②应用 RNA 干扰和细胞转染技术抑制膀胱癌细胞系 T24及5637中H19基因的表达,其后通过细胞增殖实验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-qPCR检测细胞中 H19的表达变化.③在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-29c-3p和 H19,运用荧光素酶报告系统验证 miR-29 c-3 p 对 H19及细胞周期蛋白 D2(CCND2)的靶向作用,应用Western blot检测膀胱癌细胞系 T24与5637中抑制 H19表达后 CCND2的表达变化. 结果 H19在膀胱癌中高表达,miR-29c-3p在膀胱癌中低表达,H19和 miR-29c-3p 的表达为负相关,H19与CCND2的表达为正相关.MiR-29 c-3 p 可同时靶向 H19及 CCND2.在膀胱癌细胞系中过表达miR-29c-3p可以抑制 H19的表达,miR-29c-3p在膀胱癌中起肿瘤抑制作用,而 H19具有促进癌细胞增殖和改变细胞周期的能力,表现为癌基因样作用,抑制膀胱癌细胞系 T24和5637中 H19的表达可以在翻译水平减少CCND2的表达. 结论 lncRNA H19通过与CCND2竞争结合 miR-29 c-3 p,降低 miR-29 c-3 p对CCND2的表达抑制,从而在膀胱癌中发挥肿瘤促进作用.
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乳腺癌中cyclinD2、CDK4的表达及其临床意义
目的研究乳腺癌组织中细胞周期蛋白D2(cyclinD2 )、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)的表达,探讨它们与p27kip1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义.方法应用免疫组化SP法,检测96例乳腺癌、18例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中cyclinD2、 CDK4的表达,比较它们与p27kip1蛋白表达、与临床病理学指标之间的关系.结果①96例乳腺癌组织中cyclinD2、CDK4和p27kip1的表达率分别为41.7%、54.2%和38.5%,与正常乳腺组织相比有显著性差异 (P<0.001).②cyclinD2、CDK4的表达与乳腺癌的组织学分级,核分裂数有关(P<0.001),和局部复发有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、组织类型无关(P>0.05),CDK4的表达与乳腺癌的淋巴结转移,雌激素受体状态也有密切关系 (P<0.01).③p27kip1的表达缺失,与肿瘤大小、组织学分级,核分裂数,有无淋巴结转移以及局部复发均有关系(P<0.05),而且p27kip1的表达与cyclinD2、CDK4的表达呈显著负相关(P<0.01).结论 cyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的发生、发展有关,而p27kip1的表达缺失和CDK4的异常表达与乳腺癌的侵袭、转移及复发有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标.
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miRNA29靶基因CCND2和CDK6在宫颈癌中的表达研究
目的 研究微小核糖核酸29(miRNA29)靶基因细胞周期素D2重组蛋白(CCND2)及周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)在宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理各因素之间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测宫颈鳞状细胞癌组织、子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、正常宫颈组织中 CCND2、CDK6的信使核糖核酸(mRNA)水平.结果miRNA29靶基因 CCND2在正常宫颈组织、CIN 及宫颈鳞状细胞癌组织中的表达有统计学差异(H = 29.27,P= 0.00).miRNA29靶基因CDK6在宫颈鳞状细胞癌组织、CIN及正常宫颈组织中表达水平无统计学差异(H=2.76,P=0.25).在CIN组织中,CCND2与CDK6存在正相关(r=0.58,P<0.05).结论 miRNA29靶基因CCND2可能参与宫颈癌的发生发展;CDK6与宫颈癌发生发展缺乏相关性;CCND2和CDK6在CIN发生发展中可能起协同作用.
关键词： 宫颈癌 细胞周期蛋白D2 细胞周期蛋白依赖性激酶6 微小RNA29 -
人脑胶质瘤中cyclin D2的表达及其与细胞增殖的关系
目的:研究人脑胶质瘤中cyclin D2蛋白的表达与肿瘤恶性程度的关系及其对细胞增殖活性的影响.方法:采用免疫组化方法检测52例人脑胶质瘤和8例正常人脑组织标本中cyclin D2和PCNA的表达水平,计算两者标记指数,统计分析两者之间及其与胶质瘤病理分级之间的关系.结果:正常脑组织中无cyclin D2或PCNA表达.随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin D2平均标记指数明显升高.在WHO分级Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级与Ⅳ级、Ⅰ级与Ⅲ级以及低度恶性胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ)与高度恶性胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ)之间标记指数存在显著性差异(P＜0.05).类似cyclin D2,PCNA 标记指数随脑胶质瘤恶性程度增高而升高.cyclin D2与PCNA的平均标记指数呈明显正相关(r=0.654,P＜0.01).结论:人脑胶质瘤中cyclin D2的表达与细胞增殖活性和病理学分级密切相关,很可能参与了人脑胶质瘤细胞的恶性转化.
