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γ-氨基丁酸及其A型受体α5亚单位在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达
目的 探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及其A型受体α5亚单位(GABRA5)在小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中的表达情况. 方法 在性成熟前小鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)以刺激卵泡生长,并予以人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导排卵,于给药后不同时间取出卵巢和输卵管,并收集不同时期的颗粒细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测GABRA5 mRNA在生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用Western blotting和免疫荧光技术检测GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的表达;用免疫组织化学方法检测GABA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞中的分布. 结果 (1) GABRA5 mRNA在GV期和MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中均有表达,且MⅡ期卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞上的表达水平高于其在GV期卵母细胞时卵丘颗粒细胞中表达水平(P＜0.05).(2)GABRA5蛋白在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上升趋势(P＜0.05).(3)免疫组化染色结果显示,GABA均定位于在GV期和MⅡ期卵母细胞周围卵丘颗粒细胞的胞质中. 结论 GABA及其A型受体α5亚单位均表达于小鼠不同成熟度卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞中,其中A型受体α5亚单位的表达与卵母细胞的成熟度相关,其表达量随卵母细胞成熟而升高,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程.
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乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织GABA及GABA-T的影响
目的 探讨拟除虫菊酯的神经毒性,为该类农药的中毒防治提供理论依据.方法 健康成年昆明种小鼠按体重随机分为4组,每组16只,雌雄各半.染毒组小鼠以1次经口灌胃方式分别给予20、40和80 mg/kg剂量乙体氯氰菊酯,以食用色拉油稀释受试物质,对照组给予等量色拉油.灌胃后2h,以分光光度法检测小鼠脑组织γ-氨基丁酸(y-aminobutyric acid,GABA)水平及γ-氨基丁酸转氨酶(GABA transaminase,GABA-T)活性,采用RT-PCR和Western blot法分别检测GABA-T基因转录及蛋白表达水平.结果 80 mg/kg剂量组小鼠脑组织GABA水平明显高于对照组(P＜0.05);GABA-T活性随着染毒剂量的增加而逐渐降低,其中80和40 mg/kg剂量组小鼠脑组织GABA-T活性明显低于对照组(P＜0.01或P＜0.05);各组小鼠脑组织GABA-T mRNA及蛋白表达与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 乙体氯氰菊酯可使小鼠脑组织GABA水平增加,GABA-T活性降低可能是该药引起GABA水平增加的原因之一.
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氧乐果致猫脑区Glu和GABA的时间变化
目的 建立氧乐果皮下染毒急性猫中毒模型,观察急性中毒后脑组织谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)免疫阳性细胞的时空分布规律及形态变化.方法 将30只健康猫分为2组.染毒组25只:腹部皮下4点等量注射40%氧乐果0.3 ml/kg(=2.1 mg/kg).对照组5只:腹部皮下4点等量注射同体积体积分数为0.9%的生理盐水.应用免疫组化的方法观察Glu和GABA免疫阳性细胞的变化.结果 免疫组织化学染色观察染毒后顶叶、海马、基底节和小脑Glu阳性细胞数与对照组比较,差异无显著性,顶叶GABA阳性细胞染色加深,阳性细胞数对照组为(9.8±1.2)个/视野,染毒后3h阳性细胞数(14.7±3.3)个/视野,并在染毒后各时间点与对照组比较,差异有显著性.结论 氧乐果染毒后顶叶GABA的含量增加.
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丙烯酰胺对大鼠谷氨酸和γ-氨基丁酸类神经递质含量的影响
目的 探讨丙烯酰胺(ACR)染毒致大鼠大脑皮层和小脑谷氨酸(Glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量变化.方法 60只雄性SD大鼠分为6组,即11d试验组(生理盐水对照组、30 mg/kgACR染毒组和50 mg/kg ACR染毒组)和21 d试验组(生理盐水对照组、15 mg/kg ACR染毒组和30 mg/kg ACR染毒组);步态评分评价神经行为改变;LC-MS/MS法测定染毒终点大脑皮层和小脑Glu和GABA含量变化.结果 11d试验组在染毒终点时,50 mg/kg ACR染毒组与生理盐水对照组、30 mg/kg ACR染毒组相比,体重显著降低(P＜0.05),步态评分显著增高(P＜0.05);21d试验组在染毒终点时,30 mg/kg ACR染毒组与生理盐水对照组、15 mg/kg ACR染毒组相比,体重显著降低(P＜0.05),步态评分显著增高(P＜0.05);30 mg/kg 21 d和50mg/kg11 d染毒组与对照组相比,大脑皮层和小脑内兴奋性神经递质Glu含量显著降低(P＜0.05),且降低幅度一致.结论 ACR引起大鼠大脑皮层和小脑内兴奋性神经递质Glu含量的降低,可能是导致其神经毒性的致病机制之一.
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吗啡依赖大鼠视皮层GABA及分解代谢酶的变化
目的 通过对吗啡依赖大鼠视皮层γ-氨基丁酸(GABA)含量及GAD与GABA-T活力的测定,研究吗啡成瘾过程中视皮层γ-氨基丁酸的代谢变化.方法 30只SD大鼠分为6组,末次给药前10 min,后10 min,后3 h处死组及相应对照组,每组5只.纸电泳法检测各组大鼠视皮层中GABA含量,分光光度法检测GAD与GABA-T的活力.结果 吗啡末次给药前大鼠GABA含量(0.09±0.03)μmol/mg与对照组(0.17±0.05)μmol/mg比较,差异有统计学意义,末次给药后处死组GABA含量回复至对照组水平.结论 吗啡依赖形成时视皮层处于去抑制状态.
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氰戊菊酯和辛硫磷对大鼠中枢谷氨酸及γ-氨基丁酸免疫阳性细胞的影响
为深入探讨拟除虫菊酯和有机磷混配农药对中枢神经系统的毒性作用及其机制,通过免疫组织化学和显微图象分析方法观察了大鼠经氰戊菊酯(20mg/kgBW)、辛硫磷(160mg/kgBW)、氰戊菊酯+辛硫磷(180mg/kgBW,1:8等毒配比)灌胃染毒24小时后中枢神经组织中谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)免疫阳性细胞(IRC)的变化.结果显示,氰戊菊酯组、氰戊菊酯+辛硫磷组大鼠大脑皮层、海马、纹状体等部位Glu的IRC数目(N)减少,阳性细胞面积比(Aa%)和积分光密度(IOD)呈现不同程度的降低,而GABA的IRC各观察参数值均呈现不同程度的升高;氰戊菊酯组与氰戊菊酯+辛硫磷组各参数值之间未见显著性差异;与对照组相比,单独辛硫磷组各观察参数值亦未见显著性变化.本次研究结果提示,Glu、GABA递质功能紊乱可能在拟除虫菊酯神经毒性中具有重要意义;在对Glu和GABA作用的影响上,拟除虫菊酯和有机磷之间无协同作用.
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针刺对耳鸣患者中枢性神经递质GABA及5-HT的调节作用
目的 通过检测耳鸣患者针刺治疗前后外周血清中枢性神经递质含量变化,探索针刺治疗耳鸣的可能作用机制.方法 纳入门诊耳鸣为主诉患者40例,取耳周翳风、听宫、听会穴,垂直进针1.2～1.3寸,以局部酸麻胀痛感为度,针尾连接G68050-2A治疗仪,采用连续波,脉冲重复频率30Hz,每次留针15min,配穴辨证取穴,每日1次,14次为1个疗程.应用四级杆飞行质谱(UPLC-Q-Tof/MS)法检测治疗前后患者外周血清中枢性神经递质5-羟色胺(5-HT)和γ-氨基丁酸(GABA)水平.结果 40例患者耳鸣消失1例,显效14例,有效10例,无效15例,总有效率为62.5％.针刺后患者GABA含量增加(P＜0.01),5-HT含量减少(P＜0.01).结论 针刺可以调节耳鸣中枢性神经递质5-HT与GABA含量,可能是其治疗耳鸣的作用机制.
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泻肝安神法对睡眠剥夺大鼠氨基酸类神经递质影响的研究
目的：探讨泻肝安神法对睡眠剥夺大鼠脑干、海马、下丘脑脑区氨基酸类神经递质含量的干预效应。方法将60只SD大鼠随机分为4组，分别为正常对照组、失眠模型组、中药组、西药组，每组各15只，除正常对照组外的其余三组大鼠一律采用水平台法反复剥夺睡眠7次，每次持续24小时。造模结束后，中药组大鼠灌胃给药泻肝安神汤，西药组灌胃给药地西泮溶解液，失眠模型组灌胃给予纯净水，干预7天后取材，采用高效液相色谱法检测各组大鼠脑干、海马、下丘脑脑区6种氨基酸类神经递质的含量。结果经方差分析发现大鼠剥夺睡眠后脑干氨基酸类神经递质门冬氨酸下降，γ-氨基丁酸升高，下丘脑γ-氨基丁酸下降(P<0．05)，而在海马和下丘脑区域各氨基酸类神经递质含量变化不显著(P>0．05)。采取泻肝安神法治疗后大鼠脑干门冬氨酸含量显著升高，下丘脑γ-氨基丁酸含量升高(P<0．05)；而采用地西泮片治疗后大鼠脑干区门冬氨酸升高，下丘脑门冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸、牛磺酸升高(P<0．05)。结论泻肝安神法可调节睡眠剥夺大鼠的氨基酸类神经递质，在下丘脑的作用机制类似于地西泮片，但对于氨基酸类神经递质的影响影响靶点要少于西药。
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痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马Glu,GABA含量的影响
目的:观察痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸(Glu),γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨痫愈痊颗粒治疗癫痫的机制.方法:将70只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组(200 mg· kg-)、痫愈痊颗粒低、高剂量组(586,1 172 mg·kg-1),采用亚惊厥剂量戊四氮(PTZ) ip建立癫痫大鼠模型,在造模同时即开始给药,共28 d.行为学观察后取海马组织,采用高效液相色谱-四级杆离子阱串联质谱仪检测海马中Glu,GABA的含量.结果:59只大鼠进入结果分析,与模型组比较,痫愈痊颗粒与丙戊酸钠干预后发作潜伏期延长、惊厥持续时间缩短(P＜0.01);惊厥持续时间高剂量组优于低剂量组(P＜0.05).模型组与正常组相比,海马Glu含量明显上升,GABA含量明显下降(P＜0.01);与模型组比较,痫愈痊颗粒高、低剂量组和丙戊酸钠组可明显降低海马Glu含量,升高GABA含量(P＜0.05,P＜0.01).结论:采用亚惊厥剂量PTZ能够建立癫痫大鼠模型;痫愈痊颗粒抗癫痫机制可能与其降低海马Glu含量,增加GABA含量有关.
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黄连对小鼠焦虑行为影响的研究
目的:探讨黄连对小鼠的抗焦虑作用及其机制.方法:将雄性小鼠随机分成5组(n=12),分别为模型对照组,阳性对照组,黄连水煎液高、中、低剂量组(1.8,0.9,0.45 g·kg-1),模型组ig生理盐水,阳性组ig地西泮2.5 mg·kg-1,连续ig给药5d.末次给药0.5h后,通过高架十字迷宫和明暗箱实验装置,观察黄连对小鼠焦虑的干预作用.用高效液相-荧光检测法测定脑内γ-氨基丁酸(GABA),谷氨酸(Glu),5-羟色胺的含量(5-HT).结果:黄连水煎液能明显增加小鼠在高架十字迷宫装置上的开臂进入次数和开臂滞留时间,有增加小鼠明暗箱穿箱次数的趋势.不同组别小鼠脑内GABA的含量:黄连组>阳性组>模型组.结论:黄连水煎液有一定的抗焦虑活性.黄连抗焦虑机制与提高小鼠脑内GABA含量有关.
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奔豚汤对慢性束缚应激小鼠焦虑的影响
目的:实验观察奔豚汤对慢性束缚应激诱导小鼠焦虑模型的影响,从中枢神经递质角度阐述奔豚汤抗焦虑的可能机制.方法:72只小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,奔豚汤低、中、高剂量组(3.51,10.53,31.59 g·kg-1)和阳性药地西泮组(4 mg·kg-1),各组均采用灌胃给药30 d.通过慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型;自主活动检测、旷场实验、明暗箱实验和高架十字迷宫实验从行为学分析奔豚汤对焦虑小鼠行为学的保护作用;高效液相结合荧光检测器检测海马谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马内γ-氨基丁酸受体(GABAa-Rα5),GABA转运体-1(GAT-1)和GAT-3蛋白表达.结果:与模型组比较,奔豚汤高剂量可以明显提高旷场中央区域的时间(P＜0.05),增加在高架十字迷宫开臂停留时间和进入次数(P＜0.05),提高海马内GABA水平(P＜0.05),降低Glu水平(P＜0.05),且能够明显降低GAT-1和GAT-3蛋白表达(P＜0.05).结论:奔豚汤能够改善慢性束缚应激诱导小鼠焦虑行为,可能是通过下调海马区GAT-1和GAT-3蛋白表达,进而调节中枢神经系统氨基酸类神经递质的含量.
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基于微透析技术研究舒郁胶囊对经前期综合征肝气郁证大鼠海马谷氨酸与γ-氨基丁酸含量的影响
目的:探讨舒郁胶囊对慢性应激诱导的经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠的治疗作用及谷氨酸(Glu)与γ-氨基丁酸(GABA)比值在其作用机制中的改变.方法:根据旷场实验及糖水偏好实验大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、舒郁胶囊组与柴胡皂苷组.药物治疗作用在给药4d后通过体质量、旷场实验及糖水偏好实验进行评价.微透析收集海马细胞外液,HPLC检测透析液中的Glu及GABA含量.结果:与空白组比较,模型组糖水偏好系数、旷场总得分及体质量显著下降(P＜0.01,P＜0.05),舒郁胶囊组与模型组相比该3指标均显著上升(P＜0.05).结论:舒郁胶囊可能通过抑制中枢神经系统海马中Glu与GABA比值下降治疗PMS肝气郁证.
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应用柱前在线衍生-高效液相色谱技术测定淡豆豉中γ-氨基丁酸含量
目的:测定淡豆豉中γ-氨基丁酸(GABA)及其前体物质谷氨酸(Glu)的含量.方法:通过单因素设计考察不同的提取方法、提取溶剂、提取时间、提取次数及料液比对淡豆豉中GABA、Glu提取率的影响,应用柱前在线衍生-高效液相色谱法测定其含量.结果:淡豆豉中GABA、Glu含量分别为5.48、17.98mg/g,佳提取工艺条件为超声波水提法、料液比1:12提取40min、提取2次,在0.0125～0.4000mg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为分别为99.69％、97.34％,RSD(n=6)分别为4.99％、4.51％.结论:本研究首次发现淡豆豉中存在较高含量的GABA、Glu,高于目前已报道的大多数中药材和传统食用发酵豆制品,并建立了适合淡豆豉中GABA、Glu的提取工艺和柱前在线衍生-高效液相色谱检测法.
关键词： 淡豆豉 γ-氨基丁酸 谷氨酸 提取工艺 柱前在线衍生-高效液相色谱法 -
电针对失眠大鼠脑内谷氨酸、γ-氨基丁酸含量及γ-氨基丁酸A型受体表达的影响
目的:通过观察失眠大鼠下丘脑内谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量及γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)阳性表达的变化,探讨电针治疗失眠的可能机制.方法:采用对氯苯丙氨酸(PCPA)制备失眠模型,观察各组大鼠的行为反应,Glu、GABA的含量及GABAA受体的阳性表达,进而探讨电针治疗失眠的部分机制.结果:治疗后,与模型组比较,电针组大鼠Glu、Glu/GABA比值明显降低(P＜0.05),GABA含量明显升高(P＜0.05),GABAA受体阳性细胞数增加;药物组大鼠脑内Glu、GABA含量及其比值无明显差异,GABAA受体阳性细胞数增多.结论:针刺与安定治疗失眠均有疗效,且针刺无副作用,优于安定,具有调节脑内Glu、GABA含量以及GABAA受体活性的多靶性综合作用.
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松针不同提取物镇静催眠作用及对脑神经递质的影响
目的:研究比较松针不同提取物的镇静、催眠及对脑神经递质的作用.方法:通过直接诱导小鼠睡眠,观察比较松针不同提取物对戊巴比妥钠阈上、阈下剂量致小鼠睡眠的协同作用;采用HPLC法测定给药后小鼠脑海马中γ-氨基丁酸和谷氨酸的含量.结果:松针正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物能明显延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间(P＜0.01),增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数(P＜0.01);有效提取物可增加海马中γ-氨基丁酸含量(P＜0.05).结论:松针正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均具有明显的镇静催眠作用.
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乳黄汤对A型肝性脑病大鼠神经递质 GABA、Glu的影响
肝性脑病[1](hepatic encephalopathy,HE)是由严重肝功能失调或障碍引起的以代谢紊乱为基础的中枢神经系统功能失调的综合征.其中,A型是急性肝功能衰竭相关的HE,不包括慢性肝病伴发的急性HE,其来势凶险,死亡率高.由于HE的临床表现主要是神经和精神症状,神经递质的异常必然是其发病的基础.近年来,众多学者发现氨对神经递质GABA、Glu的影响在HE发病中占有重要作用[2,3].乳黄汤是张赤志多年临证治疗HE的经验方,有很好的降氨作用.本研究用硫代乙酰胺(TAA)建立A型HE模型,探讨其对神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)的影响.
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六味地黄丸抗焦虑作用的实验研究
目的:观察六味地黄丸的抗焦虑作用.方法:采用改良天敌应激复制小鼠焦虑模型,与地西泮阳性对照组比较,观察高、中、低3个浓度的六味地黄丸对焦虑小鼠体质量、体温、饮水量、行为、血清γ-氨基丁酸(γ-amino-butylic,acid,GABA)水平的影响.结果:与空白组比较,模型组体质量减轻、体温升高,平均饮水量大,OE％、OT％、血清GABA浓度低;与模型组比较,其余各组体质量增加,阳性对照组体温降低,六味地黄丸高、中剂量组平均饮水量小且与阳性对照组的OE％、OT％、血清GABA浓度均较高;与六味低剂量组比较,高剂量组体温降低,平均饮水量小,OE％、OT％、血清GABA浓度高.结论:六味地黄丸滋肾阴而抗焦虑,具有量效依赖性,提高GABA水平是可能机制之一.
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经前烦躁症肝气郁证发病机制初探
通过对近几年经前烦躁症(PMDD)肝气郁证发病机制的初步探究发现,PMDD肝气郁证关键发病机制在于雌、孕激素分泌异常及其受体(ERα和ERβ)表达异常升高,单胺类神经递质5-HT、DA、E含量升高,NE含量降低,γ-氨基丁酸(GABA)及其受体水平调节紊乱.PMDD肝气郁证与心理和社会影响因素、微量元素缺陷以及其他方面因素关系密切.
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和胃安神方对失眠大鼠脑组织谷氨酸与γ-氨基丁酸含量的影响
目的 观察和胃安神方对失眠大鼠脑组织谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨其治疗失眠的作用机制.方法 将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、和胃安神方组及地西泮组,每组10只.除正常组外,其余各组大鼠均用对氯苯丙氨酸建立大鼠失眠模型.和胃安神方组和地西泮组分别给予和胃安神方和地西泮水溶液灌胃,其余2组给予生理盐水灌胃.6d后,断头处死并冰台上分离大鼠海马及下丘脑,低温离心后分离上清液,高效液相色谱法测定GLU、GABA含量.结果 与正常组比较,模型组大鼠海马及下丘脑GLU含量显著升高(P＜0.01),GABA含量显著下降(P＜0.01)；与模型组比较,和胃安神方组大鼠海马及下丘脑GLU含量显著下降(P＜0.01),GABA含量显著升高(P＜0.01).结论 和胃安神方可以调节失眠大鼠脑内的氨基酸类神经递质GLU及GABA含量,从而发挥治疗失眠的作用.
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双波长薄层扫描法测定复方红芪颗粒剂中γ-氨基丁酸的含量
目的测定复方红芪颗粒剂中γ-氨基丁酸的含量.方法采用硅胶G薄层板,95%乙醇-乙酸(2:1)为展开剂,0.2%茚三酮乙醇溶液显色;反射式双波长锯齿扫描法测定γ-氨基丁酸的含量,λs=392 nm,λR=460 nm.结果γ-氨基丁酸含量在0.005～0.05 mg范围内与峰面积值有良好线性关系(r=0.9968),加样平均回收率为98.75%,RSD=2.21%.结论该方法简单,重现性好.
