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体外受精周期中卵泡发育阻滞患者应用未成熟卵体外成熟培养的临床观察
目的 观察常规体外受精(IVF)中卵泡发育阻滞患者采用未成熟卵体外成熟(IVM)培养治疗结果. 方法 常规IVF治疗患者11例,在促排卵过程发生卵泡发育阻滞时,取卵行IVM培养成熟后,卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI)以获得受精卵并终实现胚胎移植.统计分析未成熟卵的成熟率、卵母细胞的受精率、胚胎的发育情况及临床结果. 结果 共获取卵母细胞128枚,其中成熟卵21枚,行ICSI后15枚正常受精,获10枚正常卵裂胚胎,全部移植3例,均未妊娠;107枚未成熟卵,经IVM、ICSI和体外培养后,成熟率、受精率、正常卵裂率及优质胚胎率分别为72.9%、75.6%、78% 及39.1%,胚胎移植后3例临床妊娠(新鲜周期2例,冻融周期1例). 结论 常规IVF控制性超促排卵(COH)过程中,发育阻滞的卵泡在体外适宜的培养条件下仍有成熟、受精、继续发育的能力,并终实现临床妊娠.IVM技术是改善IVF中发生卵泡发育阻滞患者结局的措施之一.
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体外受精-胚胎移植中不同方案治疗多囊卵巢综合征不孕患者的疗效比较
目的 比较未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)、拮抗剂方案、口服避孕药(OC)双重抑制方案和卵泡期长方案治疗多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者的结局. 方法 回顾性分析2011年1月至2012年10月在本中心接受辅助生殖技术治疗的PCOS不孕患者,共413例458个周期,分别采用IVM(IVM组,95个周期),拮抗剂方案(拮抗剂组,53个周期),OC双重抑制方案(OC组,278个周期)和卵泡期长方案(卵泡期长方案组,32个周期)治疗,比较各组的实验室结果和I临床结局. 结果 IVM组未用促性腺激素(Gn),拮抗剂组Gn用量为(1,297.17±398.88)U,明显低于OC组[(1,451.7±497.80)U],差异有统计学意义(P＜0.05).IVM组、拮抗剂组、OC组和卵泡期组的临床妊娠率分别为33.7％、54.5％、61.1％和55.2％,IVM组低于其他各组,差异均具统计学意义(P＜0.05),其他三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).IVM组未发生卵巢过度刺激综合征(OHSS)；拮抗剂组未发生重度OHSS;拮抗剂组、OC组及卵泡期组的OHSS发生率分别为13.2％、20.7％及18.8％,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 拮抗剂方案Gn用量显著低于OC双重抑制方案,OHSS发生率相对较低,而临床妊娠率显著高于IVM组,是PCOS不孕患者较为适宜的治疗方案.
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颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟培养中作用的研究
目的 探讨颗粒细胞复合体应用于未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)中的作用. 方法 收集2015年1月至2017年6月在我院生殖医学科接受ICSI-ET治疗的156例不育患者促排卵周期中废弃的未成熟卵母细胞为研究对象.共收集MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞305枚,以随机方式入组到对照组(C组,培养时不添加颗粒细胞复合体)和实验组(T组,培养时添加颗粒细胞复合体)进行培养,并按照MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞的不同分为4个亚组:M Ⅰ-C组、M Ⅰ-T组和GV-C组、GV-T组.观察各组的体外成熟及受精后胚胎发育情况等. 结果 MⅠ-T组体外培养48 h后的总成熟率显著高于M Ⅰ-C组(88.42％ vs.73.62％,P＜0.01),体外培养24 h的成熟率(80.00％ vs.65.93％)、正常受精率(69.74％vs.53.33％)、受精率(75.00％ vs.55.00％)及优质胚胎率(35.56％ vs.12.00％)均显著高于M Ⅰ-C组(P＜0.05),且M Ⅰ-T组的卵母细胞利用率亦显著高于M Ⅰ-C组(21.05％ vs.5.00％,P＜0.01);M Ⅰ-T组获得4个囊胚,多于M Ⅰ-C组(1个囊胚).GV-T组体外培养48 h的总成熟率显著高于GV-C组(65.00％ vs.35.59％,P＜0.01);GV-T组培养24 h的各项指标与GV-C组比较均无显著性差异(P＞0.05);GV-T和GV-C两组均未获得囊胚. 结论 含有颗粒细胞复合体的共培养体系可以提高促排卵周期中不同来源未成熟卵母细胞的体外成熟率,改善MⅠ期成熟卵母细胞的发育潜能,但是否能改善GV期卵母细胞的发育潜能尚需进一步研究.
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人类卵母细胞体外成熟培养的研究进展
在进行体外受精胚胎移植(IVF-ET)时,超促排卵可使妇女在同一周期产生多个成熟和不成熟的卵子.卵母细胞体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)为因遗传、免疫及分泌等因素而不孕的患者提供大量成熟卵母细胞,为治疗不孕提供了一条新途径.1935年,Pincus观察到兔卵母细胞可在体外成熟-排出第一极体,首次提出IVM观点.此后,许多学者对人卵母细胞体外成熟的调控及培养条件进行深入研究.1983年,IVM技术首次成功应用于临床,1991年,报道了第一例采用IVM技术分娩的"试管婴儿".本文主要对卵母细胞的体外成熟机制、体外培养条件及影响因素等问题进行综述.
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人卵体外成熟研究及临床应用进展
人卵体外成熟的概念及意义人卵体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术一般是指在不用或少量应用促性腺激素(gonadotropin,Gn)超促排卵的情况下,从患者卵巢中获取未成熟卵,或从手术离体的卵巢组织中直接分离未成熟卵泡,在体外经过适宜的条件进行体外成熟培养,使卵子成熟达到MⅡ期并具备受精能力.其意义主要在于:在不孕症治疗中免除患者超促排造成过度刺激的危险,尤其是多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者;由于不用或少用促性腺激素超排卵,节省医疗费用和就医时间;帮助解决卵巢组织或卵泡冷冻保存后卵细胞的成熟问题和未成熟卵冷冻保存后的应用问题,为卵巢去势患者保存生育力和建立"卵子库";开展有关人卵子成熟机制的基础性研究.
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未经促排卵获得的未成熟卵母细胞体外成熟培养后行卵母细胞质内单精子注射并胚胎移植后分娩一例报告
本研究对1例从未经促排卵刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者的卵巢中获取未成熟卵母细胞,于体外成熟培养(IVM)后行卵母细胞质内单精子注射(ICSI),并胚胎移植成功,获临床妊娠并分娩一足月健康婴儿,系国内首例.现结合文献复习,分析如下.
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体外成熟对卵母细胞纺锤体及染色体形态的影响
以往的研究发现,未成熟卵母细胞体外成熟培养及体外受精-胚胎移植后着床率低的原因之一,可能是体外成熟的卵母细胞纺锤体和染色体排列发生了异常,引起胚胎发育潜能降低[1].本研究通过观察未成熟卵母细胞体外成熟培养后,卵母细胞纺锤体与染色体的变化,探讨体外成熟培养对卵母细胞纺锤体与染色体的影响.
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人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力
目的 探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况.方法 取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6 d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况.结果 冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P＞0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P＜0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P＜0.05).各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达.从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期.结论 人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其.卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力.
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抑制素与卵母细胞体外成熟培养
人类卵母细胞的体外成熟培养是当前辅助生殖技术领域的一个研究热点,而抑制素-激活素-卵泡抑素(INH-ACT-FS)系统或其中的某一激素对生殖功能的调节作用也引起越来越多的关注.综述有关卵母细胞体外成熟培养的发展,卵母细胞成熟的调节机理,抑制素与卵母细胞的成熟,抑制素在卵母细胞体外成熟培养技术中的应用等问题.
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褪黑素在卵母细胞发育中的作用及体外成熟培养中的应用
褪黑素是一种广谱抗氧化剂,不仅可以通过与特异性受体结合产生一系列的生物学效应,而且可以直接穿过生物细胞膜进入细胞内,清除细胞内活性氧簇,降低氧化应激反应.另有研究证实,褪黑素可通过其抗氧化作用促进卵母细胞发育成熟,提高卵母细胞的发育潜力.近年来,褪黑素抗氧化作用逐渐成为研究的重点.然而在体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)的培养基中添加褪黑素促进卵母细胞成熟,提高卵母细胞的发育潜力的机制还不清楚.综述褪黑素在卵母细胞发育中的作用及在卵母细胞IVM中的应用.
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维生素和β－巯基乙醇对绵羊卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响
本研究探讨了维生素及β－巯基乙醇对绵羊卵母细胞体外成熟和孤雌培养的影响。加入β－巯基乙醇的采卵液，与不加β－巯基乙醇的采卵液对绵羊卵母细胞的体外成熟没有显著差异（P＞0．05），但是成熟率明显提高（64．70％和58．34％），孤雌培养的卵裂率却偏低（81．80％和87．57％）。若在培养液中加入维生素 A、D、E，则绵羊卵母细胞体外成熟率显著提高（P＜0．05），孤雌培养的卵裂率也明显提高（91．80％和83．27％），但没有显著差异（P＞0.05）。
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人类未成熟卵子冷冻的研究
目的 评估不同冷冻方法对人类未成熟卵子复苏和发育潜能的影响.方法 选取2009年6月～2013年12月在该院生殖中心就诊的297例卵胞浆内单精子注射(ICSI)患者捐赠的不成熟卵子438枚,其中30枚卵子冷冻前发育至MⅡ期,设为对照组;其余408枚随机分为慢速冷冻组及玻璃化冷冻组.复苏的卵子经体外成熟培养(IVM)后采用ICSI方式授精.比较各组解冻复苏率、体外培养成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 GⅤ期卵子解冻复苏率(89.4％)高于MⅠ期卵子(74.0％),而复苏后GⅤ期卵子体外培养成熟率(21.4％)低于MⅠ期卵子(55.4％);慢速冷冻组MⅠ期卵子解冻复苏率(67.9％)低于玻璃化冷冻组(79.1％);慢速冷冻组GⅤ期卵子复苏率及复苏卵子体外成熟率与玻璃化冷冻组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);慢速冷冻组解冻复苏的MⅠ期卵子体外成熟后,受精率(51.7％)、卵裂率(80.6％)、囊胚形成率E(20.0％)及囊胚形成率o(3.0％)与玻璃化冷冻组(64.8％、70.2％、15.0％、3.1％)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),均低于对照组(86.7％、96.2％、52.0％、43.3％).结论 未成熟卵子去颗粒细胞3h内如能发育至MⅡ期,受精后胚胎具有正常的发育潜能.慢速冷冻和玻璃化冷冻均适用于保存未成熟卵子,而前者胚胎贮存在封闭的麦管内,因此会更安全一些.在冷冻过程中,GⅤ期卵子对低温及冷冻保护剂的耐受能力高于MⅠ期卵子.
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OPS法玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的效果观察
目的:探讨OPS(open pulled straw,开放式拉细麦管)法玻璃化冷冻技术冻存未成熟卵母细胞的效果.方法:小鼠GV期卵母细胞用OPS法玻璃化冷冻复苏后行体外成熟培养(in-vitro maturation,IVM)或直接行IVM,所获成熟卵行体外受精(IVF)和胚胎的体外培养(IVC).以体内成熟卵行IVF/IVC作为in-vivo对照组.结果:GV期卵冻融后65.11%存活,IVM后成熟率为52.86%,其成熟率显著低于IVM对照组.冻融卵成熟后受精、卵裂率(33.78%、76.00%)低于IVM对照组和in-vivo对照组,培养后未见囊胚形成.结论:OPS法玻璃化冷冻技术可有效冻存GV期卵母细胞,复苏后可发育成熟,但卵的受精和继续发育能力欠佳.
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人类未成熟卵母细胞的体外成熟培养研究进展
随着人类生育年龄的推迟及二胎政策的全面放开，不孕症、卵巢早衰、卵巢储备功能不足等女性生殖疾病罹患率也呈逐年上升趋势。人类未成熟卵母细胞的体外成熟（in vitro maturation，IVM）培养一直是国内外生殖医学领域研究者关注的热点。体外培养卵泡生长状态受获取卵泡途径、培养环境、培养方案等多种因素影响。文章就人类未成熟卵母细胞 IVM 培养的临床适应证、培养方案及影响因素作一综述，为相关研究人员和临床工作者提供参考。
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人未成熟卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究
未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)技术的研究已成为世界生殖医学研究的热点之一,目前,IVM技术仍面临着卵子成熟率不高,成熟后体外受精率低及妊娠率较低等困难,所以IVM过程中各种影响因素的调控对卵母细胞的成熟及体外受精(IVF)后胚胎的发育甚为重要.
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一种简易的促排卵周期挽救性卵子体外成熟培养技术
[目的]探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术.[方法]在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1 mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养.113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A、B、C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液+分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液+分散贴壁的卵丘细胞+促卵泡生成激素+表皮生长因子.观察其成熟率、受精率及可用胚胎获得率等.[结果]24 h成熟率:组间比较有显著性差异(A:45.2%,B:61.7%,C:78.2%.P＜0.05);25～48 h无显著意义.成熟卵的正常受精率在59%～67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)、第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P＜0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%).[结论]来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵.
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不同浓度氧气对人未成熟卵子体外成熟和早期胚胎发育的影响
目的 收集辅助生殖治疗中废弃的人类未成熟卵子,研究其在不同浓度氧气培养条件下的卵子成熟率和受精及其后续早期胚胎发育的影响.方法 将收集的未成熟卵子随机分组为低浓度和高浓度氧气条件进行体外成熟培养,将成熟卵子进行卵胞质内单精子显微注射并行体外培养,研究卵子的体外成熟率、受精率以及胚胎卵裂率和优质胚胎率.结果 对于GV期来源卵子,低氧培养条件下的卵子体外成熟率和受精率要显著高于高氧组(P<0.05),两组间的胚胎卵裂率和优质胚胎率比较差异无统计学意义(P>0.05);MI期来源卵子在低氧培养条件下的卵子体外成熟率要显著高于高氧组(P<0.05),两组间的受精率、胚胎卵裂率和优质胚胎率差异无统计学意义(P>0.05).结论 低浓度氧气对于人类未成熟卵子的体外成熟有促进作用,能提高GV期卵子的体外成熟后的受精率;对于体外成熟培养卵子来源的胚胎卵裂和优质胚胎率没有影响.
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控制性超排卵和体外成熟培养对卵子线粒体膜电位及细胞骨架的影响
目的：探讨不同促卵子成熟方案对卵子线粒体功能的影响和可能机制，为改善当前辅助生殖周期成功率提供新思路。方法：以小鼠为实验动物模型，模拟人类辅助生殖技术（assisted reproductive technol-ogy，ART）促卵子成熟的控制性超排卵（COH）和体外成熟培养（IVM）方案，并以自然周期（natural cycle，NC）为对照，采用免疫荧光及化学发光法，检测分析三组卵子线粒体膜电位及卵子细胞骨架。结果：COH组线粒体膜电位显著低于 NC 组及 IVM 组（P ＜0．05）； IVM 组线粒体膜电位较 NC 组低，但差异无显著性（P ＞0．05）。细胞骨架分析显示COH 组与IVM组的纺锤体正常率、染色体正常率、纺锤体及染色体均正常率与NC组比较均显著降低（PCOH＜0．01，PIVM＜0．05）。结论：COH过程及IVM均会对卵子线粒体功能产生影响。
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人未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征不孕妇女中的应用
目的:探讨未成熟卵母细胞体外成熟培养-胚胎移植技术(IVM-ET)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者不孕症治疗中的临床应用前景.方法:将39例PCOS不孕妇女分未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)组和常规体外受精/卵胞浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)组.IVM组:11例PCOS患者,用小剂量促性腺激素(Gn)刺激后取未成熟卵母细胞体外培养28 h,行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),继续培养3 d后行胚胎移植.IVF/ICSI组:28例PCOS患者,用常规IVF/ICSI技术助孕.结果:IVM组获卵数123枚,体外培养成熟率为82.93%(102/123),受精率为98.04%(100/102),卵裂率为92.00%(92/100),优胚率为39.13%(36/92),移植10个新鲜胚胎周期,临床妊娠2例,临床妊娠率为2/10,累计妊娠率4/11.与同期28例施行IVF/ICSI的PCOS患者进行比较,其Gn天数、用量、HCG日E2水平、获卵数、优胚率显著低于IVF/ICSI组,差异有统计学意义(P<0.05);卵裂率无明显差异(P>0.05);种植率、临床妊娠率均低于IVF/ICSI组,但差异无统计学意义(P>0.05);IVM组无中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)和自然流产的发生,而IVF/ICSI组中重度OHSS发生率为10.71%(3/28)、自然流产率为3/10,但差异亦无统计学意义(P>0.05).结论:IVM技术为PCOS患者的治疗开辟了一条新的途径,同时在减少外源性Gn用量,有效控制卵泡数量和E2水平方面具有明显优势.但对其能否降低OHSS风险以及成功率较低等问题,有待进一步研究.
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超排卵周期未成熟卵体外培养的研究
目的:研究来源于超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后进行体外成熟培养(IVM)的成熟、受精及胚胎发育能力,探讨IVM技术的临床应用.方法:选取46名体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)患者为研究对象,比较MI和GV期不成熟卵的体外成熟情况,并比较体内成熟卵和体外成熟卵进行ICSI后的正常受精、异常受精、卵裂和优质胚胎形成情况.结果:体外培养中69.8%的MI期卵和77.2%的GV期卵均在24小时内达到成熟,其24小时和48小时的成熟率、总成熟率均无明显差异(P>0.05).体外成熟卵与体内成熟卵相比较,正常受精率、异常受精率和卵裂率均无明显差异(P>0.05),优质胚胎形成率较低,差异有显著性(P<0.05).结论:常规超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后能够继续体外发育成熟,具有与体内成熟卵相似的ICSI受精、卵裂能力.虽然优质胚胎的形成率低于体内成熟卵,但增加了可移植胚胎和冷冻胚胎数量,提高了助孕成功率.
