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异种器官移植中PERV病原安全性的研究进展
猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)是指以前病毒DNA形式整合进宿主细胞基因组中,并随细胞染色体复制而复制的反转录病毒.由于PERV在体外可以感染人的多种细胞,这引起了人们对猪-人异种移植病原安全性的广泛关注.本文从PERV的生物学特性、基因组的结构与功能及其病原安全性等几个方面综述了近年来的研究进展.
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冻融人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究
目的 探求冻融人胎儿卵巢组织异种移植后的生长发育能力. 方法 胎儿卵巢组织分为新鲜胎儿卵巢组织(新鲜组),慢冻-快融胎儿卵巢组织(冻融组),解冻的胎儿卵巢组织异种移植到8只裸鼠肾被膜下(移植组)三组.2个月后开始隔天注射孕马血清促性腺激素(PMSG),持续5个月.注射人绒毛膜促性腺激素(Hcg)36 h后裸鼠处死取得移植物.胎儿卵巢组织石蜡包埋后连续切片,进行组织学评价和增殖细胞核抗原(PCNA)的检测. 结果 冻融组和新鲜组中绝大多数是原始卵泡.与新鲜组相比,冻融组中正常及总的原始卵泡数虽有下降,异常原始卵泡数虽有升高,但均无显著性差异.移植组的原始卵泡数明显少于新鲜组和冻融组(7.2±1.64,20.4±5.68,17.2±4.27,P＜0.05),但可见到数个形态正常的初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡.三组的原始卵泡均未见有PCNA阳性表达,PCNA阳性表达见于移植组初级卵泡的颗粒细胞和卵母细胞、次级卵泡和窦卵泡的颗粒细胞. 结论 冻融人胎儿卵巢组织异种移植后能存活,卵泡能正常发育到窦卵泡.
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人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究
目的:探讨人胎儿卵巢组织异种移植后的卵泡生长发育情况.方法:18只裸鼠行去势手术后分为2组:A组为对照组,B组为胎儿卵巢组织移植组,于移植1个月后开始隔天注射5U的孕马血清促性腺激素(PMSG)持续2个月,获取移植物36h前注射hCG.获取胎儿卵巢组织行光学显微镜观察并测血清雌二醇(E2)的浓度.结果:B组血清E2水平明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.01).移植后存活的卵巢组织中有40%～50%的原始卵泡丢失,均以原始卵泡为主,可见少量初级卵泡和次级卵泡,未见窦卵泡的生长.移植后人胎儿卵巢组织中初级卵泡和次级卵泡的比例较移植前显著增加(P＜0.01).结论:人胎儿卵巢组织移植于裸鼠的背部皮下能存活,卵泡处于良好的生长发育状态.
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理冲汤对异种移植子宫肌瘤小鼠免疫因子MCP-1、ICAM-1表达的影响
目的：研究理冲汤对异种移植子宫肌瘤小鼠免疫相关因子单核细胞趋化因子-1（MCP-1）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响，为临床治疗提供科学依据。方法将50只6~9周龄CB-17Scid小鼠随机（随机数字表）分成5组，即正常组、模型组、理冲汤高剂量组（30 g/kg）、理冲汤低剂量组（10 g/kg）、化药对照组（米非司酮2.9 mg/kg），通过异种移植的方法制备小鼠子宫平滑肌瘤动物模型，药物干预4周后，HE染色光镜观察小鼠子宫平滑肌的病理变化，采取免疫组化检测小鼠子宫平滑肌MCP-1、ICAM-1的表达水平。结果 HE染色光镜显示，模型组与正常组相比，呈活跃增生现象，与人体肌瘤样增生一致，提示造模成功。免疫组化结果显示，理冲汤高低剂量组可显著降低小鼠子宫肌瘤组织中MCP-1、ICAM-1的表达，与模型组相比差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论理冲汤能显著降低子宫肌瘤平滑肌中MCP-1、ICAM-1的表达，进而对子宫肌瘤起到抑制作用。
关键词： 理冲汤 异种移植 子宫肌瘤 单核细胞趋化因子-1 细胞间黏附分子-1 -
中药甘黄注射液在异种排斥反应中作用初探
目的:研究中药甘黄注射液在异种排斥反应中的作用.方法:通过RT-PCR技术检测甘黄注射液对猪血管内皮细胞(porcine endothelial cells, PECs)激活相关基因表达的影响及采用51Cr释放法检测其对NK细胞杀伤与粘附作用的影响.结果:未灭活人血清及人NK-92细胞可以上调猪血管内皮细胞E-selectin和IL-1α基因的mRNA表达,具有激活PECs作用;甘黄注射液可抑制人血清处理和NK细胞处理的PECs激活相关基因的表达.细胞毒实验结果认为,该中药也可以抑制NK细胞对PECs细胞毒作用,而且具有剂量依赖关系,这与该药抑制NK细胞对PECs的粘附作用是一致的.结论:甘黄注射液不仅可抑制超急性排斥反应中血清对内皮细胞激活作用,而且可抑制延迟性排斥反应中NK细胞的作用.
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HLA A表达沉默和酪氨酸羟化酶过表达的人成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型
目的 观察人白细胞抗原A(HLA A)敲减和酪氨酸羟化酶(TH)过表达的人胚肺成纤维细胞(HELFs)于脑内移植后帕金森病(PD)大鼠的旋转行为和脑内炎性反应.方法 用TH反转录病毒和携带HLA A干扰序列的慢病毒(表达绿色荧光蛋白GFP)感染细胞后移植于PD大鼠模型纹状体.移植后检测大鼠旋转行为,免疫组化染色观察TH、OX42、OX6和GFAP表达,GFP观察移植物存活.同时移植HELFs以及TH转导的HELFs和大鼠肺成纤维细胞作对照.结果 移植后GFP荧光细胞数量逐渐减少,HLA A敲减组细胞的减少相对较轻,但对大鼠旋转行为的改善不明显;OX42阳性小胶质细胞改变不明显,但OX6表达逐渐增加,而GFAP阳性细胞激活逐渐下降但仍强于移植对侧.结论 HLA A表达沉默细胞移植对大鼠运动症状改善不明显,细胞移植能激活小胶质细胞和星形胶质细胞.
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生物医学前沿中的伦理问题
本文在讨论科学技术与伦理学关系、生命伦理学基本原则以及道德与伦理学之间的异同后,探讨了人的克隆和干细胞研究、基因治疗、生殖遗传学、异种移植、生物医学和临床研究中的伦理问题.
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大鼠胰岛分离纯化及其小鼠肾被膜下移植排斥反应的研究
目的:探讨胰岛分离技术和异种胰岛移植排斥反应机制.方法:在控制不同条件的情况下,使用胰管内胶原酶灌注和不连续密度梯度纯化法获取大鼠胰岛,行小鼠肾被膜下移植,分别于术后当日和第3,5,7天取出移植物,分析排斥反应情况.结果:纯化后平均获取500±67个胰岛/胰腺,纯度约在70%～80%.统计学分析高糖和茶碱对胰岛刺激引起的胰岛素分泌,提示纯化后的胰岛功能良好.在未使用免疫抑制剂的情况下,植入的胰岛多在1周内完全排斥掉.术后5天,胰岛的形态已被破坏,淋巴细胞大量增多;术后第7天见不到完整的胰岛轮廓,仅见大量的淋巴细胞浸润.结论:严格控制各种实验条件,完善分离纯化技术,是优化胰岛获取的关键.大鼠胰岛小鼠肾被膜下移植中树突状巨噬细胞参与了排斥反应过程.
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异种移植细胞型排斥反应研究进展
同种移植的成功导致了器官需求增加,人供体器官的严重短缺使器官移植作为终末期器官病变的一种有效治疗措施受到限制.异种移植包括移植细胞、组织和器官,在不同的物种间已作为一种潜在的方法运用于临床,以克服人体材料的极端短缺.
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早期人胎儿睾丸组织异种异体生长发育的研究
目的 采用免疫缺陷小鼠为受体的睾丸组织移植技术,探索小于3月龄的人类胎儿未成熟睾丸组织在异种异位生长发育的可行性,为睾丸移植技术用于人类生精机制研究提供更为易行的供体来源. 方法 将9例10～13周流产胎儿的睾丸组织分别移植到6只雄性去势免疫缺陷小鼠背部皮下,根据移植物的生长状态以及受体的健康状况于不同时间取出移植物.通过对睾丸组织移植前后的组织学观察,对人类未成熟睾丸组织在异种异位的生长发育情况进行分析. 结果 3个月左右的胎儿睾丸约为5～7mg,移植后取出的大移植物重量为84.1mg.9例未成熟睾丸组织移植后观察到有6例在受体中继续生长发育,其中的生精小管直径由移植时的(44.26±3.14)μm发育成为(77.69±7.47)μm.小管中无规则分布的原始生殖细胞和原始支持细胞开始向基底膜部位迁移,其中部分原始生殖细胞已定位于基底膜处,并具有精原细胞的特征;支持细胞也由幼稚状态发育为具有丰富胞质的成熟型细胞,有序排列在精原细胞周围,形成壁龛样结构. 结论 将较易获得的早期流产胎儿睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后,睾丸组织可继续生长发育,因此可作为人类睾丸组织生长发育研究的供体组织
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小鼠胚胎干细胞α-GT基因打靶的研究
目的在小鼠胚胎干细胞上进行α-1,3半乳糖基转移酶(α-GT)基因打靶.方法利用长距离PCR和套式PCR从C57小鼠基因组DNA中克隆出α-GT基因组DNA片段,构建了针对α-GT基因外显子4的置换型基因打靶载体ploxp-GT,同源长臂(5.0kb),同源短臂(3.97kb),同源序列全长共约9.0kb.将打靶载体酶切线性化并以电穿孔方法转移入小鼠ME ES细胞.结果通过G418和Gancyclovir正负选择出171株ES细胞药物抗性克隆,Southern blot鉴定获得11个α-Gal(+/-)小鼠ES细胞克隆,重组频率为6.4%.结论上述方法能够完成α-GT基因敲除,为进一步完成α-GT基因敲除小鼠奠定了基础.
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冻融人胎儿卵巢组织异种移植后早期血管生成的实验观察
目的 石观察冻融人胎儿卵巢组织异种移植后1个月内移植物形态学改变,动态了解微血管情况. 方法 将难免流产胎儿的卵巢组织经过冻融,异种移植至18只裸鼠肾被膜下,分别于移植后2d、7d和28d回收移植物.将新鲜、冻融以及移植后不同时间的卵巢组织进行光镜、电镜观察,RT-PCR检测血管相关基因的表达. 结果 移植后2d卵巢组织的微血管密度显著上升,部分血管处于扩张状态;移植后7d微血管密度达到相对高峰且扩张的血管腔消失,微小血管恢复正常形态;移植后28d微血管密度出现轻微下降.电镜观察发现,移植卵巢内多数原始卵泡结构完整;移植后2d间质水肿,血管内红细胞淤积;移植后7d及28d的间质水肿逐渐消退,大量微小血管生长.移植卵巢的人血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素2(Ang-2)mKNA表达均呈双向改变,即在移植后2d上升到高值.此后表达下降. 结论 冻融人胎儿卵巢组织移植后的血管重建在移植后1个月内基本完成,移植后l周是采取措施提高冻融人胎儿卵巢移植效果的关键时期.
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人与猪胆总管几何形态和顺应性的比较
目的 探讨人与猪胆总管几何形态及顺应性的关系,为猪到人异种肝移植提供理论依据. 方法 取5例成年人尸体和50例3～12月龄湖北白猪的胆总管,在软组织生物力学实验机上测定胆总管的压力-直径关系.计算出顺应性.横断取材,冷冻切片,HE染色,用计算机图像分析系统测量其管径和管壁厚度. 结果 3～6月龄猪胆总管的管壁比成人的薄,其直径比成人的小(P<0.01),7～10月龄猪胆总管的壁厚和直径与成人的相近(P>0.05).3～6月龄及11、12月龄猪胆总管的顺应性明显小于成人(P<0.01),7～10月龄猪胆总管的顺应性与成人的相近(P>0.05). 结论 7～10月龄猪胆总管的几何形态和顺应性与成人的相近,从生物力学方面考虑,7～10月龄的猪肝作为人异种移植肝供源是可能的.
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异种移植中Galα(1,3)Gal抗原的研究近况
同种异体组织和器官移植物供体来源有限,使得异种移植再度成为移植领域的研究热点.异种移植的主要障碍是人体内存在的天然抗体与移植物表面含有α1,3半乳糖残基[Galα(1,3)Gal,αGal]的抗原结合,激活补体系统和炎症反应,导致超急性移植排斥反应(HAR)的发生,使移植物失活.除人类和旧世纪猴外,其它所有哺乳动物的体内都含有αGal抗原,该抗原是由一组具有Galα(1,3)Gal双糖末端的糖蛋白或糖脂组成的,它的形成依赖于α1,3半乳糖基转移酶(αGT)的催化.目前,针对αGal抗原克服超急性移植排斥反应的方法主要有如下几种:(1)酶处理去除内皮细胞表面的αGal抗原;(2)物理化学方法去除人体血浆中存在的特异性天然抗体;(3)基因工程方法改造表达催化αGal抗原形成的相关酶基因,从而影响该抗原的表达.
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骨髓增生异常综合征小鼠模型研究进展
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组造血干、祖细胞发生突变造成以外周血细胞减少、骨髓病态造血为特征的恶性血液病.近年来,为了建立确切的MDS小鼠模型来研究该病,全世界的研究者们做了大量的努力.建立MDS小鼠模型大致可以归纳为3种途径:转致病基因、异种移植人MDS细胞、基因工程改造小鼠的造血细胞.本综述描述几种MDS小鼠模型,以阐述恶性克隆造成的致病机制和骨髓微环境的改变,同时,阐述异种移植人MDS细胞小鼠模型的进展和尚待解决的问题.
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异种移植构建小鼠人急性白血病模型的研究进展
构建小鼠人急性白血病模型的方法包括人白血病细胞异种移植、逆转录病毒转导/移植、小鼠转基因、化学诱变、插入诱变等.通过异种移植构建小鼠人急性白血病模型是当前研究急性白血病的重要手段之一.本文就免疫缺陷鼠、预处理及细胞因子、细胞接种、模型评估及模型应用方面,介绍异种移植构建小鼠人急性白血病模型的新进展.
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在人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率条件的优化
本研究旨在探讨在建立人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率的条件.本研究从三个方面分别进行条件优化:①受体免疫缺陷小鼠品系选择,分别对NOD/SCID和NOD/SCID/IL2rγnul两种小鼠品系进行移植,考察移植后不同品系小鼠嵌合率和人红细胞发育情况;②考察照射剂量和照射方法对小鼠生存率的影响;③优化人造血干细胞培养条件及感染方法,检测重建率及红细胞产生率.结果表明,移植后4周检测小鼠骨髓细胞显示,NOD/SCID/IL2rγnu1l小鼠人CD45比例可达(51.4±13.9)％,并能检测到人红细胞(5.98±3.46)％;利用X射线分2次对小鼠进行总剂量2.5 Gy的照射,照射后小鼠生存率可以达到100％;利用新鲜脐带血分离的CD34+细胞,不经过冻融和分选过程,在分离后72 h内完成转染和移植过程,移植后嵌合率可达(51.4±13.9)％,并且人红细胞产生的效率为(5.98±3.46)％.结论:利用X射线分两次照射NOD/SCID/IL2rγnull小鼠后通过尾静脉注射2×105个细胞,新鲜分离的人脐带血CD34+细胞在移植前缩短体外培养时间(≤72 h),有利于提高免疫缺陷小鼠体内人红细胞产生效率.
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建立人/猪造血嵌合体模型的初步探讨
本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞(HSC)的移植受者,建立人/猪造血嵌合体模型,初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性.在无菌隔离器中,通过肌肉或脐静脉(剖子宫)给胎猪移植人脐血细胞,或在断脐前通过脐静脉给新生猪移植人脐血细胞,应用流式细胞术检测移植组猪外周血中人CD45+细胞.结果表明:移植后,受试猪生长发育与对照猪一致;移植后60天时,用流式细胞术在猪的外周血中检测到一定比例的人源细胞.结论:胎猪或新生猪能耐受一定量的人源抗原的植入,建立人/猪造血嵌合体模型是可行的.
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骨髓腔内输注人造血干/祖细胞促进NOD-SCID小鼠体内造血功能的恢复
本研究比较经骨髓腔内输注(intra-bone marrow infusion,iBMI)及静脉输注(intravenous infusion,iⅥ)人脐血(cord blood,CB)造血干/祖细胞(HS/PC)对NOD-SCID受鼠体内造血重建的影响.将纯化的CB CD34+细胞移植到受亚致死剂量照射的NOD-SCID受鼠体内.受鼠随机分为3组:①iBMI组:骨髓腔内输注CD34+细胞5× 105/只;②iⅥ组:尾静脉输注CD34+细胞5×103/只;③阴性对照组:输注PBS缓冲液.于异种移植后第3、5及第8周通过流式细胞术、聚合酶链式反应、免疫组织化学及造血祖细胞集落分析的方法比较人造血系统各系细胞植入率,通过二次移植实验比较NOD-SCID受鼠体内人HS/PC长期造血重建能力.结果表明:移植后第8周,iB-MI组受鼠骨髓、外周血及脾脏中人CD455细胞比例均显著高于iⅥ组(P<0.05);iBMI组及iⅥ组移植的HS/PC均具有多向分化能力;移植后第8周,iBMI组受鼠骨髓中CD45+CD19+细胞、CD45+CD33+细胞、CD45+CD56+细胞及CD45+CD34+细胞比例均显著高于iⅥ组(P<0.05),CD45+CD14+细胞及CD45+CD41a+细胞比例亦高于iⅥ组(P>0.05).iⅥ组及iBMI组长期存活受鼠的肝脏、脾脏、肺脏、外周血、骨髓细胞中均可检测到人17号染色体α-卫星特异性片段.应用免疫组织化学法在移植后第8周的iBMI组受鼠的脾脏、肝脏和肺脏中均可检出人CD45抗原的表达.iBMI组受鼠的骨髓细胞各系集落总数于移植后第8周显著高于iⅥ组(P<0.05).二次移植后第6周,iⅥ组及iBMI组受鼠的各组织脏器中均可检出人17号染色体α-卫星特异性片段的表达.结论:与iⅥ相比,经iBMI移植人CB CD34+细胞至NOD-SCID受鼠可以促进HS/PC的造血重建及多向分化,提高植入率.
关键词： 造血干/祖细胞 异种移植 骨髓腔内输注 造血重建 NOO-SCID小鼠 -
利用新生大鼠建立人/大鼠造血嵌合体模型
本实验旨在通过输注脐血Lin-细胞,利用新生大鼠建立人/大鼠造血嵌合体模型.将脐血来源的Lin-细胞移植到正常一级新生SD大鼠的肝脏内,移植后的新生大鼠与同窝未接种的正常新生大鼠共同饲养和观察,于输注Lin细胞后2,4和8周时取嵌合鼠的外周血、脾脏等组织,检测人源细胞的比例及人特异性β2-微球蛋白基因片段.结果发现,通过流式细胞术检测到嵌合鼠外周血中存在有一定比例的人源细胞,PCR证明了嵌合鼠脾脏基因组DNA中存在人特异性β2-微球蛋白基因片段.结论:利用新生大鼠可以建立人造血嵌合体,它为今后利用此实验模型进行人造血干细胞体内生物学特性的检测及其它实验奠定了基础,具有潜在应用价值.
