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法舒地尔对冠状动脉搭桥术患者心肌保护的临床研究
心脏外科体外循环心内直视手术是治疗心血管疾病的重要方法之一。减少心肌缺血、缺氧所造成的心肌损害是体外循环心内直视手术成功与否的关键。近年来研究发现法舒地尔对心肌肌动蛋白细胞骨架和基本细胞功能起重要作用［1］，可减少心肌梗死面积，减少缺血心肌细胞凋亡［2］，本文就法舒地尔对冠状动脉搭桥术患者心肌保护作用进行临床研究。
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辐射相关新蛋白hHBRK1相互作用蛋白质的鉴定
基因转录的改变,是细胞对外环境因子刺激或损伤反应的一个重要环节.对辐射诱导基因的功能研究,无疑是细胞辐射反应调控机制研究中的一个重要内容.
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硒对体外心肌细胞过氧化损伤保护和骨架蛋白actin表达的影响
目的 探讨硒对H2O2损伤心肌细胞的保护作用以及α-actin和β-actin表达的影响.方法 培养乳鼠心肌细胞随机分为对照组,H2O2组,Se 0.05、0.5、1.0和5.0 μmol/L组,采用透射电镜观察实验心肌细胞的超微结构,比色法检测心肌细胞培养介质中LDH和MDA含量,Western Blot检测α-actin和[β-actin蛋白的表达.结果 Se 0.5 μmol/L可减轻心肌细胞超微结构损伤；各加硒组LDH和MDA水平较H2O2组显著降低(P＜0.05),较对照组显著升高(P＜0.05),其中Se 0.5 μmol/L组LDH和MDA含量在各加硒组中低；Se 0.5μmol/L组α-actin表达水平较H2O2组升高并高于正常对照组；Se 0.5μmol/L组β-actin表达水平较损伤组升高,低于正常对照组.结论 0.5 μmol/L硒对H2O2损伤心肌细胞具有较好的保护作用,可维持和保护α-actin和β-actin的表达,参与细胞骨架蛋白重构.
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复方太子参颗粒对失神经支配骨骼肌萎缩蛋白表达影响的研究
目的 探讨复方太子参颗粒延缓失神经支配骨骼肌萎缩的机制.方法 用切断SD大鼠右侧胫神经的方法建立失神经支配骨骼肌萎缩的动物模型.将造模后的SD大鼠54只随机分为实验组和对照组.实验组每日每只大鼠以含复方太子参颗粒1g的生理盐水溶液3ml灌胃;对照组每日每只大鼠以生理盐水3ml灌胃.于术后2、4、6周取大鼠腓肠肌进行各项指标的检测.用万分之一分析天平称量肌湿重;用免疫组织化学染色检测萎缩骨骼肌组织中肌动蛋白、肌球蛋白的表达.结果 失神经支配后大鼠腓肠肌明显萎缩;实验组和对照组肌动蛋白、肌球蛋白的表达均减少,实验组下降显著少于对照组.结论 复方太子参颗粒通过抑制失神经支配后骨骼肌蛋白质的分解延缓了失神经支配骨骼肌的萎缩.
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刺五加Actin基因cDNA全长序列的克隆与生物信息学分析
目的：克隆刺五加Actin基因的全长cDNA序列，并对其进行生物信息学分析。方法：以刺五加的叶片为材料，提取总RNA，逆转录为cDNA，根据初步克隆到的刺五加Actin基因保守序列设计引物，利用套式PCR进行3'和5'RACE扩增，得到Actin基因的3'和5'端cDNA序列片段，拼接获得cDNA全长。将该序列进行BLAST比对、相似度分析，并对刺五加Actin1蛋白的二级结构和三级结构进行预测。结果：刺五加的Actin基因全长1507 bp，命名为ESA ctin1，注册号KC469585。该基因开放阅读框（ORF）长1134 bp，编码377个氨基酸，5'端非编码区长140 bp，3'端非编码区长233 bp。ESActin1与GenBank 中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在75%以上，蛋白质序列的相似性在94%以上。结论：首次报道了刺五加Actin基因的全长cDNA序列，为刺五加的分子生物学研究奠定基础。
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中药骨康方对体外培养大鼠成骨细胞骨架保护作用的初步实验研究
目的:探讨在离心力作用下中药骨康方对大鼠成骨细胞微丝结构的保护与修复作用.方法:选用成年新西兰白兔,分2组分别灌服中药骨康方及戊酸雌二醇,制备中药骨康方和雌激素的含药血清.原代培养大鼠成骨细胞,制备细胞爬片,分为中药骨康方血清培养组(中药组),雌激素血清培养组(西药组)、不含药血清组(对照组)以及空白组.中药组、西药组及对照组3组细胞分别在240 g、200 g离心力下离心4 min,空白组不离心,离心后培养24 h以多聚甲醛固定各组细胞,鬼笔环肽荧光染色后,于共聚焦显微镜下观察.每张细胞爬片随机取5个视野,每个视野5～7个细胞,计算平均荧光值,并作统计学计算,P ＜0.05为有统计学意义.结果:不同离心力作用下,中药组、西药组细胞与对照组细胞比较荧光强度明显较强,且差异有统计学意义(P＜0.001).中药组与西药组中,240 g离心力与200 g离心力相比,前者细胞微丝荧光强度显著减弱(P＜0.001);中药组与西药组相比,200 g时,中药组细胞微丝荧光强度强于西药组细胞,有统计学意义(P＜0.001);240 g时,西药组细胞微丝荧光强度强于中药组细胞,且有统计学意义(P＜0.001).结论:离心力作用下,中药骨康方含药血清对大鼠成骨细胞的微丝结构由保护和修复作用,但随着离心力的加大,该作用有限.
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α-SMA在先天性肌性斜颈中的表达及意义
目的:研究α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在先天性肌性斜颈(congenital muscular torticollis,CMT)中的表达及意义.方法:利用免疫组化辅以计算机图象定量分析技术,对21例先天性肌性斜颈及10例正常肌肉腱性组织标本α-SMA的表达进行观察和检测.结果:α-SMA在对照组中未见明显表达,3例先天性肌性斜颈标本α-SMA染色阴性,18例病变标本中α-SMA染色阳性,病变组与对照组两者差异有非常显著性意义(P＜0.001);α-SMA在肌性斜颈中表达强度与年龄有关,6岁以上组表达明显减弱,与6岁以下组(包括6岁)比较差异有显著性意义(P＜0.001).结论:①肌纤维母细胞是先天性肌性斜颈发病关键病理因素.②先天性肌性斜颈中肌纤维母细胞的表达在6岁以上组明显减弱,这给临床治疗提供新思路.
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丹皮酚对高血压病血瘀证患者血清干预的人脐静脉内皮细胞膜联蛋白Ⅴ与肌动蛋白结合的影响
目的:研究丹皮酚对高血压病血瘀证患者血清损伤后的血管内皮细胞(VEC)的膜联蛋白Ⅴ与肌动蛋白结合的表达的影响,进一步探讨丹皮酚保护VEC的作用机制.方法:运用CCK-8法检测丹皮酚不同浓度25、50、100、250、500、1 000mg/L对人脐静脉内皮细胞活性的影响;选用250mg/L浓度的丹皮酚预干预细胞模型,运用免疫印记杂交技术检测丹皮酚组与对照组膜联蛋白Ⅴ与肌动蛋白结合的表达.结果:丹皮酚不同浓度对细胞活性的影响:不同浓度组之间比较,差异无统计学意义.250mg/L丹皮酚干预后对与肌动蛋白结合的膜联蛋白Ⅴ表达的影响:模型对照组、丹皮酚组与肌动蛋白结合的膜联蛋白Ⅴ的表达逐渐降低,其中每组与肌动蛋白结合的膜联蛋白Ⅴ的表达呈现血瘀证组、非血瘀证组、正常组逐渐降低的趋势.血瘀证组,丹皮酚组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:丹皮酚具有保护人脐静脉内皮细胞完整性的作用,其机制可能是通过降低肌动蛋白G/F含量比值的方式,减少膜联蛋白Ⅴ与肌动蛋白的结合,促进肌动蛋白的重装.
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冠心病血瘀证与肌动蛋白相关基因异常表达的相关性
目的 探讨冠心病血瘀证与肌动蛋白相关基因异常表达的相关性.方法 依据病证结合的研究思路,将5例患者样本混合与5名正常人样本混合并杂交制备芯片(即病证结合芯片).根据治疗前后血液黏度测试结果设计瓜蒌薤白半夏汤治疗前后自身对照芯片(以下称"以药测证芯片"),并对差异表达基因进行信号通路分析,筛选出凝血、血液流变学相关差异表达基因及其与肌动蛋白细胞骨架调控相关的通路.结果 在两张芯片中共同表达的凝血、血流变功能方面差异表达的基因有肌动蛋白(ACTA2)、纤维连接蛋白(FN1)、结合珠蛋白(Hp)、骨桥蛋白(SPP).其与细胞通讯、黏着斑、细胞外基质-受体相互作用、肌动蛋白细胞骨架调控、转化生长因子-β信号通路(TGF-β)等5条通路有关.结论 冠心病血瘀证与肌动蛋白基因及其代谢调控相关,介导了凝血、血流变异常基因的5条信号转导通路.
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AcMNPV肌动蛋白核定位基因的亚细胞定位
当前细胞核内肌动蛋白的功能是一个研究热点,核内存在肌动蛋白并参与细胞核内发生的许多生命活动.杆状病毒是迄今唯一报道的利用核内肌动蛋白进行复制增殖的病原微生物,为核内肌动蛋白的结构与功能的研究提供了独特的系统.有报道显示AcMNPV的ie-1,pe38,ac4,he65,ac102和ac152基因与肌动蛋白单体的核转运有关,然而关于这六个基因的亚细胞定位及其在肌动蛋白入核过程中的功能并没有深入的研究.本文首次揭示了这六个基因的亚细胞定位,IE1和AC152是全细胞分布,PE38和AC102也为核质分布,但主要分布在细胞核中,而AC4和HE65定位于细胞质.但AC102和IE1可以分别介导AC4和HE65入核.同时我们发现当使用外源强启动子OpIE2,在转染ie-1或pe38之后表达ac4和he65可以部分招募肌动蛋白单体入核,而时序性共转染这四个基因则可招募多肌动蛋白单体入核.对肌动蛋白核定位基因在细胞中的定位分析为进一步了解杆状病毒介导肌动蛋白入核的分子机理提供支持.
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巨细胞病毒对人胚成纤维细胞骨架的影响及其凋亡诱导作用
人胚成纤维细胞是人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)的容许细胞,CMV可在该细胞内活化复制[1].CMV感染后对细胞骨架及细胞凋亡有何影响尚不明确.国外有学者在透射电镜下观察感染CMV的人胚成纤维细胞,发现其微丝解聚,细胞骨架破坏[2],但结果尚不完善.我们的研究分别从细胞形态学、核酸水平、细胞超微水平等方面观察了感染CMV后的人胚成纤维细胞形态、肌动蛋白基因(β-actin)mRNA以及微丝的变化,并进一步观察了其对细胞凋亡的影响.
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转移相关分子链Actin-CD44-MMP-2在乳腺癌转移实验中的改变
目的 研究乳腺癌转移相关的分子机制及抑制体内外转移的作用和机制.方法 选择高、低转移性乳腺癌细胞系BICR-H1和MCF-7,用明胶底物非变性电泳分析法、Western blot和免疫荧光染色等方法,观察肌动蛋白、CD44和基质金属蛋白酶2分子链(ACM)成员分子的定性与定位关系.利用荧光标记肿瘤鸡胚尿囊膜(CAM)模型,血管内注射顺铂或MMP-2C末端PEX融合蛋白,利用荧光显微镜直接观察鸡胚肺转移抑制情况与癌细胞的ACM水平.结果 高转移的BICR-H1细胞ACM分子链呈高表达,分子定位相互关联.低转移性的MCF-7细胞呈低表达或无表达.体外实验中,顺铂和PEX分别抑制了CD44和MMP-2的表达.体内实验中,5-30μg顺铂能够抑制BICR-H1和MCF-7肿瘤的体内生长,呈剂量依赖性.30μg顺铂使乳腺癌BICR-H1细胞体内转移克隆数下降到(8±6)个[对照组为(30±15)个],而同剂量PEX可以完全抑制其体内转移.结论 ACM分子链表达与乳腺癌的转移性密切相关.顺铂和PEX分别通过封闭ACM分子链的环节,使CD44或MMP-2表达抑制,从而抑制乳腺癌细胞的体内外生长和转移.
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2.136微丝对豚鼠胃窦平滑肌细胞钾电流的影响
目的观察微丝对豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的影响,并且探讨肌动蛋白微丝是否参与低渗牵张增强豚鼠胃窦环行平滑肌细胞钾电流的过程.
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激活巨噬细胞的肌动蛋白分布和钙离子水平
目的 研究被LPS和IFN-γ激活的巨噬细胞的肌动蛋白分布和钙离子水平，探讨肌动蛋白构成和钙离子浓度在巨噬细胞游走和吞噬方面的作用。 方法 LPS和IFN-γ激活大鼠巨噬细胞后，用phallacidin和Fura-2标记肌动蛋白和游离钙离子，共聚焦激光扫描显微镜和钙离子图像分析仪下观察肌动蛋白分布和分析钙离子水平。 结果 在被激活的巨噬细胞，游走细胞和吞噬细胞的数量增加。细胞内F-肌动蛋白增多，钙离子水平升高。游走细胞有头部和尾部，头部伸出板状伪足和丝状伪足。板状伪足和丝状伪足内含有丰富的F-肌动蛋白。细胞底部出现肌动蛋白丝构成的应力纤维。在游走细胞，尾部的钙离子水平比头部高。游走细胞转向时，弯曲部的钙离子水平明显升高，特别是弯曲部的外侧区。巨噬细胞吞噬淋巴细胞时，吞噬处的钙离子水平显著升高。 结论 巨噬细胞被LPS和IFN-γ激活时，游走和吞噬功能明显增强，细胞内F-肌动蛋白分布和钙离子水平发生了特征性的形态学变化。
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钮蛋白在神经生长锥的三维分布及其机能意义
目的探索钮蛋白(vinculin)在神经生长锥形态变化和神经生长过程中的作用机制. 方法用免疫细胞化学方法,检测了初代培养鸡胚脊神经节细胞生长锥的细胞骨架蛋白vinculin的三维分布特征及其与纤维型肌动蛋白(F-actin)的相互关系. 结果在三维的水平面上,vinculin与F-actin的免疫反应活性在P领域和C领域的部分区域重合,在P领域伸展方向前端和丝状伪足内免疫反应活性强.vinculin比F-actin更接近细胞膜分布;在纵轴方向,vinculin主要分布在中部以上的表面游离侧,基质侧未见分布;F-actin大部分与vinculin重叠,但比vinculin分布更广泛. 结论 vinculin是构成膜骨架蛋白成分之一,具有连接生长锥细胞膜和F-actin的作用,参与生长锥形态变化、伪足伸缩,使神经突起生长.
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细胞骨架蛋白调节囊泡转运及其与神经疾病的关系
细胞内囊泡转运依赖于细胞骨架系统,细胞骨架为囊泡转运提供了轨道,而细胞骨架表面的马达蛋白则为其提供了动力.近年来,随着活细胞成像技术以及相关的生化、药理实验方法的不断进步,人们对囊泡转运的分子机制有了更加深入的认识.越来越多的实验结果表明,细胞骨架蛋白对囊泡转运有着重要的调节作用.囊泡转运的紊乱与多种神经疾病相关.囊泡转运分子调控机制的研究,将为多种神经疾病的治疗提供新的思路.
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丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2 (mitogen -activated protein kinase activated protein kinase 2,MK2)属于丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶家族,是p38的底物之一[1].MK2参与体内许多生理功能的调控,包括应激与炎性反应、细胞迁移、肌动蛋白重构等,其对炎性因子的调节作用格外受到重视[2-3].研究表明,MK2参与了动脉粥样硬化、高血压、阿尔茨海默病、银屑病、关节炎和急性胰腺炎等疾病的炎性反应过程[4].因此,对MK2的研究将为上述疾病的防治提供新的方向.
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淋巴瘤肌动蛋白假阳性表达的观察
肌动蛋白是细胞浆微丝的主要成分,多存在于肌肉组织.市售肌动蛋白抗体特异性较高,假阳性反应少见,是诊断肌源性肿瘤的可靠标记.但我们对23例淋巴瘤作免疫组织化学染色时发现一些假阳性反应,报道如下.
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p63、calponin和SMM-HC联合标记在乳腺增生性病变中表达的比较
在乳腺良性增生性疾病中,腺体周围肌上皮存在,而恶性病变出现浸润时肌上皮消失.因此乳腺肌上皮细胞是否存在对鉴别良、恶性病变具有重要的鉴别诊断价值.以前认为肌动蛋白异构体是乳腺肌上皮细胞较好的标记物,后又发现肌动蛋白结合蛋白(calponin)和平滑肌球蛋白重链(SMM-HC)的特异性优于肌动蛋白异构体,但仍未解决平滑肌细胞和肌纤维母细胞共同表达的问题.近年来,p63蛋白的应用解决了以上抗体交叉后反应的问题,使得一些构象复杂的乳腺上皮性病变易于诊断.本文应用p63、calponin和SMM-HC 3种抗体联合标记,对41例乳腺良、恶性病变进行比较,探讨3种抗体联合应用在乳腺疾病诊断中的意义.
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弓形虫actin蛋白多克隆抗体的制备及纯化
目的 制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化.方法 以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1 mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化；取200 μg纯化蛋白加等量佐剂混合,免疫SD大鼠4次,收集抗血清,用亲和纯化柱纯化.结果 PCR扩增出actin基因并成功构建actin/pET30a/BL21表达系统,获得actin-His6蛋白,制备的大鼠源性actin-His6蛋白多克隆抗体纯化后为单一蛋白抗体.结论 制备并纯化了抗弓形虫actin的多克隆抗体,为弓形虫入侵机制的研究奠定了基础.
