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过量维生素A摄入与骨质疏松
近年来发现过量维生素A可能是引起骨质疏松症的因素之一.成骨细胞和破骨细胞上可能都存在视黄醇受体,视黄酸抑制成骨细胞发挥功能,刺激破骨细胞形成.如果持续摄入高剂量的维生素A,骨量丢失加重骨脆性危险,终导致骨折.
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孕妇及新生儿成骨细胞功能状况40例临床分析
骨钙蛋白是仅有成骨细胞分泌的一种非胶原蛋白,是骨组织中含量多的蛋白质之一[1].它主要沉积在骨组织的间质细胞外,小部分可释放入血,可从外周血检测.目前认为,检测外周血骨钙蛋白水平,能准确反映成骨细胞的功能状况.孕妇及其新生儿的骨代谢状况一直是人们关注的问题.选择合适的指标反映孕妇及其新生儿成骨细胞功能,对保障孕妇及其新生儿的骨健康具有重要意义.本研究以骨钙蛋白为检测指标,对40例孕妇及其新生儿进行了测定,现报告如下.
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microRNA-21调控成骨细胞增殖和凋亡的相关研究
目的:探究microRNA-21对成骨细胞增殖和凋亡的作用.方法:应用PCR技术检测转染后的成骨细胞中microRNA-21的表达水平;应用CCK-8实验检测microRNA-21对成骨细胞增殖能力的影响;应用TUNEL实验检测microRNA-21对成骨细胞凋亡的影响.结果:PCR结果显示,转染microRNA-21 mimics后,成骨细胞中microRNA-21的表达显著升高,而转染microRNA-21 AMO后,成骨细胞中microRNA-21的表达显著降低;CCK-8实验结果表明,microRNA-21能够显著升高成骨细胞增殖能力;TUNEL结果表明,microRNA-21能够抑制成骨细胞发生凋亡.结论:microRNA-21能够显著升高成骨细胞增殖能力,并抑制其发生凋亡,从而可能参与骨质疏松的发生和发展.
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性激素对大鼠成骨细胞增殖及功能的影响
目的观察、比较17β-雌二醇(E2)、孕酮(P)及二者联合应用对体外培养的大鼠成骨细胞(ROB)增殖及成骨功能的影响. 方法分离培养新生ROB,分为培养液中不含激素(对照组)、含E210-8mol/L(E2组)、含P10-2mol/L(P组)、含E210-8mol/L+P10-7mol/L(E2+P组)4组.用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基四氮溴唑盐(MTT)法评价细胞增殖能力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定I型胶原(α2)链Col 1 mRNA含量,放射免疫法(RIA)测定无血清培养液中I型原胶原羧基端延长肽(P1CP),2-氨基-2-甲基丙醇法测碱性磷酸酶(AKP),Von Kossa染色法显示细胞层钙结节,用原子吸收仪测定钙含量. 结果与对照组比较,P组细胞增殖能力显著增加(P<0.01);P及E2+P组Col1 mRNA、P1CP、AKP、钙结节、钙原子含量均显著增加(P<0.01);E2组Col 1 mRNA及P1CP均显著增加(P<0.01),但E2组AKP、钙结节面积及钙原子含量均无显著差异(P>0.05). E2及E2+P组对细胞增殖无显著影响(P>0.05). 结论 P刺激体外培养的ROB增殖,P及E2+P增加ROB的骨胶原合成及钙化功能,而单纯E2增加ROB骨胶原的合成,但不影响细胞增殖及钙化能力.
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氟化物对大鼠颅骨成骨细胞DNA损伤的研究
我国是地方性氟病发生率较高的大国,由于氟过量摄入导致了许多患者心、脑、肝和肾等器官病变.骨骼是氟在体内主要蓄积的部位,长期过量摄入可导致骨代谢紊乱,引起全身性骨骼病变,即氟骨症.
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铅对大鼠成骨细胞形态学的影响
铅是应用广泛的重金属毒物.越来越多的研究显示骨骼是铅毒性重要的靶器官,儿童因其独特的生理发育特点对铅的毒作用较成人更为敏感,低剂量铅暴露即可引起儿童多系统、多脏器的损伤[1].对儿童体格发育的影响近年来已引起广泛的关注[1].铅中毒可以直接和间接地改变骨细胞功能[2].研究发现铅中毒儿童血清骨钙素水平下降[3].许多研究表明铅对成骨细胞可能有直接毒作用.成骨细胞是骨形成细胞,对骨组织的生长发育和损伤修复起关键作用[4].目前,国外关于铅对成骨细胞的毒性研究绝大多数采用单克隆的成骨细胞瘤细胞系(ROS17/2.8),而未见用原代成骨细胞者.国内研究只限于一些流行病学调查.为了阐明铅对幼年动物成骨细胞的影响,本研究选用原代细胞培养方法观察铅对成骨细胞光学显微镜下细胞形态及电子显微镜下超微结构的影响,为铅对成骨细胞乃至骨骼系统的发育毒性机制提供依据.
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三价铬对体外培养成骨细胞基因表达的影响
目的 了解三价铬对体外培养成骨细胞差异基因表达谱,探讨三价铬毒理机制.方法 基因芯片筛选受三氯化铬溶液(10 mg/L)作用24 h前后的成骨细胞hFOB 1.19基因表达谱.并对部分差异基因表达以实时荧光PCR技术验证.结果 10 mg/L的三价铬作用成骨细胞24 h后,基因芯片结果示差异基因2 811个,其中上调基因1 503个,下调基因1 308个(P<0.05),有显著性差异变化的细胞功能涉及增殖、凋亡、基因表达调节、免疫等.实时荧光PCR结果验证了Card11、Igsf6、Tnfrsf17和Rora基因在三价铬(10 mg/L)作用72 h后表达显著增高.结论 在本试验条件下,成骨细胞在体外受三价铬(10 ms/L)刺激后涉及的生物效应主要有炎症反应和细胞凋亡.新报道4个基因受三价铬(10 mg/L)激活,其可能通过对细胞免疫反应、凋亡的调节而参与三价铬生物效应,具体作用通路仍需进一步研究.
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铬离子对成骨细胞的毒性及对Tnfrsf17基因的影响
目的 观察Cr3+对成骨细胞SaO2的细胞毒性以及在Cr3+的作用下对成骨细胞Tnfrsf17基因的表达的影响.方法 体外培养SaO2成骨细胞,MTT法检测细胞活力,ALP试剂盒检测成骨细胞碱性磷酸酶的分泌情况,VonKossa试剂盒检测细胞钙结节形成.通过Rt-PCR及Western检测Cr3+对Tnfrsf17表达的影响.结果 在Cr3+的刺激作用下,与对照组相比,成骨细胞在相应时间节点细胞活性和钙结节形成明显受限,ALP的分泌呈时间与剂量依赖性的降低.在Cr3+的刺激作用下,0.1、1.3和150 mg各干预组与对照组相比,Tnfrsf17的基因表达水平及蛋白表达水平在24、48和72 h后均有所下降.结论 Cr3+对成骨细胞有细胞毒性而且可以下调Tnfrsf17基因及其蛋白产物的表达.
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染料木黄酮对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响及其与c-jun的关系
目的 研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其相关机制.方法 胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠盖骨成骨细胞,Ⅱ代细胞用于实验.MTY和3H-TdR测定成骨细胞增殖和DNA合成,原位杂交的方法测定c-jun表达.结果 成骨细胞培养基中加入(10-5、10-6和10-7mol/L)染料木黄酮或10-9mol/L和10-10mol/L雌激素培养48h和72h后,MTT的吸光度值与对照组相比均明显升高,48h和72h后对照组、染料木黄酮组和雌激素组MTF值分别为0.19、0.15;0.39、0.45、0.46;0.29、0.32、0.37和0.35、0.38;0.50、0.49.3H-TdR掺入量均显著增加,对照组、染料木黄酮组和雌激素组3H-TdR掺入量分别为68.47;101、844、512和1108.8、1204.2.c-jun表达各组差异无显著性.结论 染料木黄酮不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化.
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母鼠高氟摄入对仔鼠颅骨成骨细胞的影响
目的观察高氟摄入对大鼠所生仔鼠颅骨及成骨细胞超微结构变化,探讨氟中毒与成骨细胞细胞周期和细胞凋亡的关系.方法常规饮食条件下,给雌鼠自由饮用含氟化钠0、50、100、150mg/L蒸馏水2个月,随后与正常雄鼠交配,取仔鼠颅盖骨及成骨细胞做光镜和电镜检查;应用流式细胞术检测仔鼠成骨细胞凋亡的百分率和细胞周期.结果氟中毒仔鼠颅骨骨基质增生,胶原纤维堆积,排列紊乱,甚至断裂.成骨细胞异常增生.粗面内质网扩张,部分线粒体嵴断裂或消失,核出现凋亡特征.饮水中氟化钠浓度为150mg/L,对成骨细胞OB的细胞周期和细胞凋亡均有影响,使S期细胞数增多,G2/M期细胞减少;凋亡细胞百分率明显增多.结论过多的氟化物可以通过胎盘屏障直接作用于仔鼠颅骨成骨细胞,引起成骨细胞结构、细胞周期的改变,并可致细胞凋亡.
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氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响
目的: 研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法: 应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞;AlamarBlue摄入法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果: 氟化钠(NaF)浓度为0～2mmol/L、24h对细胞活性无影响 ;浓度为2mmol/L时,S期细胞数增多,G0/G1期和G2/M期细胞无明显改变.NaF浓度为 4mmol/ L时,细胞活性受抑制,S期细胞数明显增多,G2/M期细胞明显减少.NaF浓度为2mmol/L和 4m mol/L时,凋亡百分率明显增加.结论: 过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布,使细胞停滞于S期,并可诱导细胞凋亡.
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过量氟对大鼠体内、外I型胶原蛋白的影响
为研究过量氟对大鼠骨中I型胶原蛋白的影响,经饮水投氟复制大鼠氟中毒模型(NaF 221mg/L),测定氟中毒大鼠血清中骨钙素含量,骨中无机质、胶原含量和胶原交联度;酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,经0.5mmol/L和1.0mmol/L NaF染毒48h后,用免疫组化方法观察过量氟对成骨细胞I型胶原表达水平的影响.结果表明:大鼠染毒两个月后,氟中毒大鼠血清骨钙素含量、骨中无机质百分含量较对照组显著增加(P<0.05);骨中胶原含量、胶原交联度较对照组显著下降(P<0.05);体外成骨细胞染氟后,I型胶原蛋白分泌明显减少.提示过量氟可抑制I型胶原蛋白的合成;胶原蛋白减少是导致氟骨症的原因之一.
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锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的调节
为了研究锌对大鼠成骨细胞膜Ca2+-ATP酶和Na+、K+-ATP酶活性的影响及其机制,实验设对照组和3个补锌组.采用孔雀绿比色法同步测定膜Ca2+-ATP酶和Na+,K+-ATP酶活性,以研究Zn2+对酶活性的影响以及蛋白激酶C或钙调素特异性抑制剂对Zn2+诱导的成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性的影响.结果表明,Zn2+可以显著提高成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性,但对Na+,K+-ATPase活性无影响;钙调素特异性抑制剂R24571对Zn2+诱导的Ca2+-ATPase活性无影响,钙调素对膜Ca2+-ATP酶基础活性也无激活作用;蛋白激酶C特异性抑制剂三氟拉嗪可使Zn2+诱导的Ca2+-ATP酶的活性显著降低.因此,锌可能通过蛋白激酶C介导调节成骨细胞膜Ca2+-ATP酶活性.
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染氟成骨细胞内质网应激分子及骨转化功能的变化
目的 了解氟致成骨细胞内质网应激状态时成骨细胞分化相关基因的表达情况.方法 用原代培养的人成骨细胞建立染氟模型,流式细胞仪测定凋亡指数,并提取RNA后用PCR芯片分别检测未折叠蛋白反应和骨分化相关基因的表达情况.结果 氟能够引起成骨细胞内质网应激,引起15个基因表达上调,1个基因表达下调,其中涉及内质网应激PERK、IRE1和ATF6三条信号途径.骨分化方面有32个基因表达上调,2个基因表达下调,涉及胶原、基质金属蛋白酶、整合素、骨形态发生蛋白、血管生长因子、肿瘤坏死因子等基因.结论 氟引起成骨细胞内质网应激的同时,对骨转化基因的表达也产生影响.
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铅对大鼠成骨细胞Fas和Bcl-2基因表达的影响
目的研究铅对乳鼠成骨细胞凋亡相关基因表达的影响.方法分离并培养原代成骨细胞,加入不同浓度(0、1、10、100μmol/L)Pb(Ac)2,培养72h,用免疫组化染色法检测成骨细胞凋亡相关基因表达的情况.结果铅处理组成骨细胞Fas基因表达增加(r=0.78),而Bcl-2基因表达减少(r=-0.82).结论铅对成骨细胞的影响可能与Fas和Bcl-2基因表达改变有关.
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大豆异黄酮和钙对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的作用
为探讨大豆异黄酮和钙对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化和矿化的作用,体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞,然后用噻唑盐(MTT)法测定大豆异黄酮和葡萄糖酸钙对体外培养成骨细胞的增殖作用,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色方法(ARS)研究对成骨细胞矿化的影响.结果单纯补钙组大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化无显著促进作用.大豆异黄酮可显著地促进成骨细胞的增殖和分化,并促使成骨细胞形成矿化结节,而补充大豆异黄酮同时补钙可使矿化结节团块增大.大豆异黄酮可以提高成骨细胞的增殖和分化,补大豆异黄酮并补钙更有利成骨细胞的矿化.
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金雀异黄酮对人成骨细胞增殖及分化的影响
目的 观察金雀异黄酮(GS)对人成骨细胞增殖及分化的影响.方法 在加入受试物前4天,将本实验室所建立的第4代成人骨膜成骨细胞接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性炭-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设溶剂对照、雌激素(E2)对照、抗雌激素它莫西芬(TAM)对照及三个GS剂量组,观察指标包括细胞DNA合成、细胞周期分布、细胞胶原蛋白的合成和碱性磷酸酶(AKP)活性的测定.结果 10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/LGS对人成骨细胞处理48h,细胞DNA合成量明显增加,细胞增殖指数呈上升趋势,S期和M期细胞分布比例较溶剂对照组相明显提高,细胞胶原蛋白合成及细胞内碱性磷酸酶的活性增加;10-7mol/L TAM可结抗GS及E2对细胞所产生的这些生物学效应.结论 GS可促进人成骨细胞增殖及细胞合成和分泌胶原蛋白,并提高成骨细胞AKP活性,这些结果 提示,在雌激素缺乏的条件下,GS对成骨细胞来说具有雌激素效应,可刺激成骨细胞的增殖及分化作用.由于这些效应可被雌激素受体拮抗剂TAM所抑制,故GS的促进骨形成作用可能是通过影响雌激素受体途径而发挥作用的.
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缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化
为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,从大鼠颅骨分离出成骨细胞,并于DMEM培养基中进行传代培养.锌特异性络合剂TPEN络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型.采用3H-TdR掺入法确定成骨细胞在不同时点DNA的合成状况,同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析;采用组织学方法观察细胞骨架的变化、3H-脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量.结果表明,缺锌组成骨细胞3H-TdR掺入量在各个时点明显低于对照组,细胞被阻滞于细胞周期中G2/M期,这与细胞骨架受损密切相关.缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组.但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异.因此,缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化.
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高压氧对高糖浓度下MG-63细胞增殖分化的影响
目的 观察高压氧对高浓度葡萄糖状态下MG-63细胞增殖和成骨分化的影响.方法 实验根据不同葡萄糖浓度及是否行高压氧分为四组:(1)5.5 mM(对照组);(2)25.5 mM(高糖组);(3)5.5mM+高压氧;(4)25.5mM+高压氧.分别检测细胞增殖、ALP活性以及成骨基因的表达.结果 高糖组的细胞增殖、ALP活性、成骨基因及P-AKT的表达均显著低于对照组(P<0.05);行高压氧处理后,各项指标均显著增高(P<0.05).结论 高压氧能抑制高糖对MG-63细胞增殖分化的不利影响.
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口腔种植体周围炎对颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响
目的 分析口腔种植体周围炎对颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响.方法 将15例松动并拔出种植体的患者作为实验组,并选择15例拔出第三磨牙的身体健康者作为对照组,采集研究对象的颌骨组织给予成骨细胞的分离、培养、纯化,对成骨细胞增殖能力、成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA水平和蛋白水平进行测定,分析比较测定结果.结果 第一天和第三天时,对照组和实验组的成骨细胞OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);第七天时实验组患者的成骨细胞OD值显著低于对照组(P<0.05);实验组患者培养1周时的成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达量、蛋白相对表达量均显著低于对照组(P<0.05).结论 口腔种植体周围炎会对颌骨成骨细胞的分化和增殖进行抑制.
