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  • 痢疾LPS-ELISA-SIgA诊断方法的临床应用

    作者:顾金华;沈永芳

    以LPS-ELISA-SIgA法及细菌培养法对443份粪便标本进行检测,结果显示LPS-ELISA-SIgA法的敏感度和特异度分别为91.43%和96.07%;变异系数为7.32%,约登指数为0.88.表明本法敏感性和特异性均较好,且较稳定,适合基层推广使用.

  • 脂多糖水平在革兰阴性菌感染的早期诊断中的应用价值

    作者:张亚萍

    目的 研究并探讨脂多糖水平在革兰阴性菌感染早期诊断中的应用价值.方法 选择我院2016年1月至2016年6月收治的疑似革兰阴性菌感染患者80例作为观察组,另选择同期体检健康者30例作为对照组,对观察组患者进行细菌培养和血浆LPS检测,以细菌培养作为金标准,计算血浆LPS检测的特异度、灵敏度和准确率;同时,检测对照组的血浆LPS水平,并与观察组进行比较.结果 LPS检测的诊断阳性率为86.25%,明显高于细菌培养的75.00%,差异具有统计学意义(P<0.05).LPS检测对革兰阴性杆菌感染的诊断灵敏度、特异度、准确率分别为96.67%、45.00%、83.75%,阳性预测值为84.06%,阴性预测值为81.82%.观察组60例细菌培养阳性者的LPS含量为(160.65±79.52)pg/mL,明显高于对照组的(8.63±3.49)pg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 LPS水平检测有助于对革兰阴性杆菌感染患者进行早期诊断,且诊断准确率高,具有较高的临床应用价值.

  • 补肺益肾方对脂多糖刺激细胞分泌细胞因子的影响

    作者:吴耀松;陈玉龙;李建生;刘学芳;郝丽丽;田燕歌;李亚

    目的:从补肺益肾方药对脂多糖(LPS)刺激细胞分泌细胞因子变化的影响,揭示补肺益肾方药治疗COPD分子机理.方法:LPS刺激肺泡上皮细胞A549、气道上皮细胞H292、单核巨噬细胞THP-1,每种细胞均分为正常组(20%正常大鼠血清)、LPS组(20%正常大鼠血清和75 pg·mL-1LPS)、用药组(20%补肺益肾方药大鼠血清和75 pg· mL-1LPS),ELISA法检测细胞因子,应用网络工具分析细胞因子的转录因子.结果:与正常组比较,LPS组THP-1细胞分泌MMP-9、TGF-β增多,分泌TNF-α、PPAP2B减少;A549细胞分泌TIMP增多,分泌IL-3、TGF-β减少;H292细胞分泌IL-8增多.与LPS组比较,用药组THP-1细胞分泌TNF-α、TGF-β、TIMP-1、MMP-9 (P<0.01)及GM-CSF、SOD、CD36 (P<0.05)增加,TGF-β分泌减少(P<0.01);H292细胞分泌IL-8减少(P<0.01),TNF-α、TIMP-1、PPAP2B (P<0.05)和TGF-β(P<0.05)分泌增加;A549细胞分泌TIMP-1、TNF-α(P<0.01)和PPAP2B(P<0.05)减少,MMP-9、IL1B增加(P<0.01).与LPS组比较,用药组有改变细胞因子的转录因子:THP-1细胞的AP1、NFKB1、STAT3、SMAD3和PPARG,A549细胞的STAT3和PPARG满足激活条件.结论:LPS对单核巨噬细胞THP-1分泌细胞因子影响大,补肺益肾含药血清对LPS引起的细胞因子分泌变化有一定调节作用.

  • 栀子苷干预LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎性反应递质的研究

    作者:纪雯婷;尹湘君;刘姝伶;张海霞;王雪茜;魏玮

    目的:通过比较栀子苷水提液、栀子苷你标准品与栀子苷敲除液对LPS刺激巨噬细胞产生炎性反应的干预,探究栀子主要成分栀子苷的抗炎作用.方法:分别检测栀子苷水提液、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液对巨噬细胞的毒性;设立空白对照组、LPS模型组、栀子苷水提液组、栀子苷标准品组、50%栀子苷敲除液组、50%栀子苷回填组,检测各组对LPS刺激巨噬细胞后释放NO以及分泌IL-6和TNF-α的干预作用比较.结果:LPS刺激巨噬细胞后NO释放增多(P<10-4),而栀子苷水提液、栀子苷标准品、栀子苷敲除液均能降低LPS刺激巨噬细胞后NO的释放,其中栀子水提液、50%栀子苷敲除液以及50%栀子苷回填液的作用强,且其作用差异无统计学意义(P<10-2).而栀子苷标准品的作用相对较小(P<0.05).LPS刺激巨噬细胞后,巨噬细胞分泌TNF-α与IL-6较空白对照组增加(P<10-4),栀子水提液干、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液以及含50%栀子苷的栀子水提液干预后,能降低上述细胞因子的分泌(P<0.05).结论:栀子中栀子苷与其他成分均具有一定的抗炎作用,各成分之间的抗炎作用各有侧重.

  • 肺与大肠 LPS 信号通路相关性的实验研究

    作者:刘絮;刘晓燕;郭霞珍

    目的:研究肺与大肠LPS信号通路变化的相关性。方法:将实验大鼠随机分为生理组、高氧组、低氧组、限食组和限水组,通过测定肺与大肠中TLR4、MD2和CD14的变化观察肺与大肠LPS信号通路的相关性。结果:高氧组和低氧组中肺部TLR4和MD2增高时,肠部也有所增高(P<0.05),限食组和限水组中肠部TLR4和MD2增高时,肺部亦有增高(P<0.05)。结论:可以认为肺与大肠在LPS信号通路TLR4和MD2中有相关的协同识别。

    关键词: 肺与大肠 LPS TLR4 MD2 CD14
  • 柴芩合煎液与分煎液对LPS诱导的大鼠发热模型的影响

    作者:高琳;谢鸣;孙明瑜

    柴胡、黄芩是古方小柴胡汤"和解少阳"的核心药对.本实验通过观察柴-芩合煎液(CQHJ)与分煎液(CQFJ)(剂量为10g/kg)对20μg/kg和80μg/kg LPS诱导的大鼠发热模型的影响,考察了它们的解热作用.结果发现,CQHJ与CQFJ对不同剂量的LPS诱导的大鼠发热均有显著的解热作用;但CQHJ与CQFJ在起效时间和作用效度上有所区别,总体上以CQHJ更具优势.

  • 牡蛎汤对免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST和肝组织TNF-α的影响

    作者:徐强;李庆云;吕凤娟;桑希生

    牡蛎汤是通过对我校大量临床研究总结的治疗病毒性肝炎的有效中药方剂.近年来大量研究表明,病毒性肝炎的肝损害与机体对病毒的免疫应答有关.本实验利用卡介苗(BCG)和联合脂多糖LPS诱发小鼠免疫性肝损伤模型,观察牡蛎汤对血清ALT、AST和肝组织TNF-a含量的影响,探讨牡蛎汤肝保护作用的机理.

  • 温脾汤对LPS诱导的体外培养系膜细胞增殖影响的研究

    作者:李彧;张华敏;李健;牛建昭;王继峰

    目的:探讨温脾汤药物血清对原代培养大鼠系膜细胞增殖的影响.方法:分离培养原代大鼠肾小球系膜细胞,以LPS诱导系膜细胞增殖,设立正常对照组、大剂量含药血清组、uan中剂量含药血清组、小剂量含药血清组.分别以酶标仪和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期情况.结果:不同浓度的LPS均能刺激大鼠系膜细胞体外增殖,在24h、48h、72h各时相均以LPS3(1μg/ml)刺激强度高.同时加入温脾汤药理血清后,可见药理血清对LPS诱导的MC增殖具有不同程度的抑制作用,各时相点均以大剂量含药血清抑制效果为明显.进一步的研究表明,温脾汤药物血清能够增加系膜细胞G1期细胞百分数,降低S期细胞百分数,表明药物作用可使细胞分裂停滞在S期.结论:温脾汤药物血清能够明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖.

  • 槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响

    作者:王艳荣;杨峰;刘静;周娅

    目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7 巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制.方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+ LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液.Western blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-α mRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量.结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01);TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-α mRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P<0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义.结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一.

  • 茵陈蒿汤合大承气汤加味对肝硬化合并感染患者肝功能及血LPS的影响

    作者:王凤林;戴敏;李杨湄

    目的:探讨茵陈蒿汤合大承气汤加味对肝硬化合并感染患者肝功能及血 LPS的影响。方法:60例患者随机分为研究组及对照组各30例,研究组在综合治疗基础上,采用茵陈蒿汤合大承气汤加味治疗共两周,对照组仅采取常规综合治疗。结果:两组组患者在治疗结束后,肝功能、凝血功能、血 LPS 均较治疗前改善,但研究组在降低血 LPS 及总胆红素方面疗效更佳(P<0.01)。结论:在综合治疗基础上加用茵陈蒿汤合大承气汤加味能有效降低患者胆红素水平及降低血LPS。

  • 利用流式细胞术检测LPS刺激活化后小鼠腹腔巨噬细胞体积的变化

    作者:刘音;刘硕;王文蝶;朱军;陈朱波;姜明红

    目的 探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激活化后体积的变化.方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24h后,用倒置显微镜观察细胞的形态,用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量,用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积.结果 小鼠腹腔巨噬细胞在正常状态下呈圆型,细胞边缘光滑无伪足,胞质内无空泡.经LPS刺激3h后,小鼠腹腔巨噬细胞的表面积变大,伸出伪足,伪足的数量和长度随时间延长而逐渐增多和增长,胞质内的空泡也逐渐增加;24h后,细胞表面积明显增大,伪足牵拉使细胞形状呈梭型.LPS处理后细胞上清中IL-6的含量较对照组显著增加(P<0.01).流式细胞术检测发现细胞的前向角散射光(FSC)的数值(代表细胞大小)随LPS刺激时间的延长而增加,3和24h分别增加了11.0%(P<0.05)和20.2%(P<0.01);侧向角散射光(SSC)的数值(代表表面颗粒数)也逐渐增加,3和24h分别增加了21.6% (P <0.05)和68.0% (P<0.01).结论 流式细胞术可以定量检测小鼠腹腔巨噬细胞经LPS活化后的体积变化,为天然免疫细胞的活化研究提供了新的检测手段.

  • E3泛素连接酶RNF121对脂多糖诱导的巨噬细胞表达促炎性细胞因子的影响

    作者:孟姝;刘音;姜明红

    目的 探讨E3泛素连接酶RNF121对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞表达促炎性细胞因子的调控作用.方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞,Western blot检测RNF121的表达.用RNA干扰(si-RNF121)降低RNF121的表达,小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激后,实时荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α和IL-6的浓度,Western blot检测小鼠腹腔巨噬细胞中P65及磷酸化P65(p-P65)的表达水平,利用双荧光素酶报告基因法检测NF-κB的活性.结果 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞后,RNF121的蛋白水平显著降低(P<0.05),蛋白酶抑制剂MG132能够显著增加RNF121的蛋白水平.si-RNF121降低RNF121的表达后,给予LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞,IL-6和TNF-α的表达水平均显著下降(P<0.05),转录因子P65的磷酸化(p-P65)水平及NF-κB的活性均显著降低(P<0.05).结论 E3泛素连接酶RNF121通过调控NF-κB的活性从而影响小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α及IL-6的表达.

  • LPS预处理增加CoCl2诱导小鼠巨噬细胞表达HIF-1α

    作者:江丽丽;张建斌;谢平;谢可鸣

    目的 观察LPS预处理对CoC12诱导的小鼠巨噬细胞表达低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将小鼠巨噬细胞Raw264.7分为对照组、LPS(1 mg/L)组、CoCl2(100 μmol/L)组和LPS预处理LPS-Pre组4组并分别置于含相应试剂的培养液中培养,预处理组则先在LPS浓度为1 mg/L的培养液中预培养8h再转入CoCl2浓度为100 μmol/L的培养液中培养.RT-PCR检测HIF-1α和VEGF mRNA;免疫细胞化学和Western blot检测HIF-1 α和VEGF蛋白.结果 CoGl2组和LPS预处理组Raw264.7表达HIF-1α和VEGF的mRNA和蛋白均高于对照组(P<0.05),其中,预处理组蛋白表达高(P<0.05).结论 LPS预处理能在转录后水平上调CoCl2刺激的巨噬细胞表达HIF-1 α和VEGF.

  • miR-23a对LPS诱导小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

    作者:刘敏;姜明红;高静;刘丹;刘彦信;郑德先

    目的 探讨miR-23a对LPS诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.方法 Real-time PCR定量分析LPS刺激不同时间的腹腔巨噬细胞中miR-23a的表达以及瞬时转染miR-23a mimics和inhibitors的腹腔巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α等促炎性细胞因子的表达;ELISA检测mRNA变化明显的细胞培养上清的IL-6的含量.结果 原代腹腔巨噬细胞在LPS刺激后,miR-23a的表达明显下调;在转染miR-23a mimics后,IL-6的表达和分泌明显升高(P<0.05),但对IL-1β和TNF-α的表达没有明显影响.而转染miR-23a inhibitors后,则IL-6的表达水平受到抑制.结论 LPS刺激原代巨噬细胞可抑制miR-23a的表达;miR-23a可促进炎性细胞因子IL-6的表达,对IL-1β和TNF-α无显著影响.

  • 槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达

    作者:杨峰;周娅;曹相原;王艳荣;赵建宁;王宁萍

    目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制.方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组.槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液.RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量.结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P<0.01),IκBα mRNA低于同时间点对照组(P<0.01或P<0.05);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P<0.01或P<0.05),而IκBα mRNA则显著升高(P<0.01或P <0.05).结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一.

  • 磷脂对脂多糖诱导中性粒细胞CD11a表达的影响

    作者:万志红;陈惠孙;陆松敏

    本实验主要研究与磷脂作用后脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)生物学活性的变化.用与不同磷脂预孵育后的LPS刺激细胞,检测中性粒细胞的粘附功能及巨噬细胞分泌细胞因子功能的变化.结果发现与磷脂孵育后,LPS可插入磷脂脂质体膜中,使中性粒细胞粘附功能降低,巨噬细胞分泌细胞因子减少.结果提示LPS插入细胞磷脂中可以改变其生物学活性,推测细胞膜磷脂成分降解可能是LPS诱发炎症反应的重要原因.

    关键词: LPS 脂质体 6-κ-PGF1α TXB2
  • Fos蛋白在LPS免疫激发大鼠脑内的分布

    作者:杨志军;葛煦;饶志仁;段丽;鞠躬

    目的研究与神经免疫调节有关的功能神经元在大鼠脑内的分布. 方法以腹腔注射脂多糖(LPS)为免疫激发模型,采用免疫组织化学ABC方法,观察Fos蛋白在脑内的分布情况. 结果 Fos阳性产物多集中分布在大脑额顶皮质、边缘前脑(扣带皮质、梨状皮质、外侧隔核和中央杏仁核等)、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、弓状核、视上核、视交叉上核、下丘脑外侧区、中脑导水管周围灰质腹外侧部、外侧臂旁核和延髓内脏带.小脑内无明显Fos分布密集区. 结论 LPS诱发的Fos阳性神经元在脑内有相对广泛的分布.

  • 激活巨噬细胞的肌动蛋白分布和钙离子水平

    作者:王海杰;谭玉珍

    目的 研究被LPS和IFN-γ激活的巨噬细胞的肌动蛋白分布和钙离子水平,探讨肌动蛋白构成和钙离子浓度在巨噬细胞游走和吞噬方面的作用。 方法 LPS和IFN-γ激活大鼠巨噬细胞后,用phallacidin和Fura-2标记肌动蛋白和游离钙离子,共聚焦激光扫描显微镜和钙离子图像分析仪下观察肌动蛋白分布和分析钙离子水平。 结果 在被激活的巨噬细胞,游走细胞和吞噬细胞的数量增加。细胞内F-肌动蛋白增多,钙离子水平升高。游走细胞有头部和尾部,头部伸出板状伪足和丝状伪足。板状伪足和丝状伪足内含有丰富的F-肌动蛋白。细胞底部出现肌动蛋白丝构成的应力纤维。在游走细胞,尾部的钙离子水平比头部高。游走细胞转向时,弯曲部的钙离子水平明显升高,特别是弯曲部的外侧区。巨噬细胞吞噬淋巴细胞时,吞噬处的钙离子水平显著升高。 结论 巨噬细胞被LPS和IFN-γ激活时,游走和吞噬功能明显增强,细胞内F-肌动蛋白分布和钙离子水平发生了特征性的形态学变化。

  • LPS刺激来自人单核细胞的树突状细胞在调节自体CD4+CD25+T细胞活性作用研究

    作者:刘冀伟;川崎 隆;富山智香子;内藤 真;吴丹西;马军

    树突状细胞(DC)是现今被认为具潜能的专职抗原呈递细胞.应用不同方法在体内诱导细胞毒T细胞(CTL)来识别肿瘤相关抗原的肿瘤免疫治疗研究已有报告.然而,在体内免疫治疗的有效性可能仅限制在局部或系统抑制CTL产生和功能.为了检测LPS刺激人单核细胞的DC来抑制自体CD4+CD25+T细胞能力,使用HLA-A2限制性p53264-272肽作为肿瘤抗原,用LPS(DC-LPS+)或不用LPS(DC-LPS-)产生的DC分别与自体T细胞共同培养.结果显示:在DC-LPS+活化的T细胞的CD4+CD25+T细胞群比DC-LPS-活化的T细胞要低.这个结果提示,DC-LPS+与CD4+CD25+T细胞群有关联,而且这种特性可能是由于T细胞对肿瘤相关抗原的调节作用.

  • 内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

    作者:沈爱国;刘海鸥;陈梦玲;高永静;程纯

    目的观察内毒素/脂多糖(LPS)致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达变化和细胞定位.方法腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组.用Real-time PCR法和Western blot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位.结果 SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系:1、5、10和15 mg/kg组SSeCKS mRNA水平皆显著高于对照组(P<0.05),且随注射剂量增高SSeCKS mRNA表达量亦逐渐增高;不同时相LPS(5 mg/kg)注射后肺组织中SSeCKS mRNA水平表达呈动态变化过程,1 h开始增高,3 h达到表达高峰,12 h降至正常水平;SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致.SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞.结论SSeCKS是炎症反应蛋白,其表达量与炎症的严重程度相关.内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调.

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