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056 丝裂原活化蛋白激酶信号通路及其生物学功能
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路广泛存在于哺乳动物细胞中,主要由MAPKKK、MAPKK和MAPK 3类保守的蛋白激酶组成,与多种细胞反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)及机体多种生理病理过程(如脑发育、癌症及糖尿病等)密切相关.本文重点讨论了ERK1/2、JNK、p38及BMK1/ERK5通路的激活机制、下游底物及其生物学功能的研究进展.
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代谢型谷氨酸受体5在小鼠肝原代细胞和肝癌细胞中的表达及作用
目的 代谢型谷氨酸受体5(mGlu5)在肝组织中具有表达,并且在肝脏的病理过程中发挥重要的调节作用.本课题组以往的研究结果表明,mGlu5的激动剂和阻断剂影响人肝癌细胞系HepG2的生长、凋亡、浸润和转移等功能,提示mGlu5在肝癌的形成和发展中发挥一定的作用.为进一步验证mGlu5在肝癌中的作用,本研究在此基础上选用小鼠肝原代细胞和小鼠来源的肝癌细胞系Hepa1-6为实验模型,通过比较mGlu5在两者中的表达及功能的差异,深入探讨mGlu5影响肝癌的内在机制.方法 采用噻唑蓝法、免疫印迹法分别检测了mGlu5对小鼠肝癌细胞活力的影响,两种细胞中mGlu5的表达及mGlu5的功能.结果 在小鼠肝原代细胞和肝癌细胞中均有mGlu5的表达,在肝癌细胞中的表达量高于小鼠肝原代细胞；激活Hepa1-6中的mGlu5所需DHPG(mGlu5的激动剂)剂量低于激活小鼠肝原代细胞中mGlu5所需剂量；激活mGlu5促进ERK信号通路激活,在Hepa 1-6细胞中,100 μmol/L DHPG即可使ERK信号通路激活,而在小鼠肝原代细胞中,激活ERK信号通路需要300 μmol/LDHPG.激活mGlu5不影响两种细胞中的JNK以及p38信号通路.激活mGlu5能增加Hepa1-6细胞活力.结论 mGlu5在肝细胞和肝癌细胞中的表达及功能存在差异,此差异可能是肝细胞癌发生发展的原因之一.
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苯甲酸钠对PC12细胞的增殖抑制及MAPKs活化表达的影响
目的 观察苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖的抑制作用及在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,为进一步了解SB的神经毒性及相关的分子机制提供实验依据.方法 大鼠PC12细胞在含0～ 50 mmol/L浓度SB的培养基中培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Western blot检测JNK和ERK磷酸化水平的改变.结果 SB可呈一定的时间和浓度依赖性抑制PC12细胞增殖,其中40 mmol/L SB作用24 h对PC12细胞的抑制率为47.81％ ±5.23％;Western blot结果显示,SB处理可增加JNK的磷酸化水平并降低基础的ERK磷酸化水平;预孵SP600125 30 min后再加入SB,则能短暂降低JNK的磷酸化水平.结论 SB能够明显抑制PC12细胞的增殖,JNK和ERK信号转导通路可能参与了SB对PC12细胞的毒性作用机制.
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丙烯腈T淋巴细胞体外染毒对其脂筏Caveolin-1蛋白、MEK蛋白的影响
目的 丙烯腈染毒T淋巴细胞,分析膜脂筏及Ras/Raf/MEK/ERK信号通路中MEK蛋白变化,探讨丙烯腈免疫毒性的可能作用机制.方法 采取体外细胞培养技术,以T淋巴细胞Jurkat细胞株为研究对象,分为空白对照组、低浓度、中浓度、高浓度丙烯腈(0、20、100和500μmol/l)细胞染毒组,分析膜脂筏Caveolin-1蛋白、MEK蛋白变化.结果 随染毒浓度增加,受检细胞经处理4h后各染毒组与对照组细胞膜胆固醇含量差异有统计学意义(P＜0.05),细胞膜胆固醇的含量下降,间接表明脂筏的数量越少；Caveolin-1蛋白定位改变,变构便于信号传递；p-MEK蛋白随浓度增高条带变浅.结论 丙烯腈可能通过破坏脂筏结构,脂筏数量减少,Caveolin-1蛋白位移变构,Ras/Raf/MEK/ERK信号传导过程受到抑制而发挥免疫毒性.
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MAPK信号通路在酒精性肝病发病中作用研究进展
酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是长期大量饮酒导致的一种渐进性肝病,包括酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver,AFL)、酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化等.由于特殊的酒文化以及近年来经济水平的提高,我国酒精性肝病的发病率日渐增加,已成为继乙型肝炎之后的第二大肝病,如何预防、治疗ALD已成为一个日益严峻的公共卫生问题.目前虽已有大量关于ALD机制的研究,但ALD发病的关键环节仍未完全阐明;尚未有药物或其他干预措施能通过某一靶点对ALD的防治达到理想效果.丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号通路是将刺激从细胞膜传递至细胞核、诱导基因转录做出应答的一条经典路径,是细胞内重要的信号转导系统,已被证实参与了多种疾病的发病过程.近年来有研究发现ALD的发病伴随着MAPK信号通路的变化.因而,深入研究MAPK信号通路有可能找到ALD防治的一个重要靶点.本文拟就不同研究模型中MAPK信号通路的变化,及其与酒精性脂肪肝、肝炎和细胞凋亡等关系做一综述.
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锰对PC12细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究
目的 筛选锰对PC12细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系,观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制.方法取对数生长期PC12细胞株,用200、400、600、800μmol/L MnCl2培养液分别培养1、2、3、4天,噻唑蓝(MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量,台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线;western-blot法检测p-Erk,p-p38.结果 MTT和平板克隆结果显示200～800μmol/L MnCl2作用1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用,且呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl2 作用4天对PC12细胞的抑制率达50%以上.Western-blot结果显示600μmol/L MnCl2作用1～4天,p-Erk2逐渐降低,作用2天时较对照降低了75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4天时,p-Erk逐渐降低,400μmol/L MnCl2作用4天较对照降低了78%(n=3,P<0.01);600μmol/L MnCl2作用1～4天可见p-p38逐渐升高,作用3天时较对照组增加6.6倍 (n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4d时,p-p38逐渐升高,当400μmol/L MnCl2作用4天时较对照组升高了4.7倍(n=3,P<0.05).结论锰的神经毒性可能是通过阻抑p-ERK通路上调p-p38引发细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡实现的.
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土贝母苷甲对人鼻咽癌上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶活性的影响
目的 研究土贝母苷甲(tubeimoside 1,苷甲)对人低分化鼻咽癌上皮细胞株(CNE-2Z)丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase, MAPK)活性的影响.方法 采用放射自显影、液闪和蛋白质免疫印迹法检测MAPK的活性.结果 三种实验方法得到的结果一致表明,苷甲有快速激活MAPK的效果.结论 激活MAPK信号转导通路可能是苷甲诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.
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人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用
目的:探讨人参皂苷20(s)-Rg3对llc-pk1细胞中顺铂所致肾毒性的保护作用.方法:通过基于细胞的肾脏保护试验,研究了发酵黑参(FBG)及其活性成分人参皂苷20(S)-Rg3对猪肾(LLC-PK1)细胞中顺铂(化疗药物)诱导的损伤的保护作用.结果:由顺铂诱导的细胞活力降低,再使用FBG提取物和人参皂苷20(S)-Rg3依赖剂量后明显恢复.用FBG提取物或人参皂苷20(S)-Rg3处理后会降低顺铂诱导升高与磷酸化c-Jun N-末端激酶(JNK),p53和裂解的半胱天冬酶-3升高的蛋白.通过用FBG和人参皂苷20(S)-Rg3的共同处理,由于顺铂的诱导导致凋亡LLC-PK1细胞升高的百分比显著降低.结论:人参皂苷20(s)-Rg3可改善LLC-PK1的细胞毒性,人参皂苷20(S)-RG3可能是通过阻断JNK-P53-caspase-3信号级联反应来介导这种作用的重要组成部分.
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MAPK信号通路在骨关节炎发病机制中的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是真核细胞信号传递的重要途径之一,在调节控制细胞结构和功能活动中发挥关键作用.在真核生物中MAPK信号通路包括p38、ERK、JNK、ERK5等多个亚家族.随着研究的不断深入,发现p38、ERK、JNK信号转导途径的活化与骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤密切相关,诱导软骨细胞产生基质金属蛋白酶,加速关节软骨病理性降解,并参与软骨细胞增殖、凋亡与分化等一系列反应,明确MAPK信号通路在OA中的发生发展机制已成为研究的新热点.
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金振口服液对LPS致急性肺损伤模型小鼠NF-κB,MAPK信号通路的影响
目的:探讨金振口服液(JZKFY)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)模型小鼠的影响及其分子水平作用机制.方法:小鼠随机分为正常组、模型组、醋酸地塞米松组、金振口服液高、中、低(4.4,2.2,1.1 g·kg-1)剂量组,各给药组给予相应剂量药物,正常组和模型组灌胃同等剂量的生理盐水,1次/d,连续7d后,模型组及药物组小鼠腹腔注射LPS(10 mg·kg-1)复制急性肺损伤小鼠模型,正常组腹腔注射同等剂量的生理盐水.6h后采集小鼠肺组织,测定左肺湿/干质量比(W/D);酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-1β;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肺组织中p65,IκBα,ERK1/2,p38蛋白及其磷酸化蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组小鼠W/D显著升高(P＜0.01),肺组织中TNF-α,IL-1β水平显著升高(P＜0.01),p65,IκBα,ERK1/2,p38蛋白磷酸化水平显著上调(P＜0.01).与模型组比较,金振口服液低、高剂量及地塞米松组W/D显著降低(P ＜0.05,P＜0.01);金振口服液各剂量组及地塞米松组肺组织中TNF-α,IL-1β水平显著降低;金振口服液各剂量组及地塞米松组p65,IκBα,p38蛋白磷酸化水平显著下调(P＜0.05,P＜0.01),金振口服液高剂量、地塞米松组ERK1/2蛋白磷酸化水平显著下调(P＜0.05,P＜0.01).结论:金振口服液能够有效改善LPS诱导的ALI肺组织间质性水肿及降低致炎细胞因子的含量,其作用机制与抑制p65,IκBo,ERK1/2,p38多个靶蛋白磷酸化,从而阻断核转录因子-κB(NF-κB),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)炎症通路的信号传导密切相关.
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桂枝附子汤对CIA大鼠滑膜组织中MAPK信号通路的影响
目的:探讨桂枝附子汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.方法:将SD大鼠60只随机分为正常组,模型组,桂枝附子汤组(1.5,4.5,13.5 g·kg-1),甲氨喋呤组,共6组;大鼠尾根部皮下注射鸡Ⅱ型胶原(chicken type Ⅱ collagen,CC Ⅱ)乳剂制备CIA模型;自造模后第14天开始,每周观察各给药组的关节炎指数;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测滑膜组织MAPK信号转导通路中JNK,ERK,p38蛋白及相应磷酸化蛋白p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平.结果:CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数第7,14,21,28,35,42天个时间点均高于正常组,在给予桂枝附子汤治疗后在第14天后CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数均明显降低.桂枝附子汤能明显改善CIA大鼠滑膜增生和炎性细胞浸润,使得炎性细胞减少.与正常组p-JNK,p-ERK,p-p38比较,CIA组中的p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平显著增强,两组治疗间有显著性变化(P＜0.01);用甲氨蝶呤治疗CIA大鼠,与模型组比较其p-JNK,p-ERK和p-p38表达水平显著降低,两组治疗间有显著性变化(P＜0.01);用桂枝附子汤治疗CIA大鼠,与模型组相比较其p-JNK,p-ERK,p-p38明显降低,并且呈现剂量依赖性关系.结论:桂枝附子汤可抑制CIA大鼠MAPK信号转导通路的活化,从而缓解炎症症状.
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化香树果序乙醇提取物调控RAS/MAPK通路对鼻咽癌细胞的影响
目的:研究化香树果序醇提物(ethanol extract of infructescence of Platycarya strobilacea,EPS)的对鼻咽癌CNE1,CNE2细胞的药理作用机制.方法:以鼻咽癌CNE1,CNE2细胞为研究对象,以EPS 0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L-1干预,设空白组,孵育24 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测EPS对CNE1,CNE2细胞活力的影响.用1.0 g·L-1 EPS处理CNE1,CNE2细胞24 h,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞器的变化.流式细胞仪检测细胞凋亡程度,RNA高通量测序检测EPS处理后细胞中的差异基因.蛋白免疫印迹法检测HRas proto-oncogene(HRAS)蛋白细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和c-Fos proto-oncogene (c-Fos)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,EPS能明显抑制CNE1,CNE2细胞的增殖(P＜0.05),且呈浓度依赖性.与空白组比较,EPS明显诱导CNE1,CNE2细胞质出现大量空泡,空泡相互融合,不断增大,后细胞膜破裂,透射电镜发现细胞核没有发生明显的变化,溶酶体空泡化明显,流式结果未发现明显凋亡,与细胞methuosis死亡特征一致.高通量测序结果显示与癌蛋白(RAS)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关,与空白组比较HRAS,ERK1/2,c-Fos蛋白表达降低,磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达升高(P＜0.05).结论:EPS可通过调控RAS/MAPK信号通路诱导人鼻咽癌细胞CNE1,CNE2发生methuosis死亡,导致细胞相互融合,细胞内出现大量空泡.
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氧化苦参碱对TGF-β1诱导心肌细胞损伤的保护作用
目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的新生SD乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD乳鼠原代心肌细胞.实验分为4组,包括正常组,模型组[转化生长因子-β1(TGF-1),20×10-5g·L-1],OMT高剂量组(TGF-β1+0.1 g·L-1OMT),OMT低剂量组(TGF-β1+0.05 g·L-1OMT).OMT预保护2h后,采用TGF-β1孵育48 h建立心肌细胞损伤模型.利用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)外漏量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测p38,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK),c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的表达水平.结果:TGF-β1显著引起心肌细胞损伤,OMT(0.1,0.05 g·L-1)能够抑制TGF-β1诱导的心肌细胞存活率下降及LDH外漏量增加.OMT高剂量组(0.1g·L-1)可下调TGF-β1诱导的心肌细胞p-p38,p-ERK1/2,p-JNK的蛋白表达,但对p38,JNK,ERK1/2总蛋白表达无影响.结论:OMT对TGF-β1诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与其抑制p38,ERK1/2,JNK蛋白的磷酸化有关.
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针灸与MAPK信号转导通路研究进展
分析从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导角度探讨针灸作用机制的文献,结果表明多种针灸效应的产生都与MAPK细胞信号转导通路的调控密切相关.但当前的研究横向范畴不广,实验设计存在一些问题:治疗组采用电针、针刺的方法较多,灸法较少；电针所选择的波型、频率、刺激持续时间不统一；研究深度多停留在简单的印证与合理的推测等.进一步拓展横向研究的范畴,完善实验设计,从更深层次的角度研究由MAPK信号转导通路介导的针灸信号的传递途径和针灸效应的产生机制,对临床针灸疗效的提高将大有裨益.
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针刺作用及机械力刺激对成纤维细胞的影响
成纤维细胞作为穴区主要的感受性细胞和效应性细胞,在接受钎刺的机械刺激后其细胞形态结构、周长和横截面积等均会发生规律性改变.同时机械力刺激还能促进成纤维细胞增殖、相关生长因子的合成与释放及细胞骨架重构等,这一系列变化的发生可能与力学效应激活成纤维细胞膜上的整合素和MAPK信号传导通路有关,从而导致机械力作用向生物化学信号的转换,由此推断成纤维细胞的改变在针刺的力传导途径中具有重要的研究意义.
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益气健脾中药对脾气虚大鼠神经肽Y、血管活性肠肽和丝裂原活化蛋白激酶14基因表达的影响
目的：观察脾气虚大鼠血清、小肠神经肽Y (NPY)和血管活性肠肽(VIP)含量,小肠组织丝裂原活化蛋白激酶14(Mapk14)mRNA表达的变化及益气健脾中药的干预效应,以揭示脾气虚证发生的内在机制。方法受试动物随机分为空白组、模型组(7、14、21 d组)、益气健脾组,每组10只。除空白组外,其余各组采用大黄法、力竭法及饥饿法复合法建立脾气虚证大鼠模型,造模同时益气健脾组每日给予四君子汤20 g/kg干预21 d,各组大鼠分时段采用放免法测定小肠、血清NPY和VIP含量,采用实时荧光定量PCR检测小肠组织Mapk14 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血清及小肠组织 NPY 含量降低(P＜0.05),VIP 含量升高(P＜0.05),小肠组织Mapk14 mRNA相对表达量升高(P＜0.05),且以模型21 d组显著；与模型21 d组比较,益气健脾组大鼠血清及小肠组织NPY含量升高(P＜0.05),VIP含量降低(P＜0.05),小肠组织Mapk14 mRNA相对表达量降低(P＜0.05)。结论益气健脾中药具有调节脑肠肽NPY、VIP分泌及抑制小肠组织Mapk14 mRNA异常表达的作用。
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MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制
目的 通过丝裂原活化蛋白激酶(m itogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路探讨养精种玉汤正丁醇(ZDC)及乙酸乙酯(YSYZ)提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制.方法 分离并培养猪卵巢颗粒细胞,将细胞按不同浓度的MAPK抑制剂PD98059孵育,分为0(空白对照)、1、3、1 0、25 μmol/L共5组,培养24 h后,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测17α-羟化酶/C17,20-裂解酶(cytochrome P450c17a,CYP17)mRNA表达水平,应用放射免疫测定法(RIA)检测细胞上清液雄激素(睾酮)含量,筛选佳的PD98059作用浓度;采用10 μmol/L PD98059干预卵巢颗粒细胞24 h后,将细胞培养液更换成含或不含有不同浓度(O、1、5、25、50 mg/mL)的养精种玉汤有效成分提取物ZDC及YSYZ干预不同的时间(3、6、18、24 h)后,采用Western blot法检测各组磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、c-Fos及CYP17蛋白表达水平,RIA法检测细胞上清液睾酮含量.结果 10μmol/LPD98059可明显降低猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加CYP17 mRNA表达,并可增加细胞上清液睾酮含量(P＜0.05).当养精种玉汤ZDC、YSYZ提取物浓度为25 ng/m L、作用时间为6h时,可增加猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2、c-Fos蛋白水平并降低CYP17蛋白的表达,降低细胞上清液睾酮含量(P＜0.05).结论 养精种玉汤有效成分通过增加MAPK的活性从而降低猪卵巢颗粒细胞的雄激素生成.
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宁心痛颗粒及其有效组分抑制HSP60诱导的THP-1细胞炎症反应的实验研究
目的 观察NF-κB、MAPKs信号通路在介导重组人热休克蛋白60(HSP60)诱导巨噬细胞(M(p)炎症反应中的作用,探讨益气活血方宁心痛颗粒的抗炎机制.方法 采用人急性单核白血病细胞株(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)体外培养模型,结合血清药理学与中药组分配伍方法进行论证.将THP-1细胞诱导分化为Mφ,分为对照组(Mφ+培养液)、HSP60(10 μg/m L)组、黄芪多糖(APS,200 μg/mL)组、藁本内酯(LIG,20 μg/mL)组、APS(200 μg/mL)+LIG(20 μg/mL)组、含药血清(3％)组、辛伐他汀(15 μg/mL)组,各药物干预组以相应治疗药物预处理24 h后,除对照组外,其余各组均加入终浓度为10 μg/mL的HSP60.检测磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)、MAPKs[包括p-p38、胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)]蛋白表达及TNF-α、IL-6含量.结果 与对照组比较,HSP60组的p-NF-κB及p-p38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达和TNF-α、IL-6含量升高(P＜0.01);与HSP60组比较,各药物干预组检测蛋白表达和TNF-α、IL-6含量均降低(P ＜0.05,P＜0.01);与APS组比较,APS+LIG组、含药血清组和辛伐他汀组检测蛋白表达和TNF-α、IL-6含量均降低(P＜0.05,P＜0.01);与LIG组比较,APS+LIG组检测蛋白表达均降低(P ＜0.05,P＜0.01),TN F-α、IL-6含量差异无统计学意义(P＞ 0.05),含药血清组和辛伐他汀组检测蛋白表达及TNF-α、IL-6含量均降低(P＜0.05,P＜0.01);含药血清组和辛伐他汀组均较APS+LIG组蛋白表达和TNF-α、IL-6含量降低更明显(P＜0.05,P＜0.01),且辛伐他汀组降低蛋白表达的效果优于含药血清组(P＜0.01).结论 NF-κB及MAPKs信号通路是HSP60诱导THP-1源性Mp发生炎症反应的关键信号通路,宁心痛颗粒含药血清、APS、LIG、APS配伍LIG可不同程度通过调控以上通路发挥抗炎效果,其中宁心痛颗粒含药血清的效果强.
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温郁金二萜类化合物C抗胃癌作用的实验研究
目的 通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激胃癌细胞株SGC7901,探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶MAPK(p38 MA PK)调控核转录因子(NF)-κB通路在温郁金二萜类化合物C抗炎和诱导胃癌细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的温郁金二萜类化合物C在不同的时间,体外作用于人脐静脉细胞(HUVECs)、胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测其对两种细胞株的增殖抑制率;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组胃癌细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测p65核转位情况,采用Western blot检测各组p38MAPK/P-p38MAPK、p65/P-p65及Cas pase-3/P-Cas pase-3蛋白表达量.结果 温郁金二萜类化合物C对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,并能有效地诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡;温郁金二萜类化合物C能一定程度地减少胃癌细胞SGC-7901 p65核转位发生;Western blot结果提示,p38MAPK、p65蛋白的表达随着温郁金二萜类化合物C浓度的提高而减少,而Caspase-3蛋白的表达则增加(P＜0.05).结论 通过p38MAPK调控p65来激活凋亡执行蛋白Caspase-3是温郁金二萜类化合物C发挥抗炎和抗癌可能的作用机制之一.
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红花提取物对激素性股骨头缺血坏死兔股骨头组织ERK、JNK和P38蛋白表达的影响
目的 探讨红花提取物对激素性股骨头缺血坏死的可能作用机制.方法 将40只成年新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、髓芯减压组、生理盐水+髓芯减压组、红花提取物+髓芯减压组,每组8只.除正常对照组外,其余各组建立激素性股骨头坏死模型.造模成功后,正常对照组和模型对照组不予处理,髓芯减压组仅行髓芯减压术,生理盐水+髓芯减压组采用髓芯减压术配合髓腔内注射生理盐水,红花提取物+髓芯减压组采用髓芯减压术配合髓腔内注射羟基红花黄色素A(7.2 mg/kg).1周后处死兔,取出患侧股骨头,采用免疫印迹法检测组织中ERK、JNK和P38蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,模型对照组ERK1和ERK2表达明显降低,JNK和P38表达明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,髓芯减压组、生理盐水+髓芯减压组和红花提取物+髓芯减压组ERK1和ERK2表达明显升高,JNK和P38表达明显降低(P＜0.05);与髓芯减压组比较,红花提取物+髓芯减压组ERK1和ERK2表达升高明显,JNK和P38表达降低明显(P＜0.05).结论 红花提取物可通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)相关通路,增高ERK的磷酸化水平,降低JNK和P38的磷酸化水平,促进股骨头髓腔内细胞增殖、分化,抑制其凋亡,从而减轻激素导致股骨头缺血坏死的损伤,促进坏死股骨头的修复.
