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056 丝裂原活化蛋白激酶信号通路及其生物学功能
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路广泛存在于哺乳动物细胞中,主要由MAPKKK、MAPKK和MAPK 3类保守的蛋白激酶组成,与多种细胞反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)及机体多种生理病理过程(如脑发育、癌症及糖尿病等)密切相关.本文重点讨论了ERK1/2、JNK、p38及BMK1/ERK5通路的激活机制、下游底物及其生物学功能的研究进展.
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体外受精-胚胎移植对胎盘滋养层细胞MAPK信号通路的影响研究
目的 观察IVF-ET技术对早期胎盘滋养层细胞MAPK信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响. 方法 IVF-ET周期中双胚胎移植后妊娠7～8周,经超声引导下减胎获得的胎盘绒毛组织作为研究组(IVF-ET组,28例),自然妊娠双胎7～8周人工流产中获得的胎盘绒毛组织作为对照组(8例).利用AffymetrixHG-U133 Plus 2.0基因芯片对两组胎盘绒毛组织进行芯片杂交分析.用定量反转录聚合酶链反应(qRT PCR)在两组胎盘绒毛组织中验证其中的8个差异表达基因,从基因芯片数据中选取差异表达基因进行无监督聚类分析和基因本体(GO)功能生物信息学分析. 结果 与对照组相比,IVF-ET早期胎盘MAPK信号通路有32个差异表达基因(差异倍数≥2倍),13个基因上调,19个基因下调.上调基因是PLA2G12B、JUN、RPS6KA3、ACVR1B、FGF 18、PRKACB、RASGRP3、PLA2G4A、FGFR4、PDGFRA、CACNB2、RPS6KA2和SOS1,下调基因是STK4、GNG12、MAPK9、DUSP16、IL1R2、MAP3K8、BRAF、STK3、HSPA2、HSPB1、DUSP4、EGFR、IL1R1、TGFB1、RASA1、RPS6KA5、GADD45G、PLA2G2A和DUSP5.经qRT-PCR检测,与对照组相比,IVF-ET组8个MAPK信号通路基因成员中JUN、PLA2G4A、PDGFRA和SOS1上调,MAPK9、EGFR、TGFB1和GADD45G下调,与基因芯片检测结果一致.MAPK信号通路基因定位显示,IVF-ET组胎盘绒毛组织中受到影响的基因主要位于MAPK信号通路的上游. 结论 IVF-ET来源的早期胎盘MAPK信号通路基因表达与自然妊娠早期胎盘中存在差异,差异的基因涉及MAPK信号通路的多种关键功能,进而可能影响IVF-ET胎盘早期发育和功能.
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MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用
目的 研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制.方法 用4 mmol/L的AlCl3 ·6H20染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂zVAD-fmk(20 μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变.结果 与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P＜0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P＜0.05).与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P＜0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P＜0.05).与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P＜0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P＜0.05).结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡.
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降糖消渴颗粒对实验性糖尿病大鼠心肌MAPK信号通路影响
目的:观察降糖消渴颗粒对实验性糖尿病大鼠心肌病理形态及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,研究其对糖尿病心肌病的作用及机制.方法:SD大鼠高脂饲料喂养4周后结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 30 mg/kg,建立2型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠按血糖随机分为模型组、阳性对照组(吡格列酮片1.5 mg/kg BW)、降糖消渴颗粒组(9g生药/kg BW),并设正常对照组.干预4周后,检测各组大鼠心脏质量指数;心肌组织切片并用HE染色,观察药物对糖尿病大鼠心肌组织病理形态的影响;应用western-blot法检测心肌MEK1/2,p38 MAPK,p-p38 MAPK的蛋白表达情况.结果:降糖消渴颗粒组大鼠心脏质量指数明显低于模型组(P＜0.05),降糖消渴颗粒对实验性糖尿病大鼠心肌组织的病理改变有改善作用,同时能下调糖尿病大鼠心肌组织MEK1/2,p38 MAPK总蛋白表达,且能减少p-p38 MAPK蛋白量(P＜0.05),提示其对糖尿病大鼠心肌MAPK信号通路具有抑制作用.结论:降糖消渴颗粒能够通过调节心肌组织MAPK信号通路,改善心肌纤维化及心肌细胞凋亡,从而实现延缓糖尿病心肌病进展的作用.
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白桦脂醇通过ER/MAPK信号通路对A375细胞黑素合成及机制
目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇及加入受体阻断剂(ICI182780)后对A375细胞的黑素合成及机制的影响.方法:将1 μmol· L-白桦脂醇作用于A375黑素细胞,实验分为空白组(DMEM完全培养液),雌二醇组(1×l0-3μmol· L-1),白桦脂醇组(1 μmol·L-1),白桦脂醇+ICI182780组(1μmol· L-1+1 μmol· L-1).用NaOH裂解法检测黑素含量、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)测定雌激素受体/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38 MAPK,ERβ,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白及其mRNA表达.结果:与空白组比较,白桦脂醇组和白桦脂醇+ ICI182780组对A375细胞黑素合成有显著抑制作用(P＜0.01);1μmol· L-1的白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达有不同程度的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01),对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达也有不同程度的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01).与白桦脂醇组比较,ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞黑素合成的抑制作用(P＜0.01);ICI182780可以逆转白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白表达的抑制作用及对ERK2,MITF,TRP-1 mRNA的表达的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01).结论:白桦脂醇能够通过ER/MAPK信号通路下调MITF,TYR,TRP-1及TRP-2蛋白表达量,从而减少黑素合成.
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半夏白术天麻汤对痰湿壅盛型高血压大鼠心肌MAPK信号通路的影响
目的:通过观察半夏白术天麻汤对痰湿壅盛型高血压大鼠丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响,探讨其逆转心肌肥厚的机制.方法:选取40只自发性高血压大鼠(SHR)纳入造模组,喂食高脂饲料诱导痰湿壅盛型高血压模型;另取10只SHR及WKY大鼠纳入对照组,喂食普通饲料;两组均持续饲养20周.20周后造模组大鼠分为半夏白术天麻汤低、高剂量组(6.90,13.8 g·kg-1·d-1),替米沙坦组(6.33 g·kg-1·d-1)和模型组(等量生理盐水),与SHR及WKY组(等量生理盐水)一起ig12周.检测各组大鼠体重、血压变化;心脏超声观察各组大鼠左室形态和功能;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),一氧化氮(NO)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织形态;免疫组化法观察大鼠心肌组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)的分布;实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)检测大鼠心肌组织中血管紧张素转换酶(ACE),AT1,原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(c-Raf),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(ERK1),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(ERK2)的mRNA表达.蛋白质免疫印迹(Western blot)检测心肌组织中p-c-Raf,p-ERK1/2蛋白的表达.结果:持续饲养大鼠20周后,成功建立了痰湿壅盛型高血压大鼠模型.用药12周后,与SHR模型组比较,半夏白术天麻汤高、低剂量组和替米沙坦组的体重均显著下降(P＜0.05).半夏白术天麻汤高剂量组和替米沙坦组的的血压在用药第4周时出现显著下降(P＜0.05),半夏白术天麻汤低剂量组在用药第8周时血压显著下降(P＜0.05).用药后半夏白术天麻汤高剂量组与替米沙坦组的舒张末期室间隔厚度(IVSd),左室舒张末期后壁厚度(LVPWd),左室质量(LVM),左室质量指数(LVMI)显著降低(P＜0.05),左室舒张末期内径(LVEDd)显著升高(P＜0.05),心功能显著改善.半夏白术天麻汤高剂量组及替米沙坦组心肌组织中的AngⅡ,TNF-α,IL-6显著下降(P＜0.05),NO显著上升(P＜0.05);半夏白术天麻汤低剂量组的NO显著上升(P＜0.05).半夏白术天麻汤高剂量组和替米沙坦组的心肌组织形态改善明显,免疫组化结果显示其AT1受体分布减少.半夏白术天麻汤高剂量组和替米沙坦组心肌组织中ACE,AT1,c-Raf,ERK1,ERK2的mRNA表达下降(P＜0.05),Western blot半定量分析显示半夏白术天麻汤高、低剂量组和替米沙坦组心肌组织中p-c-Raf,p-ERK1/2磷酸化活性降低(P＜0.05).结论:半夏白术天麻汤能够逆转痰湿壅盛型高血压大鼠心肌肥厚,相关机制与降低MAPK信号通路的活性、抑制心脏局部组织肾素血管紧张素系统的激活有关.
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白桦脂醇对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控机制的研究
目的:探讨白桦脂醇治疗黄褐斑的内在作用机制.方法:选择对数生长期的A375细胞,培养24 h,弃掉液体,然后分组并加入不同浓度药液200 μL,组别设定为空白组、雌二醇组(1×10-3μmol·L-浓度的雌二醇)和白桦脂醇组(设定浓度的白桦脂醇),每组均设置6个复孔.用白桦脂醇干预A375细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;NaOH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR)活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测TYR,酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的表达,及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路中关键蛋白激酶ERK1,ERK2,JNK2的mRNA表达.结果:与空白组比较,白桦脂醇在1,1 ×10-1,1 ×10-2,1 ×10-3 μmol·L-1剂量下可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,1 μmol·L-白桦脂醇可明显下调A375细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA表达,以及ERK1,ERK2,JNK2 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:白桦脂醇可能是通过抑制TYR活性和/或下调TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制了A375细胞中黑素的合成,并且这种作用与抑制ERK1,ERK2,JNK2的基因表达有关.
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三氧化二砷联合丹参酮胶囊抗肝癌细胞bel-7404的研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合丹参酮胶囊对体外培养的人肝癌bel-7404细胞增殖和凋亡的影响及其信号转导机制.方法:以不同浓度的As2O3、丹参酮胶囊分别组成单药组和联合组,另设空白对照组.采用CCK-8法检测增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双标法检测凋亡率,Western blot法检测Bcl-2、cleaved caspase-3等凋亡相关蛋白影响.后检测MAPK的磷酸化水平分析凋亡信号转导机制,MAPK抑制剂实验进一步证实诱导凋亡的分子机制.结果:与单药组比较,两药联合可明显抑制细胞增殖、提高凋亡率(P＜0.01);联合组可显著下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、Survivin的表达,同时上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP促凋亡蛋白的表达.结论:As2O3联合丹参酮胶囊作用bel-7404细胞具有协同增效作用,其协同机制可能与线粒体途径和激活JNK、p38 MAPK信号通路有关.
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南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响
目的:探讨南蛇藤提取物对人食管鳞癌TE-8细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:MTT法检测不同质量浓度的南蛇藤提取物作用于TE-8细胞24、48h后细胞的增殖情况.南蛇藤提取物作用TE-8细胞24h后,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;JC-1试剂盒检测线粒体膜电位的损伤;TUNEL法检测DNA损伤情况;Western blot法检测丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况.结果:南蛇藤提取物能明显抑制人食管鳞癌TE-8细胞的增殖,呈时间及浓度依赖;南蛇藤提取物能促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位,诱导细胞内DNA损伤,阻断MAPK信号通路的表达,呈浓度依赖.结论:南蛇藤提取物能够抑制TE-8细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物抑制MAPK信号通路的表达有关.
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疏风宣肺方及解表清里方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织中TLR3、P38、 JNK表达的影响
目的:研究流感病毒性肺炎小鼠肺组织Toll样受体Ⅲ(TLR3)、促分裂原活化蛋白激酶13 (P38)、促分裂原活化蛋白激酶8 (JNK)表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用.方法:制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方大、中、小剂量组,解表清里方大、中、小剂量组.提取总RNA,采用基因芯片Pathway分析,挑选参与MAPK信号传导通路相关的靶基因.同时,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术在mRNA和蛋白表达水平对TLR3、P38、JNK的表达进行验证.结果:肺炎模型组差异表达基因Tlr3、Mapk8、Mapk13明显上调,较空白组差异显著.疏风宣肺方中小剂量和解表清里中剂量组对差异表达基因Tlr3、Mapk8、Mapk13表达有显著的下调作用.qRT-PCR和Western blot法结果显示,肺炎模型组TLR3、JNK、P38的mRNA和蛋白表达较空白组显著升高(P＜0.05,P＜0.01).疏风宣肺方中、小剂量组和解表清里方中剂量组对TLR3、JNK、P38的mRNA和蛋白有显著抑制(P＜0.05,P＜0.01).且疏风宣肺方的治疗作用存在量效关系,剂量越小,疗效越好.其治疗效果比较如下:疏风宣肺方小剂量组＞解表清里方中剂量组＞疏风宣肺方中剂量组＞解表清里方小剂量组.该结果和基因芯片表达的结果相符.结论:疏风宣肺方和解表清里方可能通过抑制以TLR3介导MAPK信号通路中JNK和P38过度活化来拮抗肺组织炎症损伤和细胞凋亡,从而发挥抗病毒作用.
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苦参碱通过MAPK信号转导通路促进U937细胞凋亡
目的:探讨苦参碱(mattine,Mat)对人淋巴瘤细胞株(U937)的抗癌作用及其分子机制.方法:用0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 g·L~(-1)Mat处理U937细胞后,分别采用倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学变化;台盼蓝拒染法及MTT实验检测细胞增殖抑制作用;Westem blot方法检测细胞MAPK的磷酸化活性.结果:0.2 g·L~(-1) Mat对人组织淋巴瘤U937细胞的增殖有抑制作用;0.2 g·L~(-1) Mat作用U937细胞48 h后,倒置显微镜下可见细胞数目减少,有些细胞变小、变圆,随着Mat作用浓度的增加,U937细胞逐步出现增多的凋亡细胞;Mat可以抑制U937细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性.结论:Mat可以在体外抑制人淋巴瘤细胞U937的增殖作用,诱导其凋亡,并且Mat可能通过抑制U937细胞中ERK的活性,提高p38和JNK的活性发挥其诱导凋亡作用.
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芒果苷对慢性炎症MAPK信号通路的影响
目的:探讨芒果苷调控MAPK信号通路而抑制脂多糖(LPS)诱导慢性炎症的机制.方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药泼尼松5 mg·kg-1·d-1组与芒果苷200,100,50 mg·kg-1·d-1组.以LPS间断尾静脉注射建立慢性炎症模型,进行大鼠全血白细胞计数,ELISA测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)；RT-PCR检测白细胞MAPK信号通路p8,ERK,JNK基因表达.结果:与模型组比较,芒果苷200 mg·kg-1组全血白细胞总数与血清TNF-α,IL-6,sICAM-1水平明显降低(P＜0.05),白细胞ERK,JNK基因表达下调(P＜0.05),p38基因表达无统计学差异.结论:芒果苷显著抑制LPS诱导慢性炎症的作用机制与其下调MAPK信号通路中ERK,JNK基因表达而降低炎症因子水平有关.
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淫羊藿苷通过影响MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖作用研究
研究淫羊藿苷(ICA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,以及对增殖细胞核抗原(PCNA)表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.以ox-LDL(50 mg·L-1)诱导VSMC增殖,采用MTT法检测ICA对ox-LDL诱导VSMC增殖的抑制作用;Real-time PCR和Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内细胞周期相关蛋白PCNA基因及蛋白表达的影响;Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内p38MAPK,ERK1/2,JNK信号通路相关信号蛋白磷酸化的影响.结果显示,经ox-LDL(50 mg·L-)刺激后,VSMC增殖活性显著增强,细胞存活率显著提升,S期、G2/M期细胞显著增加,G0/G1期细胞显著减少;同时,PCNA基因及蛋白表达水平显著提升;不同浓度的ICA(40,20,10 μmol·L-)可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,减少S期、G2/M期细胞,增加G0/G1期细胞,降低ox-LDL诱导的PCNA基因及蛋白的表达水平,下调ox-LDL诱导的p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达,但不影响p-JNK蛋白的表达.上述结果表明,ICA对ox-LDL诱导的VSMC增殖具有抑制作用,可能通过降低PCNA表达和阻断p38MAPK和ERK1/2信号通路抑制VSMC增殖.
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槐耳清膏抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭作用及其机制研究
该研究探讨槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的抑制作用及其相关分子机制.采用CCK-8法检测槐耳清膏对PC3细胞的增殖抑制作用.采用流式细胞术分析槐耳清膏给药后PC3细胞凋亡及细胞周期的变化.采用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分析给药后PC3细胞侵袭与迁移能力的变化.通过Western blot法,检测槐耳清膏给药后与侵袭迁移相关的EMT蛋白标志物表达水平的变化及MAPK信号通路中关键蛋白磷酸化水平的变化.结果显示,槐耳清膏可以明显抑制人前列腺癌PC3细胞的增殖.槐耳清膏8g.L-1作用于PC3细胞48 h后,细胞凋亡率较对照组明显升高,且细胞发生明显的S期阻滞.槐耳清膏给药后可以明显降低PC3细胞的侵袭与迁移能力,并且能够下调N-cadherin和TCF8/ZEB1的表达水平和上调E-cadherin的蛋白表达水平,表明槐耳清膏能够促进PC3细胞MET的发生,同时还发现MAPK信号通路中的关键蛋白JNK和ERK的磷酸化水平明显下降.因此,槐耳清膏能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和迁移侵袭能力,这可能与其调控EMT及抑制MAPK信号通路有关.
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知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究
考察知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的作用及机制 分析.在裸鼠皮下荷瘤模型中,知母皂苷AⅢ组与模型组相比,显著降低瘤重.知母皂苷AⅢ呈剂量 依赖性抑制U87MG细胞的体外增殖;呈剂量依赖性降低β-Catenin,Cyclin D1,Bcl-2的蛋 白表达,同时升高p21在蛋白和基因水平的表达;降低ERK磷酸化水平,抑制β-Catenin的核 转移,同时提高p38和JNK蛋白的磷酸化水平.联用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后可逆 转知母皂苷AⅢ处理而提高的p21和降低的β-Catenin的蛋白表达.知母皂苷AⅢ部分通过干预 MAPK及Wnt/β-Catenin信号通路而抑制脑胶质瘤U87MG的增殖.
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补肾聪耳方对药物性耳聋模型大鼠MAPK信号通路相关蛋白的影响
目的 探讨补肾聪耳方治疗药物性耳聋的可能作用机制.方法 将SD大鼠24只随机分为空白组、模型组及中药组各8只.模型组和中药组采用肌肉注射硫酸庆大霉素注射液100 mg/(kg·d)共14天的方法造成药物性耳聋大鼠模型.中药组在造模的同时给予补肾聪耳方2.2g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予生理盐水4ml/(kg·d)灌胃.14天后观察各组大鼠听性脑干反应(ABR)阈值,并测定耳蜗组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)的表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠ABR阈值升高,耳蜗组织JNK蛋白表达升高,而ERKI和ERK2蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,中药组大鼠ABR阈值降低,耳蜗组织JNK蛋白表达下调,而ERK1、ERK2蛋白表达升高(P＜0.05). 结论 补肾聪耳方可能通过调节MAPK信号通路相关蛋白的表达,从而降低ABR阈值以治疗药物性耳聋.
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肾康灵对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞增殖后MAPK信号通路的影响
目的 探讨肾康灵干预小儿原发性肾病综合征(PPNS)的作用机制.方法 将诱导系膜细胞(MCs)随机分为正常对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+CXCR6(CXCL16受体CXCR6)组、肾康灵低浓度组(1.5 g/ml)、肾康灵高浓度组(3.0 g/ml)、阿托伐他汀低浓度组(50 μmol/L)、阿托伐他汀高浓度组(100 μmol/L),观察各组MCs的CXCL16、CD36蛋白含量、MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)及核因子-κB p65(NF-κB p65)的磷酸化水平. 结果 ox-LDL+CXCR6组较正常对照组CXCL16、CD36蛋白含量、MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)及NF-κBp65的磷酸化水平显著升高(P＜0.01);与ox-LDL组及ox-LDL+ CXCR6组比较,肾康灵低、高浓度组及阿托伐他汀低、高浓度组的CXCL16、CD36蛋白含量、p38、SAPK/JNK、NF-κB p65的磷酸化水平显著降低(P＜0.01),肾康灵低、高浓度组及阿托伐他汀高浓度组的ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01);肾康灵高浓度组CXCL16、CD13蛋白含量、SAPK/JNK、NF-κB p65的磷酸化水平明显低于阿托伐他汀低浓度组(P＜0.05). 结论 肾康灵可能通过抑制MAPK信号通路相关蛋白(p38、ERK1/2、SAPK/JNK)、NF-κB p65及CXCL16、CD36,有效抑制MCs的增殖,从而实现减轻或延缓肾小球纤维化的作用.
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PD98059对急性淋巴细胞白血病细胞MAPK信号通路的抑制作用
本研究检测阻断Ras/Erk信号通路对原代人类急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达的影响.筛选PD98059作用的佳有效浓度和时间,采用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测PD98059作用于原代ALL细胞前后和正常人原代细胞的目的基因的表达水平.结果表明:与正常人原代细胞相比,处理前原代ALL细胞c-fos、TAK1 mRNA的相对表达升高(P值分别为0.014和0.017).经PD98059处理后原代ALL细胞中c-fos、c-jun、TAK1 mRNA的相对表达情况为:c-fos、c-jun mRNA 7个样本均低表达,TAK1 mRNA 5个样本低表达,2个样本高表达;较处理前c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达明显下降(P值均为0.018).处理后原代ALL细胞与正常人原代细胞相比,c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达无统计学差异.结论:原代ALL细胞的c-fos和TAK1基因的活性增高,阻断ALL细胞的Ras/Erk信号通路可导致重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达明显下降.
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MAPK信号通路参与哇巴因诱导Jurkat细胞的增殖
本研究目的是探讨哇巴因(ouabain)对急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat的作用及机制.采用MTT、RT-PCR、Western blot等方法观察低浓度哇巴因对Jurkat细胞的作用,同时检测丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK1/2)的磷酸化程度及c-myc基因的表达水平.结果表明,低浓度哇巴因(＜1×10-7mol/L)可以诱导Jurkat细胞增殖,其作用呈剂量及浓度依赖性;同时细胞内MAPK(ERK1/2)磷酸化程度增强,并检测到c-myc基因表达水平增高.结论:哇巴因作用于细胞膜钠泵,激活了细胞内MAPK信号通路,从而促进Jurkat细胞增殖,其作用与c-myc基因表达的调控有关.
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多发性骨髓瘤中MAPK信号通路对BLyS表达的调控研究
目的 研究多发性骨髓瘤(MM)细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的表达及活化情况,探讨MAPK信号通路对MM细胞B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达变化的影响及对MM细胞增殖与存活的影响,并初步探讨MAPK信号通路在IFN-γ(MM重要的促生长因子)上调MM细胞BLyS表达过程中的作用.方法 应用Western blot方法检测MM细胞中蛋白ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38及p-p38的表达情况；应用RT-PCR及Western blot检测MAPK信号通路对BLyS表达的影响；应用WST-1法检测靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125对MM细胞增殖与存活的影响.结果 MM细胞株中,除了ERK、JNK及p38的表达外,还有活化蛋白p-JNK的表达；靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125可下调MM细胞BLyS的表达,其激动剂茴香霉素(anisomycin)可上调BLyS的表达；IFN-γ可上调MM细胞BLyS的表达,SP600125可部分抵消IFN-γ对BLyS的上调作用；SP600125可抑制MM细胞的增殖与存活.结论 MM细胞中有JNK/SAPK信号通路的活化；JNK/SAPK信号通路的活化程度与BLyS的表达高低呈正相关；JNK/SAPK信号通路在IFN-γ上调MM细胞BLyS表达过程中发挥重要作用.
