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ERK1/2信号途径与弓形虫侵入细胞及胞内增殖关系的研究
目的:探讨阻断细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)信号途径对弓形虫速殖子侵入宿主细胞及在胞内增殖的影响.方法:姬氏染色法检测ERK1/2途径不同时间及不同剂量的抑制剂U0126或PD98059作用下宿主细胞感染弓形虫速殖子的百分率,根据细胞感染率和感染细胞内虫荷量分析ERK1/2途径抑制剂对速殖子在细胞中增殖的影响.结果:速殖子在细胞培养系统中以1、10和100/μmol/L U0126或PD98059作用3h、6h和9h后,前者细胞培养孔中的细胞感染率分别较对照组平均下降34.62%(P<0.01),53.55%(P<0.01)和67.76%(P<0.01),后者分别较对照组平均下降22.67%(P<0.01)、52.21%(P<0.01)和58.99%(P<0.01);感染细胞感染速殖子率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:阻断ERK1/2途径的不同信号位点对弓形虫速殖子侵入宿主细胞影响不同,ERKl/2途径在速殖子侵入宿主细胞起主要作用,但对侵入后的增殖无明显影响.
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PD98059对急性淋巴细胞白血病细胞MAPK信号通路的抑制作用
本研究检测阻断Ras/Erk信号通路对原代人类急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达的影响.筛选PD98059作用的佳有效浓度和时间,采用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测PD98059作用于原代ALL细胞前后和正常人原代细胞的目的基因的表达水平.结果表明:与正常人原代细胞相比,处理前原代ALL细胞c-fos、TAK1 mRNA的相对表达升高(P值分别为0.014和0.017).经PD98059处理后原代ALL细胞中c-fos、c-jun、TAK1 mRNA的相对表达情况为:c-fos、c-jun mRNA 7个样本均低表达,TAK1 mRNA 5个样本低表达,2个样本高表达;较处理前c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达明显下降(P值均为0.018).处理后原代ALL细胞与正常人原代细胞相比,c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达无统计学差异.结论:原代ALL细胞的c-fos和TAK1基因的活性增高,阻断ALL细胞的Ras/Erk信号通路可导致重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达明显下降.
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PD98059对高原红细胞增多症患者骨髓CD71+、CD235a+有核红细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究Ras/ Raf/MEK/ERK信号通路蛋白激酶MEK特异性抑制剂PD98059对高原红细胞增多症(HAPC)患者骨髓CD71+、CD235a+有核红细胞增殖和凋亡影响及HAPC发病机制.方法:采用免疫磁珠法分选16例HAPC患者及16例对照者骨髓CD71+、CD235a+有核红细胞,分别加入5、10和20μmol/L不同浓度PD98059及DMSO溶剂,低氧培养72 h,以Annexin V和PI双染流式细胞术测定细胞凋亡,CCK8检测细胞增殖.同时观察加入5、10和20 μmol/L等不同浓度PD98059及DMSO溶剂对骨髓单个核细胞(BMMNC)红系集落形成能力.结果:HAPC患者骨髓CD71+、CD235a+有核红细胞凋亡率随PD98059浓度增加上升(r =0.807,P＜0.01);增殖率随PD98059浓度增加而下降(r=0.502,P＜0.01).HAPC患者骨髓BMMNC红系集落形成率随PD98059浓度增加而下降(r=0.504,P＜0.01),7和14 d时各组比较均有统计学差异(P＜0.05).结论:MEK特异性抑制剂PD98059对HAPC患者CD71+、CD235a+有核红细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,对红细胞过度积累有一定的抑制作用.
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ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对慢性高原病患者骨髓有核红细胞中Ras、BRaf、MEK、ERK1/2表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对Ras、B型丝/苏氨酸蛋白激酶(BRaf)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、细胞信号调节激酶1/2 (ERK1/2)表达的影响,以期为慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)的基础研究和临床治疗探讨新的途径.方法:选取CMS患者16例,取骨髓液分离单个核细胞,以CD71与CD235a抗体磁珠分选阳性细胞,将细胞分为5组:空白对照组、DMSO溶剂组及PD98059 5、10和20 μmol/L组.在低氧条件下培养72 h,应用ELISA法测定培养骨髓有核红细胞上清液中Ras-GTP水平,RT-PCR法测定骨髓有核红细胞中BRaf、MEK、ERK1/2 mRNA的表达,Western blot方法检测骨髓有核红细胞中p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达.结果:PD98059对各组Ras-GTP的水平无明显影响(P=0.798).溶剂组与空白对照组相比,BRaf、MEK mRNA的表达水平差异无统计学意义(P =0.826、P=0.298).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组ERK1/2 mRNA的表达水平差异有统计学意义(P =0.001、P=0.002).溶剂组与空白对照组相比,p-BRaf、p-MEK蛋白的表达差异无统计学意义(P =0.370、P=0.351).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组p-ERK1/2蛋白水平差异有统计学意义(P ＜0.001、P＜0.007).结论:PD98059能下调骨髓有核红细胞ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2蛋白的表达.Ras/Raf/MEK/ERK 1/2通路是调控CMS骨髓有核红细胞的主要信号传导途径,可能参与了慢性高原病的发病过程.
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PD98059下调GST-π表达增强人肠癌RKO 细胞对奥沙利铂的敏感性
目的 探讨在肠癌RKO 细胞中,MAPK/ERK 特异性抑制剂PD98059 对奥沙利铂药物敏感性的影响及谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)在这一过程中的作用.方法 采用MTT 法测定奥沙利铂和(或)PD98059 处理后对人肠癌RKO 细胞的增殖抑制影响;Western-blot 方法检测PD98059 作用人肠癌RKO 细胞24 h 后,RKO 细胞中p-ERK 及GST-π蛋白的表达.结果 奥沙利铂作用人肠癌RKO 细胞24、48 和72 h,IC50 值分别为38.72、23.41、10.81 μg/ml,20 μmol/L PD98059 预处理RKO 细胞24 h后,再加入奥沙利铂培养24、48 和72 h,联合用药组细胞增殖率明显低于对照组,RKO 细胞对奥沙利铂的药物敏感性显著增强.20 μmol/L PD98059 作用RKO 细胞24 h 后,p-ERK 蛋白表达明显下调,GST-π蛋白表达亦明显下调.结论 PD98059 通过有效抑制ERK 通路,进一步下调人肠癌RKO 细胞内GST-π的表达,增强RKO 对奥沙利铂的药物敏感性.
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MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎的影响
目的： MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎（AP）病程及相关炎症因子的影响。方法72只雄性KM小鼠被随机分为4大组，每大组再根据时间段的不同再分3小组，每小组6只小鼠，即（1）雨蛙肽＋10%二甲基亚砜（DMSO）（AP 组）6 h、12 h、18 h 组，（2）雨蛙肽＋PD98059（干预组）6 h、12 h、18 h 组，（3）NS＋PD98059（对照一组）6 h、12 h、18 h 组，（4）NS＋10%DMSO（对照二组）6 h、12 h、18 h组。雨蛙肽以100μg/kg体重给予小鼠腹腔内注射诱导AP模型，1次/h，共6次。需注射PD98059的两大组在AP诱导前30 min与诱导后1 h将 PD9805910 mg/kg体重溶解于10%的DMSO （1 mg/ml）中，然后进行腹腔注射。作为对照的两大组则腹腔内注射相应剂量的生理盐水以代替雨蛙肽或10%DMSO以代替PD98059。检测各6 h组血清淀粉酶，整个胰腺组织湿干比，各12 h组胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）浓度，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰腺组织中细胞间黏附分子-1（ICAM-l） mRNA的表达和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清可溶性ICAM-l （sICAM-1），肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度，并观察各18 h组胰腺组织的病理学改变。结果在PD98059干预的6 h组，其淀粉酶浓度及湿干比均明显低于AP组[（19783±263）U/L vs.（10919±547）U/L，8.702±0.445 vs.6.800±0.600，P＜0.05]；在PD98059干预的12 h组，MPO吸光度值及血清sICAM-1与血清TNF-α水平均低于AP组[（0.171±0.014） U/g vs.（0.040±0.009）U/g，（212.85±22.03）pg/ml vs.（169.31±15.16）pg/ml，（70.9±7.8）pg/ml vs.（50.8±9.8） pg/ml，P＜0.05]，ICAM-1 mRNA 也较AP组要低很多（0.42±0.04 vs.0.22±0.03，P＜0.05）；在PD98059干预的18 h组，其病理组织学评分经过Kruskal-Wallis秩和检验检测后，其H值＝18.120，P＜0.05，表明AP 组小鼠病理改变大，PD98059的干预可减轻炎症程度。各项数据表明 PD98059的干预并不能使胰腺炎病程降到正常。结论 MAPK通路抑制剂PD98059能在一定程度上改善雨蛙肽诱导的小鼠AP，其保护机制可能与抑制部分MAPK信号通路及下调黏附分子的表达有关。
关键词： 胰腺炎 丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂 胞间黏附分子1 雨蛙肽 PD98059 -
ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Western blot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Western blot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白表达.结果:MTT法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制胃癌MGC803细胞增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059的有效浓度为25 μmol/L,在此浓度下有效时间为24 h;Western blot法检测结果显示PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P-ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;RT-PCR法和Western blot法检测结果显示PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌MGC803细胞RECK mRNA和蛋白表达增加,MMP-9 mRNA和蛋白表达下降.结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,从而抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖、生长.
关键词： ERK1/2信号通路 人胃癌细胞 RECK基因 基质金属蛋白酶9 PD98059 -
丝裂原蛋白激酶在糖尿病慢性血管并发症中的作用
目的 研究在高糖条件下人血管平滑肌细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)活性、c-fos表达与糖尿病慢性血管并发症的发病机制的关系.方法 新生儿脐动脉原代培养获得人血管平滑肌细胞.高糖为刺激因素,PD98059为MAPK特异性抑制剂,甘露醇作渗透压对照.同位素示踪法测定MAPK活性,免疫细胞化学方法检测c-fos表达.结果 高糖条件培养下人血管平滑肌细胞内MAPK活性升高(77358±1822)、与对照组(47830±1946)相比差异有统计学意义(P＜0.05).高糖条件培养下人血管平滑肌细胞c-fos表达增加(0.314±0.058),与对照组(0.245±0.049)相比差异有统计学意义(P＜0.05).PD98059可阻止高糖诱导的c-fos表达.结论 高糖可增加人血管平滑肌细胞MAPK活性及c-fos的表达,MAPK活性的增高与c-fos表达呈正相关.
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雷帕霉素与PD98059联合调控人结直肠癌细胞周期和mTOR信号转导通路
目的 探讨雷帕霉素(RPM)与PD98059对人结直肠癌细胞的联合作用及机制.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测RPM和PD98059对人结直肠癌细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术检测RPM和PD98059对细胞周期的影响,应用免疫印迹法检测RPM和PD98059对于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路相关蛋白的调控.结果 RPM与PD98059对人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、HT29均有生长抑制作用,PD98059的作用具有一定的时间-浓度依赖性.在相同作用条件下,RPM与PD98059的联合抑制效果明显优于PD98059单独用药.RPM与PD98059单独或联合用药对人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、HT29的生长周期均有调控作用(P＜0.01),但作用位点不同.RPM与PD98059可下调mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白的磷酸化水平,对SW480和HCT116细胞的总体4E-BP1蛋白水平也具有调控作用,以二者的联合作用为显著.RPM与PD98059对SW480、HCT116、HT29细胞的mTOR和p70s6K总体水平无明显影响.结论 RPM与PD98059可协同抑制人结直肠癌细胞株SW480、HCT116、HT29的生长,并阻滞其细胞周期.其作用机制可能涉及对mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的调控.
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ERK1/2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用
目的:研究黄芪苷Ⅳ(ASP)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.方法:用200 μmol/L的H2O2处理细胞6h,采用MTT,法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、总超氧化物歧化酶(T - SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn - SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平.结果:在H2O2浓度为200 μmol/L作用6h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200 μmol/LH2O2作用6h建立模型.与H2O2组比较,10 mg/L及20 mg/L ASP均显著提高细胞存活率(P<0.01),使细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01),T-SOD及Mn - SOD活力显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01).10 mg/L及20 mg/L ASP均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p - ERK1/2蛋白的表达(P<0.01),当用PD98059(ERK1/2的抑制别剂)预处理后,AST的作用则被取消.结论:黄芪苷Ⅳ可以通过ERK1/2通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.
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PD98059对高血糖加重大鼠全脑缺血再灌注神经细胞损伤的影响
①目的 探讨PD98059在高血糖加重大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.②方法 将健康雄性SD大鼠40只分为正常组、全脑缺血再灌注组(IR)、糖尿病+全脑缺血再灌注组(DCI)和糖尿病+全脑缺血再灌注+PD98059抑制剂组(PD),采用链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型.PD组于缺血前20min经尾静脉注入PD98059.采用HE染色观察神经细胞形态变化、采用神经功能学检测表,观察大鼠精神状态、部分感觉和运动能力.③结果 与IR组比较,DCI组光镜下神经元数目减少,结构疏松,神经元细胞存活密度降低,神经功能评分低于IR组(P<0.05);与DCI组比较,PD组光镜下细胞周围大量空泡,几乎看不到正常神经细胞,神经元细胞存活密度降低,神经功能评分低于DCI组(P<0.05).④结论 高血糖可加重大鼠全脑缺血再灌注神经细胞损伤; PD98059进一步加重神经细胞的损伤.
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PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导影响的研究
目的 探讨MEK1抑制剂PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导以及细胞增殖的影响.方法 四唑盐比色试验(MTT)法检测PD98059对HL60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察PD98059对HL60细胞凋亡和G0/G1期阻滞的影响,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PD98059对HL60细胞ERK2、p27、Skp2基因表达的影响,免疫组织化学SP法检测ERK2、p27、Skp2蛋白表达的改变情况.结果 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P＜0.05).PD98059能够促进HL60细胞凋亡,该作用具有浓度及时间依赖性(P＜0.05);PD98059作用HL60细胞48 h,随着浓度的增加G0/G1期阻滞增强(P＜0.05).PD98059可使HL60细胞ERK2、Skp2的mRNA及蛋白表达量减少,p27的mRNA及蛋白表达量增加(P＜0.05).结论 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,促进其凋亡,这可能是通过PD98059阻断Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导,影响了ERK2、Skp2、p27等的表达而实现的.
关键词： 细胞外信号调节MAP激酶类 HL-60细胞 PD98059 -
结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径
目的:探讨Ras/Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径.方法:分离获取PBMC,用佛波醇酯(PMA)和离子霉素(IM),CD3mAb或Mtb-Ag刺激不同时间,或PBMC先经PD98059处理后再刺激培养;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD69分子的表达;计数培养扩增10天的细胞数量.结果:PBMC用PMA+IM刺激6小时,总T细胞和γδT细胞中的CD69表达均达高峰(均＞99%),用CD3mAb刺激24小时,均达高峰(均在55%左右),用Mtb-Ag刺激24小时,亦均达高峰,但总T细胞和γδT细胞中CD69分别为16.0%和75.2%;用PD98059预处理PBMC,可明显抑制Mtb-Ag激活的γδT细胞CD69表达和γδT细胞的增殖.结论:Mtb-Ag可特异性激活γδT细胞,其活化信号转导需通过Ras/Erk通路.
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磷酸化ERK1/2在6-OHDA致PC12细胞损伤中的作用
目的 观察细胞外信号调节激酶( ERK1/2)在6-OHDA致PC12细胞损伤的帕金森(PD)细胞模型中所起的作用.方法 6-OHDA处理体外培养的PC12细胞株,建立PD细胞模型.MTT法检测6-OHDA对PC12细胞活力的影响,免疫印迹法研究p-ERK1/2蛋白表达随时间变化的趋势,并检测ERK1/2上游激酶抑制剂PD98059和U0126对6-OHDA诱导ERK1/2磷酸化及凋亡的影响.结果 PC12细胞随6-OHDA作用时间的增加,p-ERK1/2出现表达升高；PD98059和U0126明显抑制6-OHDA所致的ERK1/2磷酸化,明显减低了细胞损伤的程度.结论 在6-OHDA介导的多巴胺神经元损伤中呈现ERK1/2磷酸化,抑制ERK1/2可以6-OHDA引起的PC12细胞损伤,该过程可能在调控PD多巴胺能细胞损伤中起重要作用.
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MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其机制研究
目的:探讨MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其可能的机制.方法:采用不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的MEK抑制剂PD98059处理人结膜上皮细胞(HConEpiC),通过CCK-8法检测不同浓度PD98059作用不同时间(0、12、24、48 h)对人结膜上皮细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度PD98059对人结膜上皮细胞ERK1/2、P-ERK1/2表达的影响.结果:相比对照组(0μmol/L),不同浓度(12.5、25、50、100 μmol/L)PD98059处理后的人结膜上皮细胞增殖率明显下降,呈剂量-效应关系,且随处理时间增加(12、24、48h)其抑制作用也显著增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度PD98059处理人结膜上皮细胞24 h后,其ERK及p-ERK1/2表达随处理浓度增加而降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P＜0.05),且二者表达量与细胞增值抑制率均呈显著负相关(r=-0.995、r=-0.968,P＜0.05).结论:PD98059可抑制人结膜上皮细胞增殖,这可能与其下调ERK表达和减少其活化有关.
关键词： MEK/ERK信号通路 PD98059 人结膜上皮细胞 增殖 -
细胞外调节蛋白激酶在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用
目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)在雌激素促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中的作用及机制.方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象, MTT法检测17β-雌二醇(17β-E2)对MCF细胞增殖的影响,确定实验处理用浓度;MTT法检测PD98059对17β-E2促MCF-7细胞增殖作用的影响,求取其中效抑制浓度;流式细胞术检测细胞周期;TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,Western印迹法检测p-ERK1/2、野生型p53蛋白水平;RT-PCR检测野生型p53 mRNA水平.结果:ERK磷酸化抑制剂PD98059能抑制17β-E2对MCF-7细胞的促增殖作用,具有时效-量效关系,其差异具有显著统计学意义(P＜0.01), 各作用时间点PD98059中效抑制浓度分别为89.28 μmol/L·24 h、39.81 μmol/L·48 h、21.87 μmol/L·72 h.应用PD98059 48 h后,能抑制17β-E2促进MCF-7细胞周期转化作用,使G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少(P＜0.01); 阻抑17β-E2增强MCF-7细胞端粒酶活性的作用(P＜0.05); 增强野生型p53蛋白表达和p53基因转录水平(P＜0.01);p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.01). 结论:ERK在17β-E2促乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期转化中具有重要的作用,其机制与野生型p53转录和端粒酶活性改变有关.
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人参皂苷Rb1和Rg1对海马神经元的影响
目的 探讨人参皂苷(ginsenoside)Rb1和Rg1(GRb1,GRg1)对海马神经元突起生长及神经保护作用及其机制.方法 培养SD新生大鼠海马神经元,分为:正常组、Rb1组、Rg1组、Rb1+API-2(Akt抑制剂)、Rg1+API-2、Rb1+PD98059(MEK抑制剂)和Rg1+PD98059组,培养1 d,用免疫染色观察神经突起的生长.加入Aβ25-35制备海马神经元损伤模型,分为正常组、损伤组(Aβ组)、Rb1组、Rg1组、Rb1+API-2、Rg1+API-2、Rb1+PD98059和Rg1+PD98059,培养48 h,用Hoechst33258染色观察活细胞与凋亡细胞.用Elisa观察培养上清液里神经营养因子的浓度(nerve growth factor,NGF;brain-derived neurotrophic factor,BDNF;neurotrophin-3,NT-3).结果 Rb1和Rg1组神经突起生长高于对照组(P＜0.05);API-2和PD98059显著抑制了Rb1和Rg1诱导的神经突起生长(P＜0.01),API-2的抑制效果强于PD98059;Rg1+API-2组BDNF高于对照组和Rg1组(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05);Rg1组NT-3的浓度高于对照组(P＜0.05);Rb1+PD98059组的NGF高于Rb1组.Rb1和Rg1组海马神经元的凋亡率显著低于损伤组(P＜0.01);PD98059和API-2阻断了Rb1和Rg1对神经元的保护作用(P＜0.01);神经营养因子水平各组间差异无统计学意义.结论 Rb1和Rg1促进海马神经元突起生长及抵抗Aβ25-35损伤,促进神经元的存活.其机制与Akt和ERK1/2的信号通路激活有关,与增加神经营养因子的分泌无关.
关键词： 人参皂苷Rb1和Rg1 海马神经元 神经突起 PD98059 API-2 -
细胞外信号调节激酶在小鼠神经干细胞增殖中的作用
本文旨在探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)对小鼠神经干细胞增殖的影响.分离E14.5小鼠皮层神经干细胞,通过Western blot检测神经干细胞增殖过程中磷酸化ERK1/2的表达情况,以及不同浓度PD98059处理对神经干细胞ERK1/2磷酸化及神经球形成的影响,并用CCK-8法检测PD98059对神经干细胞增殖的影响.结果显示:ERK1/2在体外培养的神经下细胞增殖过程中被激活;PD98059显著抑制ERK1/2磷酸化及神经干细胞的成球率,且存在剂量效应依赖关系;加入PD98059后神经干细胞的生长被抑制.以上结果表明,ERK1/2在小鼠神经干细胞增殖中具有重要的作用,阻断ERK1/2信号通路后可抑制神经干细胞的增殖.
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极低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖及P42活化蛋白激酶活性的影响
目的:研究极低密度脂蛋白(VLDL)对SD大鼠系膜细胞(MCs)的促增生作用以及VLDL对MCs P42有丝分裂原活化的蛋白激酶(P42 MAPK)活性的影响.探讨P42 MAPK介导的细胞内信号转导途径在上述系膜细胞增生中的作用.方法:采用XTT法测定不同时间、不同浓度VLDL对MCs的促增生作用,借助流式细胞术观察细胞凋亡情况以了解VLDL对MCs是否具有毒性作用;通过同位素标记法测定MCs P42 MAPK活性;观察P42 MAPK抑制剂PD98059抑制该激酶后MCs的增生情况以及激酶活性变化.结果:①不同浓度VLDL(10～500μg/m1)、不同时间(6～48h)与XTT光密度(AD)值呈线性关系[r分别为0.911(P＜.01、0.651 P＜0.05)].当VLDL浓度达1000μg/ml时,MCs出现凋亡;②VLDL可以以剂量关系(10～1000μg/ml)促进MCs的P42 MAPK活性(r=.872,P＜0.05);随VLDL刺激时间延长,P42 MAPK活性增加,但不呈线性关系,分别在30 min、6h、48 h出现波峰[分别为(118.67±6.43)cpm/k、(140.50±17.68)cpm/k与(128±5.66)cpm/k];③PD98059抑制了P42 MAPK后,P42 MAPK活性显著降低;不同浓度、不同时间VLDL刺激MCs后的XTTAD值也显著降低.结论:①在一定浓度内(10～500μg/ml)VLDL可以以浓度、剂量依赖性的关系促进MCs的增生,但高浓度则可促进细胞凋亡,具有毒性作用;②VLDL可以活化P42MAPK;③VLDL可以通过P42 MAPK途径介导促进MCs增生,而且可能是仅通过该激酶途径介导促进MCs增生.
关键词： 极低密度脂蛋白 系膜细胞 P42有丝分裂原活化蛋白激酶 PD98059 -
榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨
目的:探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1/2、P38MAPK信号通路的关系.方法:用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验(MTT)法检测细胞增殖情况;Western-blot法检测ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化P38(p-P38)的表达;RT-PCR检测bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数.结果:榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药对(P＜ 0.05);随榄香烯的浓度增加p-ERK1/2蛋白的表达量增加(P＜0.05),总ERK1/2无明显变化;榄香烯(0.08 mg/mL)、PD98059 (50 μmol/L)及榄香烯+PD98059组作用胃癌细胞24 h,p-P38的表达均高于对照组(P＜0.05),且榄香烯+PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高(P＜0.05);随榄香烯浓度的增加,bax mRNA的表达增加,bcl-2 mRNA的表达降低,且榄香烯+PD98059组表现显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组(P＜ 0.05),具有浓度依赖性(P＜ 0.05),且榄香烯+PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组(P＜0.05).结论:榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡.榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERK1/2磷酸化和上调p-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERK1/2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用.
