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骨质疏松肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin 信号通路的研究
该文研究骨质疏松(OP)肾阳虚和肾阴虚证型下左归丸含药血清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达及对成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达的作用.采用手术去卵巢法造成大鼠骨质疏松模型,并在手术10周后,分别注射氢化可的松、灌胃甲状腺素造成大鼠OP肾阳虚及OP肾阴虚模型;用新生24h乳鼠颅骨体外培养得成骨细胞,以碱性磷酸酶和茜素红染色进行鉴定,分别用OP肾阳虚、OP肾阴虚及OP组(对照组)所得的左归丸含药血清、空白血清干预成骨细胞,采用MTS法检测细胞增殖情况,ELISA法检测ALP表达,RT-PCR法检测ERK1/2,β-catenin mRNA的表达,Western blot法检测ERK1/2,β-catenin蛋白表达.结果表明:OP肾阴虚证型下左归丸含药血清在促进成骨细胞增殖、ALP表达、成骨细胞ERK1/2,Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin,ERK1,ERK2 mRNA及蛋白表达方面比OP肾阳虚证型下左归丸含药血清的作用更强.这与“左归丸滋肾阴”的中医理论相吻合,为临床辩证治疗骨质疏松症提供科学依据.左归丸通过ERK1/2和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞的增殖与分化,可能是左归丸防治骨质疏松肾阴虚证的机制之一.
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芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制
目的:探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化(RIF)的作用和机制.方法:将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、芪附汤组(C组)、依那普利组(D组).通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术(UUO)的方法而建立RIF模型.造模成功后,C,D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液;其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共干预3周.各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3周末,分别称量大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(Upro)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)酶.药物干预第3周末,处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾,称重,并留取相应标本,观察肾脏外观和肾小管/间质形态;检测血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA);检测肾组织中上皮型黏钙蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量.结果:芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的cAMP和cAMP/cGMP;减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶,改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积,上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,p-ERK1/2蛋白表达;但是,对Scr,BUN,UA没有影响.芪附汤改善RIF的作用优于依那普利.结论:芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄,它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子——p-ERK1/2蛋白表达,改善肾小管EMT,从而减轻RIF.
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吉妥辛对吉非替尼耐药性非小细胞肺癌的抑制作用
目的 在细胞和动物水平评价强心苷药物吉妥辛对耐药性非小细胞肺癌的抑制作用,并对其抑癌的分子机制进行初步探索.方法 吉妥辛和吉非替尼处理H1975细胞后,用MTS法检测细胞的存活率,流式细胞分析法检测细胞的凋亡率；吉妥辛处理移植瘤裸鼠,测量并计算移植瘤体积；吉妥辛处理H1975细胞后,用Westem blot检测Erk1/2的磷酸化水平.结果 吉妥辛比吉非替尼更有效地抑制H1975的生长(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.05),且能显著抑制裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05).吉妥辛能计量和时间依赖地抑制Erk1/2的磷酸化(P＜0.05).结论 吉妥辛可作为治疗耐药性非小细胞肺癌的潜在替代药物.
关键词： 吉妥辛 H1975 小鼠移植瘤模型 ERK1/2信号通路 -
ERK1/2信号途径与弓形虫侵入细胞及胞内增殖关系的研究
目的:探讨阻断细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)信号途径对弓形虫速殖子侵入宿主细胞及在胞内增殖的影响.方法:姬氏染色法检测ERK1/2途径不同时间及不同剂量的抑制剂U0126或PD98059作用下宿主细胞感染弓形虫速殖子的百分率,根据细胞感染率和感染细胞内虫荷量分析ERK1/2途径抑制剂对速殖子在细胞中增殖的影响.结果:速殖子在细胞培养系统中以1、10和100/μmol/L U0126或PD98059作用3h、6h和9h后,前者细胞培养孔中的细胞感染率分别较对照组平均下降34.62%(P<0.01),53.55%(P<0.01)和67.76%(P<0.01),后者分别较对照组平均下降22.67%(P<0.01)、52.21%(P<0.01)和58.99%(P<0.01);感染细胞感染速殖子率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:阻断ERK1/2途径的不同信号位点对弓形虫速殖子侵入宿主细胞影响不同,ERKl/2途径在速殖子侵入宿主细胞起主要作用,但对侵入后的增殖无明显影响.
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ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对慢性高原病患者骨髓有核红细胞中Ras、BRaf、MEK、ERK1/2表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对Ras、B型丝/苏氨酸蛋白激酶(BRaf)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、细胞信号调节激酶1/2 (ERK1/2)表达的影响,以期为慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)的基础研究和临床治疗探讨新的途径.方法:选取CMS患者16例,取骨髓液分离单个核细胞,以CD71与CD235a抗体磁珠分选阳性细胞,将细胞分为5组:空白对照组、DMSO溶剂组及PD98059 5、10和20 μmol/L组.在低氧条件下培养72 h,应用ELISA法测定培养骨髓有核红细胞上清液中Ras-GTP水平,RT-PCR法测定骨髓有核红细胞中BRaf、MEK、ERK1/2 mRNA的表达,Western blot方法检测骨髓有核红细胞中p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达.结果:PD98059对各组Ras-GTP的水平无明显影响(P=0.798).溶剂组与空白对照组相比,BRaf、MEK mRNA的表达水平差异无统计学意义(P =0.826、P=0.298).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组ERK1/2 mRNA的表达水平差异有统计学意义(P =0.001、P=0.002).溶剂组与空白对照组相比,p-BRaf、p-MEK蛋白的表达差异无统计学意义(P =0.370、P=0.351).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组p-ERK1/2蛋白水平差异有统计学意义(P ＜0.001、P＜0.007).结论:PD98059能下调骨髓有核红细胞ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2蛋白的表达.Ras/Raf/MEK/ERK 1/2通路是调控CMS骨髓有核红细胞的主要信号传导途径,可能参与了慢性高原病的发病过程.
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ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Western blot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Western blot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白表达.结果:MTT法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制胃癌MGC803细胞增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059的有效浓度为25 μmol/L,在此浓度下有效时间为24 h;Western blot法检测结果显示PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P-ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;RT-PCR法和Western blot法检测结果显示PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌MGC803细胞RECK mRNA和蛋白表达增加,MMP-9 mRNA和蛋白表达下降.结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,从而抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖、生长.
关键词： ERK1/2信号通路 人胃癌细胞 RECK基因 基质金属蛋白酶9 PD98059 -
Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响
目的 分析Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响.方法 体外培养后的H9c2心肌细胞分为对照组、Apelin-13组、U0126(ERK1/2抑制剂)组和Apelin-13+U0126四组.对照组:只使用10％的FBS和DMSO处理;Apelin-13组:在对照组基础上分别加入浓度为0.0001,0.001,0.01和0.1μmol/L的Apelin-13(n=5);U0126干预组:在对照组基础上加入浓度为10μmol/L的U0126;Apelin-13+U0126组:在对照组基础上分别加入0.1μmol/L的Apelin-13和10μmol/L的U0126.各组依次恒温培养24 h后,采用MTT法测定H9c2心肌细胞在490 nm处各组的光密度值(OD值,n=5)并计算其细胞增值率,采用Western blot法测定各实验组ERK1/2信号通路磷酸化水平.结果 与对照组比较,U0126干预组所测各细胞指标差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,Apelin-13组的干预显著升高各组H9c2心肌细胞的OD值,促进了H9c2心肌细胞的增殖,升高了心肌细胞的p-ERK1/2表达量;并且0.001～0.1μmol/L Apelin-13四组间,细胞增值率及p-ERK1/2表达量有显著的统计学差异,随Apelin-13剂量的增加,各组的OD值、细胞增殖率及p-ERK1/2表达量亦显著升高(P<0.05).与Apelin-13组比较,Apelin-13+U0126组H9c2心肌细胞的OD值、细胞增值率及p-ERK1/2表达量显著降低(P<0.05).结论Apelin-13促进了H9c2心肌细胞的增殖,并存在显著的剂量依赖性,Apelin-13通过ERK1/2信号通路调控了H9c2心肌细胞的细胞增殖.
关键词： Apelin-13 H9C2心肌细胞 ERK1/2信号通路 -
急性心肌梗死大鼠主动脉组织中Profilin-1蛋白表达与细胞损伤、凋亡及ERK1/2信号通路关联研究
目的 探讨Profilin-1蛋白在急性心肌梗死大鼠主动脉组织中的表达及其与细胞损伤、凋亡及ERK1/2信号通路的关系.方法 20只成年雄性Wistar大鼠随机分为心肌梗死模型组和假手术对照组,每组各10只.对两组大鼠进行急性心肌梗死模型处理.Western免疫印迹法测定两组大鼠急性心肌梗死后升主动脉组织内Profilin-1蛋白和细胞外信号激酶磷酸化蛋白(pERK1/2)的表达量,流式细胞术检测心肌细胞内皮微颗粒(EMP),分光光度计法测定一氧化氮(NO)水平、心肌损伤指标肌钙蛋白T(cTnT)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,RT-PCR法检测心肌凋亡因子P53、Fas、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,模型组大鼠的主动脉组织Profilin-1和pERK1/2蛋白表达水平较高(P<0.05);模型组EMP值较高,NO水平较低(P均<0.05);心肌组织中cTnT、CK-MB、P53、Fas和Bax因子mRNA表达较高,Bcl-2 mRNA水平较降(P均<0.05).模型组Profilin-1和pERK1/2蛋白表达量与cTnT、CK-EMP、P53、Fas和Bax水平呈正相关,与NO和Bcl-2水平呈负相关(P均<0.05).结论 在大鼠急性心肌梗死模型中Profilin-1蛋白表达升高.
关键词： 急性心肌梗死 Profilin-1蛋白 凋亡 ERK1/2信号通路 -
Apatinib抑制套细胞淋巴瘤细胞株增殖与凋亡实验研究
目的 套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的化疗效果欠佳,亟需开拓新的靶向治疗方式.本研究探讨新一代小分子血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼(Apatinib)对MCL细胞株增殖与凋亡的影响及机制.方法 体外培养MCL细胞株Mino和Z138;CCK8法检测不同浓度下Apatinib对Mino和Z138细胞株的增殖抑制作用;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测不同浓度Apatinib对Mino和Z138细胞株的诱导凋亡作用;蛋白质印迹法检测药物处理后ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和pERK1/2的表达的变化.结果 Aptinib对Mino和Z138细胞株均有明显的增殖抑制作用,呈浓度依赖性.Mino细胞经过Apatinib处理48 h后,2.5 μmol/L的抑制率为(5.72±2.43)％、5μmol/L的抑制率为(8.19±2.2)％、10 μmol/L的抑制率为(17.70±4.01)％、20μmol/L的抑制率为(44.58±7.59)％、40 μmol/L的抑制率为(85.12±2.67)％,IC50为(20.63±0.18) μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组多重比较,差异均有统计学意义,H=22.016,P=0.001.Z138细胞组2.5 μmol/L的抑制率为(7.19±1.71)％、5 μmol/L的抑制率为(10.60±1.43)％、10 μmol/L的抑制率为(20.24±5.93)％、20 μmol/L的抑制率为(53.46±4.91)％、40μmol/L的抑制率为(87.07±1.41)％,IC50为(18.15±0.18) μmol/L,经多个独立样本非参数检验Kruskal-Wallis H分析表明,各处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=16.460,P=0.006.细胞凋亡结果显示,Apatinib处理Mino细胞48 h后,对照组凋亡率为(4.03±0.99)％、10 μmol/L的凋亡率为(8.10±0.98)％、20 μmol/L的凋亡率为(29.46±7.18)％、30μmol/L的凋亡率为(35.06±4.17)％、40 μmol/L的凋亡率为(50.01±2.14)％.经Kruskal-Wallis H分析表明,处理组与对照组两两比较差异有统计学意义,H=13.033,P=0.011.Z138细胞对照组凋亡率为(5.45±1.82)％、10 μmol/L的凋亡率为(10.58±2.74)％、20 μmol/L的凋亡率为(16.51±0.81)％、30 μmol/L的凋亡率为(23.07±3.14)％、40 μmol/L的凋亡率为(34.48±6.40)％,经Kruskal-Wallis H分析,处理组与对照组两两比较,差异有统计学意义,H=13.500,P=0.009.蛋白质印迹法结果显示,Apatinib处理Mino细胞48 h后,ERK1/2通路相关蛋白ras、c-raf、pMEK和ERK1/2表达均有下降.结论 Apatinib可以抑制MCL细胞株Mino和Z138的增殖并有效诱导其发生凋亡,呈浓度依赖性其机制可能是通过干扰ERK1/2通路实现的.
关键词： 阿帕替尼 套细胞淋巴瘤 细胞凋亡 ERK1/2信号通路 -
2-甲基-正丁酰紫草素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究
2-甲基-正丁酰紫草素[(2-methyl-n-buty1) shikonin,MBS,]是从紫草科植物紫草的根部提取得到的一个萘醌类化合物.研究表明,紫草素具有抗炎、抗菌、抗肿瘤的作用[1-3].
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肾素(前体)受体在ox-LDL激活人脐静脉内皮细胞ERK1/2通路的作用
目的 观察肾素(前体)受体[(P)RR]在氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)蛋白激酶1和2(ERK1/2)信号转导通路的作用.方法分别以浓度为0 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 15 min,以浓度为100 mg/L的ox-LDL分别处理HUVECs 0 min、15 min、30 min、60 min、120 min,用western blot 方法检测p-ERK1/2 和ERK1/2蛋白.将HUVECs随机分为空白组,奥美沙坦+PD123319组,奥美沙坦+PD123319+ox-LDL组、奥美沙坦+PD123319+RNA干扰组,奥美沙坦+PD123319+RNA干扰+ox-LDL组,奥美沙坦+PD123319+转染试剂+ox-LDL组,各组用Western blot方法分别检测p-ERK1/2 和ERK1/2蛋白.结果不同浓度的ox-LDL处理HUVECs15 min,均可引起HUVECsERK1/2磷酸化增加,以浓度为100 mg/L的ox-LDL作用明显.100 mg/L的ox-LDL处理HUVECs不同时间,HUVECs 的ERK1/2磷酸化从5 min开始增加,15 min达到高峰,此后开始下降.与奥美沙坦+PD123319+ox-LDL组相比,奥美沙坦+PD123319+RNA干扰+ox-LDL组的p-ERK1/2蛋白下降了35.61%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ox-LDL可呈剂量和时间依赖性激活HUVECs的ERK1/2信号通路.(P)RR参与 ox-LDL激活HUVECs的ERK1/2信号通路.
关键词： 氧化低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 ERK1/2信号通路 -
丹参多酚酸对糖尿病肾病大鼠细胞外调节蛋白激酶ERK1/2蛋白表达的影响
目的:观察丹参多酚酸对2型糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其对肾组织ERK1/2表达的影响.方法:50只SD大鼠,随机分为正常组、糖尿病模型组,丹参多酚酸低剂量、中剂量以及高剂量药物干预组,每组10只.采用高脂高糖饮食+一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 55 mg/kg建立2型糖尿病肾病大鼠模型;丹参多酚酸3个剂量组给予丹参多酚酸10、20、40 mg/kg·d-1注射;8周后处死大鼠,检测24h蛋白尿,血糖、胰岛素、肌酐及肾脏肥大指数;HE染色观察肾脏病理学变化;同时免疫组化法、West-ern blot、半定量PCR检测肾组织ERK1/2蛋白及mRNA的表达.结果:与正常组相比,模型组大鼠血糖、24h蛋白尿、SCr以及肾脏肥大指数明显增加(P＜0.05),胰岛素则明显降低(P＜0.05);丹参多酚酸高剂量组血糖水平明显低于模型组(P＜0.05),胰岛素水平高于模型组(P＜0.05);SCr、24小时尿蛋白总量以及肾脏肥大指数,丹参多酚酸3个剂量组明显低于模型组(P＜0.05),且改变趋势有明显的剂量依赖性.肾组织HE染色可见,正常组大鼠形态和结构均完整,没有炎症反应;模型组则可见明显的肾小球肥大,同时伴有轻微的系膜轻度增生,肾间质区可见有稍许的炎性细胞浸润;丹参多酚酸3个剂量组相较于模型组上述情况均有一定的好转.免疫组化、Western blot以及RT-PCR结果显示,模型组肾组织ERK1/2蛋白表达较正常组明显升高(P＜0.05),而丹参多酚酸组蛋白表达明显降低(P＜0.05),高剂量组作用更为明显.结论:丹参多酚酸可明显改善2型糖尿病大鼠肾功能,降低肾脏肥大指数,与其可以降低ERK1/2的表达有关.
关键词： 丹参多酚酸 糖尿病肾病 ERK1/2信号通路 大鼠 -
ERK1/2信号通路参与瘦素促人γδT细胞增殖调控
为探讨ERK1/2信号通路在瘦素促进人γδT细胞增殖中的作用机制.我们用MTT法观察不同浓度瘦素促γδT细胞的增殖效应,以及用ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2信号通路对瘦素促细胞增殖效应的影响,Western blot法检测瘦素下预对ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达水平的影响.结果显示,瘦素在一定浓度范围内促进入γδT细胞增殖.瘦素可使ERK1/2信号通路中的靶蛋白发生磷酸化激活,用PD98059阻断ERK1/2信号通路可显著抑制瘦素促细胞的增殖效应,亦可抑制瘦素对γδT细胞ERK1/2蛋白磷酸化.因此,我们认为瘦素促人γδT细胞增殖效应可能与激活ERK1/2信号通路有关.
关键词： ERK1/2信号通路 瘦素 γδT细胞 -
不同浓度钛合金颗粒对小鼠成骨细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平的影响
目的 探讨不同浓度钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞的细胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)蛋白磷酸化水平的影响.方法 ①实验设空白对照组(control)和钛合金颗粒干预组(0.1 g/L),每组又分为0、0.5、1、3和6h5个亚组.分别在培养第0、0.5、1、3和6h5个时点,采用Western Blot法检测不同时间点ERK1/2磷酸化水平.②实验设空白对照组(control),钛合金颗粒干预A组(0.01 g/L)、B组(0.1 g/L)和C组(1g/L).在培养第0.5h,采用Western Blot法检测不同钛合金颗粒浓度作用下成骨细胞ERK1/2磷酸化水平.结果 在第0.5、1、6h时点,钛合金颗粒干预组(0.1 g/L)ERK1/2磷酸化水平均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.01),其中0.5h亚组成骨细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平高;但在第3h时点,2组ERK1/2磷酸化水平的差异无统计学意义(P＞0.05).不同浓度钛合金颗粒共培养的结果显示,不同浓度钛合金颗粒组成骨细胞的ERK1/2磷酸化水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 不同浓度钛合金颗粒可促进成骨细胞ERK蛋白磷酸化水平,激活ERK信号通路.
关键词： ERK1/2信号通路 成骨细胞 钛合金颗粒 -
ERK信号通路对钛合金诱导成骨细胞RANKL、OPG表达的作用
目的 探讨钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)基因表达和蛋白分泌的影响,以及细胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法 体外培养成骨细胞.实验分3组:对照组(A组);钛合金组(B组):给予浓度为0.1 g/L钛合金颗粒干预;抑制剂组(C组):给予钛合金颗粒+ERK信号通路抑制剂PD98059,每组6个样本.采用RT-PCR和ELISA法分别检测成骨细胞RANKL、OPG基因和蛋白表达.结果 3组各个时间点均可见RANKL、OPG的表达;但B组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌量以及RANKL/OPG比值显著高于A组(P<0.01);而C组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌水平以及RANKL/OPG比值的增幅显著小于B组(P<0.01).结论 钛合金颗粒可刺激成骨细胞RANKL mRNA、OPG mRNA的表达并促进RANKL、OPG蛋白的分泌,增加RANKL/OPG比值;ERK信号通路抑制剂PD98059可一定程度抑制RANKL和OPG的表达,降低RANKL/OPG比值,对减少假体周围骨溶解的发生可能起重要作用.
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棕榈酸对肝细胞自噬和凋亡的影响
目的:探究棕榈酸对肝细胞内自噬和凋亡途径的影响.方法:不同浓度棕榈酸处理肝细胞并检测自噬相关蛋白的改变;CCK-8法检测不同浓度棕榈酸对肝细胞活性的影响;棕榈酸培养细胞不同时间,观察细胞数量和形态的改变;棕榈酸培养细胞8 h后用DAPI染色观察细胞核形态.结果:棕榈酸使自噬相关蛋白表达增加,但并不表现为剂量依赖性;随着棕榈酸浓度的增加,细胞活力下降;随着棕榈酸作用时间的增加,细胞数量减少;和对照组相比,棕榈酸处理组细胞核致密浓染.结论:棕榈酸能够引起肝细胞凋亡,细胞活力下降,同时通过Erk1/2通路引起肝细胞自噬增强.
关键词： 自噬 凋亡 棕榈酸 ERK1/2信号通路 肝细胞 -
VEGF-B通过ERK1/2信号通路对RGC-5细胞缺氧损伤的保护作用
目的：探讨血管内皮生长因子B（ vascular endothelial growth factor-B，VEGF-B）对氯化钴（ cobalt chloride hexahydrate，CoCl2）诱导的大鼠视网膜神经节细胞株（retinal ganglion cells-5，RGC-5）缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 CoCl2孵育RGC-5细胞24h诱导缺氧模型。将RGC-5细胞分为正常组、缺氧组、VEGF-B+缺氧组、PD98059（ ERK1/2阻滞剂，PD）+VEGF-B+缺氧组。倒置显微镜观察细胞的形态变化；CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞仪 Annexin V-APC/7-AAD 双染色法检测细胞凋亡率；Western Blot 检测蛋白 Bcl-2、Bax 及 ERK1/2、p-ERK1/2表达水平。结果①缺氧使细胞皱缩变小变圆，正常组及药物组细胞体积大有突起。②与正常组相比，缺氧使细胞存活率减低；与缺氧组相比，药物组细胞存活率均升高。③与正常组相比，缺氧组正常细胞率下降、细胞凋亡率升高；与缺氧组相比，药物组正常细胞率升高、细胞凋亡率下降。④与正常组相比，缺氧组Bcl-2、Bcl-2/Bax比值降低，Bax增多；与缺氧组相比，药物组Bcl-2、Bcl-2/Bax比值增高，Bax减少。四组总ERK1/2表达量不变，p-ERK1/2表达量缺氧组较正常组增多，VEGF-B+缺氧组较缺氧组表达量高，PD+VEGF-B+缺氧组较VEGF-B+缺氧组减少。结论 VEGF-B部分通过ERK1/2信号通路增加Bcl-2表达，降低Bax表达从而抑制CoCl2诱导的RGC-5细胞凋亡。
关键词： VEGF-B RGC-5细胞株 缺氧损伤 凋亡 ERK1/2信号通路 -
骨髓单个核细胞移植对脑梗死大鼠ERK1/2信号通路的影响
目的研究骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脑梗死损伤保护作用及ERK1/2信号通路是否参与BMMNCs的抗凋亡保护机制.方法选择健康清洁级雄性6~8周龄SD大鼠共384只,体质量250~280 g;采用改良线栓法制作大脑中动脉栓塞模型(MCAO).SD大鼠按随机数字表法分为:假手术组,模型组,BMMNCs组和ERK1/2抑制剂组,每组96只;模型组于造模成功后24 h经尾静脉注入200 μl PBS溶液,BMMNCs组注入200 μl含5×106个 BMMNCs的PBS溶液,ERK1/2抑制剂组在注入BMMNCs的同时经侧脑室注射5μl PD98059;分别于3 d、7 d和14 d采用改良的神经功能损害评分法(mNSS)进行神经功能评分,TTC染色评价脑梗死体积,Western blot技术检测pERK1/2、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白水平,免疫荧光法检测BMMNCs对小胶质细胞活化的影响.结果(1)各时间点模型组mNSS和脑梗死体积明显高于假手术组(P<0.05),BMMNCs组低于模型组,高于假手术组,随治疗时间延长逐渐降低(P<0.05),ERK1/2抑制剂组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).(2)各时间点模型组pERK1/2、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白水平明显高于假手术组(P<0.05);与模型组[pERK1/2:(0.17±0.05),(0.14±0.04),(0.13±0.03),Bcl-2:(0.23±0.11),(0.24±0.12),(0.27±0.14),Bax:(0.39±0.13),(0.40±0.14),(0.45±0.23),caspase-3:(0.52±0.26),(0.56±0.27),(0.58±0.28)]比较,BMMNCs组pERK1/2和Bcl-2蛋白水平[pERK1/2:(0.38±0.16),(0.39±0.15),(0.40±0.20),Bcl-2:(0.38±0.14),(0.39±0.15),(0.37±0.13)]明显升高,Bax和caspase-3蛋白水平[Bax:(0.25±0.13),(0.19±0.06),(0.21±0.08),caspase-3:(0.35±0.13),(0.34±0.16),(0.29±0.09)]明显降低(P<0.05),ERK1/2抑制剂组pERK1/2蛋白水平均低于其他各组,ERK1/2与模型组比较,Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).(3) BMMNCs组缺血半暗带中小胶质细胞(Iba1阳性)明显多于模型组,且随时间延长而增多(P<0.05);ERK1/2抑制剂组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论BMMNCs可通过ERK1/2信号通路减轻脑梗死后细胞凋亡,从而改善神经功能,降低梗死范围.
关键词： 骨髓单个核细胞 脑梗死 神经保护 ERK1/2信号通路 -
肠三叶因子激活ERK1/2信号通路促进胃黏膜上皮细胞增殖和迁移
目的:研究ITF对胃黏膜上皮细胞增殖和迁移的影响,及ERK1/2信号通路在其中的作用.方法:以GES-1细胞为研究对象,用Western blot检测ITF对ERK1/2信号通路的作用,以不同浓度ITF及ERK1/2信号通路抑制剂U0126处理GES-1细胞,用CCK-8检测细胞增殖,用细胞穿孔实验观察细胞迁移.比较不同浓度ITF对GES-1细胞增殖和迁移的影响,及ERK1/2信号通路在其中的作用.结果:ITF提高了pERK1/2蛋白的表达水平,U0126抑制了ITF激活的pERK1/2蛋白的表达.与对照组比较,在细胞培养的24 h后,ITF以剂量依赖的方式促进了GES-1细胞的增殖和迁移.U0126抑制了ITF对GES-1细胞的促增殖和迁移作用.结论:肠三叶因子通过激活ERK1/2信号通路促进胃黏膜上皮细胞增殖和迁移.
关键词： 肠三叶因子 ERK1/2信号通路 胃黏膜上皮细胞 增殖 迁移 -
电针对缺血性脑卒中后神经行为学评分及ERK1/2通路影响研究
目的:观察电针曲池、足三里穴对大鼠神经行为学评分的影响及其与ERK1/2信号通路的关系.方法:采用随机数字表法,将30只大鼠分为3组,分别为假手术组、模型组、电针组,每组各10只.造模后待缺血再灌注2h后予以神经行为学评估,每天1次;造模后第1天对电针组大鼠进行电针干预,30min/次/天,疗程为3天,其余两组大鼠不作任何处理;Western Blot检测大鼠ERK1/2、p-ERK1/2表达情况并观察ERK1/2通路激活情况.结果:电针干预3天后,电针组大鼠神经行为学评分显著低于模型组(P＜0.05),差异具有统计学意义;Western Blot示电针组大鼠p-ERK1/2蛋白水平显著高于模型组(P＜0.05),差异具有统计学意义.结论:电针干预治疗后大鼠神经行为学明显改善,可能与激活ERK1/2信号通路有关.
关键词： 电针 缺血性脑卒中 ERK1/2信号通路
