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RAS在血管性痴呆发病中的作用研究进展
血管性痴呆(vascular dementia,VD)是老年期痴呆的主要类型,仅次于Alzheimer's病(Alzheimer's disease,AD)的常见痴呆,亚洲国家VD的患病率一直高于西方国家.在我国11个城市流行病学调查结果发现VD占各类痴呆的首位,对患者的寿命影响更大,在高龄人群中,VD比AD患者有更高的死亡率[1].VD是由各种脑血管疾病引起脑功能障碍而导致的智能损害综合征,以认知、记忆、言语、情感、性格等方面的神精精神功能减退或消失为主要表现.发病年龄多在50～60岁以后.随着人均寿命的延长及我国社会人口的老龄化趋势的进展,VD的患病率将明显上升,造成老年人生活质量下降的重要原因之一.
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血管紧张素转化酶基因多态性与肾脏疾病的关系
肾素-血管紧张素系统肾素-血管紧张素系统(RAS)是体内分布范围广的调节血管功能和水盐代谢的系统.主要由肾素(Renin),血管紧张素原(AGT),血管紧张素Ⅰ(AngⅠ),血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素转换酶(ACE)组成.RAS早是作为循环内分泌系统被认识,通过对血容量和血管张力的作用,参与血压的调节.在RAS的经典通路中,肾脏球旁细胞分泌的蛋白水解酶-肾素将肝脏合成释放的AGT裂解为十肽-AngⅠ,AngⅠ又被位于血管内皮表面的蛋白水解酶ACE和非ACE系统的酶(如肝脏中的糜蛋白酶)进一步水解为具有血管收缩活性的八肽-AngⅡ,AngⅡ以全身的和局部自分泌、旁分泌的效应发挥作用,同时ACE灭活血管舒张肽-赖氨酰舒缓激肽和缓激肽.
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ARHI抑癌基因与肿瘤关系的进展
一、ARHI基因结构和功能肿瘤抑制基因ARHI(aplysia ras homo log 1),又名NO-EY2或ras同源基因家族成员Ⅰ(ras homolog gene,member Ⅰ)或DIRAS3.ARHI是一个印迹基因,人ARHI基因定位于1p 31,总长约为8kb,由2个外显子和1个内含子组成.外显子Ⅰ为81个未编码的核苷酸,外显子Ⅱ则包括整个蛋白质的编码区[1].
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癌基因高表达人上皮细胞转化模型的构建及应用
目的 构建癌基因高表达人支气管上皮细胞模型并应用于致癌物诱导细胞恶性转化活性的检测.方法 在永生化人支气管上皮细胞株16HBE中依次导入人端粒酶催化亚基(hTERT)、癌基因H-RasV12或c-Myc或空白载体,构建细胞株16HBETR、16HBETM和16HBETV.检测所构建细胞株的生物学特性如细胞形态、细胞生长、染色体畸变等指标.用已知致癌物硫酸镍(NiSO4)和二氢二醇环氧苯并(a)芘(BPDE)多次染毒,利用软琼脂试验及荷瘤试验检测化学物诱导细胞转化的活性.结果 经过端粒酶活性测定以及蛋白印迹验证上述转基因16HBE细胞株均构建成功.癌基因H-Ras和c-Myc的表达分别使细胞的增殖加速30.3%和10.4%,但是细胞染色体的畸变率没有发生改变.癌基因高表达细胞株只在软琼脂中形成少数背景克隆,但不能在裸鼠皮下形成肿瘤.BPDE诱导16HBETR、16HBETM细胞发生恶性转化的间期分别为5周、11周,比对照组细胞16HBETV的20周分别提前了15周和9周;而硫酸镍诱导16HBETR、16HBETM细胞转化的间期分别为11周、14周.比对照组细胞的32周分别提前了21周和18周.结论 癌基因高表达的细胞转化模型可大大缩短试验间期,有望应用于环境致癌物的筛查及化学致癌机制的研究.
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肾素-血管紧张素系统与肝纤维化研究进展
通过对近年来相关文献的概括,分析肾素-血管紧张素系统(RAS)在肝纤维化发生过程中的影响,从RAS方面研究中医药对防治肝纤维化的作用.
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ERK1/2通路及其介导多发性硬化发病的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路是第一个被发现的细胞信号转导通路,由Ras、Raf、MEK1/2和ERK1/2组成.ERK1/2通路激活后可以将细胞外信号从细胞膜转到细胞核,参与了细胞的多种生理病理功能,如细胞的生长、增殖、分化和凋亡等,并且与多种疾病的发病有关,包括多发性硬化(MS)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).ERK1/2通路的激活可以引起星形胶质细胞、MG、T细胞、巨噬细胞等活化,释放多种炎性因子,引起髓鞘损伤,导致MS/EAE的发病.多项研究表明,通过抑制ERK1/2通路可以减少炎性因子的释放,减轻髓鞘损伤,改善MS/EAE的病情,为治疗MS药物的开发提供了重要的靶点.
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益肾降压方对肾实质性高血压及RAS系统物质的作用研究
目的:研究益肾降压方降低肾实质性高血压(RPH)大鼠血压、改善肾功能的作用及机制.方法:采用大鼠5/6肾切除术法建立RPH模型.动态测定血压、肌酐、尿素氮,以及在给药8周后测定血浆肾素活性(PAR)、血管紧张素(AⅡ)、血栓素(TXB2)、6-酮前列环素(6-keto-PGF1α)的含量.结果:各剂量益肾降压方均可降低RPH大鼠的血压(BP)、肌酐(Cr).但对RPH大鼠尿素氮(BUN)未见影响;各剂量益肾降压方可显著降低血浆PAR、AⅡ,同时还可显著降低 TXB2含量,升高血浆6-keto-PGF1a含量.结论:益肾降压方可降低RPH大鼠的血压,并对肾脏具有保护功能;益肾降压方的降压作用和对肾脏的保护功能是通过影响RPH大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统而完成.
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益肾降压方对RPH大鼠降压及肾脏保护作用的研究
目的:研究益肾降压方降低RPH大鼠血压、改善肾功能的作用及机制.方法:采用大鼠5/6肾切除术法建立RPH模型.动态测定血压、肌酐、尿素氮,及在给药8周后测定血浆PAR,AⅡ,TXB2,6-酮-PGF1α的含量.同时观察给药8周后RPH大鼠肾脏病理改变.结果:各剂量益肾降压方均可降低RPH大鼠的BP,Cr.但对RPH大鼠BUN未见影响;各剂量益肾降压方可显著降低血浆PAR,AⅡ,同时还可显著降低TXB2含量,升高血浆6-酮-PGF1α含量.各剂量益肾降压方组大鼠肾小球硬化,肾小管的萎缩均明显好于对照组和西药组.结论:益肾降压方可降低RPH大鼠的血压,并对肾脏具有保护功能;益肾降压方的降压作用和对肾脏的保护功能是通过影响RPH大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统而完成.
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人参、三七提取物对Ras相关信号蛋白的影响
目的 探讨益气活血中药人参、三七提取物对血管内皮细胞血管生成信号蛋白血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、Ras及有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响.方法 采用Western Blot检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上VEGFR-2、Ras、MAPK蛋白表达和人参、三七提取物大、中、小剂量及碱性成纤维生长因子(bFGF)对其表达的影响.结果 与空白对照组比较,中药大剂量组VEGFR-2及Ras 蛋白表达明显增强,中药小剂量组MAPK及Ras蛋白表达明显上调,而bFGF组VEGFR-2、Ras及MAPK的表达均显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 人参、三七提取物可促进血管生成信号通路上VEGFR-2、Ras及MAPK蛋白的表达,这可能是益气活血中药促进内皮增殖、产生促血管生成作用的基础.
关键词： 人参 三七 信号转导 血管内皮生长因子受体-2 RAS 有丝分裂原活化蛋白激酶 -
Siah2在肿瘤发生、发展过程中的作用
肿瘤已经成为制约人类健康的第二大疾病,新研究表明Siah2在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用.本篇文章重点论述Siah2诱发肿瘤的机制,通过siah2/PHD/HIF-1α通路及siah2/SPRY2/Ras两条通路.除介绍各环节结构及生物特性,更阐明其间的相互作用及信号通路,为肿瘤治疗提供参考依据.
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结直肠癌KRAS突变与临床病理特征的关系
目的 检测结直肠患者KRAS的突变情况,分析KRAS突变与临床病理特征的关系.方法 应用蝎形探针扩增阻滞突变系统(ARMS)荧光定量PCR技术,检测结直肠癌患者KRAS第12和13位密码子的突变情况并分析其与临床病理特征的关系.结果 1207例结直肠癌KRAS突变率为42.92%(518/1207).第12号密码子6种突变类型,其中G12D突变率16.32%(197/1207);G12V突变率10.36%(125/1207);G12C突变率3.31%(40/1207);G12S突变率2.40%(29/1207);G12A突变率1.74%(21/1207);G12R突变率0.58%(7/1207).第13号密码子G13D突变率为9.69%(117/1207).还检测出8种同时存在两种突变类型及一种同时存在3种突变类型.女性患者KRAS突变率(46.21%)高于男性(40.46%,P<0.05).KRAS在右半结肠突变率(46.45%)和直肠突变率(44.50%)均高于左半结肠(37.50%,P<0.05).结论 结直肠癌KRAS突变有多种类型,并且多种突变类型可同时存在.女性患者突变率高于男性患者,右半结肠和直肠突变率均高于左半结肠.
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雌激素具有抗血管平滑肌细胞应激性衰老效应
目的 探讨雌激素对血管平滑肌细胞(VSMCs)应激性衰老的影响及其机制. 方法 体外培养的第2～3代雌性SD大鼠VSMCs在无或有不同浓度(10-10mol/L～10-8mol/L)17β-雌二醇(E2)存在时,用150μmol/L H2O2诱导应激性衰老.流式细胞术、细胞化学染色、Pull down assay和Western blotting等检测衰老相关标志DcR2、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)、原癌基因Ras及细胞周期负性调控因子p21WAF1的表达或活性. 结果 流式细胞术显示,在生理浓度范围内,E2呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的VSMCs DcR2高表达、其中大抑制作用达14.48%±0.6%(E2=10-8mol/L;P <0.05, n =3),且这一效应可被雌激素受体阻断剂ICI 182、780阻断.细胞化学染色、Pull down和Western blotting检测显示,10-8mol/L E2可显著性地抑制H2O2所致的SA-β-Gal阳性VSMCs上升(20.5%±1.4%和9.6%±0.9%;P <0.05, n =9)、Ras活性增高(0.60±0.06和0.26±0.04;P <0.05, n =3)及p21WAF1表达上调(0.46±0.04和0.33±0.02;P <0.05, n =3). 结论 雌激素具有抗VSMCs应激性衰老的效应,其机制可能与抑制Ras激活和p21WAF1表达相关.
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抑制Ras信号通路可减弱小鼠胚胎干细胞的造血分化
为了探讨Ras信号通路对小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem cells,ES cells)造血分化的影响,将突变型基因RasN17转染小鼠ES细胞,免疫印迹检测RasN17的表达对Erk1/2及Akt磷酸化的作用,应用半定量RT-PCR检测ES细胞在分化过程中与造血相关的基因的表达.结果表明:Ras N17的表达能抑制Erk1/2和Akt的磷酸化,携带RasN17基因的ES细胞在分化过程中Runx1、SCL及beta-major珠蛋白等基因的表达被显著抑制,而FLK1的表达不受影响.结论:ES细胞体外造血分化需要Ras通路的活化.
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ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对慢性高原病患者骨髓有核红细胞中Ras、BRaf、MEK、ERK1/2表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对Ras、B型丝/苏氨酸蛋白激酶(BRaf)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、细胞信号调节激酶1/2 (ERK1/2)表达的影响,以期为慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)的基础研究和临床治疗探讨新的途径.方法:选取CMS患者16例,取骨髓液分离单个核细胞,以CD71与CD235a抗体磁珠分选阳性细胞,将细胞分为5组:空白对照组、DMSO溶剂组及PD98059 5、10和20 μmol/L组.在低氧条件下培养72 h,应用ELISA法测定培养骨髓有核红细胞上清液中Ras-GTP水平,RT-PCR法测定骨髓有核红细胞中BRaf、MEK、ERK1/2 mRNA的表达,Western blot方法检测骨髓有核红细胞中p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达.结果:PD98059对各组Ras-GTP的水平无明显影响(P=0.798).溶剂组与空白对照组相比,BRaf、MEK mRNA的表达水平差异无统计学意义(P =0.826、P=0.298).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组ERK1/2 mRNA的表达水平差异有统计学意义(P =0.001、P=0.002).溶剂组与空白对照组相比,p-BRaf、p-MEK蛋白的表达差异无统计学意义(P =0.370、P=0.351).与PD98059 20 mol/L比较,其余4组p-ERK1/2蛋白水平差异有统计学意义(P ＜0.001、P＜0.007).结论:PD98059能下调骨髓有核红细胞ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2蛋白的表达.Ras/Raf/MEK/ERK 1/2通路是调控CMS骨髓有核红细胞的主要信号传导途径,可能参与了慢性高原病的发病过程.
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胰腺胶样癌四例临床病理学分析
目的 探讨胰腺胶样癌的临床病理学特征、诊断、鉴别诊断及分子生物学特点.方法 分析4例胰腺胶样癌的临床特点,对标本进行病理形态学观察、免疫组织化学EnVision法和K-ras基因突变检测.结果 4例胶样癌中3例发生在胰头部,患者均为男性；另1例在胰体尾部,为女性；平均发病年龄为56.5岁.其中2例首发症状为腹痛,1例为尿糖增高,1例为查体发现.3例大体形态为囊实性结节,囊内含黏液,1例大体呈实性.低倍镜下,纤维及胰腺组织中可见边界清楚的黏液结节,大的黏液湖中可见纤细的纤维结缔组织间隔成多个小黏液湖；肿瘤细胞漂浮在黏液湖中,呈小巢或条索状,或腺管状,也可看到印戒细胞漂浮其中.3例癌周可见肠型胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN),仅例1伴发胰胆管型IPMN.免疫组织化学染色3例MUC2细胞膜阳性,1例MUC1阳性.3例中例1和例3发现K-ras基因突变,突变位点均位于12密码子Gly12Asp(GGT＞GAT)和Gly12Arg( GGT＞ CGT).结论 胰腺胶样癌是少见的胰腺导管腺癌亚型,经常伴发于IPMN和胰腺黏液性囊性肿瘤,应与普通胰腺导管腺癌、印戒细胞癌及假性囊肿等病变相鉴别.免疫组织化学MUC2多阳性表达,MUC1多为阴性,K-ras基因突变率较低.
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卵巢浆液性交界及恶性肿瘤K-ras基因突变分析
目的 探讨K-ras基因在卵巢浆液性交界及恶性肿瘤发生发展过程中的作用.方法 收集51例卵巢浆液性肿瘤标本,包括经典型交界性浆液性肿瘤18例,微乳头型交界性浆液性肿瘤11例,浸润性微乳头型浆液性癌12例,经典型浆液性癌10例.采用显微切割技术获取肿瘤细胞后,提取基因组DNA、PCR技术扩增K-ras基因第一外显子,通过直接测序的方法鉴定K-ras基因第12、13密码子的突变情况.结果 1例经典型交界性浆液性肿瘤K-ras基因第12密码子发生突变,突变类型为GGT→GTT即甘氨酸→缬氨酸,余50例标本未见突变;所有标本K-ras基因第13密码子均为野生型.结论 K-ras基因第12、13密码子在被检患者中卵巢浆液性交界及恶性肿瘤中的突变频率很低,其在该肿瘤发生发展过程中可能不起主要作用.
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即时定量PCR-Sanger测序与TaqMan探针法检测结直肠癌KRAS、BRAF基因突变的对比分析
目的 对比分析即时定量PCR-Sanger测序与TaqMan探针法检测KRAS、BRAF基因突变的应用价值；探讨结直肠癌KRAS和BRAF基因突变与临床及病理的相关关系.方法 收集2008至2012年344例结直肠癌标本,经4％中性甲醛液固定、石蜡包埋组织后切片、刮取富集肿瘤细胞后提取DNA,应用即时定量PCR-Sanger测序与TaqMan探针两种方法检测分析KRAS、BRAF基因的突变阳性率、突变类型及其与临床病理特征和生存时间的相关性等.结果 即时定量PCR-Sanger测序与TaqMan探针法检出KRAS基因突变率分别为39.8％ (137/344)和38.7％(133/344),BRAF基因突变阳性率分别为4.7％ (16/344)和4.1％(14/344),两种方法结果差异无统计学意义(P＞0.05).KRAS基因突变阳性率女性高于男性；BRAF基因突变阳性率结肠高于直肠,Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期,印戒细胞癌高于黏液癌,非特殊类型腺癌低,Ⅲ级高于Ⅱ级,差异均有统计学意义(P＜0.05).两种方法总符合率为98.8％(Kappa值0.976).BRAF基因突变型与KRAS基因突变型的患者生存时间差异有统计学意义(P =0.039),BRAF基因突变型与BRAF/KRAS野生型的患者生存时间差异无统计学意义(P=0.058).结论 (1)与Sanger测序法相比,TaqMan探针法具有操作简便、耗时短、效率高、重复性好、费用低以及不需特别仪器设备等优点,具有更高的临床应用价值；(2)结直肠癌中KRAS基因突变率与性别具有相关性,而BRAF基因突变率与原发部位、临床分期、组织学类型及组织学分级具有相关性；(3) BRAF基因突变是结直肠癌患者的独立预后因素.
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结直肠癌患者 KRAS、NRAS 及 BRAF基因突变检测分析
目的：研究结直肠癌KRAS、NRAS及BRAF基因突变情况，分析KRAS、NRAS及BRAF基因突变在结直肠癌中的分布。方法收集2014年4月至8月于广东省人民医院首诊的200例结直肠患者的肿瘤组织，运用PCR＋直接测序的方法检测KRAS基因第2、3和4号外显子，NRAS基因第2、3和4号外显子及BRAF基因第15号外显子。结果 KRAS、NRAS、BRAF基因突变率分别为44％（88／200）、2％（4／200）和5％（10／200）。 KRAS基因突变主要集中在第2号外显子的第12和13位密码子，分别占总突变的64．8％（57／88）和12．5％（11／88），KRAS基因第3号外显子的突变主要集中在第59和61位密码子，KRAS基因第4号外显子的突变主要集中在第117和146位密码子。结论结直肠癌中KRAS基因第2号外显子突变率较高，增加检测KRAS基因位点和联合检测NRAS、BRAF基因有助于筛查出有可能从靶向治疗中获益的结直肠癌患者。
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结直肠粘膜隐窝异常病灶K-ras、APC基因突变的研究
目的 分析隐窝异常病灶（aberrant crypt foci，ACF）的基因水平变化特点及其作为结直肠癌早期形态变化的分子依据，探讨ACF与腺瘤之间的关系。方法 经微解剖分离提取15例正常粘膜腺体、34例ACF、15例腺瘤和35例结直肠癌组织进行DNA测序，检测K-ras第12、13、61密码子和APC第15外显子“突变密集区”的突变。结果 正常粘膜无K-ras和APC基因突变，ACF、腺瘤和癌组织K-ras突变率分别为17.6%（6/34）、13.3%（2/15）和14.3%（5/35），3者突变率相近。4例ACF、腺瘤和癌组织的突变位于12密码子的第2碱基（GGT→GAT），2例ACF突变发生在13密码子的第2碱基（GGC→GAC）。ACF中K-ras的突变特点与同来源的癌组织保持一致，即患者年龄较大，大体以隆起型为主，所有组织未发现有61密码子的突变。癌和腺瘤APC基因突变率相近，癌为22.9%（8/35），腺瘤为26.7%（4/15）明显高于ACF的2.9%（1/34，P<0.05)，癌组织APC与患者的年龄、肿瘤位置、大体类型、组织分化程度无关。结论 ACF可能是结直肠癌早期的形态改变，ACF的形态学变化、部分基因的改变均有别于腺瘤，提示：（1）ACF有可能是腺瘤前的形态改变；（2） 结直肠癌的发生可能存在“正常上皮→ACF→癌变”这一途径。
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用显微切割技术定点检测诱发大鼠肺癌发生发展各阶段p53、K-ras基因突变与表达
目的探讨p53、K-ras基因突变、蛋白表达在3-甲基胆蒽(3-methylcholanthrene,MCA)和二乙基亚硝胺(diethylinitrosamine,DEN)诱发大鼠肺鳞癌发生演进中的作用,及其突变与蛋白表达的关系.方法将大鼠诱发肺癌石蜡标本连续切片,切片用于HE染色确定肺癌发生发展的病变阶段,及免疫组织化学(SP法)检测各阶段p53、K-ras蛋白表达,并用于显微切割,定点对位分别切割由正常支气管黏膜上皮细胞演变成癌细胞,癌浸润、转移各阶段病灶的主质,提取DNA,用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测各阶段p53、K-ras基因的突变.结果 30例正常支气管黏膜上皮未检测到p53、K-ras基因突变及其蛋白表达.在32例支气管黏膜增生和鳞状化生、21例不典型增生、12例原位癌、43例浸润癌及17例转移癌组织中,p53基因突变率分别为3.1%, 28.6%, 30.0%, 51.2%, 52.9%;p53蛋白阳性表达率分别为0, 42.9%, 50.0%, 60.5%, 64.7%;不典型增生阶段与增生、鳞状化生阶段相比,p53基因突变率及蛋白表达率增高,差异均有显著性意义(P<0.025,P<0.005),p53基因突变及蛋白阳性表达高度相关(P<0.005,Pearson′s R=0.599 6).K-ras基因突变率分别为0, 4.8%, 8.3%, 9.3%, 11.8%, 各阶段之间比较差异无显著性意义(P>0.05);K-ras蛋白阳性表达率分别为15.6%, 19.0%, 25.0%, 41.9%, 52.9%, 不典型增生阶段与正常黏膜相比及转移癌阶段与不典型增生阶段相比,差异均有显著性意义(P<0.05);K-ras基因突变与蛋白表达不相关(P>0.500).结论在MCA、DEN诱发的大鼠肺鳞癌发生发展中,p53基因的突变及K-ras基因的激活是早期事件,参与了癌的发生过程,而K-ras基因突变作用可能不大.
