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癌基因高表达人上皮细胞转化模型的构建及应用
目的 构建癌基因高表达人支气管上皮细胞模型并应用于致癌物诱导细胞恶性转化活性的检测.方法 在永生化人支气管上皮细胞株16HBE中依次导入人端粒酶催化亚基(hTERT)、癌基因H-RasV12或c-Myc或空白载体,构建细胞株16HBETR、16HBETM和16HBETV.检测所构建细胞株的生物学特性如细胞形态、细胞生长、染色体畸变等指标.用已知致癌物硫酸镍(NiSO4)和二氢二醇环氧苯并(a)芘(BPDE)多次染毒,利用软琼脂试验及荷瘤试验检测化学物诱导细胞转化的活性.结果 经过端粒酶活性测定以及蛋白印迹验证上述转基因16HBE细胞株均构建成功.癌基因H-Ras和c-Myc的表达分别使细胞的增殖加速30.3%和10.4%,但是细胞染色体的畸变率没有发生改变.癌基因高表达细胞株只在软琼脂中形成少数背景克隆,但不能在裸鼠皮下形成肿瘤.BPDE诱导16HBETR、16HBETM细胞发生恶性转化的间期分别为5周、11周,比对照组细胞16HBETV的20周分别提前了15周和9周;而硫酸镍诱导16HBETR、16HBETM细胞转化的间期分别为11周、14周.比对照组细胞的32周分别提前了21周和18周.结论 癌基因高表达的细胞转化模型可大大缩短试验间期,有望应用于环境致癌物的筛查及化学致癌机制的研究.
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硒对镉诱导的大鼠肝细胞原癌基因表达的影响
目的研究亚硒酸钠对氯化镉诱导的在体大鼠肝细胞原癌基因c-myc、c-fos、c-jun表达增强的影响.方法选用雄性SD大鼠,每组5只,腹腔注射染毒,用Northern斑点杂交方法观察.用5 μmol/kg Na2SeO3分别与5 μmol/kg、10 μmol/kg、20 μmol/kg CdCl2联合作用.结果观察到Na2SeO3对CdCl2所致大鼠肝细胞c-myc、c-fos、c-jun表达增强的拮抗效应.结论一定剂量的亚硒酸钠能抑制一定剂量的氯化镉引起的大鼠肝细胞原癌基因c-myc、c-fos、c-jun表达增强.
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癌基因和抑癌基因中的阴阳
癌症发生是癌基因(阳)和抑癌基因(阴)逐渐不平衡表达的结果,二者在调控细胞生长和增殖过程中发挥相反作用.以癌基因myc和抑癌基因p53为例,说明在癌基因和抑癌基因中同样存在阴阳.阴基因p53的阴中之阴是抑制细胞生长促进细胞凋亡;阴中之阳是修复受损DNA,使细胞继续存活.阳基因myc的阳中之阳是促进细胞生长和增殖;阳中之阴是诱导细胞凋亡.阐明癌基因和抑癌基因中的阴阳作用,对于癌症全面深入研究具有重要意义.
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C-MYC和LPL基因与前列腺癌的研究进展
前列腺癌中常见的细胞遗传学改变是8号染色体异常,定位于8q24的C-MYC基因和8p22的LPL基因在前列腺癌的发生发展中起重要的作用.它们可能是新的前列腺癌预后因子和有前途的治疗靶点.
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腺样囊性癌高级别转化临床病理分析
目的 探讨腺样囊性癌高级别转化的临床病理特点.方法 收集首都医科大学附属北京同仁医院病理科2005年1月至2011年12月间4例腺样囊性癌高级别转化病例的临床及病理资料,采用免疫组织化学EnVision法标记平滑肌肌动蛋白(SMA)、p63、p53、Ki-67；用荧光原位杂交(FISH)方法检测c-myc基因.结果 4例患者中男性3例、女性1例,平均年龄55.5岁.2例分别于术后29个月,17个月死亡；1例术后23个月发生多处转移带瘤存活(随访26个月)；1例存活(随访3个月).高级别转化的组织病理学表现为低分化腺癌或未分化癌形态.异型性明显的肿瘤细胞连接成片,面积超过一个低倍视野；核质比明显增高；核仁及核分裂象易见(8～25/10 HPF).2例出现粉刺样坏死,3例出现多灶钙化.免疫组织化学染色显示转化区域SMA和p63阳性肌上皮细胞数日明显减少或消失,p53强阳性,Ki-67阳性指数增高.4例均未出现c-myc基因扩增或分离.结论 腺样囊性癌高级别转化组织病理学改变有显著特征,肌上皮减少,甚至消失,生物学行为差.c-myc基因突变可能不具有关键作用.
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定量多基因荧光原位杂交检测乳腺癌中c-myc和CCNE2基因扩增
目的 探讨c-myc和CCNE2基因在原发乳腺癌中的扩增情况以及二者之间的关系.方法 采用组织芯片、定量多基因荧光原位杂交(QM-FISH)技术检测配对的乳腺导管内癌、浸润性导管癌中c-myc和CCNE2的基因拷贝数,并分析其与临床病理指标之间的关系.结果 2005年1月至2007年12月间收集的66例原发乳腺癌中18例显示c-myc扩增(27.3％),23例显示CCNE2扩增(34.8％),且c-myc扩增与CCNE2扩增两者之间的相关性有统计学差异(P＜0.01).c-myc、CCNE2扩增的肿瘤全部为非整倍体,且与HER2基因扩增相关(P＜0.05).Ki-67高表达的肿瘤c-myc扩增更为常见(P＜0.05).结论 c-myc和CCNE2基因扩增多伴随发生,二者通过相互作用以及相对独立的信号通路在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用.
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儿童神经母细胞源性肿瘤中N-myc和C-myc基因的分子遗传学异常及其临床病理学意义
目的 研究儿童神经母细胞源性肿瘤(NT)中N-myc和C-myc基因的分子遗传学异常及其临床病理学意义.方法 应用间期荧光原位杂交(FISH)技术检测246例NT标本[神经母细胞瘤(NB)188例,节细胞神经母细胞瘤(GNB) 52例,节细胞神经瘤(GN)6例]中N-myc异常,并与组织学类型、预后进行相关性分析,同时对其中的133例NT进行C-myc基因的FISH检测.结果 246例NT中,N-myc总扩增率为11.0％(27/246),所有扩增均发生在NB中,52例GNB及6例GN中无1例存在N-myc扩增(P＜0.05).246例NT中,N-myc非扩增者占89.0％(219/246),包括N-myc的获得者(71.1％,175/246)和正常者(17.9％,44/246).单因素生存分析显示,N-myc扩增者预后比N-myc非扩增者差(P=0.012)；N-myc非扩增者中,N-myc获得者预后与N-myc正常者相比,差异无显著统计学意义(P =0.057).进行C-myc检测的133例NT中,55.6％(74/133)存在C-myc的获得,未见C-myc扩增及易位者.6/15 N-myc扩增者与57.6％(68/118) N-myc非扩增者,伴C-myc获得,两者的差异无统计学意义(P＞0.05).C-myc基因的单因素生存分析显示,C-myc获得者预后与C-myc正常者相比,差异无统计学意义(P=0.357).结论 我国儿童NT中N-myc扩增率较低,且仅存在于NB中；N-myc扩增者预后差；儿童NT中未检测到C-myc的扩增及易位,但C-myc获得较常见；N-myc扩增与C-myc获得之间无明显相关性.
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应用间期荧光原位杂交技术检测原发性肝细胞癌c-myc基因扩增的临床意义
目的探讨c-myc基因在原发性肝细胞癌中的扩增及其与临床及预后的关系.方法应用间期核荧光原位杂交技术对100例原发性肝癌和6例带卫星结节的肝癌组织标本进行检测.结果 92%(92例)原发性肝癌组织存在c-myc基因扩增,其中高拷贝数扩增达37%(37例),低拷贝数扩增55%(55例),只有8%(8例)无扩增.结合临床资料分析,c-myc扩增与患者临床分期、肿瘤大小和病理类型无明显相关(P>0.05),原发肿瘤和相应卫星结节肿瘤组织具有相似的c-myc基因扩增水平和相同病理类型的特点.在可随诊两年半的90例病例中,91.1%(82例)病例有c-myc基因扩增,其中高拷贝数扩增34例,低拷贝数扩增48例,无扩增8例.分析c-myc扩增程度与患者术后复发的时间及生存期关系,发现c-myc高拷贝数扩增的病例术后1年内复发率(70.6%,24/34)高于c-myc低拷贝数扩增(39.6%,19/48)和无扩增者(12.5%,1/8),三者之间差异有显著性意义(P＜0.05).而在术后>12个月的复发率则与c-myc不同扩增程度间差异无显著性意义(P>0.05).另外,c-myc高拷贝数扩增者术后2年存活率明显低于低拷贝数扩增和无扩增者(P= 0.001).结论原发性肝细胞癌存在高频率的c-myc基因扩增,基因扩增与患者临床分期,肿瘤大小和病理类型无明显相关性,但与患者预后有关,高拷贝数扩增者复发时间早、复发率高、生存期短.
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NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响
目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响.方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达.脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化.结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0.82±0.14,而有转移的乳腺癌组织中为69.2%(9/13)和0.17±0.11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0.14±0.02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1.51±0.11).NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期Go/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义.结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因.
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胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤临床病理学研究
目的 探讨胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤即弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、Burkitt淋巴瘤(BL)、特征介于DLBCL和BL之间不能分类型的淋巴瘤(DLBCL/BL)的组织学特点,及其临床病理参数、免疫组织分型与预后的相关性.重点讨论c-myc抗体在胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤中的表达特点,及预测其基因易位的价值和意义.方法 对54例胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤的临床资料、组织学、免疫组织化学(EnVision法)进行观察分析并随访;荧光原位杂交(FISH)检测所有病例c-myc和部分病例的bcl-2的基因状态;免疫组织化学检测c-myc、Tcl-1及CD38 3种c-myc基因预测抗体的表达;统计分析各临床病理参数间及其与预后的关系,并对基因易位预测指标c-myc进行准确性检验(ROC曲线).结果 54例胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤,包括49例DLBCL(免疫分型:生发中心B细胞型11例,活化B细胞型38例)、4例DLBCL/BL、1例BL,中位年龄56岁,男女之比为1.6:1.0,中位生存时间42个月,其中11例在97个月内死亡.组织学观察可见异型的大细胞弥漫浸润胃肠道壁全层,部分伴有核碎裂及星空现象(18/54).瘤细胞CD20、CD79a均阳性,CD43(4/54)、CD5 (7/54)、bcl-2 (26/54)、Tcl-1 (17/54)、CD38(15/54)部分阳性,CD3、CD30均阴性,Ki-67阳性指数40％ ～ 100％.FISH检测显示部分病例出现bcl-2(1/19)和c-myc(4/54)易位,后者免疫组织化学c-myc均阳性(阳性百分数为80％ ～ 100％).单因素分析显示B症状、行为状态、乳酸脱氢酶、国际预后指数、远处转移、临床分期、c-myc阳性百分数90％以上、c-myc易位在内的8个因素与预后相关,CD5阳性的DLBCL预后不良,其中乳酸脱氢酶、远处转移、c-myc易位是独立的预后因素.ROC曲线显示c-myc抗体阳性百分数预测c-myc基因易位的佳阈值为75％.结论 胃肠道侵袭性B细胞淋巴瘤预后受多方面临床病理因素影响;DLBCL(多为生发中心B细胞型)、DLBCL/BL可出现c-myc易位,组织学上可伴有Burkitt样的形态学特征和Ki-67高表达,且该基因易位是影响预后的独立因素,其检测对于患者的治疗和预后的判断均有重要意义;较高的c-myc抗体阳性百分数有助于预测c-myc易位.
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前列腺癌8号染色体改变与Gleason评分之间的相关性
目的 探索前列腺癌8号染色体数目增加及c-myc基因和脂蛋白脂酶(LPL)基因状态和发生频率,分析8号染色体改变与前列腺癌Gleason评分之间的相关性及其在前列腺癌发生发展中的作用.方法 采用ProVysionTM三色探针组合,以荧光原位杂交(FISH)方法检测34例未经临床治疗的前列腺癌穿刺组织石蜡切片标本的8号染色体改变,其中包括Gleason评分5分者1例,6分者10例,7分者14例,8分者4例,9分者5例,并进行8号染色体各种异常之间及其与前列腺癌Gleason评分级别之间的关联性分析.结果 8号染色体增加为17/34(50%),c-myc基因拷贝数增加为21/34(61.8%),LPL单体为15/34(44.1%),c-myc基因扩增为23/34(67.6%),LPL基因缺失为21/34(61.8%),同时具有LPL基因缺失和c-myc基因扩增为16/34(47.1%),至少有其中一种遗传学异常者为29/34(85.3%).8号染色体增加与Gleason评分级别增高呈明显的正相关关系(P=0.0006);c-myc基因拷贝数增加与Gleason评分级别增高呈正相关关系(P=0.0035);LPL缺失与Gleason评分级别增高呈负相关关系(P=0.0383);调整年龄后,除了上述三个变量与Gleason评分级别的相关关系仍然存在以外,c-myc基因扩增与Gleason评分级别增高也呈现正相关关系(P=0.0462).结论 8号染色体数目增加、c-myc基因拷贝数增加、c-myc基因扩增和LPL基因丢失都与Gleason评分级别有关,c-myc基因扩增同时伴有LPL基因缺失也是前列腺癌的遗传学特征之一,提示8号染色体异常可能与前列腺癌的发生和进展有关.
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原发中枢神经系统弥漫性大B细胞淋巴瘤中bcl-2、C-MYC基因异常、蛋白表达及治疗方案选择对患者预后的影响
目的 探讨原发中枢神经系统(PCNS)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)临床病理学特点,分析其中bcl-6、bcl-2、C-MYC基因异常、蛋白表达及治疗方案选择对患者预后的影响.方法 收集浙江省肿瘤医院2007年1月至2016年12月收治的33例PCNS-DLBCL患者资料,对33例患者样本进行免疫组织化学(IHC)染色以检测CD10、bcl-2、bcl-6、MUM1、MYC蛋白表达;原位杂交检测肿瘤组织中EB病毒编码的小RNA(EBER);荧光原位杂交(FISH)检测bcl-6、bcl-2、C-MYC基因扩增及易位情况;利用单、双因素生存分析及 Cox 风险回归模型分析上述指标改变与预后的关系.结果33例患者,男女比为1.36:1.00,平均年龄56岁.20例为单发病灶,13例为多发病灶;12例累犯深部脑组织.所有患者接受部分或全部肿瘤切除,5例术后接受全脑放疗,9例接受高剂量甲氨蝶呤为基础的化疗,12例接受全脑放疗联合高剂量甲氨蝶呤为基础的化疗,7例未进一步治疗,8例患者在化疗时联合使用利妥昔单抗.按照 Hans 模型分类非生发中心型(non-GCB)27例(81.8%,27/33).25例(75.8%,25/33)bcl-2蛋白表达阳性,其中8例(24.2%)为高表达(≥70%),12例(36.4%) C-MYC蛋白表达阳性(≥40%),C-MYC和bcl-2蛋白双表达者有6例(18.2%,6/33).EBER阳性率为10.0%(3/30).28例患者中检测到5例bcl-6基因异常;7例bcl-2基因异常;4例C-MYC基因异常,bcl-2、C-MYC基因同时发生异常("双打击")者2例(7.4%).13例患者发现脑脊液中蛋白升高, 10例血中乳酸脱氢酶升高.随访时间2~90个月,平均生存时间(23.0 ± 3.7)个月,2年生存率为39.0%.单因素分析发现bcl-2蛋白高表达、MYC蛋白阳性、bcl-2基因异常是PCNS-DLBCL的不良预后指标,以高剂量甲氨蝶呤为基础的化疗、利妥昔单抗的应用为良性预后因素,双因素分析发现bcl-2、MYC蛋白双表达及bcl-2、C-MYC基因双打击为PCNS-DLBCL的不良预后因素.Cox多因素风险回归分析发现男性、脑脊液中蛋白升高、C-MYC基因拷贝数增加为不良预后因素,高剂量甲氨蝶呤为基础的联合化疗为良性风险因素.结论 PCNS-DLBCL中bcl-2、C-MYC基因双打击及蛋白双表达均和不良预后明显相关,高剂量甲氨蝶呤为基础的联合化疗可明显延长患者生存期,利妥昔单抗可使PCNS-DLBCL患者生存获益.
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C-myc与T淋巴母细胞淋巴瘤／白血病预后的相关性
目的：探讨C-myc基因及蛋白与T淋巴母细胞淋巴瘤／白血病（ T-LBL／ALL）预后的相关性。方法应用免疫组织化学EnVision 法对山西省肿瘤医院病理科有详细随访资料的60例T-LBL／ALL石蜡标本进行CD1a、CD3、εCD3、CD7、CD10、CD34、CD43、CD45RO、CD99、末端脱氧核苷酸转移酶（ TDT）、CD20、CD23、髓过氧化物酶（ MPO）、Ki-67和C-myc免疫组织化学标记，用20例淋巴结反应性增生作为实验组中C-myc基因和蛋白表达异常的正常对照组。并用荧光原位杂交（ FISH）技术检测C-myc基因所在8q24染色体断裂和拷贝数异常的情况。结果60例T-LBL／ALL中，免疫组织化学结果显示：23例（38.3％） CD1a、45例（75.0％） CD3、27例（45.0％）εCD3、57例（95.0％） CD7、22例（36.7％）CD10、14例（23.3％） CD34、36例（60.0％） CD43、25例（41.7％） CD45RO、58例（96.7％）CD99、56例（93.3％）TDT阳性，CD20、CD23和MPO均为阴性。 Ki-67≤80％和＞80％分别为36例和24例。60例T-LBL／ALL中，C-myc蛋白的表达率为66.7％（40／60），20例淋巴结反应性增生全部阴性表达（0／20），二者C-myc蛋白阳性表达率差异有统计学意义（χ2＝26.67，P＜0.05）。C-myc蛋白表达与纵隔宽度、Ki-67呈正相关性（ P＜0.05）。 FISH 结果显示：60例T-LBL／ALL中， C-myc基因发生8q24染色体断裂6例（10.0％），拷贝数增加11例（18.3％）。20例淋巴结反应性增生均未发生C-myc基因断裂和拷贝数增加。 C-myc基因改变与C-myc蛋白表达无关（P＞0.05）。另外，在60例T-LBL／ALL中，C-myc蛋白及基因异常同时存在的病例有12例（20.0％）。单因素分析结果：C-myc蛋白阳性组预后比阴性组差（ P＜0.05）。 C-myc基因改变与预后差异无统计学意义（ P＞0.05）。 C-myc蛋白及基因异常同时存在与预后有关（ P＜0.05）。多因素COX分析结果显示，C-myc蛋白阳性组是独立的预后不良因素（ P＜0.05）。结论 T-LBL／ALL中，C-myc表达在T-LBL／ALL的发生发展中可能有重要作用，并且与预后差相关，提示为一种独立的预后因子。
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MYCN基因扩增对小儿神经母细胞肿瘤患者预后判断的意义
目的 分析小儿神经母细胞肿瘤(NT)的临床病理学特征,探讨MYCN扩增病例形态学改变及其在NT预后的意义.方法 回顾性分析267例小儿NT的临床病理资料.其中119例经荧光原位杂交(FISH)检测MYCN基因扩增情况,探讨MYCN扩增及其与病理形态学指标的关系,并进行预后分析.结果 267例小儿NT中,年龄1 d至13岁,中位数为27个月;男女比例为1.43∶ 1.00;组织学预后良好型157例(59.9％),组织学预后不良型110例(40.1％);临床分期,Ⅰ期38例(14.2％),Ⅱ期43例(16.1％),Ⅲ期71例(26.6％),Ⅳ期115例(43.1％,其中Ⅳs期8例).119例NT中18例MYCN扩增(15.1％),MYCN与第2号染色体信号比值为4.08～43.29;MYCN无扩增101例,其中包括获得79例(66.3％),阴性22例(18.5％).MYCN的表达在不同年龄、性别、NT分型以及核分裂-核碎裂指数(MKI)高低组间差异有统计学意义(P =0.000),而与组织学预后分组及临床分期无关(P＞0.05).18例MYCN扩增病例中未分化型3例,其余15例为分化差型;17例具有高MKI,1例为中MKI;均属组织学预后不良组.3例存活,15例死亡,平均生存期为(17.9±2.4)个月.MYCN未扩增病例101例,69例存活(68.3％),32例死亡(31.7％),平均生存期(29.8±1.3)个月.生存分析结果显示,MYCN扩增患儿预后较差(P＜0.05).结论 NT发病年龄小,易转移,组织学分型多为预后良好型;MYCN基因扩增病例组织学均表现为预后不良型,多伴高MKI;MYCN基因扩增患儿预后差.
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涂层支架局部导入c-myc反义核酸防治再狭窄的实验研究
目的:探讨铂-铱合金明胶蛋白涂层支架局部导入c-myc反义寡核苷酸的可行性及对新生内膜的抑制作用.方法:将携带c-myc反义寡核苷酸的国产铂-铱合金明胶蛋白涂层支架置入兔颈动脉(n=16),在术后7、14、30、90 d处死动物行HE和Weigert染色,图像分析测量新生内膜厚度和面积,c-myc蛋白免疫组化染色并与对照组(n=16)进行对比分析.结果:随观察时间延长两组新生内膜面积和平均新生内膜厚度呈持续增加趋势,且不同观察时间点给药组新生内膜面积和平均新生内膜厚度均显著小于对照组(P均＜0.001).c-myc免疫组化染色给药组为弱阳性和阴性,对照组为阳性.14 d时透射电镜观察显示血管平滑肌细胞呈过渡型改变.结论:国产铂-铱合金明胶蛋白涂层支架可携带c-myc反义寡核苷酸于兔颈动脉局部,并抑制新生内膜的形成,提示支架可作为局部给药防治再狭窄的工具.
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癌基因C-myc和抑癌基因 p16在大肠癌中的表达
目的:探讨大肠癌中癌基因C-myc和抑癌基因p16的表达及相关性.方法:采用免疫组织化学SP法检测78例大肠癌组织、20例癌旁组织和20例大肠腺瘤中C-myc和p16的表达,并分析它们之间的相关性.结果:大肠癌中C-myc表达率高,p16表达率低(P＜0.05);C-myc阳性表达和p16阴性表达与大肠癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移和远隔转移密切相关(P＜0.05);C-myc和p16之间存在明显的相关性(P＜0.05).结论:C-myc与p16表达具有协同性,C-myc的表达上调与p16失活在大肠癌发展中起关键作用.
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C-myc 参与β-Catenin 介导的肺腺癌 A549／DDP细胞的化疗耐药的实验研究
目的探讨C-myc与β-Catenin介导的肺腺癌A549/DDP的耐药相关性。方法 MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性；Western blot检测在顺铂作用前、后β-catenin及C-myc在肺腺癌A549及A549/DDP中的蛋白表达及免疫荧光定位；流式细胞仪检测不同剂量的顺铂作用下两株细胞以及A549/DDP转染C-myc siRNA前后的凋亡和周期变化。结果 MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为（5.769±0.24）μmol/L和（28.373±0.96）μmol/L，与A549细胞比较． A549/DDP顺铂耐药4.92倍。 Western blot 结果显示β-Catenin 及C-myc蛋白在A549/DDP细胞的表达较A549高，顺铂作用48 h后A549细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前下调（ P＝0.007）， A549/DDP细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前上调（ P＝0.006）；免疫荧光定位结果显示顺铂作用48 h后A549及A549/DDP细胞的β-Catenin由膜/质/核表达转为质/核表达，C-myc表达由浆/核表达转为核表达。流式结果显示随着顺铂剂量的增加，细胞凋亡率成剂量依赖性增加。 A549/DDP中转染C-myc siRNA 48 h后引起细胞S期阻滞，G0/G1期细胞积聚，凋亡率增加（P＝0.013），IC50值明显下降（P＝0.009）。结论β-catenin的下游靶基因C-myc在调节A549/DDP的耐药性中起到一定作用，C-myc siRNA可以提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。
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同时检测三种Myc基因的聚合酶链反应技术
目的建立同时检测Myc基因3个成员L-myc 、N-myc及C-myc异常扩增的简便方法.方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,用一对引物同时扩增Myc基因3个成员第2外显子中的高度保守区,扩增产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描.结果此法可以检测Myc基因家族中3个成员的扩增情况. 经检测,正常组织细胞没有Myc基因扩增,32例喉癌组织中47%有L-myc和C-myc扩增,41%有N-myc 扩增,与正常比差异均有显著意义(χ2=6.764,7.609, 5.961;P均＜0.05).C-myc扩增率与用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本相符(χ2=0.254,P＞0.05) .结论此法对检测肿瘤组织中Myc基因3个成员提供了简易、特异、无放射污染,并且适于临床应用的、优于PCR-琼脂糖凝胶电泳的方法.
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细胞凋亡与肝脏疾病
细胞凋亡(apoptosis,APO)是指在一定的生理和病理情况下,机体为维护内环境的稳定,通过基因调控而使细胞自动消亡的过程.英国Kerr教授1972年首先提出凋亡的概念,他主要根据形态学上的不同将细胞凋亡与坏死相区分,并指出前者是一种主动的、程序性的、细胞固有的过程许多文献又称凋亡为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),而新观念认为APO是形态学上的概念,PCD是发生机制上的概念,不是所有PCD都表现为APO,因而可以认为APO是PCD的一种形态学表现[1].1980年以来,细胞凋亡现象受到了广泛重视,有关的研究工作取得了重要进展,并成为医学生物学各学科所共同关注的极为活跃的研究领域[2-19].
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胃癌雌激素受体的研究
自20世纪60年代发现雌激素受体以来,学者们开展了对各种不同器官肿瘤受体的研究,并形成了激素作用机制的3种模式(二步模式、核模式和平衡模式).目前已在众多的肿瘤中发现了性激素受体,如孕酮激素(PR)、雌激素(ER)和雄激素(AR).这些肿瘤包括激素依赖性器官和非依赖性器官的肿瘤.
