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p-STAT3与Survivin在神经母细胞瘤中的表达及意义
目的:探讨p-STAT3和Survivin在神经母细胞瘤组织中的表达及意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测42例神经母细胞瘤组织标本和癌旁正常组织标本中p-STAT3和Survivin表达情况.结果:p-STAT3和Survivin在入神经母细胞瘤组织中表达阳性率分别为69.05％ (29/42)和76.19％ (32/42)；在癌旁正常组织中为4.76％ (2/42)和11.9％ (5/42)；p-STAT3和Survivin在神经母细胞瘤组织中的表达呈正相关(P＜0.01).结论:p-STAT3和Smvivin的表达与人神经母细胞瘤的发生、发展有一定的关系,二者表达强度之间呈正相关,二者有可能作为神经母细胞瘤临床诊断和治疗的靶基因.
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神经母细胞瘤患儿尿中儿茶酚胺含量的HPLC测定
目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定尿中去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和多巴胺(DA)三种儿茶酚胺类物质的方法,为临床确诊神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)提供诊断手段.方法利用高效液相色谱及荧光检测器,采用Zorbax SB-Aq-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,使用0.02mol/L KH2PO4溶液为流动相,对正常儿童和神经母细胞瘤患儿24h尿中NE、E和DA进行测定.结果NE、E和DA的日内精密度分别为5.46%、3.96%、4.49%,日间精密度分别为6.48%、4.67%、5.43%.NE、E和DA低、中、高3种浓度加标回收率分别为92.20%～94.38%、94.60%～95.85%、88.43%～91.68%.NE、E的线性范围为25～800 μg/L、DA的为50～1600μg/L.低检测限分别为2.5、1.5、0.5μg/L.结论建立的方法精密度好、准确度高、特异性强,适用于临床神经母细胞瘤的诊断.
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神经母细胞瘤血清肿瘤标记物围手术期变化的临床研究
目的：探讨神经母细胞瘤患者血清肿瘤标记物围手术期的变化及其临床意义。方法：收治神经母细胞瘤患者52例，对其临床资料进行回顾性分析，并分析其血清肿瘤标记物，血清神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase，NSE)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)、S100蛋白手术前后的变化及相关关系。结果：52例初诊患者的血清 NSE 为33～356μg/L，血清 LDH 水平251～806U/L，手术后血清 NSE 为9～125μg/L，血清 LDH 水平101～320U/L，与手术前比较差异有统计学意义(P＜0.01)。NSE与LDH呈正相关(r=0.593，P＜0.01)。结论：NSE、LDH反映肿瘤负荷，其可作为手术前后监测神经母细胞瘤疗效的辅助性指标。
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小儿肾上腺神经母细胞瘤CT特征分析25例
目的:分析常规螺旋CT对儿童肾上腺神经母细胞瘤的诊断特征.方法:收治儿童肾上腺区神经母细胞瘤患儿25例,回顾性分析CT表现.结果:25例均行CT平扫与增强检查,其中来源于右侧肾上腺16例,左侧9例;17例肿块形态不规则,8例呈类圆形;边界清9例,边界不清16例;25例肿块以实性密度为主,其中14例伴有囊变坏死,16例伴瘤内钙化;其中17例肿块包绕后腹膜大血管生长;18例后腹膜大血管周围淋巴结肿大,其中2例合并有肝门淋巴结肿大;其中5例肾脏浸润受累,1例肝脏受侵;3例发生颅骨、髂骨及脑内和颈部转移;增强扫描25例神经母细胞瘤实质11例呈轻度强化,14例呈中度强化,其中11例低密度坏死区未见强化.结论:CT扫描是儿童肾上腺神经母细胞瘤有价值的检查方法之一,肿瘤以实性成分为主、钙化多见、可见坏死,易包绕后腹膜大血管生长,邻近脏器侵犯、淋巴结和远处器官转移是神经母细胞瘤重要影像诊断依据;CT扫描可为术前定性诊断、确定治疗方案及估计预后提供重要依据.
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肺转移瘤影像诊断回顾性分析
肺转移瘤相当常见,原发肿瘤多来源于:头颈部恶性肿瘤、肾癌、睾丸癌、绒毛膜癌、骨及软组织肉瘤、黑色素瘤、内分泌肿瘤(如甲状腺、肾上腺)、大多数小儿肿瘤(神经母细胞瘤除外)等等.对某些肿瘤,肺部可能是作为第二个转移站.如消化道肿瘤(胃、胰腺、结肠)及卵巢癌的瘤栓通常先抵达肝,再经门静脉引流后抵肺.此类肿瘤除肺外,尚应仔细探查其他部位(如肝)有无转移.如首站未发现有转移灶,则肺内转移的可能性就比较低.
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儿童神经母细胞瘤误诊分析12例
神经母细胞瘤(NB)是常见的好发于幼儿期的交感感神经节的异质性恶性实体肿瘤,占幼儿恶性肿瘤的8%～10%,其年发病率0.3～5.5/10万[1].该病起病隐匿,早期无特殊症状,易发生淋巴结、骨髓等远处转移,确诊时多已属中晚期,病死率较高.进展快,预后差,易误诊.为提高对该病认识,现就12例儿童神经母细胞瘤分析如下.
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神经母细胞瘤对TRAIL的不同药理反应与PI3K/AKT信号通路无关
方法取神经母细胞瘤手术标本4例,通过胰酶消化后培养在DMEM细胞培养液中.4个标本各自分为2组:正常培养基培养组与PI3K/Akt抑制剂处理24 h组.然后这些细胞加入100 ng/mL的TRAIL处理90 min后收获.细胞通过流失细胞术检测凋亡,通过western blot检测AKT以及磷酸化AKT的变化.结果 Akt的基线表达因标本的不同而变化;经过PI3K抑制剂LY294002处理24 h后,磷酸化AKT在每个标本中的表达都有所下降;磷酸化AKTPI3K/AKT的抑制没有改变了两个对TRAIL敏感的标本中caspase-3、-8、-9的活化,但没有改变任何标本中TRAIL诱导的凋亡.结论 抑制PI3K/Akt通路不增加神经母细胞瘤细胞株对TRAIL诱导凋亡的敏感性.由于对TRAIL的药物抵抗具有多个重复的途径,神经母细胞瘤在激活PI3K/AKT信号通路上的独特性既对TRAIL的药物抵抗无关,也不会抵消TRAIL的作用.
关键词： 神经母细胞瘤 TRAIL 药理反应 PI3K/Akt信号通路 -
程序性坏死在铝致神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y死亡中的作用
目的 探讨程序性坏死是否存在于铝诱导的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的死亡途径中.方法 培养SH-SY5Y细胞,并用4 mmol/L AlCl<,3>·6H<,2>O染毒制作铝致神经细胞死亡模型,按加入Nec-1剂量不同分别设对照组(0 μmol/L)和30、60、90 μmol/L组,检测SH-SY5Y细胞的活力、线粒体膜电位、活性氧含量及细胞的凋亡率和坏死率等.结果研究表明,加入Nec-1可以显著改善染铝后的细胞坏死样形态学改变.流式细胞仪检测结果表明,加入不同剂量的Nec-1(30、60、90μmol/L)后其细胞活力分别为0.58±0.03、0.68±0.04、1.03±0.17,与对照组(0.28±0.05)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.25、3.36、4.56,P值均<0.05).Annexin V-PI双染法测定结果显示,不同剂量Nec-1(30、60、90 μmol/L)作用后坏死率分别为10.40%±0.64%、5.43%±0.68%、6.28%±0.35%,与对照组(16.46%±0.54%)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.62、7.32、6.96,P值均<0.05),可以明显降低SH-SY5Y细胞的坏死率,但其作用后SH-SY5Y细胞凋亡率分别为7.66%±0.53%、5.68%±0.41%、4.13%±0.41%,与对照组(8.68%±0.36%)相比,差异无统计学意义(F=6.33,P=0.11).加入不同剂量Nec-1(30、60、90μmol/L)后,其线粒体膜电位分别为49.42±5.96、84.79±6.86,95.51±7.01,60、90 μmol/L剂量组与对照组(67.54±6.36)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.21、4.01,P值均<0.05).但加入不同剂量的Nec-1(30、60、90 μmol/L)后其活性氧含量分别为52.79±2.36、54.68±1.91、59.23±2.96,对照组为54,07±3.32,各组间差异无统计学意义(F=5.26,P=0.19).结论 用程序性坏死的特异阻断剂Nec-1可以有效阻断铝致SH-SY5Y细胞的死亡通路,提示程序性坏死是导致铝神经毒性的原因之一.程序性坏死在铝致SH-SY5Y细胞的死亡中发挥了重要作用.
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氟中毒对神经母细胞瘤细胞株尼古丁受体蛋白和基因表达的影响
目的观察氟中毒对神经细胞中尼古丁受体亚单位蛋白和基因表达水平的影响及氟中毒引起尼古丁受体功能改变的发生机制.方法体外培养人脑神经母细胞瘤细胞,在培养液中加入不同浓度的氟化物或加入抗氧化剂,培养48 h后测定细胞3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚基四唑溴化物(MTT)和蛋白氧化水平;用蛋白印记方法测定α3和α7尼古丁受体亚单位蛋白水平;用逆转录-聚合酶链反应方法测定尼古丁受体亚单位mRNA水平.结果经氟处理的神经细胞中MTT水平降低,高浓度氟组比对照组低49%;蛋白氧化水平升高,高浓度氟组比对照组高72%;高浓度氟组神经细胞中α3和α7尼古丁受体亚单位蛋白含量分别比对照组减少51%和47%,但mRNA表达水平未见改变;用抗氧化剂处理可减弱氟中毒对尼古丁受体的损害.结论氟中毒可引起神经母细胞瘤细胞受损,降低尼古丁受体蛋白水平,其机制与该受体的基因表达水平无关,但与自由基的损害有关.
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儿童神经母细胞瘤13例临床分析
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童常见的颅外实体性恶性肿瘤,其年发病率为0.3～5.5/10万.NB起源于胚胎神经嵴交感神经元细胞,故凡有交感神经元细胞的地方,就可以出现原发肿瘤,因此临床表现多种多样.该病恶性程度较高,进展快,早期易发生转移,约50%的患儿诊断时已发生远处转移.
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中医药减轻实体瘤患儿化疗不良反应的临床观察
由于医学技术水平的进展,使得小儿恶性肿瘤5年的生存率由20%～30%上升到40%～50%,其中肾母细胞瘤的生存率已达90%,横纹肌肉瘤和神经母细胞瘤的生存率也分别达到60%和50%左右[1].但是化疗对实体瘤小儿的生长发育和生活质量的影响仍是困扰家长和临床医生的问题.我们应用扶正健脾中药对正在接受化疗的实体瘤患儿进行了减轻不良反应的临床观察,现报告如下.
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神经母细胞瘤患者尿液儿茶酚胺代谢物及血清癌胚抗原、神经烯醇化酶水平变化分析
目的 探讨尿中儿茶酚胺代谢物及血清癌胚抗原(CEA)、神经烯醇化酶(NSE)在神经母细胞瘤(NB)诊断和鉴别诊断中的应用价值.方法 用高效液相色谱和化学发光免疫分析技术,分别对36例NB患者和30名正常对照者尿液儿茶酚胺代谢产物香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)和血清CEA、NSE含量进行检测分析.结果 NB患者尿液VMA、HVA和血清CEA、NSE均显著高于正常对照组(P＜0.01),VMA、HVA单项检测的阳性率分别为86.1％、75.0％,两项同时检测可提高到91.7％,结合NSE、CEA进行三项或四项联合检测,其阳性率可分别提高至94.4％和97.2％.结论 尿液儿茶酚胺代谢物VMA、HVA和血清肿瘤标志物CEA、NSE水平变化对NB的诊断和鉴别诊断具有重要意义,这些指标的联合检测可大大提高检测的阳性率.
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CSE1L在神经母细胞瘤化疗DNA损伤修复过程中的表达
目的 研究核转运因子CSE1L在化疗后神经母细胞瘤DNA损伤修复过程中的表达变化并初步探索其作用机制,为神经母细胞瘤诊疗提供线索和理论依据.方法 通过免疫组化染色方法对19例未化疗和28例经化疗的神经母细胞瘤组织中CSE1L表达水平进行分析.阿霉素处理SH-SY5Y细胞6小时和12小时建立DNA损伤模型,并通过免疫荧光方法检测DNA损伤修复标志物g-H2AX和53BP1在DNA损伤位点的聚集情况;免疫印迹检测阿霉素诱导DNA损伤后CSE1L以及53BP1、FEN-1和EXO-1等DNA损伤相关蛋白的变化水平.慢病毒敲减CSE1L后,免疫印迹检测CSE1L、53BP1、FEN-1和EXO-1蛋白水平变化.结果 未化疗组CSE1L阳性率(73.7％)高于化疗组(42.9％)并具有显著差异(卡方检验P=0.037);阿霉素可诱导DNA损伤修复标志物g-H2AX和53BP1在DNA损伤位点的聚集;并诱导53BP1、CSE 1L、FEN-1的表达水平在处理6小时先增高、在12小时降低,EXO-1表达持续增高;敲减CSE1L可降低53BP1和FEN-1表达,但促进EXO-1表达.结论 CSE1L在化疗后神经母细胞瘤样本中表达降低,并参与DNA损伤修复过程.
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神经母细胞瘤患儿外周血γδT细胞比例及凋亡变化特点
目的 分析研究神经母细胞瘤(NB)患儿外周血中γδT细胞比例以及多种细胞因子水平变化情况,并进行γδT细胞的体外培养,分析其凋亡特点,探讨神经母细胞瘤患儿外周血γδT细胞的变化特点及临床意义.方法 通过流式细胞术检测NB患儿外周血中γδT细胞(CD3+、TCRγδ+)比例,并与健康儿童比较;通过luminex200液相悬浮芯片系统检测细胞因子表达;探索并优化γδT细胞体外培养条件(PAM+IL-2),培养过程中通过检测Annexin V分析细胞凋亡情况.结果 NB患儿外周血中γδT细胞比例明显升高,患者外周血中多种促生存细胞因子减少;同时我们在体外刺激γδT细胞增殖,发现γδT细胞凋亡增加.结论 NB患儿外周血中γδT细胞呈现病理性升高,并且细胞凋亡增加,其可能与外周血中促生存细胞因子减少相关,增加γδT细胞抗凋亡能力,对于其用于NB临床治疗具有重要意义.
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BARD1在神经母细胞瘤基因研究中的进展
神经母细胞瘤是常见的儿童实体瘤,占儿童肿瘤相关死因的12％.近年全基因组关联研究显示,BARD1单核苷酸多态性在神经母细胞瘤的发生发展中起重要作用.BARD1的功能可分为BRCA1依赖性和BRCA1非依赖性.BARD1-BRCA1二聚体具有泛素化酶、调节转录及DNA修复的作用.BARD1重要的剪切变异体为BARD1β,与高危型神经母细胞瘤的发生、发展有一定相关性.
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BARD1单核苷酸多态性与汉族儿童神经母细胞瘤相关性的研究
目的 探讨BARD1单核苷酸多态性与汉族儿童神经母细胞瘤的相关性.方法 采用病例对照研究,收集242例汉族神经母细胞瘤患儿及301例汉族健康儿童的外周血,通过PCR方法扩增目的DNA,应用Sequenom massarray对所扩增的DNA进行基因分型.以x2检验及logistics分析比较不同组基因型与神经母细胞瘤的关系.结果 BARD1的21个标签SNPs位点均符合Hardy-Weinberg平衡,BARD1的21个SNPs等位基因频率在患者组与对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 未发现BARD1单核苷酸多态性与汉族儿童神经母细胞瘤有相关性.
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miR-221促进神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞N-MYC表达和细胞增殖
目的 探讨过表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中N-MYC表达及其细胞增殖能力的影响.方法 构建miR-221过表达慢病毒载体并建立稳定转染细胞系,实验设未处理组、空载组和miR-221组,以实时定量荧光PCR(RT-qPCR)检测miR-221表达;以RT-qPCR和Western blot检测N-MYC mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;CCK8法检测细胞增殖.结果 经测序证实慢病毒载体构建成功,与未处理的SH-SY5Y细胞相比,稳定表达miR-221的SH-SY5Y细胞(miR-221组)miR-221表达升高约7倍(P ＜0.01);miR-221组N-MYC mRNA和蛋白表达水平较未处理组显著增多(P＜0.01);miR-221组G0/G1期细胞比例明显减少(P＜0.05),S期细胞比例显著增多(P ＜0.05);miR-221组细胞增殖能力明显增强(P＜0.01).结论 过表达miR-221能够上调神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中N-MYC的表达,并可能通过促发细胞从G0/G1期向S期转化促进细胞增殖.
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下调Notch1信号抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖能力
目的 探讨Notch1基因与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖能力的关系.方法 应用-分泌酶抑制剂DAPT或表达Notch1-shRNA慢病毒载体阻断SH-SY5Y细胞Notch1信号的活化,RT-PCR和Western blot法行Notch1及Hes1表达水平的检测,MTT法和裸鼠体内种植检测瘤细胞体内外增殖能力的变化.结果 DAPT处理和表达Notch1-shRNA慢病毒载体转染均能减少细胞内NICD和Hes1表达,其细胞体外增殖能力受到明显抑制(P＜0.01),Notch1 RNAi细胞体内种植瘤重为0.20±0.13 g,明显轻于对照组的0.89 ±0.58 g(P ＜0.01).结论 Notch1信号的活化与人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力密切相关,有望成为神经母细胞瘤基因治疗的潜在靶点.
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间变性淋巴瘤激酶与神经母细胞瘤
神经母细胞瘤(NB)是儿童期常见的颅外恶性实体瘤.起源于肾上腺髓质或椎旁交感神经系统.很多基因参与NB的发生发展过程,其中间变性淋巴瘤激酶(ALK)在NB的发病中起重要作用.以ALK抑制剂为基础的新的靶向治疗成为NB治疗中研究热点,但ALK异常在NB中的致瘤机制还未完全明确.因此,深入研究ALK在NB中的发病机制有重要意义,可为NB的靶向治疗提供新思路.
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抑制IGF-1R可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖
Ⅰ型胰岛素样生长因子受体(type Ⅰ insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)是细胞生长分化的重要调节因子,可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤,并为一些细胞类型转化所必需.IGF-1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表达,并被认为是潜在的肿瘤治疗靶点.软琼脂克隆形成实验是体外检测细胞成瘤性的常规方法,可用于分离和纯化肿瘤细胞及抗肿瘤药物体外抑制肿瘤生长能力的评价,随着肿瘤干细胞研究的兴起,亦被用来检测具有干细胞性质的细胞.本实验拟构建非锚着依赖性细胞立体生长模型,使用IGF-1R抑制剂检测特异性抑制IGF-IR对细胞增殖和克隆形成的影响.
